全 文 ：中国食品添加剂
China Food Additives试验研究
65
2016年第6期
猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮的
体外抗氧化活性研究
钟方丽 1，王文姣 1，2，王晓林 1，*，罗亚宏 1
（1.吉林化工学院 化学与制药工程学院，吉林 132022；2.吉林大学 化学学院，长春 130012）
摘 要：探索猴腿蹄盖蕨及玉竹总黄酮的体外抗氧化活性。采用 NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法测定猴
腿蹄盖蕨及玉竹提取液中的总黄酮含量，采用分光光度法测定猴腿蹄盖蕨及玉竹总黄酮的还原力及对各种
自由基、亚硝酸盐的清除能力。研究结果表明，猴腿蹄盖蕨及玉竹总黄酮提取液对 DPPH ·、· OH、· O2-、
NaNO2、ABTS+ ·均具有清除活性，同时具有一定的还原能力，而且随着质量浓度的增加，对各种自由基、亚
硝酸盐清除率均逐渐增加。玉竹总黄酮提取液对 DPPH ·的清除能力弱于 VC溶液，对 · OH、· O2-、NaNO2、
ABTS+ ·的清除能力及还原力均强于 VC溶液；猴腿蹄盖蕨总黄酮提取液对 DPPH ·、ABTS+ ·、NaNO2的清除
能力及还原力均弱于 VC溶液，对 · OH的清除能力高于 VC溶液，低浓度时猴腿蹄盖蕨总黄酮提取液对 · O2-
的清除能力明显强于 VC溶液。本研究结果为猴腿蹄盖蕨和玉竹的进一步开发利用提供了试验依据。
关键词：猴腿蹄盖蕨；玉竹；总黄酮；抗氧化
中图分类号：O629.9 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2016）06-0065-08
Research on the antioxidant ability of total fl avonoids
in Athyrium multidentatum and Polygonatum odoratum（Mill.）
Druce in vitro
ZHONG Fang-li1，WANG Wen-jiao1，2，WANG Xiao-lin1，*，LUO Ya-hong1
（1.School of Chemistry and Pharmaceutical Engineering，Jilin Institute of Chemical Technology，
Jilin 132022；2. School of Chemistry，Jilin University，Changchun 130012）
Abstract：To study the antioxidant ability of total fl avonoids （TFs）in Athyrium multidentatum and Polygonatum
odoratum（Mill.）Druce in vitro，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH was used as the chromogenic agents in determining
TFs content. Extraction solution，and spectrophotometric method was applied to measure the scavenging ability and
reducing power onfree radicals，nitrite. The experimental results have shown that both TFs extraction solution from
Athyrium multidentatum and Polygonatum odoratum（Mill.）Druce. All had scavenging ability and certain reducing
power to DPPH ·，· OH，· O2-，NaNO2 and ABTS+ · free radicals. In addition，the scavenging ratio gradually
increased with the increase of mass concentration. The scavenging ability of TFs extraction solution to DPPH · was
weaker than that of VC solution，however，its scavenging abilities to · OH，· O2-，NaNO2 and ABTS+ · were
收稿日期：2016-01-17
基金项目：吉林省科技厅计划项目（编号：20130206021）。
作者简介：钟方丽（1970-），女，博士，教授，主要从事天然产物化学成分的分离与生物活性研究。E-mail：fanglizhong@sina.com。
* 通讯作者： 王晓林（1969-），男，硕士，教授，主要从事天然产物有效成分的提取、纯化及药物的研究与开发。E-mail：wangxi-
aolin69@eyou.com。
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all stronger than that of VC solution. The scavenging abilities on DPPH · DPPH ·，ABTS+ · and NaNO2 of TFs
extracted from Athyrium multidentatum were all weaker than that of VC solution. The scavenging ability to · OH was
stronger than that of VC solution. Furthermore，Athyrium multidentatum TFs’ scavenging ability to · O2- was much
stronger than that of VC solution at low concentration. The research provides experimental evidences for the further
development and utilization of the two plants.
Key words：Athyrium multidentatum；Polygonatum odoratum （Mill.）Druce.；total fl avonoids；antioxidant ability
玉竹、猴腿蹄盖蕨在东北地区资源丰富，广
泛分布，都是味道鲜美的药食两用型山野菜，均
可以进行人工栽培。猴腿蹄盖蕨具有降压、止
血、安神、利尿等功效，玉竹具有降血糖、降血
脂、增强免疫力等作用，二者均具有广阔的开发
前景［1-4］，课题组对玉竹、猴腿蹄盖蕨特别是针
对二者所含有的黄酮类成分展开了系列研究［5-8］。
黄酮类化合物具有增强免疫力、保肝、抗衰老等
多种生理活性［9，10］，许多天然黄酮类成分清除自
由基、抗氧化作用显著，是一类极具发展潜力的
天然抗氧剂。人体在正常多种代谢过程中会产生
具有高氧化性的自由基，健康情况下，机体会将
产生的自由基清除，如果产生的自由基不能被及
时清除，过量的自由基便会攻击蛋白质、核酸等
生物大分子，使组织器官和细胞被氧化损伤，加
快机体衰老速度，诱发各种慢性疾病。为了预防
和控制自由基氧化给人体造成的不利影响，人们
开始利用一些化学合成抗氧化剂［11］，而合成抗氧
化剂若过量使用可能产生较大安全隐患，人们开
始转向研制安全性更好的天然抗氧化剂［12］，植物
中，尤其是药食两用植物中的黄酮类成分备受青
睐与瞩目，成为目前天然抗氧化剂的开发热点之
一。玉竹、猴腿蹄盖蕨均含有黄酮类成分，所以
对其清除自由基的能力与活性进行研究，评价其
抗氧化活性的研究工作就变得十分有意义。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
猴腿蹄盖蕨采自吉林市蛟河地区，经吉林化
工学院药学系薛健飞博士鉴定为蹄盖蕨科植物猴
腿蹄盖蕨；玉竹购于安徽省亳州市华申药业有限
公司。
芦丁对照品，成都曼思特生物科技有限公
司；DPPH ·，上海如吉生物科技有限公司；邻
二氮菲、三羟甲基氨基甲烷，天津市科密欧化学
试剂有限公司；盐酸萘乙二胺，天津市化学试剂
研究所有限公司；铁氰化钾，天津北方天医化学
试剂厂；水为双蒸水；乙醇、硫酸亚铁、三氯化
铁、磷酸二氢钠、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠
等试剂均为分析纯试剂。
1.2 仪器与设备
TU-1810型紫外可见分光光度计，北京普
析通用仪器有限责任公司；SHB- Ⅲ A型循环水
式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；RE-
52AA型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；
W5-100SP型恒温水浴锅，上海申生科技有限公
司；FA2004N型电子天平，上海精密科学仪有限
公司；KQ118型超声波清洗器，昆山市超声仪器
有限公司；DHG-9076A型电热鼓风干燥器，上
海精密实验设备有限公司。
1.3 方法
1.3.1 标准曲线的绘制 精密称取 120℃干燥至
恒重的芦丁对照品 10.5 mg，置于 50 mL容量瓶
中，加 50%乙醇溶液溶解并定容，摇匀，配制
成质量浓度为 0.21 mg/mL的对照品溶液。精密
吸取芦丁对照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、
12.0 mL于 50 mL容量瓶中，加入 5%的亚硝酸
钠溶液 0.4 mL，摇匀，放置 6 min后，加入 10%
的硝酸铝溶液 0.4 mL，摇匀，放置 6 min后，再
加入 4%的氢氧化钠溶液 4.0 mL，摇匀，用 50%
的乙醇溶液定容至刻度，摇匀，放置 15 min［13］。
以相应试剂为空白对照，按照分光光度法，
在 510 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐
标，质量浓度为横坐标绘制标准曲线。
1.3.2 猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮的提取及含量测
定
1.3.2.1 猴腿蹄盖蕨总黄酮的提取及含量测
定 称取干燥的猴腿蹄盖蕨适量，置于 250 mL
圆底烧瓶中，以料液比 1∶ 45（g∶ mL）加
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入 60%乙醇溶液，85℃回流提取 3次，每次
105min，过滤，合并滤液，浓缩，浓缩液用蒸馏
水定容至 250 mL容量瓶中。精密吸取上述猴腿
蹄盖蕨总黄酮提取液 0.4 mL于 25 mL容量瓶中，
按 1.3.1节测定吸光度，计算总黄酮含量［8］。
1.3.2.2 玉竹总黄酮的提取及含量测定 称取干燥
的玉竹粗粉适量，置于 100 mL圆底烧瓶中，以
料液比 1：13（g：mL）加入 40%乙醇溶液，超
声提取 2次，每次 25 min，过滤，合并滤液，浓
缩，浓缩液用蒸馏水定容至 100 mL容量瓶中。
精密吸取上述玉竹总黄酮提取液 1.0 mL于 25 mL
容量瓶中，按 1.3.1节测定吸光度，计算总黄酮
含量［6］。
1.3.3 总黄酮提取液体外抗氧化作用
天然产物的抗氧化能力，通常通过其对
DPPH ·、· OH、· O2-、亚硝酸盐、ABTS+ · 等的
清除能力及其还原能力进行评价，清除能力通常
用清除率表示，清除率越大，表明该物质的清除
能力越强；还原能力通常用吸光度值表示，吸光
度越大，表明物质的还原能力越强。
1.3.3.1 清除 DPPH ·试验 分别吸取不同质量
浓度的猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶
液各 2.0 mL，按参考文献［14］中的试验方法，
以 50%乙醇作对照，于 517 nm处测定其吸光度
值 A样品、A空白、A对照。按照下式计算各溶液对
DPPH ·的清除率［14］。
DPPH ·清除率（%）=［（A空白-A样品+A对照）
/A空白］×100。式中：A样品—供试液与 DPPH ·乙
醇溶液反应后的吸光度值；A对照—无水乙醇代替
DPPH ·乙醇溶液反应后的吸光度值；A空白—无水
乙醇代替供试液与 DPPH · 乙醇溶液反应后的吸
光度值。
1.3.3.2 清除 · OH试验 分别吸取不同质量浓
度的猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶液
各 1.0 mL，按参考文献［15］中的试验方法，于
536 nm处测定其吸光度值 As、Ap、Ab。按照下
式计算各溶液对 · OH的清除率［15］。
· OH 清 除 率（%）=［（AS-AP）/（Ab-AP）］
×100。式中：AS—供试液与（邻二氮菲 +硫酸
亚铁 + H2O2）反应后的吸光度值；AP—蒸馏水代
替供试液与（邻二氮菲 +硫酸亚铁 + H2O2）反应
后的吸光度值；Ab—蒸馏水代替供试液与（邻二
氮菲 +硫酸亚铁）反应后的吸光度值。
1.3.3.3 清除 · O2- 试验 分别吸取 3.0 mL Tris-
HCl缓冲液（50 mmol/L，pH8.2）置于 10 mL具
塞试管中，于 25℃水浴中预热 20 min，分别加入
1.3.3.1节中不同质量浓度的猴腿蹄盖蕨、玉竹供
试品溶液、VC溶液各 0.5 mL和 2.0 mL邻苯三酚
溶液（30 mmol/L），混匀后于 25℃水浴中反应 8
min，加入 1.0 mLHCl（10 mmol/L）溶液终止反
应，以 Tris-HCl缓冲液为空白，于 320 nm处测
定供试品溶液和 VC对照溶液的吸光度值 A1、A2、
A3。按照下式计算各溶液对 · O2- 的清除率［16］。
· O2- 的清除率（%）=［（A3 － A1 ＋ A2）/
A3］×100。式中：A1—供试液与邻苯三酚溶液
反应后的吸光度值；A2—蒸馏水代替邻苯三酚溶
液与供试液反应后的吸光度值；A3—蒸馏水代替
供试液与邻苯三酚溶液反应后的吸光度值。
1.3.3.4 还原力试验 分别吸取不同质量浓度
的猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶液各
1.0mL，按参考文献［17］中的试验方法，依次
加入各种试剂进行反应。以 50%的乙醇为空白，
在 700 nm处测定其吸光度值 A、A0 ［17］。按照下
式计算各溶液的还原力。
还原力 = A-A0。式中：A—供试液与铁氰化
钾溶液反应后的吸光度值；A0—蒸馏水代替供试
液与铁氰化钾溶液反应后的吸光度值。
1.3.3.5 清除亚硝酸盐试验 分别吸取不同质量
浓度的猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶
液各 1.0 mL，按参考文献［18］中的试验方法，
对各种试剂的加入量稍加改动，以 50%乙醇作
空白，在 538 nm处测定其吸光度值 Ai、Aj、Ao。
按照下式计算各溶液对亚硝酸盐的清除率［18］。
亚硝酸盐清除率 %=［（A0－ Ai＋ Aj）/A0］
×100。式中：Ai—加入供试品溶液的吸光度值；
Aj—供试品溶液的本底吸光度值；A0—不加供试
品溶液的吸光度值。
1.3.3.6 清除 ABTS+ ·试验 分别吸取不同质量
浓度的猴腿蹄盖蕨供试品溶液、VC溶液各 0.1mL
和不同质量浓度的玉竹供试品溶液 0.2 mL，按
参考文献［19］中的试验方法，稍加改动，于
734 nm处测定其吸光度值 A样品、A空白。按照下
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式计算各溶液对的 ABTS+ ·的清除率［19］。
ABTS+ · 清除率 %=［（A空白－ A样品）/A空白］
×100。式中：A样品—加入供试品溶液的吸光度
值；A空白—ABTS+ ·工作液的吸光度值。
2 结果分析
2.1 标准曲线及样品含量测定
以芦丁对照品溶液的吸光度值为纵坐标，质
量浓度（mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，回
归方程：A=12.382C＋ 0.0108，r=0.9996。结果
表明：芦丁在 0.0084～ 0.0504 mg/mL范围内呈
良好线性关系。经测定猴腿蹄盖蕨提取液、玉竹
提取液的总黄酮含量分别为 2.919、0.113 mg/mL。
2.2 体外抗氧化性试验
2.2.1 DPPH ·的清除
由试验结果可知，随着质量浓度的增
加，猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC
溶液对 DPPH · 的清除率均逐渐升高。当玉
竹总黄酮提取液、VC 溶液质量浓度为 0.06
mg/mL 时，DPPH · 的 清 除 率 分 别 为 76.89、
92.06%。当猴腿蹄盖蕨总黄酮提取液质量浓度为
0.6 mg/mL时，DPPH ·的清除率为 88.70%。由此
可见猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶液
对 DPPH · 均具有清除能力，但猴腿蹄盖蕨、玉
竹总黄酮提取液对 DPPH · 的清除能力低于 VC
溶液，结果见图 1、2。
     








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图 1 玉竹总黄酮、VC 对 DPPH·的清除率
Fig. 1 The scavenging ratio of TFs in Polygonatum
odoratum（Mill.）Druce and VC to DPPH
     








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图 2 猴腿蹄盖蕨总黄酮对 DPPH·的清除率
Fig. 2 The scavenging ratio of TFs in Athyrium multidentatum
to DPPH·
2.2.2 · OH的清除
由试验结果可知，随着质量浓度的增加，猴腿
蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶液对 · OH的
清除率均逐渐增加。当猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮
提取液、VC溶液质量浓度分别为 0.5、0.03、0.5
mg/mL时，· OH的清除率分别为 56.64、47.37、
35.57%。由此可见猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液
对 · OH均具有较强的清除能力，而且高于 VC溶
液对 · OH的清除能力，结果见图 3、4、5。
     






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图 3 猴腿蹄盖蕨总黄酮对· OH 的清除率
Fig.3 The scavenging ratio of TFs in ratio of VC
Polygonatum multidentatum to · OH
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图 4 玉竹总黄酮对· OH 的清除率
Fig. 4 The scavenging ratio of TFs in Athyrium odoratum
（Mill.）Druce to · OH
     






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图 5 VC 对· OH 的清除率
Fig. 5 The scavenging to· OH
2.2.3 · O2- 的清除
由试验结果可知，随着质量浓度的增加，猴
腿蹄盖蕨总黄酮提取液、VC溶液对 · O2- 的清
除率均逐渐增加。当猴腿蹄盖蕨总黄酮提取液、
VC溶液质量浓度为 0.6 mg/mL时，其对 · O2- 的
清除率高达 93.65、99.46%，而当质量浓度低于
0.3mg/mL时，猴腿蹄盖蕨总黄酮对 · O2- 的清
除率明显高于 VC溶液，如当猴腿蹄盖蕨总黄酮
提取液、VC溶液质量浓度为 0.2 mg/mL时，其
对 · O2- 的清除率分别为 86.92、48.82%。同样玉
竹总黄酮提取液对 · O2- 的清除率也随着其质量
浓度增加而提高，当玉竹总黄酮提取液质量浓度
为 0.06 mg/mL时，其对 · O2- 的清除率为 46.95%。
试验结果表明猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液
对 · O2- 均具有较强的清除能力，详见图 6、7。
     






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图 6 玉竹总黄酮对· O2-的清除率
Fig. 6 The scavenging ratio of TFs in Athyrium
multidentatum（Mill.）Druce to · O2-
     






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图 7 猴腿蹄盖蕨总黄酮、VC 对· O2-的清除率
Fig. 7 The scavenging ratio of Vc and TFs in
Polygonatum odoratum to · O2-
2.2.4 还原力试验
由试验结果可知，随着质量浓度的增加，猴
腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶液的吸光度
均逐渐增大。当质量浓度提高到 0.12 mg/mL时，
猴腿蹄盖蕨总黄酮提取液和 VC溶液的还原力分
别为 0.407、0.943，说明猴腿蹄盖蕨总黄酮提取
液的还原力低于 VC溶液。而当质量浓度提高到
0.06 mg/mL时，玉竹总黄酮提取液和 VC溶液的
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还原力分别为 0.785、0.548，说明玉竹总黄酮提
取液的还原力强于 VC溶液，结果见图 8、9。
     






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图 8 玉竹总黄酮的还原力
Fig. 8 The reducing power of TFs in Athyrium
multidentatum （Mill.）Druce
     





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图 9 猴腿蹄盖蕨总黄酮、Vc 的还原力
Fig. 9 The reducing power of Vc and TFs in Polygonatum
odoratum
2.2.5 亚硝酸盐的清除
由试验结果可知，随着质量浓度的增加，
猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶液对
NaNO2的清除率均逐渐增加。当玉竹总黄酮提
取液质量浓度为 0.06 mg/mL时，其对 NaNO2的
清除率为 84.33%，高于同质量浓度 VC溶液对
NaNO2 的清除率（81.00%）。而当猴腿蹄盖蕨
总黄酮提取液质量浓度为 0.6 mg/mL时，其对
NaNO2的清除率高达 98.33%。试验结果表明猴
腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液对 NaNO2均具有较
强的清除能力，且其清除能力高于 VC溶液，结
果见图 10、11、12。
     






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图 10 猴腿蹄盖蕨总黄酮对 NaNO2 清除率
Fig. 10 The scavenging ratio of TFs in Athyrium
multidentatum （Mill.）Druce to NaNO2
     







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图 11 玉竹总黄酮对 NaNO2 清除率
Fig. 11 The scavenging ratio of TFs in Polygonatum
odoratum to NaNO2
2.2.6 ABTS+ ·的清除
由试验结果可知，随着质量浓度的增加，
猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄酮提取液、VC溶液对
ABTS+ · 的清除率均逐渐增加。当玉竹总黄酮提
取液、VC溶液质量浓度为 0.12 mg/mL时，其对
ABTS+ ·的清除率分别为 68.20、45.13%。而当猴
腿蹄盖蕨总黄酮提取液质量浓度为 0.6 mg/mL时，
其对 ABTS+ ·的清除率为 75.40%。试验结果表明
玉竹总黄酮提取液对 ABTS+ ·具有较强的清除能
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力，而且明显强于 VC溶液，猴腿蹄盖蕨总黄酮
提取液对 ABTS+ · 的清除能力略低于 VC溶液，
结果见图 13、14。
     







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图 12 VC 对 NaNO2 清除率
Fig. 12 The scavenging ratio of VC to NaNO2
     






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图 13 玉竹总黄酮、VC 对 ABTS+·的清除率
Fig. 13 The scavenging ratio of VC and TFs in Athyrium
multidentatum （Mill.）Druce to ABTS+· radicals
3 结论
3.1 试验结果表明随着猴腿蹄盖蕨、玉竹总黄
酮提取液质量浓度的增加，二者的还原力及对
各种自由基的清除能力均逐渐提高。其中玉竹
总黄酮提取液对 DPPH · 的清除能力明显弱于
VC溶液，对 NaNO2 的清除能力略高于 VC溶
液，对 · OH、· O2-、ABTS+ · 的清除能力及还
原力均强于 VC溶液。猴腿蹄盖蕨总黄酮提取
液对 DPPH ·、ABTS+ ·、NaNO2 的清除能力及
还原力均弱于 VC溶液，对 · OH的清除能力高
于 VC溶液，低浓度时猴腿蹄盖蕨总黄酮提取液
对 · O2- 的清除能力明显强于 VC溶液。
     





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图 14 猴腿蹄盖蕨总黄酮对 ABTS+·的清除率
Fig. 14 The scavenging ratio of TFs in Polygonatum
odoratum to ABTS+· radicals
3.2 猴腿蹄盖蕨、玉竹均是可以食用的天然植
物，试验结果表明二者总黄酮提取液均具有很好
的体外抗氧化活性，而且随着总黄酮质量浓度的
增大其抗氧化活性增强。结果表明猴腿蹄盖蕨、
玉竹总黄酮提取物可以作为具有抗氧化活性的天
然抗氧化剂使用，二者作为药食两用植物，不仅
可用于普通食品，还可以用于保健食品、药品、
化妆品等领域，为拓宽猴腿蹄盖蕨、玉竹的应用
范围提供了试验依据。
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