全 文 ：　2008年第 2期
辽 宁 林 业 科 技
Journal of Liaoning Forestry Science &Technology 2008№2
风信子鳞片离体诱导培养技术研究①
孙晓梅1 ,孙莉莉1 ,张正伟2 ,莫东发2 ,成　正2
(1.沈阳农业大学 林学院 , 辽宁 沈阳　110161 ;2.北京盛斯通生态科技有限公司 ,北京　102202)
摘　要:以风信子摇滚为试材 ,选用不同类型的鳞片为外植体进行离体诱导 ,结果表明:不同类型的
外植体其诱导率不同 ,诱导率从高到低的外植体依次为:带基盘双鳞片>带基盘单鳞片>不带基盘
单鳞片>鳞片上半部 。影响鳞片分化的条件依次为:BA>IBA>基本培养基 ,最适诱导激素为 BA
1.5 mg L , IBA 0.2 mg L ,基本培养基以 B5和 MS 略好于White 。
关键词:风信子;离体培养;诱导率
中图分类号:S722.37　　文献标识码:A　　文章编号:1001-1714(2008)02-0023-03
　　风信子(Hyacinthus orientalis)为百合科风信子属
多年生具鳞茎草本植物 ,原产欧洲的地中海东岸与
亚洲的小亚细亚等地 。风信子植株低矮 ,色彩艳丽 ,
花具芳香 ,适于庭园布置 、盆栽或水养 ,深受世界各
国人民的喜爱 ,是国际花卉市场上重要的球根花卉
之一 ,我国近年陆续开始引种栽培。我国栽培的种
球多数从国外进口 ,国内外已经对风信子的组培诱
导技术进行了一些研究[ 1-5] ,并取得了一定的成果 。
但关于鳞片外植体的选择还没有明确的研究 ,大部
分的学者选择将鳞片消毒后切取 0.5cm 的小
段[ 1-3] ;刘勇刚将鳞片消毒后切掉鳞片边缘 ,将中间
部分切成 5mm2 的小块[ 4] ;Chung JD认为鳞片基部比
鳞片的顶部有更高的器官诱导能力[ 5] ;Bach A 和
Cecot A 采用双鳞片为外植体进行试验[ 6] ,而 Hanks
GR认为对于风信子单鳞片比双鳞片更加有效[ 7] 。
本文就不同类型鳞片外植体进行了诱导技术的研
究 ,旨在找到更适合风信子鳞片诱导的外植体和培
养基 ,以便更好地推进风信子的组培生产技术发展 。
1　材料与方法
1.1　材　料
风信子栽培品种Woodstock(摇滚)解除休眠后
的种球。
1.2　方　法
1.2.1　材料处理
将种球冲洗干净 ,然后浸入含 0.08%三唑酮和
400 mg L头孢的混合液中12h后 ,流水冲洗 2h ,再根
据需要切取不同类型的外植体在流水中冲洗 2h 左
右。切取不同类型外植体时每次用刀后都要用纯酒
精擦洗干净 , 避免交叉感染。在超净工作台上用
70%酒精消毒30s后再用 0.1%升汞消毒10min ,无菌
水冲洗 5次 ,将外植体上的消毒液漂洗干净后接种 。
1.2.2　外植体类型
双鳞片 ,将种球纵切 8等份 ,然后每 2枚鳞片分
割一次。每个外植体均带基盘 ,并含 2枚鳞片 ,消毒
完成后再将鳞片上半部切除 。单鳞片带基盘 ,将种
球纵切 8等份 ,然后将每枚鳞片分割开。每个外植
体均带基盘 ,并含 1枚鳞片 ,消毒完成后再将鳞片上
半部切除 。单鳞片不带基盘 ,将种球纵切 8等份 ,然
后分别掰下每枚鳞片。每个外植体不带基盘 ,并含
1枚鳞片 ,消毒完成后再将鳞片上半部切除 。鳞片
上半部 ,将种球纵切 8 等份 , 然后分别掰下每枚鳞
片 ,消毒完成后切取上半部鳞片 ,此部分可采用上述
3种外植体切除的鳞片上半部。
1.2.3　培养条件
基本培养基附加蔗糖 3.0%、琼脂 0.7%, pH 值
5.8。培养温度为(25±1)℃,光强1 500 lx 。
1.3　结果与数据分析
采用 L9(34)正交试验进行 ,因素和水平见表 1。
每组 30个重复。接种后 60d调查诱导情况 ,统计诱
导率 ,进行极差分析 。诱导率=分化形成芽数 接种
—23—
① 收稿日期:2008-01-31
基金项目:北京市花卉重点项目(ylhh2006002)
外植体数×100%。
表 1　试验因素和水平
因素 基本培养基
1 2 3
　 IBA(mg L)
1 2 3
　 BA(mg L)
1 2 3
水平 MS B5 White 0 0.2 0.4 1.0 1.5 2.5
2　结果与分析
2.1　风信子摇滚双鳞片的最佳诱导条件
K代表不同因素 ,1 、2和3代表不同因素的 3种
水平。极差 R值越大的因素对鳞片诱导的影响越
显著 。由表2可以得出 ,双鳞片的最佳诱导条件为:
B5 + IBA 0.2 mg L +BA 1.5 mg L ,这一组合在试
验中没有出现。各因素对双鳞片最佳诱导条件的影
响依次为 BA>基本培养基>IBA。
表 2　风信子摇滚双鳞片诱导条件的极差分析
实验号 基本培养基
IBA
(mg L)
空闲
因子
BA
(mg L)
诱导率
(%)
1 1 1 1 1 96.67
2 1 2 2 2 180.00
3 1 3 3 3 140.00
4 2 1 2 3 136.67
5 2 2 3 1 116.67
6 2 3 1 2 186.67
7 3 1 3 2 166.67
8 3 2 1 3 130.00
9 3 3 2 1 96.67
K1 416.67 400.01 413.34 310.01 T=1250.02
K2 440.01 426.67 413.34 533.34
K3 393.34 423.34 423.34 406.67
R 46.67 26.66 10.00 223.33
2.2　风信子摇滚单鳞片带基盘的最佳诱导条件
由表 3可见 ,单鳞片带基盘外植体最佳诱导条
件为:MS + IBA 0.2 mg L+BA 1.5 mg L;各因素对
单鳞片带基盘影响的主次关系为 BA>IBA>基本培
养基 。
2.3　风信子摇滚单鳞片不带基盘的最佳诱导条件
单鳞片不带基盘的最佳诱导条件为:B5 + IBA
0.2 mg L +BA 1.5 mg L ,见表 4。各因素对单鳞片
不带基盘的影响依次为 BA>基本培养基>IBA 。
2.4　风信子摇滚鳞片上半部的最佳诱导条件
由表 5可见 ,鳞片上半部的最佳诱导条件为:B5
+IBA 0.2 mg L +BA 1.5 mg L ,这一组合在试验中
没有出现。各因素对鳞片上半部的影响依次为 BA
>IBA>基本培养基 。
2.5　不同外植体类型诱导结果比较分析
对不同鳞片类型的外植体进行比较分析 ,结果
见表 6。
表 3　风信子摇滚单鳞片带基盘诱导条件的极差分析
实验号 基本培养基
IBA
(mg L)
空闲
因子
BA
(mg L)
诱导率
(%)
1 1 1 1 1 90.00
2 1 2 2 2 170.00
3 1 3 3 3 103.33
4 2 1 2 3 103.33
5 2 2 3 1 96.67
6 2 3 1 2 146.67
7 3 1 3 2 133.33
8 3 2 1 3 113.33
9 3 3 2 1 83.33
K1 363.33 326.66 350.00 270.00 T=1039.99
K2 346.67 380.00 356.66 450.00
K3 329.99 363.33 333.33 319.99
R 33.34 53.34 23.33 180.00
表 4　风信子摇滚单鳞片不带基盘诱导条件的极差分析
实验号 基本培养基
IBA
(mg L)
空闲
因子
BA
(mg L)
诱导率
(%)
1 1 1 1 1 43.33
2 1 2 2 2 93.33
3 1 3 3 3 56.66
4 2 1 2 3 100.00
5 2 2 3 1 90.00
6 2 3 1 2 113.33
7 3 1 3 2 123.33
8 3 2 1 3 103.33
9 3 3 2 1 63.33
K1 193.32 266.66 259.99 196.66 T=786.64
K2 303.33 286.66 256.66 329.99
K3 289.99 233.32 269.99 259.99
R 110.01 53.34 13.33 133.33
表 5　风信子摇滚鳞片上半部诱导条件的极差分析
实验号 基本培养基
IBA
(mg L)
空闲
因子
BA
(mg L)
诱导率
(%)
1 1 1 1 1 10.00
2 1 2 2 2 36.67
3 1 3 3 3 16.67
4 2 1 2 3 13.33
5 2 2 3 1 19.05
6 2 3 1 2 33.33
7 3 1 3 2 23.33
8 3 2 1 3 13.33
9 3 3 2 1 16.67
K1 63.34 46.66 56.66 35.72 T=172.38
K2 65.71 69.05 56.67 93.33
K3 43.33 56.67 59.05 43.33
R 22.38 22.39 2.39 57.61
　　由表 6可见 ,不同外植体类型的诱导分化率从
高到低依次为:带基盘双鳞片>带基(下转第34页)
—24—
　第 2 期　　　　　　　　　　　　　　　　　　辽 宁 林 业 科 技　　　　　　　　　　　　　　　　　　2008年　
资金 、良好的技术和广泛的信息 ,对于单个林农来
说 ,获取这些非常不易 ,就需要政府给予帮助 。同时
必须有限制地开发公益林 ,出台相关法律法规 ,以免
大面积 、破坏性地利用公益林地 ,造成水土流失。
4.3　适度放开公益林的采伐限额政策
辽东地区公益林郁闭度很高 ,不利于一些林下
作物的生长 ,在不影响公益林生态作用的前提下 ,可
适度开放公益林的抚育采伐限额 ,以促进林下作物
生长 ,提高林农收入。辽西地区 ,林木质量不好 ,应
该对一些长势相对不好的残次林进行间伐 ,确保其
它树木能够很好的通风透光。
参 考 文 献:
[ 1] 陈钦 , 黄和亮.试论林业外部性及补偿措施[ J] .林业经济
问题 , 1999 ,(3):19-22.
[ 2] 王冲 , 孟全省.生态公益林建设成本效益分析及政策建
议[ J] .林业经济问题 , 2007 , 27(2):176-180.
[ 3] 张维迎.博弈论与信息经济学[ M] .上海:上海人民出版
社 , 2004.11.
(责任编辑:苑 辉)
(上接第 24页)盘单鳞片>不带基盘单鳞片>鳞片
上半部 ,分别为:138.89%、115.55%、87.40%和 19.
15%。可见适合风信子摇滚初代诱导培养的外植体
类型是带基盘双鳞片 、带基盘单鳞片和不带基盘单
鳞片;鳞片上半部诱导率极低 ,不适合作为初代诱导
的外植体 。在培养过程中 ,不同外植体芽形成的时
间不同。双鳞片的芽最早发生 ,其次是带基盘单鳞
片和不带基盘单鳞片 ,它们的芽形成时间相差不大。
鳞片上半部形成芽最晚 ,可达 60d以上 ,且诱导率很
低。
表 6　不同外植体类型的诱导结果
外植体类型 总诱导率(%) 形态发生
带基盘双鳞片 1250.02 在这 4种外植体中芽最早形成 ,并且几乎都在两个鳞片中间形成 ,个别芽在双鳞片的内侧或外侧发生
带基盘单鳞片 1039.99 形成芽较双鳞片晚些 ,大部分在基部的内外侧形成 ,也有个别芽在离基部偏上些形成 ,保留基盘可以减少鳞片基部消毒后的损伤程度
不带基盘单鳞片 786.64 芽形成较上述外植体都晚些,大部分在基部的内外侧形成 ,也有个别芽在离基部偏上些形成
鳞片上半部 172.38 芽在这 4种外植体中最晚形成
3　结论与讨论
　　风信子摇滚鳞片外植体的诱导率从高到低依次
为:带基盘的双鳞片>带基盘的单鳞片>不带基盘
单鳞片>鳞片上半部 。另外不同的外植体类型也表
现出不同的污染率 。污染率从高到低依次为:带基
盘双鳞片>带基盘单鳞片>不带基盘单鳞片>鳞片
上半部 。如果种球带菌严重 ,可以使用不带基盘单
鳞片作为诱导的外植体 ,在大大降低污染率的同时
有适量的诱导芽发生 。如果种球带菌不严重 ,则可
使用双鳞片和带基盘单鳞片 ,可以尽快的诱导出芽 ,
且芽生长的较快;从节约资源角度考虑 ,也可选择带
基盘的单鳞片。
本试验设计了 3因素 3水平来探讨对风信子摇
滚鳞片的诱导影响 , BA对诱导率影响最大 ,其次为
IBA 和基本培养基 。最适诱导激素浓度为:BA
1.5mg L+IBA 0.2 mg L ,基本培养基对鳞片诱导没
有明显的影响 ,采用 B5和 MS都较为适合 ,White培
养基次之 ,但差异不大。因此 ,在诱导风信子摇滚时
应首先考虑细胞分裂素的影响 ,其次是生长素 ,培养
基采用MS基本培养基就可以 ,在诱导中芽所需要
的营养物质鳞片本身就可以满足。
参 考 文 献:
[ 1] 赵秀芳.风信子组培快繁技术的研究[ J] .山东林业科
技 , 2004 ,(1):20-21.
[ 2] 刘志强 , 王华 , 史毅峰 , 等.利用组培法快速繁殖风信子
[ J] .河南科技 , 1999 ,(12):10.
[ 3] 李艳 ,李英慧 , 田广澍 , 等.风信子外植体植株再生系统
的研究[ J] .辽宁师范大学学报(自然科学版), 1999 , 22
(1):59-62.
[ 4] 刘勇刚 ,徐子勤.风信子的组织培养和植株再生[ J] .西
北大学学报(自然科学版), 2001 ,(6):255-258.
[ 5] Chung JD , Chun CK , Choi SO.Variation of totipotency from
individual organ parts of Hyacinthus orientalis cultured in vitro
at different growth stages[ J] .1984 , 25(4):297-304.
[ 6] Bach A , Cecot A.Application of double-phase culture media
in micropropagation of Hyacinthus orientalis cv.Carnegie.II.
Effect of auxins on growth and development[ J] .Acta-Horti-
culturae , 1989 , 251:215-221.
[ 7] Hanks GR.The effect of temperature and duration of incubation
on twin -scale propagation of Narcissus and other bulbs[ J] .
Crop-Research , 1986 , 25(2):143-152.
(责任编辑:张素清)
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　第 2 期　　　　　　　　　　　　　　　　　　辽 宁 林 业 科 技　　　　　　　　　　　　　　　　　　2008年