全 文 ： Drug Evaluation Research 第 36 卷 第 2 期 2013 年 4 月

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RP-HPLC 法测定短筒兔耳草中松果菊苷
宋 杰 1, 2，崔保松 1，李 帅 1*，马 林 1，张 瑛 1，石建功 1
1. 中国医学科学院 北京协和医学院 药物研究所，天然药物活性物质与功能国家重点实验室，北京 100050
2. 北京协和制药二厂，北京 102600
摘 要：目的 建立短筒兔耳草中松果菊苷的 RP-HPLC 测定方法。方法 短筒兔耳草经流动相超声提取后，用 RP-HPLC
法测定。采用 Alltech Prevail C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙睛-甲醇-1%醋酸（10∶15∶75），体积流量
1.0 mL/min，检测波长 334 nm，柱温为室温。结果 松果菊苷进样量在 0.46～18.40 μg 内与峰面积呈良好的线性关系（r＝
0.999 9）；平均回收率为 101.11%，RSD 为 2.09%（n＝6）。结论 采用 RP-HPLC 测定短筒兔耳草药材中松果菊苷的含量，
该方法准确、快速、简便，重复性好，适用于短筒兔耳草中松果菊苷的质量控制。
关键词：短筒兔耳草；松果菊苷；RP-HPLC；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1674 - 6376 (2013) 02 - 0132 - 003
DOI: 10.7501/j.issn.1674-6376.2013.01.013
Determination of echinacoside in Lagotis brevituba by RP-HPLC
SONG Jie1, 2, CUI Bao-song1, LI Shuai1, MA Lin1, ZHANG Ying1, SHI Jian-gong1
1. State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines, Institute of Materia Medica, Chinese Academy
of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100050, China
2. Beijing Union Second Pharmaceutical Factory, Beijing 102600, China
Abstract: Objective To develop a RP-HPLC method for the determination of echinacoside in Lagotis brevituba. Methods L.
brevituba was extracted with the mobile phase by ultrasound extraction and then determined by RP-HPLC. The chromatograph was
carried out on Alltech Prevail C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) with acetonitrile-methanol-1% acetic acid (10:15:75) as the
mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min, and the detection wavelength was set at 334 nm at room temperature. Results The linear
range of echinacoside was 0.46—18.40 μg (r=0.999 9). The average recovery of echinacoside was 101.11% and RSD was 2.09% (n=6).
Conclusion The method is accurate, quick, simple, and reproducible, and it could be used for the quality control of L. brevituba.
Key words: Lagotis brevituba Maxim.; echinacoside; RP-HPLC; content determination

短筒兔耳草来源于玄参科植物短筒兔耳草
Lagotis brevituba Maxim. 的干燥全草，生长在海拔
3 000～4 420 m 的高山草地及多砂砾的坡地上，主
要分布于甘肃西南部、青海东部及西藏等地。其全
草入药，为常用藏药，称为洪连，又名藏黄连，始
载于藏医古籍《月王药诊》、《四部医典》及《晶珠
本草》。本品味苦、性寒，具有清热解毒、行血调经
之功效，可治疗全身发热、肾炎、肺病、高血压、
动脉粥样硬化、月经不调、综合物毒物中毒及“心
热”症[1-2]。目前来源于短筒兔耳草的藏药洪连广泛
应用于藏医临床制剂中，《中国药典》2005 版收载
该药材及其制剂[3]，但无质量控制方法。郑秀萍等[4]
在 2004 年就报道从该植物中分得松果菊苷、毛蕊花
糖苷等有效成分。为更好地控制短筒兔耳草药材及
其制剂的质量，本课题组在前期对其化学成分研究
的基础上[5-7]，选取主要活性成分松果菊苷为指标性
成分，建立了短筒兔耳草中松果菊苷的测定方法，
为其质量标准的控制提供了依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪，包括 DAD 紫外
检测器，Agilent 1100 色谱工作站（Agilent 公司）；
电子天平（赛多利斯公司）；超声清洗器（江苏昆山
超声有限公司）；所用的甲醇、乙腈为色谱纯，乙酸
为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

收稿日期：2013-01-22
基金项目：《中国药典》2010 版一部标准研究项目（YS-204）
*通信作者 李 帅，研究员。Tel: (010)63164628 E-mail: lishuai@imm.ac.cn
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松果菊苷对照品（批号 111670-200503）购自
中国食品药品检定研究院；短筒兔耳草药材采自西
藏林周县（样品 1）、青海大坂山（样品 2）和购自
青海省九康中药销售中心（样品 3），经中国医学科
学院药物研究所马林副研究员鉴定为玄参科短筒兔
耳草 Lagotis brevituba Maxim. 的全草。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取松果菊苷对照
品适量，用乙腈-甲醇-1%醋酸溶液（10∶15∶75）
溶解，制成 0.23 mg/mL 溶液，即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 短筒兔耳草粉碎，精
密称取样品粉末（过四号筛）0.50 g，置具塞锥
形瓶中，精密加入流动相：乙腈-甲醇-1%醋酸溶
液（10∶15∶75）25 mL，称定质量。超声（230
W，35 kHz）15 min，放置室温，加流动相补足
减失的质量，经微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取
续滤液，即得。
2.2 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为 Alltech Prevail C18（250 mm×4.6
mm，5 μm）；流动相为乙腈-甲醇-1%醋酸溶液（10∶
15∶75）；体积流量 1.0 mL/min；柱温室温；检测波
长 334 nm；进样量 20 μL。
分别取对照品溶液及供试品溶液各 20 μL，在
“2.2”项色谱条件下，注入液相色谱仪测定，记录
色谱图，见图 1。由图 1 可见，本实验条件下，样
品色谱图中松果菊苷的保留时间约为 10 min，松果
菊苷与其他化学成分能达到基线分离，其色谱峰与
相邻色谱峰分离度良好（与相邻峰的分离度均大于
1.5），符合高效液相色谱定量分析的要求，理论塔
板数以松果菊苷计算不低于 4 000。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶
液 2、5、10、20、40、80 μL，按上述色谱条件测
定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，松果菊苷的
进样量（μg）为横坐标绘制标准曲线，得到松果菊
苷的回归方程：Y＝972.84X－14.973，r＝0.999 9
（n＝6）。结果表明松果菊苷进样量在 0.46～18.40 μg
与峰面积有良好的线性关系。
2.3.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液各 20
μL，按“2.2”项色谱条件下，连续进样 6 次，根据
松果菊苷峰面积的结果计算 RSD 值为 0.82%，结果
表明仪器在分析过程中精密度良好。


t /min
*-松果菊苷
*- echinacoside
图 1 松果菊苷对照品（A）及短筒兔耳草样品（B）的
HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of echinacoside reference
substance (A) and L. brevituba sample (B)
2.3.3 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 20 μL，
分别于 0、1、2、4、8、16、24 h 进样，在“2.2”
项色谱条件下测定，根据测定的松果菊苷的峰面积
的结果计算 RSD 值为 3.11%。表明供试品溶液在 24
h 内稳定。
2.3.4 重复性试验 取同一批次（样品号 1-1）
的供试品约 0.5 g，精密称定，按“2.1.2”项下方
法制备供试品溶液 6 份，在“2.2”项色谱条件下，
进行含量测定。结果样品中松果菊苷的 RSD 值
为 1.17%，说明方法重复性良好。
2.3.5 加样回收率试验 取同一批（样品号 1-1）
已知含量的样品（过 4 号筛）0.10 g，共 6 份，分别
精密加入松果菊苷对照品 1.07、0.91、1.01、1.07、
1.07、0.96 mg。按“2.1.2”项下方法制备所需溶液，
在“2.2”项色谱条件下测定，计算松果菊苷平均回
收率为 101.11%，RSD 值为 2.09%（n＝6）。
2.4 样品测定
从 3 批药材中各取 2 份样品，按“2.1.2”项下
的方法制备供试品溶液，在“2.2”项色谱条件下测
0 5 10 15 20 25
A

*
0 5 10 15 20 25




B *
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定，每份样品均进样 3 次，记录松果菊苷的峰面积，
按外标法计算含量，结果见表 1。
表 1 短筒兔耳草样品中松果菊苷的测定结果（n＝3）
Table 1 Determination of echinacoside in L. brevituba
from different samples (n＝3)
样品号 松果菊苷/% RSD/%
1-1 1.02 0.43
1-2 1.01 0.28
2-1 1.23 2.49
2-2 1.24 1.28
3-1 1.41 0.49
3-2 1.41 0.20

3 讨论
本实验采用 RP-HPLC 法对短筒兔耳草中松果
菊苷定量测定进行了方法学考察，并研究了短筒兔
耳草中松果菊苷的最佳提取溶剂、提取方式。从实
验结果来看，由流动相提取得到的样品色谱图有良
好的分离度，松果菊苷峰形较好，色谱峰的面积比
其他溶剂提取的大；用不同的提取方法（如超声、
冷浸、索氏提取等）提取得到的峰面积相差不大，
故采取简便、快速的超声提取。溶剂用量和超声时
间通过实验确定为 50 倍量提取液超声 15 min。
色谱流动相参考《中国药典》2005 年版肉苁蓉
中松果菊苷的含量测定方法，以乙腈-甲醇-1%醋酸
溶液（10∶15∶75）为流动相。现有文献报道中松
果菊苷的含量测定大多采用该流动相[8]。
由 DAD 紫外检测器得到松果菊苷在 200～400
nm 紫外吸收图，其最大吸收波长在 334 nm 左右，
且在 334 nm 处杂质干扰少，故选用 334 nm 为其检
测波长。
不同色谱柱的比较结果表明，采用 Alltech
Prevail C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）的色谱图峰
形和分离度等优于其他色谱柱。
本试验采用 HPLC-紫外检测法测定短筒兔耳
草中松果菊苷的量，灵敏度高，准确性和精密度好，
操作简便，色谱峰分离优良，回收率高。所建立的
方法可用于短筒兔耳草药材及其制剂的质量控制。
此外，短筒兔耳草中还含有毛蕊花糖苷，但由
于在此条件下 HPLC 色谱图中毛蕊花糖苷的色谱峰
峰形较宽，不适合含量测定，因此只选用松果菊苷
作为来源于短筒兔耳草的洪连药材的指标成分。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药品标准 [S]. 藏药 (第 1 册).
1995.
[2] 中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志 (67
卷第 2 册) [M]. 北京: 科学出版社, 2005.
[3] 中国药典 [S]. 一部. 2005.
[4] 郑秀萍, 石建功. 短筒兔耳草化学成分的研究 [J]. 中
草药, 2004, 35(5): 503-504.
[5] Zong Y Y, Che C T. Glucosides from Lagotis brevituba
[J]. Planta Med, 1995, 61(6): 585-586.
[6] 史高峰, 黄新异, 鲁润华. 藏药短管兔耳草的化学成分
研究 [J]. 中国中药杂志, 2006, 31(2): 164-165.
[7] 刘德铭, 杨仕兵, 彭 敏, 等. 藏药短管兔耳草脂溶性
化学成分的 GC-MS 分析 [J]. 天然产物研究与开发,
2007, 19: 62-64.
[8] 张思巨, 刘 丽, 于江泳, 等. HPLC 同时测定肉苁蓉
药材中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量 [J]. 中国药学杂
志, 2004, 39(10): 740-741.