---

作 者 ：化占勇;刘雅莉;徐伟荣;王跃进;张雄飞;

期 刊 ：中国农学通报 2010年 02期 页码：38-44

关键词：同源重组；快速构建；LCHS2基因；RNAi；表达载体；酶切连接；

摘 要 ：为探讨CHS基因的下调表达对花朵着色的影响以及为百合观赏性状遗传改良提供技术支持,利用基于同源重组原理的Gateway技术,根据课题组从东方百合‘索邦’分离的LCHS2基因序列(Genbank登录号:GQ483376)和pENTR/D-TOPO载体要求,设计上游5‘端添加‘CACC‘的一对特异引物,PCR扩增获得636 bp的干扰片段。通过TOPO克隆,将该片段克隆入载体pENTR/D-TOPO构建入门克隆载体pENTR/D-CHS,测序结果显示,与原序列同源性为100%。再经过LR反应使pENTR/D-CHS上的干扰片段替换掉目标载体pHellsgate12上的ccdB片段,快速构建了包含L...

---