全 文 :235※营养卫生 食品科学 2010, Vol. 31, No. 01
平贝母雪梨配伍抗炎作用研究
李 霞 1,高文远 1 ,*,黄丽晶 1 ,2,张艳军 2
(1.天津大学药物科学与技术学院,天津 300072;2.天津中医药大学中药学院,天津 300193)
摘 要:目的:观察平贝母水提物、雪花梨汁以及平贝雪梨饮(BLY)的抗炎作用及其作用机制。方法:通过二甲
苯导致小鼠耳肿胀实验、鸡蛋清致大鼠足趾肿胀实验及对小鼠毛细血管通透性的影响分别观察平贝母水提物、雪花
梨及BLY的抗炎作用,同时通过测定小鼠炎性渗出物中前列腺素(PGE2)和丙二醛(MDA)含量研究三者的抗炎机制。
结果:三者均能减轻二甲苯所致的耳廓肿胀;能降低小鼠毛细血管通透性;能减轻鸡蛋清致大鼠足趾肿胀;能抑
制小鼠炎性渗出物中 PGE2和MDA含量的升高,且梨汁和BLY均与 PGE2和MDA含量呈量效关系。结论:平贝
母水提物和雪花梨汁都具有抗炎作用,同等剂量的BLY作用效果比平贝母水提物和雪花梨汁抗炎作用之和更为显
著,三者对 PGE 2和MDA含量升高具有负调节作用,提示其抗炎作用与抗 PGE 2和MDA含量升高有关。
关键词:平贝母水提物;雪花梨汁;平贝雪梨饮(BLY);抗炎作用
Anti-inflammatory Effect of Fritillaria ussuriensis Maxim. Combined with Snow Pear Juice
LI Xia1,GAO Wen-yuan1,*,HUANG Li-jing1,2,ZHANG Yan-jun2
(1. School of Pharmaceutical Science and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China;2. School of Chinese Medicine,
Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China)
Abstract:Objective: To investigate anti-inflammatory effects and action mechanisms of aqueous extract of Fritillaria
ussuriensis Maxim., snow pear juice and Pingbei Xueli Yin (BLY). Methods: Animal models of auricular edema induced by xylene
in mice, capillary permeability induced by acetic acid in mice and paw edema induced by albumen in rats were established to
observe anti-inflammatory effects of aqueous extract of Fritillaria ussuriensis Maxim., snow pear juice and BLY. The contents
of PGE2 and MDA in inflammatory exudates were measured to explore anti-inflammatory mechanisms of three samples. Results:
Aqueous extract of Fritillaria ussuriensis Maxim., snow pear juice and BLY exhibited good attenuation effects on auricular edema
induced by xylene, paw edema induced by albumen and permeability increase of capillary induced by acetic acid. Meanwhile, the
three experimental samples revealed an obvious inhibition effect on the increase of PGE2 and MDA. Moreover, snow pear juice
and BLY exhibited an obvious dose-dependent inhibition effect on the increase of PGE2 and MDA. Conclusion: All of them have
a good anti-inflammatory effect. A synergistic effect of Fritillaria ussuriensis Maxim. and snow pear juice on anti-inflammation
is achieved. The three administration samples all had a negative regulation function on the level of PGE2 and MDA, which
suggests that the anti-inflammatory effect might be related to the reduction of PGE2 and MDA levels.
Key words:aqueous extract of Fritillaria ussuriensis Maxim.;snow pear juice;BLY;anti-inflammatory effect
中图分类号:R965.1 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2010)01-0235-05
收稿日期:2009-03-03
作者简介:李霞(1979—),女,博士研究生,研究方向为天然产物药物化学。E-mail:lixia2008@tju.edu.cn
*通信作者:高文远(1965 —),男,教授,博士,研究方向为中药和天然药物新产品的研究以及中药和天然药物的质量
控制。 E-mail:pharmgao@tju.edu.cn
平贝母(Fritillaria ussuriensis Maxim.)为百合科多年
生草本植物平贝母的干燥鳞茎,是我国常用的中药材,
常用于清咽润喉类的保健食品中。主要含生物碱、皂
苷、腺苷、胸苷等活性成分。具有清热润肺,化痰
止咳等功效[ 1 -4 ]。雪花梨富含各种有机酸、蛋白质、矿
物质和多种维生素等。具有生津止渴、止咳化痰、清
热降火、润肺去燥等功能。自古以来,民间即有“贝
母梨”的验方流传,常用于治疗咳嗽、急性扁桃体炎、
慢性气管炎等,均取得较好疗效。
川贝是清咽类保健食品配方中常用的中药之一,川
贝雪梨膏即是以川贝母与雪花梨配伍的产品。药典规
定,川贝母和平贝母同是百合科植物,其性味、主治
2010, Vol. 31, No. 01 食品科学 ※营养卫生236
功能、用法用量等基本相同,是同类同效品种。在此
基础上,本实验室研制出了以平贝母和雪花梨配伍的清
咽类保健饮品——平贝雪梨饮(BLY),实验证明其具有
良好的抗炎效果。但对于其是何种物质通过何种途径发
挥抗炎效果尚无相关依据,因此,本实验对平贝母水
提物、雪花梨汁及 BLY 进行体内抗炎作用研究,并对
其抗炎机理进行初步探讨,为贝母和雪梨的合理配伍提
供理论依据,也为进一步开发利用平贝母和梨的食用和
药用价值提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
昆明种小鼠,雌性,体重( 2 0 ± 2 ) g;S D 大鼠,
雌性,体重(200± 20)g,均由中国医学科学院实验动
物研究所提供。
1.2 材料与试剂
平贝母:采自黑龙江林区,经天津大学药学院高
文远教授鉴定为真品。实验前加 9倍体积的水煎煮提取
3次,2h/ 次,合并提取液,浓缩至含生药材 1. 0kg/L
的合剂,置冰箱冷藏室备用。
雪花梨清汁:采用河北沧州雪花梨,经挑选、洗
涤、去核、榨汁、粗滤、澄清、精滤等工艺制得,
置冰箱冷藏室备用。
BLY:按一定比例(每100mL BLY中含平贝母按生药
材计算为 3g)加入平贝母水提物浸膏和雪花梨清汁,再
加入少量蜂蜜和柠檬酸等制得,置冰箱冷藏室备用。
二甲苯 天津市赢达稀贵化学试剂厂;冰醋酸 天
津光复科技发展有限公司;伊文氏蓝;醋酸地塞米松片
天津力生制药股份有限公司。
1.3 仪器与设备
LDZ5-2离心机 北京雷勃尔离心机厂;754紫外 -
可见分光光度计 天津市普瑞斯仪器有限公司;CP225D
型电子天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司。
1.4 平贝母水提物、梨汁及 BLY对炎症反应的影响
1.4.1 平贝母水提物、梨汁及BLY对二甲苯致小鼠耳
肿胀的影响[5]
取健康昆明小鼠 8 8 只,雌性,称重,随机分为
11 组,每组 8 只,即:阴性对照组(生理盐水组),平
贝母水提取液高、中、低剂量组(相当于生药材量 1、
0.5、0.25g/kg),雪花梨汁高、中、低剂量组(30、15、
7.5mL/kg),BLY 的高、中、低剂量组(33 .6、16.8、
8.4mL/kg),地塞米松(DXM)阳性对照组(0.01g/kg)。以
上各组给药方法均为灌胃,每天一次,连续 3 0 d。末
次给药 45min后在乙醚麻醉下将100%二甲苯 0.1mL均匀
涂在小鼠右耳前后两面,左耳作对照。1.5h后将小鼠脱
颈处死,沿耳廓基线剪下两耳,用 9mm直径打孔器分
别在左右耳的同一部位打下圆耳片,电子天平称质量,
以右耳质量减去左耳质量的差值为肿胀值。以两耳片的
质量之差作为肿胀度进行统计学检验,以平贝母水提物
为例,计算肿胀抑制率。
正常对照组肿胀值-平贝母水提物组肿胀值
肿胀抑制率 /%=—————————————————× 100
正常对照组肿胀值
1.4.2 平贝母水提物、梨汁和BLY对冰醋酸致小鼠腹
腔毛细血管通透性的影响[6]
取昆明小鼠 8 8 只,雌性,称重,分组及给药剂
量同 1.4.1节,连续灌胃给药 30d。于末次给药 1.5h后
尾静脉注射0.5%伊文氏蓝生理盐水溶液10mL/kg,10min
后腹腔注射 0.7%冰醋酸 10mL/kg,20min后脱颈处死小
鼠,每只腹腔注射生理盐水 5mL,轻柔腹部 3min,从
腹腔中收集腹腔洗出液 3mL(冲洗液如被血液污染,则弃
去不用),1000r/min,离心 5min,取上清液用 754紫外 -
可见分光光度计,于λ=590nm处测定吸光度。
1.4.3 对蛋清所致大鼠足趾肿胀的影响[7]
取健康 S D 大鼠,雌性,称重,分组及给药剂量
同 1.4.1节,连续灌胃给药 30d,于末次给药 1h后,每
只大鼠左后足趾皮下注射 10% 鸡蛋清液 0.1mL。随后于
致炎后 30min、1、3、5h分别测定左后足趾厚度一次
(用游标卡尺测量大鼠踝关节下 0.5cm处足趾中央厚度),
计算肿胀率。
致炎后足趾厚度-致炎前足趾厚度
肿胀率 /%=———————————————× 100
致炎前足趾厚度
1.5 抗炎机制初步探讨
1.5.1 平贝母、雪花梨计和BLY对炎症渗出物中前列
腺素(PGE2)含量的影响[8]
昆明种小鼠,称重,分组及给药剂量同 1.4.1节。
连续给药 7d,末次给药后 30min,在右后足趾皮下注射
1%角叉菜胶 0.1mL致炎,4h后处死小鼠,于踝关节上
0 .5 c m 处剪切炎性肿胀足,称重,充分剪碎,用生理
盐水 5 mL 浸泡 1 h,取出,离心浸泡液,吸取上清液
0.1mL,加 0.5mol/L KOH-甲醇溶液 2mL,在 50℃下异
构化 20min,用甲醇稀释至 2mL,置紫外 -可见分光光
度计(λ=278 nm)测定吸光度,以每克炎性组织相当的吸
光度表示 PGE2的含量。
1.5.2 BLY对炎症渗出物中MDA含量的影响
昆明种小鼠,称重,分组及给药剂量同 1.4.1节。
连续给药 7d,末次给药后 30min,在右后足趾皮下注射
1%角叉菜胶 0.1mL致炎,4h后处死小鼠,于踝关节上
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0.5cm处剪切炎性肿胀足,称重,充分剪碎,于 0.45mL
三氯醋酸(TCA)中浸泡,4h后弃炎足,加入 0.1mol/L盐
酸水溶液 1mL,1% 硫代巴比妥酸(TBA)0.55mL,于 90~
95℃保温 15min,再加入 2mL生理盐水稀释,3000r/min
离心 5min。取上清液于波长 532nm处测吸光度,MDA
含量按以下式计算[ 9]。
A×72×2×106
MDA含量 /(μg/kg) =——————————
1.37×105×炎足质量
1.6 数据处理
数据统计方法以 x± s表示,总体间用单因素资料
方差分析,两组间比较采用 t 检验。
2 结果与分析
2.1 平贝母水提物、梨汁及 BLY对炎症反应的影响
2.1.1 平贝母水提物、梨汁及BLY对二甲苯致小鼠耳
肿胀的影响
组别 剂量 肿胀度 /mg 肿胀率 /%
生理盐水组 10mL/kg 16.0± 2.44 -
地塞米松组 0.01g/kg 7.1± 2.10** 55.62**
平贝母水提物低剂量组 0.25g/kg 12.8± 4.09 20.19
平贝母水提物中剂量组 0.5g/kg 11.8± 4.39 26.29
平贝母水提物高剂量组 1g/kg 10.8± 4.93* 32.19*
雪花梨汁低剂量组 7.5mL/kg 13.6± 2.05 14.71
雪花梨汁中剂量组 15mL/kg 12.7± 4.50 20.50
雪花梨汁高剂量组 30mL/kg 11.5± 3.96* 28.33*
BLY低剂量组 8.4mL/kg 10.4± 3.75* 35.05*
BLY中剂量组 16.8mL/kg 9.2± 3.25** 42.25**
BLY高剂量组 33.6mL/kg 8.0± 3.81** 49.69**
表1 平贝母水提物、雪花梨汁及BLY对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
Table 1 Effects of aqueous extract of Fritillaria ussuriensis
Maxim., snow pear juice and BLY on auricular edema induced by
xylene in mice
注:与对照组相比 * .P < 0 . 05;** . P < 0 . 01,下同。
组别 剂量 A 抑制率 /%
生理盐水组 10mL/kg 0.335± 0.045 —
地塞米松组 0.01g/kg 0.155± 0.018** 53.72**
平贝母水提物低剂量组 0.25g/kg 0.305± 0.037 8.76
平贝母水提物中剂量组 0.5g/kg 0.295± 0.037 11.94
平贝母水提物高剂量组 1g/kg 0.246± 0.029* 26.57*
雪花梨汁低剂量组 7.5mL/kg 0.312± 0.037 6.87
雪花梨汁中剂量组 15mL/kg 0.296± 0.029* 11.45
雪花梨汁高剂量组 30mL/kg 0.258± 0.027** 22.99*
BLY低剂量组 8.4mL/kg 0.247± 0.037 26.31*
BLY中剂量组 16.8mL/kg 0.203± 0.029* 39.58**
BLY高剂量组 33.6mL/kg 0.168± 0.027** 49.66**
表2 平贝母水提物、雪花梨汁和BLY对冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血
管通透性的影响
Table 2 Effects of aqueous extract of Fritillaria ussuriensis
Maxim., snow pear juice and BLY on capillary permeability
induced by acetic acid in mice
意义(P> 0.05)。BLY的高剂量组显示出明显的抑制作用
(P< 0.01),且与地塞米松组作用接近。
2.1.3 平贝母水提物、梨汁和BLY对蛋清所致大鼠足
趾肿胀的影响
结果见表 1,与生理盐水组相比,平贝母和梨汁
中、低剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀有一定的抑制作
用,但没有显著性差异,只有高剂量组有显著性差异
(P< 0.05)。BLY各剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀均有
明显抑制作用(P< 0.01和 P< 0.05),随剂量增加抑制
作用增强,且高剂量组与地塞米松阳性对照组抑制作用
相近。
2.1.2 平贝母水提物、梨汁和BLY对冰醋酸致小鼠腹
腔毛细血管通透性的影响
表 2 结果表明,与生理盐水组相比,平贝母和雪
花梨汁的高剂量组在一定程度上能抑制冰醋酸所致小鼠
腹腔毛细血管通透性增加(P< 0.05),低剂量组无统计学
30
25
20
15
10
5
0
平贝母
30
m
in
肿
胀
度
/m
m
A B C D E
雪花梨汁 平贝雪梨饮
c
b
c
b
c c
c
c
30
25
20
15
10
5
0
1h
肿
胀
度
/m
m
A B C D E
c
b
c
c
b
c c
c
平贝母 雪花梨汁 平贝雪梨饮
25
20
15
10
5
0
3h
肿
胀
度
/m
m
A B C D E
c
b b
b
c c
c
c
平贝母 雪花梨汁 平贝雪梨饮
2010, Vol. 31, No. 01 食品科学 ※营养卫生238
由图 1可见,与生理盐水组相比,在 30min和 1h
后平贝母中、高剂量组对鸡蛋清所致大鼠足趾肿胀有明
显抑制作用(P< 0.01),在 3h和 5h后,有一定的抑制
作用(P< 0.05)。雪花梨汁的中、高剂量组在 30min 到
5 h 内对蛋清所致大鼠足趾肿胀都有一定的抑制作用。
BLY的中、高剂量组对鸡蛋清所致大鼠足趾肿胀有明显
抑制作用(P< 0.01)并与阳性对照组接近。低剂量组中只
有BLY组大鼠足趾肿胀率有降低趋势,且显示出了一定
的差异性(P< 0.05),平贝母和梨汁均无统计学意义(P>
0.05)。
2.2 抗炎机制初步探讨
2.2.1 平贝母、雪花梨和BLY对炎症渗出物中 PGE2含
量的影响
2.2.2 平贝母、雪花梨和BLY对炎症渗出物中MDA含
量的影响
组别 剂量 A (× 10-2)
生理盐水组 10mL/kg 4.41± 0.62
地塞米松组 0.01g/kg 1.32± 0.33**
平贝母水提物低剂量组 0.25g/kg 3.25± 0.41**
平贝母水提物中剂量组 0.5g/kg 3.08± 0.55**
平贝母水提物高剂量组 1g/kg 3.97± 0.37*
雪花梨汁低剂量组 7.5mL/kg 4.02± 0.57
雪花梨汁中剂量组 15mL/kg 3.17± 0.52**
雪花梨汁高剂量组 30mL/kg 1.99± 0.38**
BLY低剂量组 16.8mL/kg 3.68± 0.82**
BLY中剂量组 33.6mL/kg 2.31± 0.56**
BLY高剂量组 67.2mL/kg 1.53± 0.85**
表3 平贝母、雪花梨汁和BLY对炎症渗出物中 PGE2含量的影响
Table 3 Effects of aqueous extract of Fritillaria ussuriensis
Maxim., snow pear juice and BLY on PGE2 content
组别 剂量 MDA含量 /(μg/kg)
生理盐水组 10mL/kg 251.3± 71.4
地塞米松组 0.01g/kg 151.2± 68.3**
平贝母水提物低剂量组 0.5g/kg 203.5± 63.1*
平贝母水提物中剂量组 1g/kg 187.8± 55.6**
平贝母水提物高剂量组 2g/kg 176.3± 50.7**
雪花梨汁低剂量组 15mL/kg 213.1± 57.8
雪花梨汁中剂量组 30mL/kg 192.6± 72.3**
雪花梨汁高剂量组 60mL/kg 181.4± 50.8**
BLY低剂量组 16.8mL/kg 190.5± 72.6**
BLY中剂量组 33.6mL/kg 179.3± 56.9**
BLY高剂量组 67.2mL/kg 158.6± 55.2**
表4 平贝母、雪花梨汁和BLY对炎症渗出物中MDA含量的影响
Table 4 Effects of aqueous extract of Fritillaria ussuriensis
Maxim., snow pear juice and BLY on MDA content
从表 4可以看出,三者的中、高剂量组均可明显拮
抗角叉菜胶性炎足炎性渗出物中的MDA含量增高,说明
三者的抗炎机制可能与抑制MDA的合成或释放有关。
3 讨 论
炎症是机体对组织损伤所发生的一种特异性防御反
应,是机体对创伤局部的应答,炎症对机体的危害主
要由炎症过程中释放的多种炎症介质共同作用所致。炎
症主要表现为组织损伤、血液循环障碍和渗出、组织
增生等三方面的病理变化。早期炎症反应以毛细血管扩
张和通透性亢进、渗出、组织肿胀为主,特别是渗出
变化对于判定是否为炎症反应具有重要意义[10]。本实验
结果显示:平贝母水提物、雪花梨汁均能显著抑制二甲
苯所致的耳廓肿胀;能减轻蛋清致大鼠足趾肿胀;降低
小鼠毛细血管通透性。说明三者能减轻炎症早期出现的
组织损伤,较强地抑制毛细血管通透性亢进,从而减
轻血管内液体成分和细胞成分渗出到组织间隙,避免足
趾肿胀,起到了较好的抗炎作用。
此外,从实验结果还可以看出,平贝母和雪花梨
的配伍作用尤为显著,同等剂量的BLY作用效果比平贝
母和雪花梨抗炎作用之和更为显著,为传统方剂中贝母
和梨配伍提供了合理的依据。配伍结果还说明平贝母和
雪花梨起抗炎作用时可能存在协同作用,至于两者具体
的哪种活性成分产生协同抗炎作用,需要进行进一步的
研究。
前列腺素 E 既是炎症介质,又是免疫调节物,参
与一系列重要的生理与病理过程[11]。PGE2作为一种重要
的炎症介质,引起炎症反应性水肿、渗出、局部红斑
和充血,产生红肿热痛的症状,介导炎症的发生发展。
丙二醛是一种脂质过氧化产物,它可激活环氧化酶
与对照组相比,b.P≤ 0 .05;c .P≤ 0 .01。A.空白组
(生理盐水组);B. DXM 组;C、D和 E分别代表平贝
母水提物,雪花梨汁和 B L Y 的低、中和高三个剂量组。
图1 平贝母水提物、雪花梨汁和BLY对蛋清所致大鼠足趾肿胀的影响
Fig.1 Effects of aqueous extract of Fritillaria ussuriensis Maxim.,
snow pear juice and BLY on paw edema induced by albumen in rats
20
15
10
5
0
平贝母
5h
肿
胀
度
/m
m
A B C D E
雪花梨汁 平贝雪梨饮
b
c
b
b
c
c c
c
由表 3 可见,平贝母的低、中剂量组与空白对照
组比较,PGE 2含量均显著降低,但高剂量组反而没有
显著性差异。梨汁的中、高剂量组和 BLY 以及阳性对
照组与空白对照组比较,PGE 2含量均显著降低,差异
显著(P< 0.01),略比阳性对照组低,且 PGE2含量与剂
量有关。但总的来说,三者的抗炎机制可能与拮抗 PGE2
的合成或释放有关。
239※营养卫生 食品科学 2010, Vol. 31, No. 01
(COX),一方面促进花生四烯酸生成前列腺素,导致细
胞代谢紊乱形成炎症;另一方面可影响白三烯代谢引起
炎症。此外,中性粒细胞浸润可释放大量自由基,自
由基可直接与膜脂质、蛋白质、糖类等生物大分子作
用,损伤组织细胞引起炎症反应,MDA可作为体内自
由基水平的间接反映指标,代表损伤涉及脂质过氧化反
应的程度[12-13]。平贝母水提取物、梨汁和 BLY可降低
炎症组织渗出液中 PGE2的含量,推测其可能通过抑制
COX的活性,减少 PGE2的合成,减轻了炎性渗出和水
肿。另外,三者还可显著降低炎性组织中M D A 的含
量,提示抑制组织炎症中脂质过氧化物产物形成可能是
三者抗炎作用的又一机制。
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