全 文 ：浓缩冷冻储存小新月菱形藻
(N i t zs e h i a
e l o s t e r t u m ) 的试验
河北省水产研究所 崔秀林 郑小玲 卜品芝
目前大多数种类的水产经济动物的人工育苗在缺乏控温的条件下 , 都具有一 定 的 季 节
性 , 其幼体的饵料— 单细胞藻类在人工控制的条件下 , 却可以周年生产 , 以满足水产动物不同时期育苗阶段的需求量 。 为了提高单细胞藻类培养设备的利用率 , 充分满足水产经济动
物苗种生产的需要 , 解决一些研究项 目 (如海参 、 河蟹 、 扇贝等 ) 人 工育苗期间饵料供应不
足的问题 , 于 19 8 1年 1 0月— 19 8 2年 3 月 , 进行了小新月菱形藻 ( N i t z s e h i a e l o s t e r t u m ) 的冬季室内培养 、 浓缩后储存的小型试验 。
一 、 培养条件
以 s 0 0 0m l细口瓶作半封闭式培养。
温度以炉火调剂 , 一般控制在 15 ℃左右 , 最低 9 . 5 ℃ , 最高 曾达 19 . 5 ℃ 。
光照除采自然光外 , 另加四支 2 0w 日光灯 , 光照强度一般在 1 2 0 0l u x左右 。
营养盐 1 一 2 日施肥一次 , 其浓度为 : N H ` N o 3 4 0即m , K 2 H Z P o ` i p p m , F e e 6 H 5 o 7
I P Pm
,
N a
Z S IO s
·
g H : 0 S P Pm
。
培养用水 以脱脂棉过滤后 , 煮沸 、 冷却 , 再用以接种。
管理方法主要是调理炉火 , 控制温度 , 每天测温三次 , 摇荡 4 一 6 次 , 以增加藻液内洛
解氧 , 防止老化沉淀 。
二 、 浓缩方法
根据曾呈奎先生和吴超元先生在《单细胞藻类养殖》一文 中提到 , 浓缩小球藻和扁藻时用
石灰和明矾为沉淀浓缩剂 , 因此本试验采用了硫酸铝按 A 1 2 ( 5 0 ` ) 3 ( N H ` ) 2 5 0 ` · 2 4 H 2 0 即接明
矾为浓缩剂 。 其浓缩原理为 : 硫酸铝按水解产生 A l ( O H ) 3沉淀 , 而 A l ( O H ) 。 具有 极强的吸附
作用 , 能吸附水中的悬浮物和微生物一起沉入水底 。 也可将单细胞藻类沉淀 , 起到浓缩作用 。
试验时将小新月菱形藻分组 , 每组取 2 5m l 。
投硫酸铝按的方法 , 先以研钵将块状研成细末 , 以天平称量后再投入藻液中。
为了摸清浓缩剂硫酸铝按的使用浓度及其效果 , 以三种不同浓度组作了三批沉淀浓缩试
验。 第一批共分三组 : Z o P m组 、 s o P m组 、 l o 0P mP 组 ; 第二 、 三批共分五 组 : 20 P m 组 、
4 0 p pm组 、 6 0p pm组 、 6 Op p m组 、 s o p p m组 、 I Oo p p m组 。 详见表 ( i ) 。
6
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由表中可知加入沉淀剂后几分钟试验瓶内即开始产生絮状团 , 1 小时后藻液 便 开 始 透
明 , 只是由于气泡的作用而影响沉淀速度 ; 5 小时后大部分藻体已基本沉淀 ; 24 小 时 后 80
P m组和 I O0 p p m组浓缩率已达 89 %以上 。 由此可见 S OP m和 1 0 0P pm比较理想 。 当然 由表 中
也可看出由于藻细胞的密度不同 , 同量的沉淀剂效果也有差异 , 藻细胞密度越高 , 需要加的
沉淀剂量则越大 。 如密度为 40 0万个 /m l左右 , 我们认为以80 P m为宜 。
沉淀 48 小时后镜检浓缩后藻体 , 各浓度组藻细胞完整 , 色素均匀 。 沉淀 7 2小时后 (保存
温度为 14 一 16 ℃ ) , 亦可重新接种培养 , 接种一周后镜检 , 藻细胞发育正常 , 细胞分裂亦属
正 常 。
三 、 储存
1
. 自然冷冻 : 沉淀浓缩后 , 以乳胶管虹吹出上层清液 , 将所余下层沉淀藻移至室外 ,
靠 自然降温冷冻之 。 经几次 自然冷冻结果可以认为 , 当温度高于 一 4 ℃时 , ` 各浓度组均未结
冰 , 低于 一 4 ℃时 2 0P p m组开始结冰 , 到 一 6 ℃时各浓度组 ( 20 ~ l o 0P m ) 均已 冻 结 为 冰
块 。
表 ( 1 ) 中第一批沉淀藻冻结 24 小时后 , 将冻块藻液溶化镜检 , 藻细胞 完 整 , 色 素 正
常 , 但发现个别藻细胞有小缺口 , 可能是藻液尚未完全溶化时摇动所致 。 其他几批冷冻后尚
未发现异常现象。
冷冻后再次培养试验 : 将沉淀后藻液以低温 一 1 ℃一 一 4 ℃保存 23 小时 , 室内温度调至
1 5 ℃左右 , 接种培养 , 4 天后镜检藻细胞发育正常 , 分裂正常 。
同时进行 了大批自然冷冻共作三批 , 分别于 : 19 81 年 12 月 16 日、 12 月 30 日、 1 9 8 2年 1 月
20 日 (详见表 2 ) 。 以8 0P m硫酸铝馁沉淀后 , 装入双层塑料袋 (分层封严袋口 ) 。 置于 室
外背阴处冷冻 , 据气象预报该晚最低气温为 一 6 一 一 7 ℃ 。 使其冻结后再转至冷屋储存 。 到
1 9 8 2年 2 月 15 日以后气温回升到 。 ℃以上 , 浓缩藻开始解冻为液体 。 4 月 2 日镜检三批浓缩
藻 , 细胞完整 , 色素均匀 , 并无其他异常现象 。
表 2 、 大 批 浓 缩 冷 冻 藻 数 量 统 计
批 数 { 时 间
第一批
第二批
第三批
1 9 8 1
。
1 2
。
1 6
1 2
。
3 0
1 9 8 2
。
1
。
2 0
藻液数量m l
6 7 0 0 0
3 5 0 0 0
1 1 0
.
0 0 0
藻 液 密 度百万 /m l 浓缩剂使用浓度 }浓缩后数量 m l
4
.
5 百万 / m l
4
.
8 5百万 /m l
4
.
2 百万 /m l
8 0 P Pm
8 0P Pm
8 0P Pm
2 0 0 0
1 0 0 0
3 0 0 0
2
. 冰箱冷冻 : 将冷箱调至 一 2 ℃时 , 以 8 0P pm硫酸铝按沉淀之藻液不 曾结 冰 ; 调 至
一 5 ℃后则结为冰块 。 冰箱冷冻储存的效果同自然冷冻一样 比较理想 , 两种方法比较 , 冰箱
冷冻储存更为便于操作和稳妥 。
3
. 常温保存 : 沉淀浓缩后 , 以乳胶管吸出上层清液 , 将所余下层沉淀藻置 于 室 内保
存 , 室内常温为 5 一 18 ℃之间 , 大部分时间在 10 ℃以下 。 保存四个月 后 ( 19 8 1 年 12 月 2 日
一 1 9 82 年 4 月 2 日 ) , 于 4 月 2 日再次 检 查 , 各浓度 组 ( 2 0P ~ 1 。仰mP ) 瓶 内 藻 细 胞
正常 , 色素均匀 , 只是无分裂现象 。
4 月 2 日将各瓶沉淀藻 ( 2 5 0m l沉淀而成 )
胞完整 , 色素正常 , 并已开始细胞分袋繁殖 ,
冲稀到 2 5o m l , 施肥培养三天后 镜 检 , 藻 细
密度均已达到 40 万个 /m l以上 。 (表 3 )
表 3 常温保存的沉淀藻再培养密度
* \ 组 }件妙。…时 间 \ 么 ! 2 0 P p m 组 4 0 p p m 组 6 0 P Pm组
接种后三 夭 5 1 7 5 0 0 0个 /m l 6 12 5 0 0 0个 / m l
43 5 0 0 0 0
个 /m l
5 0 7 5 0 0 0
个 /m l
5 3 0 0 0 0 0
个 /m l
注 : 沉淀前密度为 4 5 8 5 0 0。个 /m l,
四 、 讨论
1
. 沉淀浓缩藻液时间最好是早晨或晚上 。 因沉淀之藻细胞是由于 A l ( O H ) : 沉淀的吸附
而下沉 , 并非固定死亡 。如在光照强度较大时沉淀 , 光合作用藻体产生的氧 , 由于加入浓缩剂 的
关系常常不能脱离藻体而形成气泡附在藻体上 , 造成部分藻体成块上浮 , 从而影响沉淀效果 。
2
. 沉淀剂的使用浓度要随藻液的密度而定 , 从表 ( 1 ) 中可 以 看 出 , 密度 为 3 0 万
个m/ l时使用 50 P m可达到 97 %的浓缩率 , 密度为 39 5万个 /m l时使用 60 p p m 可达 87 % 的浓缩
率 ; 密度为 45 8万个 /m l时使用 80 P州叮即可达到 91 %的浓缩率 。 这里的数据是指沉淀 2 4小 时后
再除去上层清液 。
(
浓缩率 = 原藻液密度 一 上层清液密度原藻液密度
x l 。。 ,、
)
女。缩短浓缩时间贝。应适
当加大沉淀剂的浓度 。
3
。 由于藻液加入浓缩剂 , 使藻液的冰点有所下 降 , 温度高于零下 4 ℃时 , 即使最低浓
度 2 0P m组也无结冰现象 , 低于零下 4 ℃时才开始结冰 , 到零下 5 一 6 ℃时所有各 组 (2 0一
1 0 P m )都已结冰 。 如果用冰箱冷冻则可调到零下 5 一 6 ℃ , 即可冻结贮存 。
4
. 按目前试验情况 , 可 以看出在 12 月一翌年 3 月共 4 个月期间内 , 常温保存浓缩藻液
也可取得贮存和恢复生长的效果 , 在经济效益上显示出了优越性 。
参考文献
1
. 郑 重 1 9 6 4 、 浮游生物学概论 , 科学出版社
2
. 小久保清治 (华汝成译 ) 1 9 6 2 浮游硅藻类 、 上海科技出版社
3
. 马志珍 1 9 8 1 . 9 单细胞藻类在海水增 、 养殖中的作用以及对我国今后培养研究工
作的几点意见 (油印本 )
4
. 山东海洋学院 1 9 6 2 藻类养殖学 农业出版社
5
. 湛江水产专科学校 1 9 8 0 海洋饵料生物培养 农业出版社
6
. 郑 严等 1 9 8 1 褐指藻等低温和冰后的生长特性 (油印本 )