全 文 ：　
２０１３年
海 洋 湖 沼 通 报
Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｏｃｅａｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｌｉｍｎｏｌｏｇｙ
　
№２
长松藻ＩＴＳ序列特征及其系统进化分析
＊
张　磊１，刘　翠１，池　姗１，封艳静１，谢恩义２，孙　琰１，刘　涛１＊
（１．中国海洋大学 海洋生命学院，山东 青岛２６６００３；２．广东海洋大学 水产学院，广东 湛江５２４０８８）
摘　要：采用ＰＣＲ扩增的方法获得了第一个松藻目物种长松藻（Ｃｏｄｉｕｍ　ｃｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍ）的ＩＴＳ序列，长松
藻ＩＴＳ全长５１５ｂｐ，其中ＩＴＳ１的长度为７４ｂｐ，５．８Ｓ序列长１６３ｂｐ，ＩＴＳ２的长度为２７８ｂｐ。与已知的绿藻
门其它５个目８个属物种的ＩＴＳ序列的系统发育分析结果表明，绿藻门物种分为三大支，其中团藻目藻
类为一支，松藻目和刚毛藻目藻类为一支，石莼目、顶管藻目和丝藻目藻类构成一大支；长松藻与刚毛藻
目的刚毛藻属和硬毛藻属物种同为多核藻体，在系统发生上表现出更近的亲缘关系；不同绿藻目海藻的
聚类关系表明，其能够准确地反映出其在单核与多核、单细胞与多细胞等生物结构特性方面的差异与水
平。
关键词：松藻属；长松藻；ＩＴＳ；系统进化
中图分类号：Ｓ９４６．１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００３－６４８２（２０１３）０２－１７７－０６
引言
松藻属（Ｃｏｄｉｕｍ）在分类学上属于绿藻门（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）、松藻目（Ｃｏｄｉａｌｅｓ）、松藻科（Ｃｏｄｉａｃｅａｅ）［１］。
松藻属物种在世界海洋广泛分布，种类多样，栖息生境差异大，是研究形态历史、进化和生物地理学理想
的模式材料。在过去２０ａ间，松藻属海藻因为其高繁殖力造成对栖息地的侵占影响生态群落结构，以及
由于水体富营养化形成有害藻华等特点成为研究的焦点［２－３］。但是它却缺乏一个全面和客观的进化框
架，早期的进化假说都是以形态学特点以及解剖特征为基础，直到２００４年才有关于松藻分子进化研究的
报道［４］，且到目前为止，仅涉及ｒｂｃＬ和ｒｐｓ３－ｒｐｌ１６两种基因片段［５］，有关松藻分子系统学方面的研究报
道极其有限。
长松藻（Ｃｏｄｉｕｍ　ｃｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍ）是松藻属的１个种，是我国南海常见的可食用大型海藻，富含多糖、蛋
白质、粗纤维等营养成分［６－７］，且含有抗血管生成的多糖类化合物［８］，具有很好的开发价值和应用前景。
目前，有关松藻属ＩＴＳ序列的相关研究未见报道。本研究通过ＰＣＲ扩增及测序方法得到长松藻ｒＤＮＡ
ＩＴＳ序列，分析其序列特征，并结合ＧｅｎＢａｎｋ数据库中绿藻门各种属ＩＴＳ序列，从分子水平上探讨其进
化地位，为松藻属的分子系统学研究提供更多的依据。
１　实验材料与方法
１．１　实验材料
本实验所用长松藻材料采自湛江特呈岛（２１°０９′２６′′Ｎ，１１０°２４′５７′′Ｅ），由中国海洋大学大型海藻种
质库提供。藻体用消毒海水冲洗干净，吸干表面水分，保存于－８０℃超低温冰箱备用。
１．２　基因组ＤＮＡ提取
基因组总ＤＮＡ的提取采用改良ＣＴＡＢ法［９］。ＤＮＡ经１％琼脂糖电泳检测，使用ＮａｎｏＤｒｏｐ　ＮＤ－
１０００仪器测定ＯＤ２６０／２８０比值及浓度，将ＤＮＡ模板浓度调整到５０ｎｇ／μＬ用作ＰＣＲ扩增。
＊ 基金项目：海洋公益性行业科研专项（２０１１０５０２１）；中央高校基本科研业务费专项资金项目资助
第一作者简介：张磊（１９８７－），男，在读硕士，海藻遗传学研究方向．Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｂｍａ＠ｏｕｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
＊通讯作者：刘涛，男，副教授，硕士生导师．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｔａｏ＠ｏｕｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
收稿日期：２０１２－０４－２６
DOI:10.13984/j.cnki.cn37-1141.2013.02.020
１７８　 海　洋　湖　沼　通　报 ２　０　１　３年
１．３　ＩＴＳ序列测定
参照Ｌｅｓｋｉｎｅｎ等方法［１０］对长松藻ＩＴＳ序列进行ＰＣＲ扩增，引物序列见表１。
ＰＣＲ反应体系（２５（Ｌ）：ＤＮＡ模板５０ｎｇ，ｄＮＴＰｓ　２（Ｌ，正反向引物（１０（ｍｏｌ／Ｌ）各０．１（Ｌ，１０（ＰＣＲ
ｂｕｆｆｅｒ（Ｍｇ２＋ Ｆｒｅｅ）２．５（Ｌ，ＭｇＣｌ２（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）２．３μＬ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶（５Ｕ（（Ｌ）０．２（Ｌ。ＰＣＲ反应程序：
９４℃变性６ｍｉｎ，３５个循环，每个循环９４℃变性１ｍｉｎ，５４℃复性１ｍｉｎ，７２℃延伸１ｍｉｎ，７２℃延伸１０ｍｉｎ。
ＰＣＲ产物经１％琼脂糖电泳检测后，使用ＴＩＡＮｇｅｌ　Ｍｉｄｉ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ（北京天根生化科技有限公
司）胶回收纯化，连接ｐＭＤ１９－Ｔ载体（ＴａＫａＲａ宝生物工程有限公司）并转化至感受态Ｅ．ｃｏｌｉＴＯＰ　１０
（北京天根生化科技有限公司），经氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆，送华大基因生物公司测序。
表１　ＩＴＳ引物信息
Ｔａｂｌｅ　１　ＰＣＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒｓ
引物序列
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
扩增区域
Ｔａｒｇｅｔ
ＩＴＳ１－Ｆ［１０］ ５′－ＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧＴＴＴＣＣＧＴＡＧＧ－３′ ＩＴＳ
ＩＴＳ２－Ｒ［１０］ ５′－ＴＴＣＣＴＴＣＣＧＣＣＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ－３′ ＩＴＳ
１．４　数据分析
利用ＳｅｑＭａｎ软件对测序数据进行峰图校正和序列拼接，最终得到完整的ＩＴＳ序列，用 ＭＥＧＡ　４．０
计算ＩＴＳ序列的碱基含量。同时从ＧｅｎＢａｎｋ中下载绿藻门５个目８个属不同物种的ＩＴＳ序列，首先去
除低质量或不完整的序列，对于同一物种的多条ＩＴＳ序列，根据序列相似性比对排除同源性较低的序列
之后，选取剩余序列中的一条作为代表（ＧｅｎＢａｎｋ序列号及详细信息见表２）。所有序列通过ＣｌｕｓｔａｌＸ
１．８３软件进行比对，并用ＢｉｏＥｄｉｔ软件对序列进行人工编辑，利用以上数据用ＰＡＵＰ　４．０ｂ１０软件［１１］在
Ｍｏｄｅｌｔｅｓｔ　３．７中计算不同核酸替代模型的似然值并筛选出最适核酸替换模型，依据依据邻接法（Ｎｅｉｇｈ－
ｂｏｒ　ｊｏｉｎｉｎｇ，ＮＪ）、最大似然法（Ｍａｘｉｍｕｍ　ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ，ＭＬ）和最大简约法（Ｍａｘｉｍｕｍ　ｐａｒｓｉｍｏｎｙ，ＭＰ）分别
构建系统进化树，以团藻目的衣藻属和团藻属为外群，其中最大简约法运用采用启发式搜索（Ｈｅｕｒｉｓｔｉｃ
ｓｅａｒｃｈ），每轮搜索最大尝试次数为１０００次，每步保留２０个树，自举检验值Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ为１０００次重复。
２　实验结果
２．１　ＩＴＳ序列特点
通过ＰＣＲ扩增及序列测定，得到长松藻ＩＴＳ全长序列和部分核糖体１８Ｓ、２８Ｓ序列，根据ＧｅｎＢａｎｋ
数据库发布的ＩＴＳ序列，确定长松藻的ＩＴＳ１、５．８Ｓ、ＩＴＳ２的序列范围，结果表明，长松藻ＩＴＳ序列全长
５１５ｂｐ，该序列已提交 ＧｅｎＢａｎｋ数据库，登录号为ＪＱ９６６９３６。其中ＩＴＳ１的长度为７４ｂｐ，５．８Ｓ序列长
１６３ｂｐ，ＩＴＳ２的长度为２７８ｂｐ。ＩＴＳ１、５．８Ｓ和ＩＴＳ２序列的ＧＣ含量分别为５１．４％、５４．６％和５４．０％。可
见，长松藻ＩＴＳ２序列明显长于ＩＴＳ１序列，且ＧＣ含量高于ＩＴＳ１序列。
目前ＧｅｎＢａｎｋ中已经发布的绿藻门ＩＴＳ序列长度（含５．８Ｓ）分布在４３６－１０１６ｂｐ之间，长松藻ＩＴＳ
序列全长５１５ｂｐ，介于该范围之内。不同绿藻门物种之间的ＩＴＳ１长度从７４－５１０ｂｐ不等，ＩＴＳ２长度从
１２４－５２６ｂｐ不等，表现出极大的长度差异。然而５．８Ｓ序列相对稳定，其长度范围介于１４７－１６０ｂｐ，长松
藻５．８Ｓ序列长度１６３ｂｐ，与绿藻门其它物种相比仅有几个碱基的长度差异，表现出极强的保守性。
２．２　系统进化分析
根据长松藻ＩＴＳ序列及ＧｅｎＢａｎｋ数据库中下载的绿藻门ＩＴＳ序列，用ＮＪ、ＭＰ和 ＭＬ法分别构建
系统树，３种方法所得聚类结果一致，仅列出 ＭＰ法构建的系统树（图１）。启发式搜寻后最终获得一个最
优简约树，步长为２２０６，一致性指数（ＣＩ）和严格性指数（ＲＩ）分别是０．５７０３和０．６９８０。从系统树可以看
出：绿藻门６个目被分为３大支且均具有较高的支持率，其中团藻目作为外群独自成为一支（Ｃ）；松藻目
和刚毛藻目聚为一支（Ｂ）；石莼目、顶管藻目和丝藻目构成一大支（Ａ），其中该分支可分为２个类群，顶管
２期 长松藻ＩＴＳ序列特征及其系统进化分析 １７９　
藻目和丝藻目类群（Ａ１），石莼目类群（Ａ２）。该聚类结果表明，ＩＴＳ能够将所有物种按照各自所属类群进
行准确分类：来自同一属的不同物种均优先聚在一起，来自同一目的不同科属之间均聚为一支，显示出较
近的亲缘关系，如石莼目的石莼科和礁膜科，团藻目团藻科的衣藻属和团藻属，刚毛藻目刚毛藻科的刚毛
藻属和硬毛藻属。本次研究的长松藻属于松藻目，在系统树上与刚毛藻目同属于Ｂ分支，该结果说明长
松藻与刚毛藻目的刚毛藻属和硬毛藻属物种在系统发生上显示出更近的亲缘关系。
表２　ＧｅｎＢａｎｋ下载ＩＴＳ序列来源及序列号
Ｔａｂｌｅ　２　Ｄｅｔａｉｌｅｄ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　ＧｅｎＢａｎｋ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ
物种　
Ｓｐｅｃｉｅｓ　
分类地位
Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ
来源
Ｓｏｕｒｃｅ　ｏｒ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
ＧｅｎＢａｎｋ序列号
ＧｅｎＢａｎｋ　ｎｕｍｂｅｒ
Ｃｌａｄｏｐｈｏｒａ　ｒｈｏｄｏｌｉｔｈｉｃｏｌａ 刚毛藻属 Ｌｅｌｉｅａｒｔ，Ｆ．等２００９［１２］ ＦＭ２０５０５５
Ｃｌａｄｏｐｈｏｒａ　ｐｙｇｍａｅａ 刚毛藻属 Ｌｅｌｉｅａｒｔ，Ｆ．等２００９［１２］ ＦＭ２０５０５４
Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａ　ｓｐ． 硬毛藻属 Ｌｅｌｉａｅｒｔ，Ｆ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＦＲ６９４８７６
Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａ　ｎｏｒｖｅｇｉｃａ 硬毛藻属 Ｌｅｌｉａｅｒｔ，Ｆ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＦＲ６９４８７７
Ｕｌｖａ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ 石莼属 Ｗａｎｇ，Ｈ．Ｄ　Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＪＮ８４５５６７
Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ 石莼属 Ｓｈｅｎ，Ｓ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＨＱ９０２００８
Ｕｌｖａ　ｆａｓｃｉａｔａ 石莼属 Ｂａｇｈｅｌ，Ｒ．Ｓ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＪＱ６６８０２８
Ｕｌｖａ　ｔａｅｎｉａｔａ 石莼属 Ｂａｇｈｅｌ，Ｒ．Ｓ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＪＱ６６８０２９
Ｕｌｖａ　ｌｉｎｚａ 石莼属 Ｌｉｎ，Ｚ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＪＮ０９３１０９
Ｕｌｖａ　ｃｏｍｐｒｅｓｓａ 石莼属 Ｇａｏ，Ｓ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＪＮ７１２２３３
Ｕｌｖａ　ｌａｅｔｅｖｉｒｅｎｓ 石莼属 Ｍａｏ，Ｙ．Ｘ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＪＱ０４８９４６
Ｕｌｖａ　ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ 石莼属 Ｇｕｐｔａ，Ｖ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＨＱ０２６４９７
Ｕｌｖａ　ｆｌｅｘｕｏｓａ 石莼属 Ｍａｒｅｓ，Ｊ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＨＭ４８１１７８
Ｕｌｖａ　ｍｕｔａｂｉｌｉｓ 石莼属 Ｏｅｒｔｅｌ，Ｗ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＥＵ２５６３７７
Ｕｌｖａ　ｂｅｙｔｅｎｓｉｓ 石莼属 Ｇｕｐｔａ，Ｖ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＨＭ１４２１６７
Ｖｏｌｖｏｘ　ｇｌｏｂａｔｏｒ 团藻属 Ｕｅｋｉ，Ｎ．等２０１０［１３］ ＧＵ３２５７９９
Ｖｏｌｖｏｘ　ｒｏｕｓｓｅｌｅｔｉｉ 团藻属 Ｕｅｋｉ，Ｎ．等２０１０［１３］ ＧＵ３２５７９８
Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｏｌｉｇｏｔｈｅｒｍｉｃａ 衣藻属 Ｂｅｙ，Ｔ．Ｄ．Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＨＱ４０４８９８
Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ　ｓｕｂｃａｕｄａｔａ 衣藻属 Ｂｅｙ，Ｔ．Ｄ．Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＨＱ４０４８９６
ｌｏｔｈｒｉｘ　ｓｐ． 丝藻属 Ｈａｎｉｃ，Ｌ．Ａ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＤＱ８２１５１５
Ｕｌｏｔｈｒｉｘ　ｚｏｎａｔａ 丝藻属 Ｆｒｉｅｄｌ，Ｔ．１９９６［１４］ Ｚ４７９９９
Ｍｏｎｏｓｔｒｏｍａ　ａｎｇｉｃａｖａ 礁膜属 Ｓｕ，Ｑ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＡＦ４１５１７３
ｏｎｏｓｔｒｏｍａ　ａｒｃｔｉｃｕｍ 礁膜属 Ｓｕ，Ｑ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＡＦ４１５１７１
Ｍｏｎｏｓｔｒｏｍａ　ｇｒｅｖｉｌｌｅｉ 礁膜属 Ｓｕ，Ｑ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＡＦ４２８０５０
Ｍｏｎｏｓｔｒｏｍａ　ｎｉｔｉｄｕｍ 礁膜属 Ｓｕ，Ｑ．等Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　 ＡＦ４１５１７０
Ｕｒｏｓｐｏｒａ　ｎｅｇｌｅｃｔａ 尾胞藻属 Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｓ．Ｃ．等２００５［１５］ ＡＹ４７６８２１
Ｕｒｏｓｐｏｒａ　ｗｏｒｍｓｋｉｏｌｄｉｉ 尾胞藻属 Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｓ．Ｃ．等２００５［１５］ ＡＹ４７６８１９
Ｕｒｏｓｐｏｒａ　ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ 尾胞藻属 Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｓ．Ｃ．等２００５［１５］ ＡＹ４７６８１１
Ｃｏｄｉｕｍ　ｃｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍ 松藻属 Ｔｈｉｓ　ｗｏｒｋ　 ＪＱ９６６９３６
１８０　 海　洋　湖　沼　通　报 ２　０　１　３年
图１　基于ＩＴＳ序列（含５．８Ｓ）构建的绿藻门 ＭＰ系统树。其中Ａ、Ｂ、Ｃ分别代表３个不同的主要分支，
Ａ１和Ａ２为Ａ分支的２个类群
Ｆｉｇ．１　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＭＰ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎｆｅｒｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ｒｅｇｉｏｎ（ｃｏｎｔａｉｎ　５．８Ｓ）ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ．Ｗｈｅｒｅ
Ａ，Ｂ　ａｎｄ　Ｃ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｍａｉｎ　ｃｌａｄｅｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，Ａ１ａｎｄ　Ａ２ａｒｅ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ　ｏｆ　ｃｌａｄｅ　Ａ
３　讨　论
松藻形态多样，分布极为广泛，从海边岩石到平静池塘、从潮间带到深海暗礁、从北极到热带水域、从
富营养河口到营养缺乏的珊瑚礁均有分布［５］，是一种研究海洋形态和演化的很好的潜在模式材料，但其
物种鉴定是研究的难点，并且缺少相应的分子系统进化框架。一直以来，仅仅依靠形态学特点对松藻属
海藻进行物种鉴定是一项很大的挑战，目前有关松藻属分子系统分类的研究也仅限于ｒｂｃＬ和ｒｐｓ３－
ｒｐｌ１６基因片段，并且其分类作用有限，不足以对所有的松藻属物种进行准确鉴定，因此，更多的分子生物
学手段以及遗传标记亟待开发。
ＩＴＳ（Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　Ｓｐａｃｅｒ）由ＩＴＳ１和ＩＴＳ２构成，是位于１８Ｓ、５．８Ｓ和２８ＳｒＤＮＡ基因之间
的非编码序列，具有高度变异性和丰富的信息位点，是一种良好的分子遗传标记，广泛应用于分子系统学
和物种鉴定方面的研究。此外，１８Ｓ和５．８ＳｒＤＮＡ序列也是分子系统学研究中使用最为广泛的分子指
标之一［１６］，然而有关松藻ＩＴＳ序列的研究工作尚未见报道。
本研究通过ＰＣＲ方法扩增得到长松藻ＩＴＳ全长序列并对其序列特征进行分析，结合ＧｅｎＢａｎｋ数据
库中发布的绿藻门ＩＴＳ序列，构建绿藻门的系统进化树。绿藻门植物有单细胞体、群体、多细胞丝状体、
多细胞膜状体等类型［１］，系统进化结果表明绿藻门物种分为Ａ、Ｂ和Ｃ三大支（见图１），其中Ｃ分支由团
２期 长松藻ＩＴＳ序列特征及其系统进化分析 １８１　
藻目组成，该分支下的衣藻属和团藻属藻体分别是单细胞和单细胞群体，属于较为低等绿藻。Ｂ分支由
松藻目和刚毛藻目构成，该分支下的松藻属、刚毛藻属和硬毛藻属藻体均为多核细胞组成，在进化地位上
高于单细胞或单细胞群体藻体。Ａ分支由Ａ１和Ａ２两个类群构成，其中Ａ１类群是顶管藻目和丝藻目，
该类群下的尾胞藻属和丝藻属藻体为不分支的丝状体，且均由单列细胞组成；Ａ２类群由石莼目构成，其
下的礁膜属和石莼属藻体为１－２层细胞组成的膜状体或管状体，具有较为高等的进化地位。而在ＩＴＳ
序列的系统发育分析中，能够较为准确地反映这一结构学特性差异，这说明绿藻门藻类在早期地进化过
程中出现了不同类群分化，而在后期平行进化和演化过程中，再进一步出现了组织分化（如膜状体、丝状
体、管状体）等结构差异。
４　结　论
本实验首次获得了绿藻门（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）松藻目（Ｃｏｄｉａｌｅｓ）松藻属（Ｃｏｄｉｕｍ）长松藻（Ｃｏｄｉｕｍ　ｃｙｌｉｎ－
ｄｒｉｃｕ）ＩＴＳ序列（ＪＱ９６６９３６），其ＩＴＳ全长５１５ｂｐ，其中包括了１６３ｂｐ　５．８Ｓ序列。以绿藻门６个目代表性
海藻ＩＴＳ序列的系统发育进化关系研究，构建的系统发育树显示出绿藻门物种分为三大支，其中团藻目
藻类为一支，松藻目和刚毛藻目藻类为一支，石莼目、顶管藻目和丝藻目藻类构成一大支，其聚类关系反
映出其在单核与多核、单细胞与多细胞等生物结构特性方面的差异与水平。分子生物学与生物信息学方
法已在生命科学研究中和物种起源与进化中显示出了巨大的研究价值与意义，随着研究工作的不断深入
发展以及基因组水平研究能力的不断提升，将更有助于揭示海洋藻类这一低等原始植物类群进化的过程
与途径。
参考文献
［１］　曾呈奎．中国黄渤海海藻［Ｍ〗．北京：科学出版社，２００９．
［２］　Ｐｒｏｖａｎ，Ｊ．，Ｓ．Ｍｕｒｐｈｙ，ａｎｄ　Ｃ．Ｍａｇｇｓ，Ｔｒａｃｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｈｉｓｔｏｒｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｒｅｅｎ　ａｌｇａＣｏｄｉｕｍ　ｆｒａｇｉｌｅ　ｓｓｐ．Ｔｏ－
ｍｅｎｔｏｓｏｉｄｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，２００４，１４：１８９－１９４．
［３］　Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ，Ｃ．Ｄ．，Ｅｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｒｅｅｎ　ｍａｃｒｏａｌｇａＣｏｄｉｕｍ　ｆｒａｇｉｌｅ （Ｓｕｒｉｎｇａｒ）Ｈａｒｉｏｔ：ｉｎｖａｓｉｖｅ　ａｎｄ　ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ
ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｏｃｅａｎｏｇｒｒａｐｈｙ　ａｎｄ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ，１９９８，３６：１－６４．
［４］　Ｓｈｉｍａｄａ，Ｓ．，Ｍ．Ｈｉｒａｏｋａ，Ｙ．Ｓｅｒｉｓａｗａ，ｅｔ　ａｌ．，Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｃｏｄｉｕｍ （Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）ｆｒｏｍ　Ｊａ－
ｐａｎ［Ｊ］．Ｊａｐａｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｐｈｙｓｉｃｓ，２００６，５２：３５－３９．
［５］　Ｈｅｒｏｅｎ，Ｖ．，Ｌ．Ｆｒｅｄｅｒｉｋ，Ｃｈｒｉｓｔｉｎｅ，Ａ．ｅｔ　ａｌ．，Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ　ａｎｄ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒｅｅｎ
ａｌｇａｌ　ｇｅｎｕｓ　Ｃｏｄｉｕｍ （Ｂｒｙｏｐｓｉｄａｌｅｓ）ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｐｌａｓｔｉｄ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，
２００７，４４：２４０－２５４．
［６］　吉宏武，邵海艳，章超桦，等．长松藻化学成分及其营养评价［Ｊ］．食品与发酵工业，２００７，３３：１２９－１３１．
［７］　熊皓平，黄涛，吉宏武，等．长松藻基本营养成分分析及其多糖的提取［Ｊ］．广东海洋大学学报，２００７，２７：８２－８５．
［８］　Ｋｉｍｉｎｏｒｉ，Ｍ．，Ｍ．Ｍａｓａｈａｒｕ，Ｈｉｒｏａｋｉ，Ｍ．ｅｔ　ａｌ．，Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ａ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｇａｌａｃｔａｎ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ａ
ｍａｒｉｎｅ　ｇｒｅｅｎ　ａｌｇａ，Ｃｏｄｉｕｍ　ｃｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍ ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｐｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００３，１５：８７－９０．
［９］　Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｊ．，ａｎｄ　Ｊ．Ｌ．Ｄｏｙｌｅ，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｆｒｅｓｈ　ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］．Ｆｏｃｕｓ，１９９０，１２：１３－１５．
［１０］　Ｌｅｓｋｉｎｅｎ，Ｅ．，ａｎｄ　Ｐ．Ｐａｍｉｌｏ，Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＤＮＡ　ｉｎ　Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）
［Ｊ］．Ｈｅｒｅｄｉｔａｓ，１９９７，１２６：１７－２３．
［１１］　Ｓｗｏｆｆｏｒｄ，Ｄ．Ｌ．，ＰＡＵＰ＊．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｕｓｉｎｇ　Ｐａｒｓｉｍｏｎｙ（＊ａｎｄ　Ｏｔｈｅｒ　Ｍｅｔｈｏｄｓ）．Ｖｅｒｓｉｏｎ　４．Ｓｉｎａｕｅｒ
Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，１９９８．
［１２］　Ｌｅｌｉａｅｒｔ，Ｆ．，Ｃ．Ｂｏｅｄｅｋｅｒ，Ｐｅｎａ，Ｖ．ｅｔ　ａｌ．，Ｃｌａｄｏｐｈｏｒａ　ｒｈｏｄｏｌｉｔｈｉｃｏｌａｓｐ．ｎｏｖ．（Ｃｌａｄｏｐｈｏｒａｌｅｓ，Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ），ａ
ｄｉｍｉｎｕｔｉｖｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　ｍａｅｒｌ　ｂｅｄｓ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００９，４４：１５５－１６９．
［１３］　Ｕｅｋｉ，Ｎ．，Ｓ．Ｍａｔｓｕｎａｇａ，Ｉ．Ｉｎｏｕｙｅ，ｅｔ　ａｌ．，Ｈｏｗ　５０００ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｒｏｗｅｒｓ　ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ　ｔｈｅｉｒ　ｓｔｒｏｋｅｓ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｒｏｗ
ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｓｕｎｌｉｇｈｔ：Ｐｈｏｔｏａｘｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｃｅｌｕｌａｒ　ｇｒｅｅｎ　ａｌｇａＶｏｌｖｏｘ ［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，８：１０３．
［１４］　Ｆｒｉｅｄｌ，Ｔ．，Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｐｈｙｌｅｔｉｃ　ｇｅｎｕｓ　Ｐｌｅｕｒａｓｔｒｕｍ （Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）：ｉｎｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　ｎｕｃｌｅａｒ－ｅｎｃｏｄｅｄ　ｒｉｂｏ－
ｓｏｍａｌ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｍｏｔｉｌｅ　ｃｅｌ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｃｏｌｏｇｉａ，１９９６，３５：４５６－４６９．
１８２　 海　洋　湖　沼　通　报 ２　０　１　３年
［１５］　Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｓ．Ｃ．，ａｎｄ　Ｌ．Ａ．Ｈａｎｉｃ，Ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｕｒｏｓｐｏｒａ （Ｕｌｏｔｒｉｃｈａｌｅｓ，Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）
ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ｇｅｎｅｓ，ｉｎｔｒｏｎｓ　ａｎｄ　ｓｐａｃｅｒｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｃｏｌｏｇｉａ，２００５，４４：１９４－２０１．
［１６］　李海涛，杨官品，石媛媛，等．长菱形藻（Ｎｉｔｚ　ｓｃｈｉａｌｏｎｇｉｓｓｉｍａ）和新月细柱藻（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｔｈｅｃａ　ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ）分子分类研
究［Ｊ］．海洋湖沼通报，２００６，３：６７－７２．
ＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮ　ＯＦ　ＩＴＳ　ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＡＮＤ　ＴＨＥ　ＰＨＹＬＯＧＥＮＥＴＩＣ
ＡＮＡＬＹＳＩＳ　ＯＦ　ＣＯＤＩＵＭ　ＣＹＬＩＮＤＲＩＣＵＭ （ＣＯＤＩＡＣＥＡＥ，ＣＨＬＯＲＯＰＨＹＴＡ）
ＺＨＡＮＧ　Ｌｅｉ　１，ＬＩＵ　Ｃｕｉ　１，ＣＨＩ　Ｓｈａｎ１，ＦＥＮＧ　Ｙａｎｊｉｎｇ１，ＸＩＥ　Ｅｎｙｉ　２，ＳＵＮ　Ｙａｎ１，ａｎｄ　ＬＩＵ　Ｔａｏ１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６００３，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｊｉａｎｇ　５２４０８８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　ｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ）ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｄｉｕｍ　ｃｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍ（Ｃｏｄｉａｌｅｓ）ｗａｓ　ｆｉｒｓｔｌｙ　ｓｅ－
ｑｕｅｎｃｅｄ　ｂｙ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｒｅｇｉｏｎ　ｗａｓ　５１５ｂｐ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ＩＴＳ１（７４ｂｐ），５．８Ｓ
ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＤＮＡ（１６３ｂｐ）ａｎｄ　ＩＴＳ２（２７８ｂｐ）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｏｔｈｅｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｆｒｏｍ　ｅｉｇｈｔ
ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｏｒｄｅｒｓ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ　ｄｏｗｎｌｏａｄｅｄ　ｆｒｏｍ　ＧｅｎＢａｎｋ　ｄａｔａｂａｓｅ，ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＴＳ　ｒｅｇｉｏｎ　ｗａｓ　ｅｘｐｌｏｒｅｄ．Ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ
ａｌｇａｅ　ｗｅｒｅ　ｇｒｏｕｐｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｍａｉｎ　ｃｌａｄｅｓ：Ｖｏｌｖｏｃａｌｅｓ　ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ａｓ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃｌａｄｅ；Ｃｏｄｉａｌｅｓ　ａｎｄ
Ｃｌａｄｏｐｈｏｒａｌｅｓ　ｆｅｌ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｌａｄｅ；Ｕｌｖａｌｅｓ，Ａｃｒｏｓｉｐｈｏｎｉａｌｅｓ　ａｎｄ　Ｕｌｏｔｒｉｃｈａｌｅｓ　ｆｏｒｍｅｄ　ａｎｏｔｈｅｒ　ｍａｉｎ
ｃｌａｄｅ．Ｃｏｄｉｕｍ　ｃｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍｈａｓ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｏｆ　ａｌｇａｌ　ｍｕｌｔｉ　ｎｕｃｌｅｉ　ｗｉｔｈ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｌａｄｏｐｈｏ－
ｒａｌｅｓ，ａｎｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ｃｌｏｓｅｒ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｗｉｔｈ　Ｃｌａｄｏｐｈｏｒａａｎｄ　Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａ．Ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅ－
ｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｏｒｄｅｒｓ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ　ａｌｇａｅ　ｃｏｕｌｄ　ｅｘａｃｔｌｙ　ｒｅｆｌｅｃｔ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｆｒｏｍ　ｓｉｎｇｌｅ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ｔｏ　ｍｕｌｔｉ　ｎｕｃｌｅｉ　ａｎｄ　ｆｒｏｍ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃｅｌｓ　ｔｏ　ｍｕｌｔｉｃｅｌｕｌａｒ　ｏｒｇａｎｉｓｍｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｏｄｉｕｍ；Ｃｏｄｉｕｍ　ｃｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍ；Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　Ｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ）；ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ