全 文 ：in systemic sclerosis:relationship with cutaneous and internal organ in-
volvement[ J] .Clin Exp Immunol , 2004 , 138(3):540
[ 8] 　Hartel C ,Schumacher N , Fricke L , et al .Sensitivity of whole-blood T
lymphocytes in individual pat ients to tacrolimus (FK-506):impact of
interleukin-2 mRNA expression as surrogate measure of immunosuppres-
sive effect[ J] .Clin Chem , 2004 , 50(1):141
[ 9] 　Garrity ER Jr , Mehra MR.An update on clinical outcomes in heart and
lung transplantation[ J] .Transplantation , 2004 , 77(9 Suppl):S68
[ 10] 　Schmouder RL , Strieter RM ,Wiggins RC , et al .In vitro and in vivo
interleukin-8 production in human renal cortical epithelia[ J] .Kidney
Int , 1992, 41(1):191
[ 11] 　Asderakis A ,Sankaran D , Dyer P , et al .Association of polymorphisms
in the human interferon-gamma and interleukin-10 gene with acute and
chronic kidney transplant outcome:the cytokine effect on transplanta-
tion[ J] .Transplantation , 2001 , 71(5):674
[ 12] 　Tsau Y , Chen C.Urinary epidermal growth factor excretion in chi ldren
with chronic renal failure[ J] .Am J Nephrol , 1999, 19(3):400
[ 13] 　Letko E , Bhol K , Pinar V , et al .Tacrolimus(FK-506)[ J] .Ann
Allergy Asthma Immunol , 1999 ,83(3):179
[ 14] 　Brennan TV , Freise CE , Fuller TF , et al .Early graft function af ter
living donor kidney transplantation predicts rejection but not outcomes
[ J] .Am J Transplant , 2004, 4(6):971
[ 15] 　Calabrese V , Stella AM , Butterfield DA , et al .Redox regulation in
neurodegenerat ion and longevity:role of the heme oxygenase and
HSP70 systems in brain stress tolerance[ J] .Ant ioxid Redox Signal ,
2004, 6(5):895
[ 16] 　 Ichimaru N , Takahara S , Kokado Y , et al .Changes in lipid
metabolism and effect of simvastatin in renal transplant recipients in-
duced by cyclosporine or tacrolimus[ J] .Atherosclerosi s , 2001 , 158
(2):417
(收稿日期:2005-01-12;修回日期:2005-02-16)
(本文编辑　魏　萍)
文章编号:1008-9926(2005)03-0181-05　　中图分类号:R965.1　　文献标识码:A
新月菱形藻胞外多糖抗病毒活性研究①
郑维发② ,陈才法 ,储成才③ ,鲍康德④
(②徐州师范大学　江苏省药用植物生物技术重点实验室　江苏　徐州　221116;③中国科学院遗传与发育生物学研究所　北
京　100101;④安徽师范大学　生物系　安徽　芜湖　241000)
摘　要:目的　阐明新月菱形藻胞外多糖(exopolysaccharides of Nitzschia closterium , EPN)及其硫酸酯(sulfated exopolysaccharides of
Nitzschia closterium SEPN)的体内抗流感病毒活性。方法　以流感病毒亚甲型小鼠肺炎适应株(FM1)对小鼠鼻吸入法造模 , EPN
和SEPN对染毒小鼠灌胃 , 以对小鼠肺指数抑制率作为体内抗病毒活性指标 , 同时观察小鼠的胸腺和脾脏指数;以MTT法检测
EPN和 SEPN 对小鼠淋巴细胞增值和对 NK细胞杀伤的促进作用。结果　EPN和 SEPN都显示出体内抗流感病毒作用 , 其中 ,
中剂量组(100mg·kg -1)作用最为显著。与同等剂量的 EPN 相比 , SEPN 对 FM1 病毒表现出更为显著的体内抗病毒活性。 EPN
和SEPN均能不同程度地提高染毒小鼠的胸腺指数和脾脏指数 ,显著地促进小鼠淋巴细胞的增值反应 ,提升小鼠 NK 细胞的杀
伤活性。结论　新月菱形藻胞外多糖及其硫酸酯可能通过促进淋巴细胞增值 , 增强NK细胞的杀伤活力实现对 FM1 病毒的抑
制作用。其中SEPN还通过自身携带的负电荷与病毒颗粒的正电荷相互作用阻止病毒进入宿主细胞从而抑制其复制来发挥
抗病毒作用。
关键词:新月菱形藻胞外多糖;新月菱形藻胞外多糖硫酸酯;体内抗病毒活性;淋巴细胞增值反应;NK细胞;杀伤活性
In Vivo Antiviral Activity of Exopolysaccharides from Nitzschia Closterium①
ZHENG Wei-Fa② ,CHEN Cai-Fa ,CHU Cheng-Cai③ , BAO Kang-De④
(②Key Lab on Biotech for Medicinal Plants of Jiangsu Province ,Xuzhou Normal University ,Xuzhou　221116 , Jiangsu　
China)
(③Institute of Genetics and Developmental Biology ,Chinese Academy of Science ,Beijing　100101　China)
(④Biology Department of Anhui Normal University ,Wuhu　241000 ,Anhui　China)
ABSTRACT:Aim To evaluate in vivo efficacy of the exopolysaccharides from Nitzschia closterium(EPN)and their sul-
fated derivatives(SEPN)against influenza virus mouse pneumonia adaptive strain(FM1).Methods The viral pneumonia
·181·　解放军药学学报　第 21卷第 3期　　新月菱形藻胞外多糖抗病毒活性研究　　　　　　　　　　　　　郑维发　　
①② 作者简介:郑维发(1962-),男 ,安徽南陵人 ,理学博士 ,教授。研究方向:天然产物化学及其药理毒理学。Tel:(0516)3403179;E-mail:
yyzw@xznu.edu.cn
基金项目:江苏省高新技术产业化项目 , No.02KJA360002
of the test micewas induced by the infection of FM1 virus and ig treated with different doses of EPN and SEPN.The in vi-
vo antiviral activity was indicated by the inhibition of the pulmonary oedema(lung index).The variation of thymus and
spleen was used as the in vivo effect on immune organs in FM1 infected mice.The effect on lymphocyte proliferation and
killing activity of NK cells was assayed by MTT method.Results Both EPN and SEPN indicated remarkable in vivo antivi-
ral activity at a dose of 100mg·kg-1.In comparison with that of EPN ,SEPN suggested more in vivo efficacy against the
test virus.EPN and SEPN evidently enlarged the thymus and splenic index in FM1-infected mice , promoted lymphocyte
proliferation and killing activity of NK cells.Conclusion The in vivo antiviral activity of EPN and SEPN was probably re-
alized via the enhancement of lymphocyte proliferation and killing activity of NK cells.The negatively charged SEPN even
prevented the penetration of the virus into the host cells by binding with positive charge on FM1 virus and thereby prevent-
ed its invasion into host cells and exhibited more efficacy against the test virus.
KEYWORDS:EPN;SEPN;In vivo antiviral activity;Lymphocyte proliferation;Killing activity of natural killer cells
　　硅藻是海洋生态系统的初级生产力之一[ 1] 。硅
藻在生长的过程中向胞外分泌大量的胞外多聚物 。
胞外多聚物为包裹在细胞外周的一种黏性物质 ,主
要由含有硫酸根或碳酸根的酸性多糖组成[ 2] 。现代
药理学研究表明 ,海洋藻类来源的酸性多糖具有显
著的免疫调节活性 ,对病毒性疾病有治疗或预防作
用[ 3 ～ 5] 。多糖的衍生物尤其是多糖的硫酸酯对 HIV
病毒有显著的抑制作用[ 6] 。因此 ,以多糖为主要成
分的硅藻胞外多聚物具有潜在的药学价值。
新月菱形藻(Nitzschia closterium)是海洋微藻
中富含多不饱和脂肪酸的浮游生物种类之一 。在系
统分类学上属于硅藻门羽纹藻纲 ,是海洋生态系统
初级生产力的常见种类 ,为许多珍贵水产动物的饵
料生物 。我们从 40L 新月菱形藻培养液中收获了
79.8g胞外多聚物 ,成分分析表明 ,该藻胞外多聚物
中只含多糖 , 不含蛋白质和硫化物 。经 DEAE-
Sephadex 25柱分离 ,共得到 3种多糖 ,分子质量分别
为EPN1 ,187 900;EPN2 ,141 300;EPN3 ,112 100。3种
多糖的单糖组成均为甘露糖 、鼠李糖 、葡萄糖醛酸 、
葡萄糖和岩藻糖 。甘露糖-鼠李糖-葡萄糖醛酸-
葡萄糖-岩藻糖的摩尔比在 EPN1 为 4.3∶1∶5.1∶8.9
∶5.6;EPN2 为 4.2∶7.3∶3.7∶12.8∶3.4;EPN3 为 3.5∶
2.1∶4.3∶4.9∶4.7。在此基础上对上述 3种多糖进
行了硫酸化衍生物的制备(多糖的分离 、单糖的组成
及其硫酸酯制备过程另文发表)。本文报道新月菱
形藻胞外总多糖及其硫酸酯的抗病毒活性。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　药品与试剂　环磷酰胺(Cyclophosphamide ,
CP)(江苏恒瑞医药股份有限公司 ,批号 04051921);
利巴韦林(四川百利药业有限责任公司 , 批号
0407194);淋巴细胞分离液(TBD 生物技术发展中
心);96孔细胞培养板(Nunc)。
1.1.2　实验仪器 　酶标仪(BIORAD 550 , USA)。
CO2 培养箱(SHELLAB ,USA)。
1.1.3　实验病毒及实验动物　流感病毒亚甲型小
鼠肺炎适应株(FM1), 由南京中医药大学微生物教
研室提供 。ICR小鼠 ,14 ～ 16g ♀♂兼用 ,(徐州医学
院实验动物中心 ,动物合格证号:苏动 2004027)。实
验动物饲养于本室实验动物房 ,温度 23±5℃,相对
湿度 55%±5%,光周期为 12h(光)/12h(暗),自由
饮水 、取食。
1.1.4　胞外多糖及其硫酸酯　新月菱形藻胞外总
多糖及其硫酸酯由本室制备 。总多糖中 EPN1 占
12.5%, EPN2 占 55.1%,EPN3 占 32.39%。总多糖
的硫酸酯中 ,硫酸根含量为 3.9%, 取代度为 22.
4%。
1.2　方法
1.2.1　体内抗 FM1 病毒活性　选取 ICR小鼠 ,随机
分为 9 组:正常组 ,模型组 , 阳性对照组及 EPN 和
SEPN各 3个给药组(50 、100 、200mg·kg-1),每组 10
只;阳性对照组 ig 30mg·kg-1的利巴伟林。选择滴
度为640∶1的 FM1病毒 ,在小鼠乙醚麻醉后滴鼻染
毒 ,每鼠 50μl。自感染病毒的当日开始 ,各组 ig 给
药 ,bid ,连续 5d。末次给药 2h后 ,小鼠开始禁食 、禁
水 8h ,无菌摘眼球取血 ,置盛有适量肝素钠(200U·
ml
-1)的无菌离心管中备用。取血后的小鼠脱颈椎
处死 ,按文献[ 7]所述方法取胸腺 、肺 、脾脏。用精密
天平分别称重 ,按下列公式计算肺(胸腺 、脾)指数和
肺抑制率。体内抗病毒活性以对病毒感染小鼠肺指
数抑制率表示。
肺指数(%)=小鼠肺重(g)/小鼠体重(g)×100%
肺指数抑制率(%)=对照组肺指数-实验组肺指数对照组肺指数 ×100%
·182· 　解放军药学学报　2005年 6月　第 21卷　第 3期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 21　 No 3　Jun 2005　　　　　
1.2.2　对 FM1感染小鼠淋巴细胞增值的影响　将
方法 1.2.1中所取的无菌血液等体积加入盛有淋巴
细胞分离液的试管中 , 封管后 1 200r/min 离心
20min ,吸去上层血浆液 ,再用微吸管慢慢吸取淋巴
细胞层 ,注入 2ml指形管中 ,加入 1ml完全 DMEM 培
养液并吹打 ,封管后于 2 400r/min 下离心 20min;吸
去培养液 ,同法再洗涤 1 次。最后用 RPMI 1640 培
养液将淋巴细胞调整细胞为 1.2×106·ml-1 。将各
组淋巴细胞悬液分别加入 48孔板中 ,每孔 200μl ,再
加入 5μg·ml-1的 ConA 50μl ,设 6 个平行样 ,以不加
ConA 培养的淋巴细胞作为对照孔。置 37℃、5%
CO2培养箱中培养 72h。培养结束前 4h 每孔加入
20μl MTT(5mg·ml-1),培养结束后每孔加入 0.04mol
的酸化异丙醇 200μl , 使紫色结晶完全溶解 ,吸取
200μl置入 96孔板 ,在 570nm 处用酶标仪测定其吸
收度 。以吸收度值对应的淋巴细胞数的标准曲线确
定淋巴细胞增值后的数量 。
1.2.3　对小鼠 NK细胞杀伤活性影响　取小鼠 70
只 ,分为 7组 ,以 40mg·kg-1的剂量 ip环磷酰胺 ,造
成NK细胞杀伤活力下降[ 8] 。其中 6组中的 3组以
EPN另 3组以 SEPN按剂量50 、100和200mg·kg-1连
续 ig 10d。另取小鼠 10只作为正常对照组。每天 ig
等体积的生理氯化钠溶液 。末次给药 24h 后无菌取
脾脏 ,制成脾细胞悬液 ,作为效应细胞;以 Hela 细胞
作为靶细胞 ,用 RPMI-1640完全培养基分别将效应
细胞 、靶细胞调至 1×107、2×l05·ml-1 ,加入 96孔板
中 ,每孔100μl ,使效应细胞-靶细胞的比例为 50∶1 ,
另设效应细胞和靶细胞对照 ,每个处理设 5个平行
孔。置于 37℃, 5%CO2 条件下杀伤 4h , 加入 MTT
(5mg·ml-1)15μl ,继续孵育 3h ,每孔加 100μl酸化异
丙醇 ,吹打均匀 ,使紫色结晶完全溶解 ,用酶标仪在
570nm处测吸收度(A 值)。NK细胞活性按下式公
式计算[ 9] :
NK细胞杀伤活性百分比%=
靶细胞A值-(实验组A 值-效应组 A值)
靶细胞A 值 ×100%
1.2.4　实验数据处理方法　所有实验数据均采用
均数标准差 x ±s 表示 ,组间差异性比较 ,采用 t 检
验判断。
2　结果
2.1　抗FM1病毒活性　3个剂量的 EPN和SEPN对
FM1 病毒都显示出不同程度的抑制作用 ,中剂量组
表现出较强的抗病毒活性。与 EPN 相比 , SEPN 对
FM1病毒表现出更强的体内抑制作用。SEPN 的中
剂量组(100mg·kg-1)对 FM1病毒的体内抑制活性高
达 38.41%,接近于阳性对照组的 39.92%,比 EPN
的中剂量组高出 14%以上 。显示 EPN经硫酸酯化
后 ,抗病毒活性有明显地提高 ,见图 1。
　　注:与同等剂量的EPN比较 , bP <0.05 , cP <0.01
图 1　EPN和 SEPN体内抗 FM 1病毒活性
Fig 1　In vivo activities against FM1 virus by EPN and SEPN
2.2　对小鼠免疫器官的影响　小鼠经 FM1病毒感
染后胸腺指数和脾脏指数与正常小鼠相比有显著的
下降(P <0.05)。口服利巴韦林可使小鼠胸腺指
数和脾脏指数显著提高(P <0.01)。3个剂量的
EPN和SEPN均能不同程度地提高染毒小鼠的胸腺
指数和脾脏指数 ,其中 ,低 、高剂量组的提升作用接
近利巴韦林组 ,中剂量组的提升作用超过利巴韦林
组 。与 EPN相比 , SEPN 中剂量组对染毒小鼠的胸
腺指数有显著的提高 P <0.01),对脾脏指数的提
升作用也高于 EPN(P <0.05)。
表 1　EPN SEPN 对染毒小鼠胸腺指数和脾指数的影响( x ±s , n =10)
Tab 1　Effects on thymus and spleen index in FM1-infected
mice by EPN and/ or SEPN( x±s , n =10)
组别 剂量(mg·kg-1)
胸腺指数
EPN SEPN
脾指数
EPN SEPN
正常组 … 0.37±0.09 0.38±0.07 0.70±0.09 0.75±0.06
模型组 … 0.25±0.08 0.26±0.09 0.35±0.07 0.36±0.09
利巴韦林 30 0.45±0.09b 0.46±0.08b 0.81±0.08b0.83±0.07b
低剂量组 50 0.38±0.09 0.47±0.09 0.75±0.06 0.87±0.08
中剂量组 100 0.45±0.08 0.72±0.11cf 0.85±0.09c0.97±0.12cf
高剂量组 200 0.41±0.06 0.67±0.08 0.80±0.09 0.85±0.11
　　注:与正常组比较 , bP >0.05 ,与阳性对照组比较 , cP <0.01, 与
同等剂量的 EPN组比较 , fP <0.01
2.3　对淋巴细胞增值的影响　3个剂量的 EPN和
SEPN对小鼠淋巴细胞增值均显示出一定的促进作
用 ,但 EPN对小鼠淋巴细胞增值的促进作用相对较
弱 。与 EPN相比 , SEPN 对小鼠淋巴细胞增值的促
进作用更为明显 ,其中中剂量组的淋巴细胞数达到
5.25×106 。与模型组相比有显著性差异(P <0.
01)。
·183·　解放军药学学报　2005年 6月　第 21卷　第 3期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 21　 No 3　Jun 2005　　　　　
　　注:与空白对照比较 , bP <0.05 , cP <0.01;与同等剂量的 EPN
比较 , f P <0.05 , gP <0.01
图 2　EPN和 SEPN对小鼠淋巴细胞增值的促进作用
Fig 2　Enhancement of EPN and SEPN on lymphocyte proliferation in mice
2.4　对 NK 细胞杀伤活性的影响 　结果表明 , ip
(40mg·kg-1)CP使小鼠的 NK 细胞杀伤活力比正常
小鼠下降50%左右 。EPN和SEPN均能显著提升CP
处理小鼠的NK细胞杀伤活性 。其中 ,50mg·kg-1可
使NK细胞杀伤活力恢复到正常水平 , 100mg·kg-1
将使NK细胞杀伤活力超出正常水平 2倍以上。这
种提升作用在 200mg·kg-1以上时有所下降 。与同
等剂量的 EPN相比 ,SEPN对 NK细胞杀伤活性的提
升作用更为显著 ,见表 2。
表 2　EPN/ SEPN对小鼠NK 细胞的
杀伤活力的影响( x±s , n =10)
Tab 2 Effects on killing activity of NK cells by EPN/ SEPN( x±s , n =10)
组别 剂　量(mg·kg-1·d-1+mg·kg-1)
杀伤活性(%)
EPN SEPN
正常对照 … 19.75±3.20 19.75±3.20
CP 对照 40 9.75±1.60c 9.75±1.6c
试验组 1+CP 50+40 15.14±1.10g 28.11±3.24gk
　　　2+CP 100+40 36.117±1.92g 49.28±2.99gk
　　　3+CP 200+40 27.94±1.91g 38.97±4.32gk
　　注:与正常对照组相比 , cP <0.01 ,与 CP对照相比 , gP <0.001;
与同等剂量的 EPN 相比 , kP <0.01
3　讨论
FM1病毒可特异性地引起小鼠肺炎[ 10] 。随着
病毒的感染 ,造成小鼠肺部支气管损伤 ,导致 O2 和
CO2的交换面积急剧减少 ,同时伴随着炎症的发生 ,
引起血管肿胀和中性粒细胞的渗出 、肺部肿胀和充
血[ 11] 。EPN和SEPN对染毒小鼠的肺部肿胀和充血
有显著的抑制作用 ,提示 EPN和 SEPN对 FM1 病毒
有显著的体内抑制作用 ,其中 SEPN的抑制作用更
为显著。
有研究表明 ,带有负电荷的硫酸化多糖可以与
带有正电荷的病毒颗粒发生相互作用 ,阻止病毒进
入宿主细胞进而抑制其复制[ 12、13] 。因此硫酸基团
的引入显著增强了新月菱形藻胞外多糖的抗病毒活
性 。病毒的入侵主要引起机体的细胞免疫反应[ 14] 。
而淋巴细胞的增值反应是机体细胞免疫反应的前
提[ 15] 。EPN对小鼠淋巴细胞增值没有显著的促进
作用 ,衍生化为硫酸酯后对小鼠淋巴细胞增值有更
为显著的促进作用 ,表明硫酸化多糖除了提升机体
的细胞免疫外还能直接作用于病毒颗粒。
NK细胞是机体对抗病毒入侵的重要防御体系
之一[ 16] 。在病毒的体内感染时NK细胞诱导和释放
γ-干扰素[ 17] 。环磷酰胺是潜在的免疫抑制剂 ,高剂
量时将持久地导致 NK细胞功能的减弱[ 8] 。EPN或
SEPN可使小鼠的 NK 细胞的杀伤活性恢复或超过
正常水平 。因此增强 NK 细胞杀伤活力是 EPN 和
SEPN抗病毒活性的重要机制之一。
综上所述 ,新月菱形藻胞外多糖及其硫酸酯有
显著的体内抗病毒活性 ,其作用机制可能通过促进
淋巴细胞增值 ,增强NK细胞的杀伤活力实现对 FM1
病毒的抑制作用。其中 SEPN还通过自身携带的负
电荷与病毒颗粒的正电荷相互作用阻止病毒进入宿
主细胞进而抑制其复制而发挥抗病毒作用 。
参考文献:
[ 1] 　Kelly GJ.A comparison of marine photosynthesis with terrestrial photo-
synthesis:a biochemical perspective[ J] .Oceanogr.Mar.Biol.Annu.
Rev , 1989 ,27:11
[ 2] 　Hoagland KD , Rosowski JR , Gretz MR , et a l .Diatom extracellular
polymeric substances:function , fine structure , chemistry , and physiolo-
gy[ J] .J .Phycol , 1993 , 29:537
[ 3] 　Damonte EB ,Matulewicz MC.Sulfated xylogalactans from marine algae
useful as anti HSV-1 agents[ J] .Antivir.Res , 1995 ,26(3):A306
[ 4] 　Schaeffer DJ.Anti-HIV Activity of Ext racts and Compounds from Algae
and Cyanobacteria[ J] .Ecotoxic.Environ , 2000 , 45(3):208
[ 5] 　Ermak IM , Khotimchenko YS.Physical and chemical properties , appli-
cations , and biological activities of carrageenan , a polysaccharide of red
algae[ J] .Oceanogr.Literature Rev , 1998 , 45(9):1710
[ 6] 　吴立根 ,毛文君.衍生化多糖的生物活性研究进展[ J] .科学视
野 , 2002 ,26(5):23
[ 7] 　郑维发.甘遂醇提物 4种二萜类化合物体内抗病毒活性研究
[ J] .中草药 , 2004 ,35(1):65
[ 8] 　Valadares MC , Klein SI ,Guaraldo AMA , et al .Enhancement of natu-
ral killer cell function by titanocenes in mice bearing Ehrlich ascites tu-
mour[ J] .Eur J Pharm ,2003 , 473:191
[ 9] 　Nakamura H , Tamura SI ,Watanabe Z , et al .Enhanced resistancy of
thioredoxin-transgenic mice against inf luenza virus-induced pneumonia
[ J] .Immun Let t , 2002 , 82:165
[ 10] 　胡　涛 ,耿排力.复方片剂及单味药对化疗损伤小鼠细胞因子
及 NK 细胞活性的影响[ J] .中国免疫学杂志 , 2003, 19:616
[ 11] 　Hoopera P , Zakib S , Danielsa P , et al .Comparative pathology of the
diseases caused by Hendra and Nipah viruses [ J] .Microbes &
·184· 　解放军药学学报　2005年 6月　第 21卷　第 3期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 21　 No 3　Jun 2005　　　　　
Infect ion ,2001 , 3:315
[ 12] 　Ehresmann D , Deig EF , Hatch MT.Antiviral properties of algal
polysaccharides and related compounds[M] .In Hoppe H , Levring T ,
Tanaka Y(eds), Marine Algae , in:Pharmaceutical Science.Walter
de Gruyter , Berlin , New York ,1979.293
[ 13] 　Hatch M , Ehresmann D , Deig E, et al .Further studies on the chemi-
cal compostion and an initial in vivo evaluation of antiviral material in
extracts of macroscopic algae[ J] .J Phycol , 1977, 13:28
[ 14] 　Biron CA.Role of early cytokines , including alpha and beta interferons
(IFN-α β), in innate and adaptive immune responses to viral infec-
tions[ J] .Semin Immunol , 1998 , 10(5):383
[ 15] 　Adam JK , Odhav B , Bhoola KD.Immune responses in cancer[ J] .
Pharm &Ther , 2003 , 99(1):113
[ 16] 　Brutkiewicz RR ,Sriram V.Natural killer T(NKT)cells and their role
in antitumor immunity[ J] .Critical Rew.Oncol.Hamatol , 2002 ,
41:287
[ 17] 　Biron CA.Activation and function of natural killer cell responses dur-
ing viral infections[ J] .Curr.Opinion Immun ,1997 , 9:24
(收稿日期:2004-11-29;修回日期:2005-02-16)
(本文编辑　宋金斗)
(上接 169 页)(扭体抑制率 46.8%)减少小鼠扭体次
数的作用强于生白芍(扭体抑制率 32.2%)和炒白
芍(扭体抑制率 33.9%),结果见表4。
表 4　对小鼠醋酸致痛扭体抑制的影响( x±s , n =10)
Tab 4　The effects on mice writhing counts after
injection acetic acid( x ±s , n =10)
组别 剂量(g·kg -1) 扭体次数 扭体抑制率(%)
生理氯化钠溶液组 … 62±6.8 …
对乙酰氨基酚组 0.15 23±5.0c 62.9
生白芍组 2.25 42±12.8c 32.2
炒白芍组 2.25 41±10.1c 33.9
酒白芍组 2.25 35±9.6c 43.5
醋白芍组 2.25 33±9.6c 46.8
　　注:与生理氯化钠溶液组比较 , cP <0.01
3　讨论
3.1　中国药典所载白芍含量测定项下芍药苷的测
定 ,使用 HPLC 法 ,所用流动相为甲醇-0.05mol·L-1
磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇(67∶173∶4∶4),实验过
程中发现使用该流动相测定芍药苷 ,分离效果不理
想 ,基线波动较大。作者参考其他文献[ 4] ,流动相选
用乙腈-水(17∶83),芍药苷分离效果好 ,杂质峰少 ,
基线平稳 。
3.2　白芍中含有多种苷类 ,其中羟基芍药苷 、没食
子酰芍药苷 、苯甲酰芍药苷 、白芍苷都为芍药苷的衍
生物 。在浸润过程中 ,这些成分均能转变为芍药苷 ,
使得浸润后白芍切片中芍药苷含量高于原药材。由
于芍药苷结构中含有酯键 、苷键 ,在浸润过程中易水
解 ,转变为其他成分 ,随着浸润时间的延长 ,白芍切
片中芍药苷的含量逐渐降低。在本次实验中 ,曾选
择了不同的浸润时间进行预试 ,分别考察了白芍药
材浸润6 ～ 36h后芍药苷的含量 。结果表明浸润 12h
后切片中芍药苷的含量高于原生药 ,浸润 24h以上 ,
切片中芍药苷的含量则明显降低。因此 ,本实验选
择了 12h的浸润时间 。生药切片经炮制后 ,芍药苷
的含量均有不同程度下降 ,比较而言单纯炒制对芍
药苷的破坏最少。
3.3　镇痛实验中使用的阳性对照药为对乙酰氨基
酚 ,给药剂量经过预试 ,预试结果表明小鼠 ig 0.15g·
kg-1镇痛效果较好。若给药剂量太小 ,则阳性对照
药物组抑制小鼠扭体次数的效果不明显。另外 ,在
醋酸扭体实验中 , 0.6%的醋酸溶液必须临用前现
配 ,否则注射后小鼠的扭体现象不明显。
3.4　热板法和醋酸扭体实验结果均表明 ,白芍的不
同炮制品中 ,酒白芍 、醋白芍的镇痛作用强于生白芍
和炒白芍 ,这与白芍不同炮制品种的中医传统使用
方法相符合。白芍 4种炮制品中 ,生白芍中芍药苷
的含量最高 ,其次为炒白芍 ,酒白芍和醋白芍最低。
上述结果表明 ,白芍中芍药苷的含量并不能直接反
映其镇痛作用的强弱 ,白芍中的其它化学成分也发
挥了镇痛的药效 ,也可能为多组分联合作用产生了
镇痛的药效 ,这也符合中药多成分 、多途径 、多靶点
的作用特点。2000 版中国药典选择了芍药苷的含
量作为白芍的质量评价指标 ,本试验结果显示芍药
苷的含量并不适用于评价白芍的镇痛作用 。如何选
择白芍镇痛效果的定量评价指标尚待进一步研究。
参考文献:
[ 1] 　徐楚江.中药炮制学[M] .上海:上海科学技术出版社 , 1985.90
[ 2] 　高崇凯 ,吴　雁 ,王　勇 ,等.白芍总苷粉针剂的抗炎 、镇痛作用
[ J] .中药新药与临床药理 , 2002, 13(3):163
[ 3] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[ S] .北京:化学
工业出版社 , 2000.78
[ 4] 　黄罗生 ,郭健新.不同干燥和炮制方法对白芍中芍药苷含量的
影响[ J] .现代中药研究与实践 ,2003 , 17(5):28
(收稿日期:2005-02-03;修回日期:2005-03-23)
(本文编辑　宋金斗)
·185·　解放军药学学报　2005年 6月　第 21卷　第 3期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 21　 No 3　Jun 2005