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滇白珠提取物对胃肠功能以及止泻作用研究



全 文 :2016年5月第22卷第9期 May.2016 Vol.22 No.9
*基金项目:广西中药质量标准研究重点实验室系统性研究
课题(桂中重系201203)
通讯作者:韦桂宁,E-mail:weiguining2004@163.com
滇白珠,别名:透骨草、小透骨草、透骨消、满山
香、下山虎等,为杜鹃花科植物滇白珠Gaultheria
leucocarpa Bl.var. yunnanensis (Franch.) T.Z.Hsu的
全株[1]。滇白珠是我国部分省区民间习用药材。《滇南
本草》《中药大辞典》《中国民族药志》等均有记载。滇
白珠味辛,性温,具有清热解毒、活血化瘀、祛风除
湿、顺气平喘的功效 [2]。滇白珠根部含有木脂素、萜
类、黄酮、有机酸、香豆素和甾醇类等化学成分[3];地
上部分含有机酸类化合物[4],黄酮葡萄糖醛酸苷,有
滇白珠提取物对胃肠功能以及
止泻作用研究*
何 飞1,2,韦桂宁1,2,苏 华1,韦 韡1
(1.广西中医药研究院,广西 南宁 530022;
2.广西中药质量标准研究重点实验室,广西 南宁 530022)
[摘要] 目的:观察滇白珠提取物对胃肠运动功能、吸收功能影响以及止泻作用。方法:采用新斯的明造成
小鼠胃排空和小肠推进亢进,乙酰胆碱造成大鼠离体回肠痉挛性收缩,利血平造成小鼠小肠吸收功能障碍,蓖
麻油造成小鼠腹泻,观察滇白珠提取物对胃肠运动亢进模型动物胃肠运动,小肠吸收D-木糖水平以及腹泻次数
的影响。结果:滇白珠提取物能够显著减少小鼠胃排空(增加胃内残留率)和小肠推进率;显著抑制大鼠离体回
肠痉挛性收缩;显著提高小肠吸收D-木糖水平(增加尿液中D-木糖的排出量);显著减少小鼠腹泻次数。结论:
滇白珠提取物具有显著抑制胃肠运动亢进,改善小肠吸收功能以及止泻作用。
[关键词] 滇白珠提取物;胃肠运动功能;吸收功能;止泻
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X(2016)09-0020-04
Effective Study of Extract of Gaultheria Leucocarpa on Gastrointestinal
and Antidiarrheal Function
HE Fei1,2, WEI Gui-ning1,2, SU Hua1, WEI Wei1
(1.Guangxi Institute of Chinese Medicine & Pharmaceutical Science, Nanning Guangxi 530022, China;
2.Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Standards, Nanning Guangxi 530022, China)
[Abstract] Objective: To observe the effect of the extract of Gaultheria leucocarpa on gastrointestinal and
antidiarrheal function. Methods: The effect of the extract of Gaultheria leucocarpa was investigated with gastroin-
testinal function on gastric emptying and small intestine activities movement mice induced by neostigmine, anti-
spasmodic activities in rats induced by acetylcholine, small intestine disturbance of absorptive function malab-
sorption in mice induced by reserpine, antidiarrheal in mice induced by castor oil and improving urinary excre-
tion of D-xylose in mice. Results: The extract of Gaultheria leucocarpa could significantly inhibit the gastric
remnant rate and the alvine advancing rate on gastric emptying and small intestine activities movement mice in-
duced by neostigmine. The extract of Gaultheria leucocarpa could relieve the spasm of gallbladder smooth mus-
cle in rats induced by acetylcholine. The extract of Gaultheria leucocarpa could improve urinary excretion of D-
xylose in mice, and decrease the times of diarrhea in mice induced by castor oil and. Conclusion: The extract
of Gaultheria leucocarpa can improve absorption function and inhibit gastrointestinal-hypermotility of the small
intestine, and stop diarrhea.
[Key words] extract of Gaultheria leucocarpa; gastrointestinal motility function; absorption function; antidiar-
rheal
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2016.09.007
2016年5月第22卷第9期 May.2016 Vol.22 No.9
机酸甲酯类化合物以及木脂素等化学成分[5]。药理学
研究表明,滇白珠具有抗炎,抗菌,镇痛,祛痰化瘀和
抗肿瘤等作用[6]。而有关滇白珠对胃肠功能影响以及
止泻作用未见报道。本文观察滇白珠提取物对动物
胃肠运动、吸收功能的影响以及止泻作用,为进一步
开发其药用价值提供依据。
1 实验材料
1.1 动物 SD大鼠,体质量200~250 g;昆明种小白
鼠,体质量18~22 g,雌雄兼用,SPF级,由广西医科大
学实验动物中心提供。动物许可证号:SCXK桂2009-
0002。动物观察室:温度(25±1)℃,相对湿度(60±
10)%。
1.2 药物 滇白珠药材采自广西金秀县,经广西中
医药研究院何开家主任中药师鉴定为杜鹃花科植物
滇白珠Gaultheria leucocarpa BI . var . yunnanensis
(Franch.)T.Z.Hsu的干燥全株。滇白珠提取物制备(水
提醇沉法):滇白珠药材饮片,水提取2次,每次加10
倍水,充分浸泡,加热至沸腾提取2 h,合并2次提取
液,滤过。滤液浓缩至1.0 g生药/mL,然后加入95%乙
醇使药液乙醇含量达65%,静置沉淀,吸取乙醇提取
液,沉淀物再用65%乙醇提取2次;提取液经回收乙
醇后制成药膏备用。临用时用蒸馏水配成所需浓度
药液,供实验用。滇白珠提取物灌胃给药高剂量(20.0 g
生药/kg)约为小鼠灌胃LD50的1/10。易蒙停,批号:
130219289,西安杨森制药有限公司;健胃消食片,江
中药业股份有限公司。
1.3 试剂 溴化乙酰胆碱,Aladdin Chemistry Co.
Ltd;甲硫酸新斯的明注射液,河南润弘制药股份有
限公司;利血平注射液,天津金耀氨基酸有限公司;
D(+)木糖,国药集团化学试剂有限公司;蓖麻油,广
东光华科技股份有限公司。黑色炭末糊配制:取2 g
CMC-Na(800-1200)加70 mL蒸馏水浸泡溶解,然后
加入3.3 g奶粉,1.0 g炭末混匀。
1.4 仪器 ZH-Z离体器官测量系统,淮北正华生
物仪器设备有限公司;JZ301型微张力换能器,北京
新航兴业科贸有限公司;BL420S生物机能实验系
统,成都泰盟科技有限公司;722型可见分光光度计,
上海精密科学仪器有限公司;FA1004型上皿电子天
平,上海精科天平;等。
1.5 统计学方法 数据均以(x±s)表示;采用SPSS
16.0软件进行方差分析,P<0.05为差异有统计学意
义。
2 实验方法与结果
2.1 滇白珠提取物对新斯的明所致小鼠胃肠运动
亢进的影响[7] 小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,
每组10只,分别为滇白珠提取物低(10.0 g生药/kg)、
高(20.0 g生药/kg)剂量组,易蒙停6 mg/kg组,模型组
以及正常组。灌胃给药,1次/d,连续5 d,正常组和模
型组灌胃同容积蒸馏水,第4天给药后,小鼠禁食(不
禁水)24 h,第5天末次给药后1 h,模型组和给药组小
鼠皮下注射(SC)甲硫酸新斯的明0.15 mg/kg,正常组
SC同体积NS,20分钟后,灌胃黑色炭末糊0.8 g/只,
20 min后脱颈处死小鼠,结扎胃喷门和幽门,取胃,
称量胃全重,剖开胃体,清理干净胃内残留物,称量
胃净重。计算胃内残留物重量(胃全重减去胃净重的
差值)以及胃内残留率(%)。胃内残留率(%)=胃内残
留物重量(g)÷0.8 g(炭末糊)×100。同时取出小肠,测
量小肠长度(幽门至回盲部的距离)以及炭末糊推进
距离(幽门至炭末糊前沿的距离),然后计算小肠推
进率(%)。小肠推进率(%)=(炭末糊推进距离÷小肠
长度)×100。(见表1)
表 1 滇白珠提取物对新斯的明所致小鼠胃肠运动亢进的影
响 (n=10,x±s)
组别 胃内残留率(%) 小肠推进率(%)
正常组 47.10±14.50b 60.46±10.95a
模型组 23.04±14.79 73.12±10.72
易蒙停组 40.18±11.71a 70.88±13.23
滇白珠高剂量组 52.84±13.31b 63.21±7.66a
滇白珠低剂量组 48.31±16.19b 67.18±8.77
注:与模型组比较,aP<0.05,bP<0.01。
2.2 滇白珠提取物对乙酰胆碱(Ach)所致大鼠离体
回肠痉挛性收缩的影响[8] 大鼠,雌雄兼用,禁食(不
禁水)24 h,处死,取1 cm左右回肠,置内装有克氏液
表 2 滇白珠提取物对 Ach所致大鼠离体肠管痉挛性收缩的影响 (x±s)
张力/g
基础张力 Ach+给药前 Ach+给药后2.5 min 抑制率(%) Ach+给药后5.0 min 抑制率(%)
正常组 9 0.45±0.03 2.01±0.51 1.80±0.47 13.30±7.57 1.69±0.46 20.83±11.92
阿托品组 6 0.47±0.08 1.94±0.26 0.92±0.19b 69.27±9.62b 0.77±0.16b 79.48±8.10b
滇白珠高剂量组 8 0.48±0.05 2.14±0.25 1.17±0.31b 55.93±13.90b 0.89±0.23b 73.84±11.10b
滇白珠低剂量组 9 0.45±0.05 2.11±0.36 1.49±0.27 33.74±5.44 1.30±0.28a 46.63±8.11b
注:与对照组比较,aP<0.05,bP<0.01。
组别 例数
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的浴槽中,恒温水浴温度为(37±0.5)℃,调好空气流
量。连接生物机能实验系统,调节肠管基础张力为
0.5 g左右,首先记录一段基础张力曲线,然后加入
Ach(终浓度0.01 g/L),在肠管痉挛性收缩平稳期(即
张力曲线平台期),分别加入滇白珠提取物低(终浓
度15.7 g生药/L)、高(终浓度31.5 g生药/L)剂量和硫酸
阿托品(终浓度0.01 g/L)药液,对照组加入同容积
NS;每次换药液前均用克氏液冲洗肠管,待肠管张
力恢复正常后方可再次加药。给药后继续观察记录
5 min内肠管张力变化曲线。选择给Ach前(基础张
力)、给Ach后张力平台期以及Ach+给药后2.5、
5.0 min共4个时间点的张力大小(g)以及给药后2.5、
5.0 min的张力抑制率(%)进行统计分析。张力抑制
率(%)=[(加Ach后张力曲线平台期张力-给药后某
时间点张力)÷(加Ach后张力曲线平台期张力-基础
张力]×100。(见表2)
2.3 滇白珠提取物对蓖麻油引起的小鼠腹泻次数
的影响[7] 小鼠40只,雌雄各半,随机分为4组,每组
10只,分别为滇白珠提取物低(10.0 g生药/kg)、高
(20.0 g生药/kg)剂量组,易蒙停6 mg/kg组以及正常
组。灌胃给药,1次/d,连续4 d,末次给药后1 h,灌胃
蓖麻油0.1 mL/10 g,立即把小鼠单个放在垫有吸水纸
的鼠笼内,连续观察4 h小鼠腹泻次数(稀便点数)。
(见表3)
表 3 滇白珠提取物对蓖麻油引起的小鼠腹泻次数的影响
(n=10,x±s)
组别 腹泻次数 抑制率(%)
正常组 10.30±2.36 ——
易蒙停 2.80±1.99b 72.82
滇白珠高剂量组 2.70±2.00b 73.79
滇白珠低剂量组 6.30±3.56b 38.83
注:与对照组比较,aP<0.05,bP<0.01。
2.4 滇白珠提取物对利血平所致小肠吸收功能障
碍的影响[9] 小鼠50只,随机分为5组,每组10只,分
别为滇白珠提取物低(10.0 g生药/kg)、高(20.0 g生
药/kg)剂量组,健胃消食片(阳性组)2.20 g/kg组,模
型组以及正常组。灌胃给药,l次/d,连续20 d;模型
组、正常组灌胃同容积蒸馏水。第5 d灌胃给药同时,
除正常组SC同体积生理盐水外,其余各组每鼠SC利
血平0.12 mg/kg,1次/d,连续15 d,以复制利血平型小
肠吸收功能障碍模型。末次灌胃给药后1 h (为末次
SC利血平后24 h)进行小肠吸收功能试验(试验前小
鼠禁食、不禁水12 h)。试验时每只小鼠灌胃5%D(+)
木糖,容积20 ml/kg,然后单只放入尿液收集器中收
集5 h内排出的尿量,测定尿液中D(+)木糖的含量,计
算5 h D(+)木糖排出量(mg)。(见表4)
表 4 滇白珠提取物对小鼠小肠吸收功能的影响 (n=10,x±s)
组别 5 h尿中排出木糖重量/mg
正常组 6.36±1.68b
模型组 3.95±1.67
阳性组 6.24±2.55a
滇白珠高剂量组 6.26±2.36a
滇白珠低剂量组 5.97±2.25a
注:与模型组比较,aP<0.05,bP<0.01。
3 讨 论
腹泻是由于各种不良刺激造成胃肠道分泌物大
量增加,消化、吸收功能障碍以及胃肠蠕动异常加速
而形成的,表现为大便次数增加,溏便、清稀、严重者
水样便。腹泻诱因很多,其中肠过敏,细菌、病毒感
染,食物中毒或某些全身性疾病等为腹泻常见病因。
中药具有良好的止泻作用。吴志军采用参苓白术散
加减治疗脾胃虚弱型慢性腹泻30例取得较好的临床
疗效[10]。现代药理研究表明,中药复方或单方制剂对
腹泻均具有不同程度的防治作用。益脾止泻汤能够
提高血清D-木糖含量、改善胃肠吸收功能以及降低
血浆胃动素水平、纠正胃肠功能紊乱状态,从而发挥
止泻作用[11]。苦参提取液能够改善由肠致病性大肠
杆菌引起的小鼠腹泻症状并保护肠道组织 [12]。葛根
水煎液具有明显抑制小肠蠕动、降低胃排空速度的
作用,并能明显减少番泻叶引起的小鼠腹泻次数[13]。
本实验采用新斯的明造成小鼠胃排空和小肠推
进亢进,乙酰胆碱造成大鼠离体回肠痉挛性收缩,利
血平造成小鼠小肠吸收功能障碍,蓖麻油造成小鼠
腹泻,观察滇白珠提取物对胃肠运动亢进模型动物
胃肠运动,小肠吸收D-木糖水平以及腹泻次数的影
响。研究结果显示,滇白珠提取物能够显著抑制小鼠
胃排空和小肠推进率,抑制大鼠离体回肠痉挛性收
缩,提高小肠吸收D-木糖水平(增加尿液中D-木糖
的排出量),以及减少小鼠腹泻次数。表明滇白珠提
取物具有抑制胃肠运动亢进,改善小肠吸收功能和
止泻作用。而滇白珠改善胃肠功能和止泻的具体作
用机制及其物质基础有待进一步研究。
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22
2016年5月第22卷第9期 May.2016 Vol.22 No.9
3.5 小结 清音片长期给药后大鼠外观体征和行
为无异常改变,主要脏器组织均未见明显异常。表明
大鼠经口灌胃给药,未造成明显的病理学毒性反
应,可安全应用于临床。
4 讨 论
清音丸收载于《中华人民共和国药典》2010年版
一部,主要由诃子肉、川贝母、百药煎、乌梅肉、葛根、
茯苓、甘草、天花粉组成。清音丸为国家中药保护品
种,清音片为清音丸改革剂型,服用更方便,服用量
小,更适应现代人的需求,是北京同仁堂股份有限公
司研制的中药8类新药。
本方中诃子肉具有苦降收涩的性味,既能敛肺
气,止咳逆,又能下气降火,畅利咽喉,使肺窍无壅
塞,声音清亮;百药煎为五倍子同茶叶等经发酵制成
的块状物,润肺化痰,止血止泻,清热生津。乌梅肉味
酸涩、气平,其性重在收敛。乌梅肉和诃子肉相配,敛
肺利咽,生津止渴。川贝母苦甘微寒,滋润性强,能清
热润肺;天花粉可清肺胃之热,养肺胃之阴,生肺胃
之津,并兼有解毒、活血、消肿的功效;葛根具有生津
止渴的作用;甘草可泻火解毒益气,并调和诸药。诸
药合用,共奏清热利咽,生津润燥的功效。
本实验中清音丸高剂量组(3.87 g生药/kg,相当
于临床日用量的85倍),清音片高、中、低剂量组(相
当于临床日用量的120、60和30倍),连续给大鼠灌胃
13周及停药2周期间大鼠的一般状况良好,未发现与
药物毒性有关的动物死亡。
给药13周后及停药2周清音片高、中、低剂量组
大鼠病理组织学检测,除个别动物肺部有轻度炎症,
可能与灌胃时呛咳有关,余未见各脏器的异常,给药
期和恢复期均未见由该药引起的中毒性病理组织学
改变。
本研究结果表明,清音片药毒性较小,可安全应
用于临床。
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