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〔2000-07-05收稿　 2000-12-25修回〕
(编辑　牛铁兵 )
于术对衰老大鼠抗氧化系统影响的实验研究 1
欧　芹　张玉华 2　魏晓东　王桂杰　张鹏霞　白书阁　 (佳木斯大学基础医学院 ,黑龙江 佳木斯　 154002)
白　晶　 (佳木斯大学图书馆 )
　　〔摘　要〕　目的　探讨于术的抗衰老作用机制 ,并寻求合理的用药时间。 方法　采用自然衰老的 Wis tar大鼠 ,测定血清总抗氧化能力 ( TAA)、
红细胞超氧化物歧化酶 ( SOD)活性、肝组织丙二醛 ( M DA)和脑组织脂褐素 ( LPF)及心肌细胞膜 Na+ , K+ -AT P酶 ( Na+ , K+ -AT Pase)活性 ,观察于
术对它们的影响。结果　于术能明显提高老年大鼠血清 TAA、红细胞 SOD及 Na+ , K+ -ATPase活性 ( P < 0. 01) ,而明显降低 MDA的含量和脑 LPF
的生成 (P < 0. 01)。 结论　于术可明显提高老年大鼠抗氧化能力 ,具有抗衰老作用 ,理想的用药时间为 20 d。
〔关键词〕　于术　老年大鼠　 SOD　 TAA　 LPF　抗衰老
〔中图分类号〕　Q599　　〔文献标识码〕　 A　　〔文章编号〕　 1005-9202( 2001) 05-0371-02
Ef fects of Yuzhu on the anti-oxidat ion system in aged rats
OU Qin,WEI Xiao-dong, WANG Gui- jie et al
Basic medical college of Jiamusi University,Heilong Jiang Jiamusi 154002
〔Abstract〕　 Objective　 To investig ate the anti-ageing mechanism o f Yuzhu and sea rch fo r a reasonable duration o f adminis-
tra tion.Methods　 Using ageing Wistar ra ts, w e dete rmined the serum to tal anti-oxida tion activ ity ( T AA) , supero xide dismutase
( SOD) in r ed blo od cells, Na+ , K+ -AT Pase activities in myoca rdial cells as well as the content o f malondia ldehyde ( MDA) in liv er
and tha t o f lipofuscin ( LPF) in br ain, and observ ed the effects o f Yuzhu on th em. Results　 Yu zhu significantly increased the serum
TAA, SOD and LPF ( P < 0. 01). Conclusion　 Yuzhu can g reatly incr ea se the anti-oxida tion activ ity in aged rats and has anti-age-
ing effect. 20-day is suggested the optima l duration of administ ration.
〔Key words〕　 Yuzhu　 Aged ra ts　 Super oxiden dismutase　 To tal antio xidant　 Lipo fuscin　 Anti-ag ing
1　黑龙江省自然科学基金课题项目 ( D9818)
2　吉林大学中日联谊医院
作者简介:欧芹 ,女 , 39岁 ,副教授 ,研究方向:衰老生化机制与中药抗衰
老作用
　　据《神农本草经》记载久服于术 ( A tracty lodes mac rocepha-
la Koidz)可轻身延年 ,现代药理学研究表明有增加小鼠体重、
肌力 ,增强免疫细胞功能 ,保护肝脏、肾脏 ,抗肿瘤等〔1, 2〕功能。
为确定于术的抗衰老作用及其作用机制 ,本文观察了于术对抗
氧化系统及 Na+ -K+ -ATP酶活性的影响 ,及合理的用药时间。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　试剂及药品　于术购于佳木斯市药材公司 ,用文火水
提取 3次 ,混合 3次水提液 ,浓缩致每毫升含生药 1. 5 g ,置 4
℃备用。超氧化物歧化酶 ( SOD)、 Na+ -K+ -ATP酶、总抗氧化能
力 ( T AA )试剂盒由南京建成生物制品工程研究所提供 ; 1, 6-二
苯基 -1, 3, 5-己三烯 ( DPH) ( Sigma公司产品 , A. R) ,硫代巴比
妥酸 (上海试剂二厂 , A. R)。
1. 1. 2　动物及分组　Wistar雌性大鼠由北京中国中医研究院
医学实验动物中心提供。 17～ 19月龄 , 32只 ,体重 371± 29 g。
随机分为四组: 老年对照组 ( 0 d) ;实验组 A( 10 d );实验组 B
·371·欧　芹等　于术对衰老大鼠抗氧化系统影响的实验研究　第 5期
( 20 d) ;实验组 C( 30 d)。
1. 2　实验方法
1. 2. 1　动物的处理　各组标准饲料喂养 ,老年对照组喂养 1
w后 ,乙醚麻醉后心脏取血 ,分别制成肝素抗凝血和血清 ,迅速
处死大鼠 ,取肝脏、脑组织、心脏 ,制成匀浆 ,置 - 40℃保存备
用。 各实验组每日灌服于术水煎剂 2 m l /kg体重 ,在给药后第
10、 20、 30天时 ,同法处理 ,取血和组织备用。
1. 2. 2　指标的测定　血清总抗氧化活性测定 ,通过抗氧化物
质使 Fg3+ 还原成 Fg2+ ,后者与非卟啉物质形成稳定的络合物
来计算总抗氧化活性 ,以 U /ml血清表示。肝组织 MDA含量的
测定 ,采用 TBA比色法〔3〕 ,以 nmo l /mg蛋白表示。红细胞 SOD
活性测定 ,取肝素抗凝血 , 4℃下分离红细胞 ,用冷 0. 9% NaCl
洗涤两次 ,用亚硝酸盐法测定 SOD活性 ,结果以 NU /ml全血
表示。脑组织 LPF含量测定 ,采用 Sohal法〔4〕 ,以 ng /ml匀浆表
示 ,心肌组织 Na+ -K+ -ATP酶活性按试剂盒说明方法测定。肝
细胞膜脂流动性测定 ,采用荧光偏振法〔5〕 ,以荧光偏振度 ( P)表
示 ,μMpi /mg· h- 1。 组织蛋白含量的测定 ,采用 Low ry氏法。
1. 2. 3　统计学处理　文中所用数据以 x± s,两均数比较采用
t检验。
2　结　果
2. 1　不同给药时间大鼠血清 T AA、 MDA、 SOD活性的变化　
见表 1。
表 1　不同给药时间组大鼠 TAA、MDA、 SOD的变化 (x± s)
组别 n T AA
( ng /ml )
MDA
( nmol /mg蛋白 )
SOD
( IU /ml )
0 d 8 5. 38± 0. 58 144. 3± 11. 9 1 950± 395
10 d 8 6. 62± 1. 511) 144. 5± 8. 5 2 569± 1472)
20 d 8 6. 66± 1. 052) 116. 7± 9. 32) 2 600± 1502)
30 d 8 7. 53± 0. 902) 115. 3± 10. 92) 2 617± 1812)
　　注:未给药组比较: 1) P < 0. 05, 2) P < 0. 01;下表同
由表 1可见 ,在给药 10 d时血清 TAA开始增加 (P <
0. 05 ) ,在 20 d显著增加 (P < 0. 01);在给药后 20 d,红细胞
SOD活性就有明显提高 (P < 0. 01) ;而 M DA含量在给药 20 d
后才发生明显的变化。
2. 2　给药不同时间老年大鼠 LPF、膜质流动性 ( P)和 Na+ -
K+ -AT P酶的变化 ,见表 2。
表 2　给药不同时间 LPF、 P和 Na+ -K+ -ATP酶的变化 (x± s)
组别 L PF
( ng /mg蛋白 ) P
Na+ -K+ -ATP酶
(μMpi /mg蛋白· h- 1 )
0 d 1. 68± 2. 06 0. 38± 0. 08 0. 68± 0. 09
10 d 1. 21± 0. 322) 0. 34± 0. 11 0. 75± 0. 15
20 d 1. 01± 0. 192) 0. 35± 0. 07 0. 79± 0. 101)
30 d 1. 02± 0. 282) 0. 34± 0. 08 0. 91± 0. 052)
3　讨　论
过多自由基的产生可引起不同程度的细胞毒及瞬时的不
可逆损伤〔6〕 ,而最终引起机体衰老。 以往的研究表明衰老时机
体抗氧化酶活性降低 ,抗氧化能力下降〔7, 8〕 ,自由基产生过多往
往作用于不饱和脂肪酸 ,导致脂质过氧化作用增强 ,使生物大
分子之间发生交联 ,致使蛋白质结构破坏而丧失功能。 于术主
要成分含苍术酮、苍术醇、于术内脂 A及 B, 3-β-乙酰氨基苍术
酮 , 3-β羟基苍术酮、芹烷烯酮及苍术内酯 ,尚含维生素 A样物
质和多糖及丰富的铜、锌、锰等微量元素。 具有补气、健脾、燥
湿、止汗和利水的功效。 本实验中于术能明显增加老年大鼠血
清 SOD活性和血清总抗氧化能力 ,使肝组织中 MDA含量和脑
组织中 LPF含量降低 ,提高机体对抗自由基对膜结构损伤的
能力 ,减轻自由基对生物膜大分子的攻击 ,从而减弱过多自由
基对生物膜的损害 ,使老年时膜酶活性有所改善。 亚细胞器的
膜 ,尤其是线粒体膜对过氧化损伤更敏感 ,于术可提高心肌
Na+ , K+ -AT P酶活性 ,使心肌的能量代谢、膜对离子转运维持
正常。有研究表明老化红细胞膜质流动性下降可能与自由基的
随龄变化有关 ,于术虽能提高机体的抗氧化能力 ,但对肝细胞
膜质流动性没有影响 ,提示脂质过氧化作用不是导致膜质流动
性随龄下降的唯一因素。
不同给药时间对老年大鼠机体抗氧化等指标的影响发现 ,
于术首先降低组织 LPF含量 ,而后降低 M DA含量 ,说明于术
除通过提高机体抗氧化能力、降低组织 LPF外 ,还可能通过为
机体补充大量的微量元素 ,维生素等其它途径降低组织 LPF
的含量 ,其机理尚有待于继续研究。 于术发挥抗氧化作用的最
佳用药时间为 20 d。
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〔2000-01-07收稿　 2000-04-25修回〕
(编辑　胡国义 )
·372· 中国老年学杂志 2001年 9月第 21卷