全 文 ：兰 州 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) , I 。 。1 . 2 7 ( 2 ) : 19 6~ 19 7
JO U RN A L O F L A N ZH O U U N IV E R S IT Y ( N a t u r a l S c i e 公 e e s )
研 究 简 报
伊贝母组织培养中贝母碱含量变化的研究
卫 · E M S对伊贝母愈伤组织培养中贝母碱蓄积量的影响
丁感宾 王仑山 . 店庆圈
(兰州大学生物不 . 兰州 , ” 。。。0)
近年来 , 利用植物组织培养生产天然产物是一个十分活跃的研究领域 . 据报道 , 目
前用组织或细胞培养产生的次生代谢产物 已达 50 多种 . 有的已进入中试阶段 , 有的已实
现了工业化生产 . 但由于组织或细胞培养产生的次生代谢产物产量低 、 成本高 , 有的作
者已通过使用物理或化学诱变剂处理培养的组织或细胞 , 大大提高了培养物 中次生代谢
物的含量 . 如郑光植 ` ” “ ’ 用 4 o 0 R的丫一射线照射三分三愈伤组织获得了东蔑碱含量比
亲本植株高 30 肠的变异株 , 而且经过 14 代仍保持稳定 . B er il 川 ” 用化学诱变法获得的
烟草丁二一4对一氟苯丙氨酸抗性细胞株 , 它产生的肉桂酞腐胺 比亲本细胞高 6 ~ 10 倍 .
伊贝母 ( F r i才i lla r i。 几 11` d `f ot r a S e五r e n k ) 是百合科贝母属多年生草本植物 , 它
和浙贝 、 川贝一样 , 都是名贵中药材 , 以鳞茎入药 , 其有效成分是贝母碱 . 前文 [` ’ 已
报道了用正交试验法筛选出了既可加速愈伤组织生长 , 也可提高贝母碱含量的培养基组
合 ( M S + N A A 。 , s m g / L + K T Z . o m幻 L + L H 10 o g / L ) . 本文是前一 工作的继续 , 通
过在不同培养时间 , 使用不同浓度的 E M S , 以确定诱变产生贝母碱高含量无性系的最佳
一
E M S浓度因素和培养时间因素 , 为今后进一步筛选高产突变体 , 使贝母组织培养用于商
业化生产打好基础 . _
t 材瑞和方法
声。 1 愈伤组织的培养及诱 变处理
将伊贝母鳞茎切块接种在 M S基本培养基上 , 附加 N A A o . s tn g / L , K T 2 . o m g / L ,
L H 10 m g / L
. 蔗糖浓度 4肠 , 琼脂。 . 65 帕 , p H S . 6 ~ 6 . 8 . 培养 20 d时 , 选择生长良好
的愈伤组织进行不同时间的继代培养 . 8组材料每组 5瓶分别在培养。 、 6 、 1 2 、 18 、 24 、
30
、 “ 、 妞 d时用 E M S处理 。 将 5瓶培养基中的愈伤组织块分别放入 E M S浓度为。 。 0 肠 、
。 `。石肠 、 。 . 10 肠 、 0 . 15 呱和 0 . 2 0帕的浪体墙养基中振婚培养 2 4 h , 冲冼干净后 , 放回原培
养基中继续培养 7 d , 进行贝母碱含量的侧定 .
1
。
2 贝毋碱含量 的浏定
参照张秀琴等 ` 压 ’ 的方法 , 稍加修改 .
2 结 果
不 同 E M S浓度贝母碱蓄积量的变化见图 1 .
本文 19 00年 9 月 8 日收 到 ,
. 通讯联系人 .
DOI : 10. 13885 /j . i ssn. 0455 -2059. 1991. 02. 041
2期 丁惠宾等 :伊贝母组织培养中贝母碱含量变化研究 19学
- - - - - ~- - - - ~自 - - - -
8 泊 论
a .从图 1看出 , 经不同浓度的 E M S诱变后的愈伤组织 , 贝母碱含量有显著差异 ,
欲ù七蓄缓助公
0
.
10
E M s 浓度 / %
0
.
15 0
.
20
图 1 不同 E M S 浓度 贝毋碱蓄积蚤的变化
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右
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说明 E M S 对贝母碱的蓄积量确
有明显影响 . 其 中 以 。 . 10 呱 和
O
。
15 肠的浓度诱变效应最强 , 可
见这是诱发伊贝母愈伤组织获得
高含量贝母碱株系的最适浓度 .
结合培养天数分析 , 以 培养 30 d
时为最佳 。 由此结论 , 用。 . 10 肠
的 E M S处理 培养 30 d时的伊贝母
愈伤组织 ,可 望提取较高含 量 的
贝母碱 . 此外 , 0 . 0 5肠的 E M S,
不论培养时 间的多少 , 贝母碱含
量均有下降趋势 , 说明该浓度的
E M S 具有抑制伊贝母愈伤组 织
产生贝母碱的效应 .
从图 1 还可看 出 , 在 不 同
E M S浓度下 , 培养 1 2 d时的愈伤
组织同其它培养时 间相比 , 贝母
碱含量很低 , 说明在此期间贝母
碱处于缓慢的累积过程 . 超过这个时间 , 贝母碱就有一个急剧增加的趋势 .
b
. 贝母碱同其他植物的次级代谢产物一样 , 具有种类及结构的多样性 , 产生次级代
谢产物的途径也是多条的 , 影响因素更为复杂 , 但通过遗传变异改进其生产是一个重要
手段 . 除利用继代培养中的 自发突变获得高产变异系外 , 采用诱发突变是一种快速 、 简
便而又经济的方法 . 本文所用的 E M S是一种使用最广泛的诱变剂 , 从实验看出 , 得到
了较好的结果 . 在此基础上筛选高产变异系可望获得成功 。
今 考 文 献
郑光桩 . 药用植物组织培养的研究 V . 生 长速率和东住城含圣份高而称 定的突史体 . 位物生足李报 , 19 83 ,
。 ( 2 ) : 12 。~ 13 `
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贾廷推 , 王 仑山 . 伊贝毋组织培养中贝毋城含童变化的研究 1 . 几种位物生长调节荆时伊贝毋愈伤组织生长
圣和贝毋减蓄积童的影响 . 兰州大毕学报 ( 白然科李版 ) , l o a o , 2 6 ( 3 ) : z r 4 ~ r z 7
张玲琴 , 沙世炎 . 贝毋中总生物减的含圣浏定 . 中苹药通讯 . 197 6 , 2 : s1 ~ 16 .