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薇甘菊提取物对螺旋粉虱的生物活性



全 文 :收稿日期(Received):2012 - 10 - 08 接受日期(Accepted):2012 - 12 - 22
基金项目:海南省科学事业费项目(11-20409-0005、11-20409-0009)
作者简介:钱军,男,林业工程师。研究方向:林业有害生物普查及防控技术
* 通讯作者(Author for correspondence) ,E-mail:lcj5783@ 126. com
DOI:10. 3969 / j. issn. 2095-1787. 2013. 01. 006
薇甘菊提取物对螺旋粉虱的生物活性
钱 军1,钟宝珠2,苟志辉1,罗湘粤1,吕朝军2*
1海南省林业科学研究所,海南 海口 571100; 2中国热带农业科学院椰子研究所,海南 文昌 571339
摘要:【背景】薇甘菊和螺旋粉虱均为我国入侵物种,且二者之间无寄生关系。本研究旨在挖掘薇甘菊的利用价值,为其在
螺旋粉虱生态防控中的使用提供依据。【方法】采用药膜法和田间喷雾法,研究了 4 种提取方法(冷浸法、索氏提取法、冷
浸—索氏提取法、温浸法)获得的薇甘菊提取物对螺旋粉虱成虫的室内生物活性和田间防治效果。【结果】在所选择的 4 种
提取方法中,索氏提取法和温浸法的提取率最高,分别为 9.90%和 9.35%;冷浸—索氏提取法和冷浸法的提取率相对较低,
分别为 7.73%和 4.50%。室内生物测定表明,采用冷浸法、冷浸—索氏提取法、索氏提取法和温浸法所获得的薇甘菊提取
物对螺旋粉虱成虫的 LC50值分别为 8.94、9.03、6.32 和 7.51 mg·mL
-1,但由于 95%置信区间存在重合,不同提取物活性之
间的差异不显著。田间试验结果则表明,不同提取方法获得的薇甘菊提取物对螺旋粉虱成虫都具有良好的防治效果,100
倍液处理 7 d后,对螺旋粉虱的校正防效均在 75%以上。但是,索氏提取法和温浸法提取物防治效果显著优于冷浸—索氏
提取法和冷浸法。【结论与意义】薇甘菊提取物对螺旋粉虱具有生物活性。
关键词:薇甘菊;螺旋粉虱;生物防治;提取方法;植物生物碱
Bio-activities of Mikania micrantha extracts on Aleurodicus disperses
Jun QIAN1,Bao-zhu ZHONG2,Zhi-hui GOU1,Xiang-yue LUO1,Chao-jun L2*
1Forestry Research Institute of Hainan Province,Haikou,Hainan 571100,China;2Coconut Research Institute,
Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Wenchang,Hainan 571339,China
Abstract:【Background】Mikania micrantha (Asteraceae)and Aleurodicus disperses (Aleyrodidae)are two invasive species of Chi-
na with non-parasitism. The study sought evidence for ecological control of A. disperses by M. micrantha by its plant-based alkaloids.
【Method】The laboratory bio-activities and field effects of M. micrantha extracts were examined using four extraction methods (cool
maceration,Soxhlet extraction,cool maceration followed by Soxhlet extraction,warm maceration). M. micrantha extracts were test-
ed on A. disperses using test tube residual film and field spray method.【Result】Among the four different extraction methods,Soxhlet
extraction and warm maceration showed higher extraction rate (9.90% and 9.35%,respectively)followed by cool maceration-with-
Soxhlet and cool maceration extraction methods (extraction ratio of 7.73% and 4.50%,respectively). The laboratory bioassay re-
sults indicated no significant difference among the bio-activities of M. micrantha extracts prepared using different extract methods on
A. disperses under laboratory conditions. However,significant differences were found under field conditions:Soxhlet extraction and
warm maceration extracts had higher effect than those of cool maceration-with-Soxhlet and cool maceration. All extracts showed good
effects on A. disperses,and the best method (Soxhlet extraction) ,at 100 × times dilution,killed over 75% of A. disperses individu-
als after 7 days. 【Conclusion and significance】Extracts of M. micrantha showed inhibition against another invader,A. disperses,so
its success may involve plant-based alkaloids.
Key words:Mikania micrantha;Aleurodicus disperses;biological control;extraction method;plant alkaloids
螺旋粉虱 Aleurodicus disperses Russell 属同翅目
Homoptera粉虱科 Aleyrodidae 粉虱亚科 Aleurodiei-
na,是近年来入侵我国的一种重要害虫(Charati et
al.,2003;Kambrckar et al.,2003) ,主要分布于我国
海南省和台湾地区,已经对我国的农林业造成了严
重危害(韩冬银等,2008;谭群英,1993;温宏治等,
1994;徐岩,1999;虞国跃等,2007;Russell,1965)。
目前对该虫防控技术的研究主要集中在化学防治
生物安全学报 2013,22(1) :33 - 37
JOURNAL OF BIOSAFETY http:∥www. jbscn. org
方面,如林珠凤等(2007)研究了 8 种常用杀虫剂对
螺旋粉虱的防治效果,刘奎等(2007、2008)研究了
常用杀虫剂对螺旋粉虱的田间药效。将植物活性
物质用于螺旋粉虱防控方面的研究还较少。钟宝
珠等(2009、2010)研究了几种植物乙醇提取物对螺
旋粉虱的生物活性,其中,在 50 倍液处理下,飞机
草 Chromolaena odoratum(L.)和青葙 Celosia argent-
ea (L.)提取物的防效均在 75% 以上;吕朝军等
(2009、2010a)研究了印楝素、苦参碱和烟碱对螺旋
粉虱的室内生物活性和田间防治效果;孙晓东等
(2010)研究了几种植物挥发油对螺旋粉虱的室内
生物活性。Wang et al.(2012)系统研究了 9 种植物
性杀虫剂对螺旋粉虱的毒力,并进一步将这些药剂
进行合理混配,分析了其对螺旋粉虱的增效作用。
薇甘菊 Mikania micrantha H. B. K.是菊科假泽
兰属多年生攀援草本,也是我国的头号外来入侵恶
性杂草。我国于 1884 年在香港动植物园首次采集
到薇甘菊标本(孔国辉等,2000;周先叶等,2003)。
迄今为止,薇甘菊已遍布我国的海南、广西、香港、
台湾、云南、广东等省,严重破坏了生物多样性和生
态环境,同时造成巨大的经济损失。研究表明,薇
甘菊提取物对褐稻虱 Nilaparvata lugens (Stal)、假
眼小绿叶蝉 Empoasca vitis (Gothe)和椰心叶甲
Brontispa longissima (Gestro)等均具有一定的生物
活性(冯安伟等,2010;吕朝军等,2010b;钟平生
等,2010)。目前,在我国农业生产提倡施用高效、
低毒、低残留和对环境友好的农药的大背景下,开
发新型植物源农药成为有效途径之一。本研究本
着生态安全、变害为宝,及以害抑害的原则,从薇甘
菊中提取活性物质,研究其对螺旋粉虱的生物活
性,以期为入侵植物薇甘菊体内次生物质的综合利
用和螺旋粉虱的无公害防治提供参考。
1 材料与方法
1.1 供试植物与昆虫
薇甘菊于 2012年 8月从野外采集(近 2年内未施
用任何药剂)。取薇甘菊地上部分,洗净泥沙,晾干表
面水分后置入 45 ~50 ℃烘箱内烘干,然后用植物粉碎
机(DWF-100型)粉碎,将干粉密封保存备用。
螺旋粉虱成虫采自海南省文昌市郊区的印度
紫檀 Pterocarpus indicus Willd.上,采集时间为 2012
年 9 月。所有寄主均未施药。
1.2 薇甘菊杀虫活性成分的提取
1.2.1 冷浸法 准确称取薇甘菊干粉 200 g,装入
1000 mL平底磨口烧瓶内,加入 800 mL 无水乙醇,
盖上玻璃磨口塞,室温下(约 27 ℃)浸泡 3 ~ 5 d。
1.2.2 索式提取法 准确称取薇甘菊干粉 200 g,
分 3 次用双层棉纱布袋装后放入索氏抽提器,加入
800 mL 无水乙醇,水浴加热进行提取,水浴温度
80 ℃,连续提取 36 h。
1.2.3 冷浸—索式提取法 为考察索氏提取过程
中温度对薇甘菊活性物质提取效果的影响,并提高
单纯冷浸法的提取率,对冷浸后的药渣采用索氏法
提取,方法同 1.2.2。
1.2.4 温浸法 将薇甘菊干粉 200 g 装入容量为
1000 mL的圆底烧瓶中,加入 800 mL 无水乙醇,在
恒温水浴锅(80 ℃)上回流抽提 4 h后过滤,再重复
提取 2 ~ 3 次,合并抽提液。此法与索氏提取法的
区别:温浸法中植物材料置于圆底烧瓶中,之后一
直置于恒温水浴锅中;而索氏提取法植物材料则置
于抽提管中,依靠回流液将浸泡成分导入下端接受
瓶中。
分别将以上 4 种方法所得滤液转入旋转蒸发
器中浓缩至稠膏状无溶剂滴出,然后称其质量。每
种提取方法重复 3 次,最后根据所得浸膏量计算不
同提取方法的提取率。
1.3 药液配制
称取适量不同提取方法获得的薇甘菊提取物
浸膏,用丙酮稀释成系列浓度(2000、1000、5000、
250、125 倍)后,置于 4 ℃冰箱中避光冷藏备用。
1.4 室内毒力测定
试验参照 Plapp & Bull (1978)和汤方等
(2007)的玻管药膜法进行,并有所改进。分别吸取
不同薇甘菊提取物系列浓度的药液 2 mL,置于
20 mL玻璃试管中,迅速滚动玻璃试管,使试管内壁
形成均匀的药膜,以仅加入丙酮的玻璃管作对照。
然后每管内接入发育一致的螺旋粉虱成虫 40 头
(随机选取雌、雄) ,用纱网封口,置于 27 ℃光照培
养箱中,5 h后检查死、活虫数,用解剖针轻触虫体,
完全不动者为死亡。每个处理重复 3 次。
死亡率按 Abbott 公式校正,用黄剑和吴文君
(2004)的方法,采用 Excel 统计软件求出毒力回归
方程及 LC50、LC50的 95%置信区间等。
·43· 生物安全学报 Journal of Biosafety 第 22 卷
1.5 田间试验
试验于 2012 年 10 月在海南省林业科学研究
所通什分所实验苗圃的受害严重的印度紫檀树上
进行。将不同提取方法获取的薇甘菊提取物以清
水稀释为 2000、1000、500、250、100 倍液(在配制过
程中加 2 滴吐温-80)。试验前以叶片为单位调查
虫口基数,并记录、标记。每 10 片叶为 1 个处理,
且每个处理总虫数不少于 100 头,每个处理重复 3
次。用小型手动喷雾器将药液均匀喷施于标记的
叶片背面。分别于药前和药后 1、3、7 d统计标记叶
片上残存的螺旋粉虱活虫数量,计算虫口减退率和
校正死亡率。
虫口减退率 = (药前虫口基数 - 药后残留虫
数)/药前虫口基数 × 100%
校正防效 =(处理组虫口减退率 -对照组虫口
减退率)/(1 -对照组虫口减退率)× 100%
2 结果与分析
2.1 不同方法对薇甘菊活性物质提取率的影响
从表 1 可以看出,索氏提取法和温浸法的提取
率较高,分别为 9.90%和 9.35%,可能是由于这 2
种方法在提取时温度较另外 2 种高,比较有利于乙
醇对活性物质的溶解。
表 1 不同提取方法对薇甘菊活性物质的提取率
Table 1 Extraction efficiency of M. micrantha secondary substances
using different extraction methods
提取方法
Extraction method
浸膏质量
Mass of extract
obtained (g)
提取率
Extraction ratio
(%)
索氏提取法 Soxhlet extraction 19.80 ± 0.38a 9.90 ± 0.19a
冷浸法 Cool maceration 9.00 ± 0.23c 4.50 ± 0.12c
冷浸—索氏提取法
Cool maceration-with-Soxhlet
15.47 ± 0.65b 7.73 ± 0.32b
温浸法 Warm maceration 18.70 ± 0.45a 9.35 ± 0.23a
数据为平均值 ±标准误;同列数据后附不同小写字母者表示经
DMRT法检验在 5%水平上差异显著。
Dates are mean ± SE;Means in the same column bearing different
letters are significantly different at the 5% level (Duncan s Multiple
Range Test).
2.2 薇甘菊活性物质对螺旋粉虱的室内毒力
从表 2 可以看出,4 种方法获得的薇甘菊提取
物对螺旋粉虱成虫均具有较强的毒力,但各处理的
LC50 95%置信区间均存在重叠现象,表明不同提取
方法所获得的薇甘菊提取物对螺旋粉虱成虫的室
内毒力没有显著差异。
表 2 薇甘菊次生物质对螺旋粉虱成虫的室内毒力
Table 2 Laboratory bio-activity of M. micrantha secondary substances against A. disperses
提取方法 Extraction method
致死中浓度 LC50
(mg·mL -1)
毒力回归方程
LC-P line
相关系数
r
95%置信区间
95% CI
冷浸法 Cool maceration 8.94 Y = 3.95 + 1.10X 0.98 5.97 ~ 14.01
冷浸—索氏提取法 Cool maceration-with-Soxhlet 9.03 Y = 4.06 + 0.98X 0.99 5.51 ~ 14.80
索氏提取法 Soxhlet extraction 6.32 Y = 4.18 + 1.03X 0.98 4.27 ~ 9.38
温浸法 Warm maceration 7.51 Y = 3.89 + 1.26X 0.97 5.20 ~ 10.85
2.3 薇甘菊活性物质对螺旋粉虱的田间防治效果
从表 3 可知,4 种方法获得的薇甘菊提取物对
螺旋粉虱均具有良好的田间防治效果。经索氏提
取法、温浸法、冷浸—索氏提取法和冷浸法获得的
提取物 100 倍液处理后,第 7 天螺旋粉虱的虫口减
退率分别为 92.59%、87.88%、80.00%和 78.79%。
但是,不同方法获得的薇甘菊提取物对螺旋粉虱的
田间防治效果存在显著差异。
3 讨论
近年来,农药残留问题备受关注,越来越多的高
毒、高残留药剂被限制使用;而生物源杀虫剂由于其
一系列的优势,在有害生物防治中被重视,一大批的
生物源活性物质被分离出来,并以其为先导化合物
开发成为一系列的杀虫剂产品,如印楝素、烟碱、除
虫菊素等。薇甘菊体内含有大量的次生化合物(邵
华等,2001;吴玉荷等,2007) ,用这些次生活性物质
防治农业有害生物具有无残留、生态安全等优点(覃
伟权等,2002)。已有研究表明,薇甘菊提取物在病
虫害防治方面具有一定的潜力(冯惠玲等,2004;杨
耀峰和张金凤,2012;钟宝珠等,2012)。本研究结果
亦表明,入侵植物薇甘菊的提取物对螺旋粉虱具有
生物活性,这拓展了薇甘菊的有害生物防治谱。
·53·第 1 期 钱军等:薇甘菊提取物对螺旋粉虱的生物活性
表 3 薇甘菊活性物质对螺旋粉虱的田间防治效果
Table 3 Field control effects of M. micrantha secondary substances against A. disperses
稀释倍数
Dilution ratio
提取方法
Extraction method
药后 1 天 1 day after treatment
虫口减退率
Decrease (%)
校正防效
Corrected control
effect (%)
药后 3 天 3 days after treatment
虫口减退率
Decrease (%)
校正防效
Corrected control
effect (%)
药后 7 天 7 days after treatment
虫口减退率
Decrease (%)
校正防效
Corrected control
effect (%)
2000 索氏提取法
Soxhlet extraction
41.18a 37.91a 50.00a 48.37a 61.76a 60.94a
温浸法
Warm maceration
28.83b 24.88b 41.44b 39.53ab 55.86ab 54.90b
冷浸—索氏提取法
Cool maceration-with-Soxhlet
21.43bc 17.07c 35.71bc 33.62bc 50.00bc 48.92bc
冷浸法
Cool maceration
18.06c 13.51c 33.33c 31.16c 43.06c 41.83c
1000 索氏提取法
Soxhlet extraction
45.83a 42.83a 54.17ab 52.67ab 66.67a 65.95a
温浸法
Warm maceration
41.67a 38.43a 58.33a 56.97a 60.00b 59.14ab
冷浸—索氏提取法
Cool maceration-with-Soxhlet
31.03b 27.21b 48.28bc 46.59bc 62.07ab 61.25ab
冷浸法
Cool maceration
25.88b 21.77c 44.71c 42.90c 56.47b 55.53b
500 索氏提取法
Soxhlet extraction
55.17a 52.68a 65.52a 64.39a 72.41a 71.82a
温浸法
Warm maceration
51.52ab 48.82a 63.64a 62.45a 71.21a 70.59a
冷浸—索氏提取法
Cool maceration-with-Soxhlet
41.30b 38.05b 58.70a 57.35ab 65.22ab 64.47b
冷浸法
Cool maceration
32.43c 28.68c 51.35b 49.76b 59.46b 58.59b
250 索氏提取法
Soxhlet extraction
69.23a 67.52a 76.92a 76.17a 80.77a 80.35a
温浸法
Warm maceration
62.50b 60.42b 71.88ab 70.96ab 76.56ab 76.06ab
冷浸—索氏提取法
Cool maceration-with-Soxhlet
50.98c 48.26c 66.67bc 65.58bc 72.55bc 71.96ac
冷浸法
Cool maceration
45.76c 42.75c 59.32c 57.99c 67.80c 67.10c
100 索氏提取法
Soxhlet extraction
86.42a 85.67a 88.89a 88.53a 92.59a 92.43a
温浸法
Warm maceration
80.30ab 79.21a 84.85ab 84.35a 87.88a 87.62a
冷浸—索氏提取法
Cool maceration-with-Soxhlet
72.00bc 70.45b 76.00bc 75.22b 80.00b 79.57b
冷浸法
Cool maceration
65.15c 63.22c 72.73c 71.84b 78.79b 78.33b
各供试浓度中,同列数据后附不同小写字母者表示经 DMRT法检验在 5%水平上差异显著。
Dates in the same column bearing different letters are significantly different at the 5% level (DMRT)at each concentration.
已有研究表明,薇甘菊提取物对褐稻虱的田间
种群具有很强的干扰作用,主要表现在产卵驱避和
影响成虫取食方面(钟平生等,2010)。本研究发
现,4 种提取方法所获得的薇甘菊生物活性物质,对
螺旋粉虱的室内生物活性差异不显著,但田间防控
效果具有显著差异。这可能是由于薇甘菊体内含
有一定量的化感物质,这些化感物质对螺旋粉虱具
有一定的驱避作用,而采用不同提取方法获得的次
生物质中,化感物质的含量存在差异;另外,薇甘菊
体内的化感物质对螺旋粉虱的触杀效果可能不显
著,而真正对螺旋粉虱起作用的方式可能体现在驱
避、拒食等方面。因此,室内研究结果虽然可为田
间防治提供参考,但由于药剂的特性和田间环境的
复杂性,室内研究结果不能照搬于室外有害生物的
防治,期间仍然需要田间试验的验证,充分综合分
析二者的结果,才可得出正确的结论。
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( 责任编辑: 杨郁霞)
·73·第 1 期 钱军等:薇甘菊提取物对螺旋粉虱的生物活性