全 文 ：第二军医大学学报 　２０１６年４月第３７卷第４期　　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｊｓｍｍｕ．ｃｎ
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｐｒ．２０１６，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．４
ＤＯＩ：１０．１６７８１／ｊ．０２５８－８７９ｘ．２０１６．０４．０５１７ ·短篇论著·
［收稿日期］　２０１６－０２－０４　　　　［接受日期］　２０１６－０３－２８
［基金项目］　国家自然科学基金青年项目（８１３０３３００）．Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｙｏｕｔｈ　Ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ（８１３０３３００）．
［作者简介］　李云青，硕士生．Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｅｌｏｄｙ０７７０＠１６３．ｃｏｍ
＊通信作者 （Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ）．Ｔｅｌ：０２１－８１８７５５７１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｑｚｈａｎｇ＠ｓｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
高效液相色谱法测定白狼毒中月腺大戟素Ａ的含量
李云青，赵　亮，王新霞，钱　跹，李盛建，张　凤，吕　磊，张国庆＊
第二军医大学东方肝胆外科医院药材科，上海２００４３８
　　［摘要］　目的　建立白狼毒药材中月腺大戟素 Ａ的含量测定方法。方法　采用高效液相色谱法，色谱柱为 Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ１８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈∶０．１％甲酸水溶液＝５５∶４５，等度洗脱，流速１．０ｍＬ·ｍｉｎ
－１，检测波
长为２９０ｎｍ，柱温２５℃，进样量２０μＬ，运行时间为２０ｍｉｎ。结果　月腺大戟素 Ａ与周围干扰峰达到基线分离，线性范围为
４．５４５～２２７．３μｇ·ｍＬ
－１，相关系数ｒ＝０．９９９　９；日内、日间精密度均小于２％；平均回收率为（９９．１±３．４）％（ｎ＝６），狼毒大戟
２个批次药材及月腺大戟对照药材中月腺大戟素Ａ含量分别为（５６．７３±１．０９）、（１８．９８±２．１１）及（２３５．２±２．４）μｇ／ｇ（ｎ＝６）。
结论　该法简便快捷、测定结果准确，重复性好，可用于白狼毒药材中月腺大戟素Ａ的含量测定。
［关键词］　白狼毒；月腺大戟；狼毒大戟；月腺大戟素Ａ；高压液相色谱法
　　［中图分类号］　Ｒ　９３１．７１　　　［文献标志码］　Ａ　　　［文章编号］　０２５８－８７９Ｘ（２０１６）０４－０５１７－０４
Ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａｉｎ　Ａ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｆｉｓｃｈｅｒｉａｎａ　Ｓｔｅｕｄ
ａｎｄ　Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａ　Ｈａｙａｔａ
ＬＩ　Ｙｕｎ－ｑｉｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｘｉｎ－ｘｉａ，ＱＩＡＮ　Ｘｉａｎ，ＬＩ　Ｓｈｅｎｇ－ｊｉａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｆｅｎｇ，ＬＬｅｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｇｕｏ－ｑｉｎｇ＊
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｅａｓｔｅｒｎ　Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｒｙ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００４３８，Ｃｈｉｎａ
　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａｉｎ　Ａ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｗｈｉｔｅ　Ｌａｎｇｄｕ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｆｉｓｃｈｅｒｉａｎａ　Ｓｔｅｕｄ　ａｎｄ　Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａ　Ｈａｙａｔａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 Ａｎ
ＨＰＬＣ－ＤＡＤ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｃｒｅａｔｅｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｔ　ｔｈｅ　ｆｏｌｏｗｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ：ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ１８（４．６ｍｍ×
１５０ｍｍ，５μｍ）；ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ：０．１％ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｗａｔｅｒ＝５５∶４５（Ｖ∶Ｖ），ｉｓｏｃｒａｔｉｃ　ｅｌｕｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ
ｗａｓ　１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　２５℃，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ａｔ　２９０ｎｍ，ｔｈｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ
ｗａｓ　２０μＬ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｕｎｎｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　２０ｍｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａｉｎ　Ａ　ｗａｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｅｌｉｎｅ，
ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｗａｓ　４．５４５－２２７．３μｇ·ｍＬ
－１，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｉｎｇ　０．９９９　９ｆｏｒ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａｉｎ　Ａ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ
ｉｎｔｒａ－ｄａｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ－ｄａｙ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｂｏｔｈ　ｗｉｔｈｉｎ　２％（ｎ＝３），ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ（９９．１４±３．４）％（ｎ＝６）．Ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａｉｎ　Ａ　ｉｎ　ｔｗｏ　ｂａｔｃｈｅｓ　ｏｆ　Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｆｉｓｃｈｅｒｉａｎａ　Ｓｔｅｕｄ　ａｎｄ　Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａ　Ｈａｙａｔａ　ｗｅｒｅ（５６．７３±
１．０９）μｇ／ｇ，（１８．９８±２．１１）μｇ／ｇ　ａｎｄ（２３５．２±２．４）μｇ／ｇ（ｎ＝６），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，
ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａｉｎ　Ａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｗｈｉｔｅ　Ｌａｎｇｄｕ．
［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　ｗｈｉｔｅ　Ｌａｎｇｄｕ；Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｆｉｓｃｈｅｒｉａｎａ　Ｓｔｅｕｄ；Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａ　Ｈａｙａｔａ；ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａｉｎ　Ａ；ｈｉｇｈ
ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
［Ａｃａｄ　Ｊ　Ｓｅｃ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ，２０１６，３７（４）：５１７－５２０］
　　中药白狼毒为大戟科植物月腺大戟（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ
ｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａ　Ｈａｙａｔａ）和 狼 毒 大 戟 （Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ
ｆｉｓｃｈｅｒｉａｎａ　Ｓｔｅｕｄ）的根［１］。狼毒大戟主要分布在
黑龙江、内蒙古、吉林、辽宁、河北等地，其味苦、辛，
性平，有毒，入肺、肝、脾，具有泄水逐饮、破疾杀虫之
功效［１－６］。月腺大戟主产于河南、山东、江苏、安徽、
湖北、湖南、浙江、福建等地，味辛，性平，有大毒，具
有散结杀虫的功效，民间常用作驱虫、治疗肺结核和
癌症［７－８］。近年来白狼毒引起越来越多学者的注意，
尤其是其中萜类和苯乙酮类［９］的特有成分，表现出了
显著的抗结核、抗癌、细胞毒等生物活性［１０－１２］，但这些
成分同时存在着一定毒性，制约着其使用。因此，
·７１５·
第二军医大学学报　２０１６年４月，第３７卷
进一步明确其生物活性与毒性的物质基础，以及它
们之间的相互关系非常重要。
前期研究经植化分离提取得到化合物月腺大戟
素Ａ，初步的实验证明其对肝癌细胞具有一定的细
胞毒作用，为白狼毒中具有抗肿瘤作用的活性物质。
本研究采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）建立该物质的
含量测定方法，对狼毒大戟与月腺大戟中共有化合
物月腺大戟素Ａ的含量进行测定，为提高白狼毒有
效部位提取纯化效率提供支持。
１　仪器和试药
１．１　仪器　Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００系列高效液相色谱仪（美
国安捷伦公司），包括 Ｇ１３７９Ａ 型真空脱气机、
Ｇ１３１１Ａ型四元泵、Ｇ１３６７Ａ型高性能自动进样器、
Ｇ１３１６Ａ型柱温箱、Ｇ１３１５Ａ 型二极管阵列检测器
（ＤＡＤ）；ＡＥ２４０型十万分之一电子天平（梅特勒－托
利多瑞士有限公司）；ＸＷ－８０Ａ型漩涡混合器（上海
医科大学仪器厂）；ＤＪ－０４粉碎机（上海定久仪器设
备有限公司）；ＰＷ－型超纯水系统（香港力康公司）；
ＫＱ－２５０ＤＥ型医用数控超声波清洗器（昆山市超声
仪器有限公司）；ＨＨ·Ｓ１－２电热恒温水浴锅（上海
跃进医疗器械厂）。
１．２　药品与试剂　狼毒大戟２个批次药材购自安
徽（产地山东，批号：２０１４０８０５、２０１４１００７），经第二军
医大学药学院生药学教研室的孙莲娜教授鉴定为狼
毒大戟的根；月腺大戟对照药材购自中国药品生物
制品鉴定所，批号１２０９６１－２００３０３。月腺大戟素 Ａ
对照品（纯度＞９８％）购自上海诗丹德生物技术有限
公司。乙腈为色谱纯（美国费希尔公司），乙醇为分
析纯（江苏强盛功能化学股份有限公司），水为超
纯水。
２　方法和结果
２．１　色谱条件　色谱柱 Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ１８
（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），流动相：乙腈∶０．１％甲
酸水溶液＝５５∶４５，流速为１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温为
２５℃，紫外检测波长为２９０ｎｍ，进样量为２０μＬ，运
行时间为２０ｍｉｎ。
２．２　供试品溶液制备　取药材适量，置粉碎机中打
碎，过１００目筛，取粉末约５．０ｇ，精密称定，置于
１００ｍＬ锥形瓶中，加入４０ｍＬ无水乙醇，超声提取
１５ｍｉｎ，过滤，收集滤液；残渣同法再提取１次，合并
２次滤液，置蒸发皿中，水浴（９０℃）浓缩至３ｍＬ，再
转移至５ｍＬ容量瓶中，用无水乙醇定容，经０．４５
μｍ有机滤膜过滤，取续滤液待测。
２．３　对照品储备液的配制　精密称取月腺大戟素
Ａ对照品２２．７３ｍｇ，置２５ｍＬ量瓶中，用甲醇溶解
并定容，得浓度为０．９０９ｍｇ·ｍＬ－１的对照品储备
液，置冰箱４℃保存。
２．４　方法学的考察
２．４．１　系统适用性实验　分别取月腺大戟素Ａ对
照品、供试品溶液，按２．１项下色谱条件进行分析，
记录色谱图，见图１。结果表明月腺大戟素 Ａ的保
留时间约为１５．２ｍｉｎ，所得色谱峰与周围干扰峰的
分离度均大于１．５，理论塔板数均大于９　０００，拖尾
因子０．９６４。
图１　月腺大戟素Ａ对照品及供试品色谱图
Ａ：对照品；Ｂ：狼毒大戟药材 （批号２０１４０８０５）；Ｃ：狼毒大戟药材 （批号２０１４１００７）；Ｄ：月腺大戟对照药材．１：月腺大戟素Ａ
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第４期．李云青，等．高效液相色谱法测定白狼毒中月腺大戟素Ａ的含量
２．４．２　标准曲线的制备　按逐级稀释法，精密量取
月腺大戟素Ａ对照品储备液适量，置于１０ｍＬ量瓶
中，加入甲醇定容至刻度，得浓度分别为２２７．３、
９０．９０、４５．４５、２２．７３、９．０９０、４．５４５μｇ·ｍＬ
－１的系
列对照品溶液，按２．１项下色谱条件进样分析，以浓
度为横坐标（Ｘ）、色谱峰面积为纵坐标（Ｙ）进行线性
回归，得月腺大戟素Ａ回归方程为：Ｙ＝７３．０８　Ｘ－
１１６．８６，ｒ＝ ０．９９９　９，线性范围为４．５４５～２２７．３
μｇ·ｍＬ
－１。
２．４．３　定量限与检测限　取月腺大戟素Ａ的对照
品溶液倍数稀释后进行分析，以信噪比为１０∶１确
定其最低定量限为０．２２７μｇ·ｍＬ
－１；以信噪比为
３∶１确定其最低检测限为０．１１３μｇ·ｍＬ
－１。
２．４．４　精密度实验　取月腺大戟素 Ａ低 （９．０９０
μｇ·ｍＬ
－１）、中 （４５．４５μｇ·ｍＬ
－１）、高 （２２７．３
μｇ·ｍＬ
－１）３个浓度的对照品溶液，按２．１项下色
谱条件进样分析，在１ｄ内分别进样３次，以及连续
３ｄ每天进样１次，考察日内、日间精密度。月腺大
戟素 Ａ低、中、高浓度的日内精密度分别为０．６５％、
０．４１％及 ０．５６％，日间精密度分别为 １．２６％、
１．７０％及０．８３％，均小于２％，表明方法精密度
良好。
２．４．５　 重复性实验 　 取狼毒大戟药材（批号
２０１４１００７）粉碎后过１００目筛，取粉末约５．０ｇ，精密
称定，按２．２项下方法制备供试品溶液，平行操作６
份，按２．１项下色谱条件进样分析。计算得月腺大
戟素 Ａ的含量为５４．９４μｇ／ｇ，相对标准偏差（ＲＳＤ，
ｎ＝６）为１．３５％，表明该方法重复性好。
２．４．６　加样回收率实验　取狼毒大戟药材（批号
２０１４１００７）粉末约２．５ｇ，精密称定，置于５０ｍＬ锥
形瓶中，再加入精确浓度为９０９μｇ·ｍＬ
－１的月腺大
戟素 Ａ对照品储备液０．１５ｍＬ，按２．２项下方法制
备供试品溶液，平行操作６份，按２．１项下色谱条件
进样分析。结果月腺大戟素 Ａ的平均加样回收率
为（９９．１±３．４）％（ｎ＝６）。
２．４．７　稳定性实验　取狼毒大戟药材（批号：
２０１４１００７）粉末约５．０ｇ，精密称定，按２．２项下条件
制备供试品溶液，分别于放置０、２、４、６、８、１２ｈ时按
２．１项下色谱条件进样分析。计算月腺大戟素Ａ的
ＲＳＤ为１．４％，表明样品在１２ｈ内稳定性良好。
２．５　含量测定　分别取狼毒大戟的２个不同批次
药材及月腺大戟对照药材粉末各约５．０ｇ，精密称
定，按２．２项下条件制备供试品溶液，按２．１项下色
谱条件进样分析，计算月腺大戟素Ａ的含量。狼毒
大戟（批号２０１４１００７）平均含量为（５６．７３±１．０９）
μｇ／ｇ（ｎ＝６），狼毒大戟（批号２０１４０８０５）平均含量为
（１８．９８±２．１１）μｇ／ｇ（ｎ＝６），月腺大戟对照药材平
均含量为（２３５．２±２．４）μｇ／ｇ（ｎ＝６）。
２．６　实验条件优化
２．６．１　样品前处理方法的优化　采用正交设计法
对影响超声提取结果的提取溶剂、倍数、时间及次数
等４个因素进行优化，参考Ｌ９（３４）正交设计表，各因
素水平设置见表 １。取狼 毒 大 戟 药 材 （批 号：
２０１４１０００７）适量，置粉碎机中打碎，过１００目筛，取
粉末约５．０ｇ，精密称定，置于１００ｍＬ的容量瓶中；
按表１中设定的实验参数进行提取，过滤，滤液置水
浴锅中浓缩，最后定容至５ｍＬ容量瓶中，经０．４５
μｍ有机滤膜过滤，取续滤液按２．１项下色谱条件进
样分析，计算每个样品中月腺大戟素Ａ的含量。以
各样品中月腺大戟素 Ａ的含量作为衡量标准分别
计算各实验结果的综合平均值Ｋ１、Ｋ２ 和Ｋ３ 及其极
差Ｒ，结果见表１。
表１　正交试验结果
试验号
提取溶
剂（Ａ）
溶剂体积
Ｖ／ｍＬ（Ｂ）
提取时间
ｔ／ｍｉｎ（Ｃ）
提取次
数（Ｄ）
月腺大戟
素Ａ含量
ρＢ／（μｇ·ｍＬ－１）
１　 ５０％乙醇 ３０　 １５　 １　 ２２．５３
２　 ５０％乙醇 ４０　 ３０　 ２　 ４６．０６
３　 ５０％乙醇 ５０　 ６０　 ３　 ４４．２８
４　 ７５％乙醇 ３０　 ３０　 ３　 ４１．９９
５　 ７５％乙醇 ４０　 ６０　 １　 ３９．９６
６　 ７５％乙醇 ５０　 １５　 ２　 ５４．９６
７　 １００％乙醇 ３０　 ６０　 ２　 ４６．７９
８　 １００％乙醇 ４０　 １５　 ３　 ５７．０８
９　 １００％乙醇 ５０　 ３０　 １　 ４０．１２
Ｋ１ ３７．６２　 ３７．１０　 ４４．８６　 ３４．２０
Ｋ２ ４５．６４　 ４７．７０　 ４２．７２　 ４９．２７
Ｋ３ ４８．００　 ４６．４５　 ４３．６８　 ４７．７８
Ｒ　 １０．３７　 １０．６０　 ２．１３　 １５．０７
　　Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３ 为水平均值，Ｒ 为极值。由表１可
以看出，对于因素 Ａ，Ｋ３＞Ｋ２＞Ｋ１；对于因素Ｂ，
Ｋ２＞Ｋ３＞Ｋ１；对于因素Ｃ，Ｋ１＞Ｋ３＞Ｋ２；对于因素
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第二军医大学学报　２０１６年４月，第３７卷
Ｄ，Ｋ２＞Ｋ３＞Ｋ１；最优组合应为Ａ３Ｂ２Ｃ１Ｄ２。由Ｒ值
可知，各因素对提取结果影响程度依次为：提取次数
＞溶剂体积＞提取溶剂＞提取时间。最终确定供试
品溶液最优制备方法为２．２项下方法。
２．６．２　色谱柱的考察　白狼毒中成分复杂，为达到
定量分析要求，月腺大戟素 Ａ 与干扰峰要完全分
离。考察不同类型填料色谱柱对月腺大戟素 Ａ与
杂质分离的影响，如Ｃｈｒｏｍａｓｉｌ－Ｃ１８、Ｗａｔｅｒｓ　ＲＰ－Ｃ１８、
Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ１８，发现在 Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－
Ｃ１８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５．０μｍ）色谱柱上月腺大戟
素Ａ色谱峰与其他峰分离良好、保留时间合适、峰
形对称，符合实验要求。
２．６．３　流动相的考察　对流动相的组成及不同比
例进行了考察，发现使用甲醇－水系统在等度洗脱的
条件下月腺大戟素Ａ的峰形较差，且与干扰峰不能
很好地分离。采用乙腈－水系统能够明显改善峰形，
在流动相中加入一定比例的甲酸有助于提高周围干
扰峰的分离度；同时考察乙腈与０．１％甲酸水溶液
的不同比例，由７５∶２５→６５∶３５→５５∶４５，最终确
定流动相组成为乙腈∶０．１％甲酸水溶液＝５５∶４５
时分离效果最佳。
２．６．４　检测波长的选择　采用ＤＡＤ对月腺大戟素
Ａ在２００～４００ｎｍ范围内的紫外吸收进行了全扫
描，发现月腺大戟素Ａ在２３０ｎｍ及２９０ｎｍ均有较
好的紫外吸收，２９０ｎｍ处有最大吸收，故选择２９０
ｎｍ作为检测波长。
３　讨　论
本研究建立了 ＨＰＬＣ测定月腺大戟和狼毒大
戟中月腺大戟素Ａ含量的方法，通过对不同类型色
谱柱、流动相组成的考察，确定了最佳的色谱条件；
方法学考察表明本方法能够用于对月腺大戟素 Ａ
含量的测定。该方法前处理条件简便、测定结果准
确可靠、重复性好，实用性强且溶剂消耗少、分析速
度快，可用于白狼毒中月腺大戟素Ａ的含量测定。
［参 考 文 献］
［１］　赵　明，孙伟健，陈丽杰，李　军，王金兰，张树军，等．
狼毒大戟地上部分化学成分研究［Ｊ］．中草药，２０１４，
４５：２７５２－２７５６．
［２］　么焕开，张文婷，郑雪晶．狼毒大戟化学成分及药理作
用研究进展［Ｊ］．中成药，２０１０（０８）：１４０４－１４０７．
［３］　洪　博，李文静，刘树民，刘吉成．狼毒大戟二萜类成分
ＨＰＬＣ指纹图谱及聚类分析［Ｊ］．天然产物研究与开
发，２０１５，２７：６１７－６２０．
［４］　刘阳熙，卢　燕，陈道峰．中药狼毒及其醋炙饮片的
ＵＰＬＣ指纹图谱［Ｊ］．中药材，２０１５（１０）：２０６０－２０６４．
［５］　李青松，吴起成．狼毒大戟化学成分的研究［Ｊ］．医药导
报，２０１４，３３：１３１９－１３２０．
［６］　蔡珍珍，金　铭，温宪春，刘吉成．狼毒大戟石油醚提取
物和乙酸乙酯提取物的半数致死量测定［Ｊ］．中国医学
创新，２０１３，１０：１５８－１５９．
［７］　汪兰云．狼毒（月腺大戟）醋制工艺及质量标准研究
［Ｄ］．江苏：南京中医药大学，２０１２．
［８］　张　宁．狼毒（月腺大戟）炮制机理研究［Ｄ］．江苏：南京
中医药大学，２０１０．
［９］　吴起成，尤奋强，丁安伟，唐于平，殷金廒．白狼毒化学
成分和生物活性研究进展［Ｊ］．药学与临床研究，２００９，
１７：１２５－１３１．
［１０］王宏伟，王海香，顾雅静．狼毒大戟化学成分和药效作
用研究进展［Ｊ］．天然产物研究与开发，２０１２，２４：１８５３－
１８５６．
［１１］潘丽丽，房平磊．狼毒大戟的化学成分及生物活性研究
进展［Ｊ］．吉林农业：学术版，２０１１（０４）：３２０－３２１．
［１２］顾臣贤，朱华荣，王奎龙，管伦兴．狼毒质量控制研究进
展［Ｊ］．中国现代中药，２０１４（０６）：４９７－５０４．
［本文编辑］　尹　茶
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