全 文 ：收稿日期:2014-12-26; 修订日期:2015-05-12
基金项目:2015 年版《中国药典》狼毒质量标准研究(591);
国家自然科学基金(No． 81273486);
高等学校博士学科点专项科研基金(优先发展领域)
(No． 20120071130011)
作者简介:刘阳熙(1990-)，女(汉族)，陕西西安人，复旦大学 药学院硕士
研究生，硕士学位，主要从事新药研究与开发研究工作．
* 通讯作者简介:卢 燕(1979-)，女(汉族)，山东泰安人，复旦大学 药学
院副教授，博士学位，主要从事中草药活性成分与质量标准研究工作．
狼毒商品药材中岩大戟内酯 B含量的
高效液相色谱法测定及其品质评价
刘阳熙，卢 燕* ，陈道峰
(复旦大学药学院，上海 201203)
摘要:目的 以岩大戟内酯 B的含量为指标，评价 21 批狼毒商品药材的质量。方法 采用 HPLC法测定 21 批月腺大戟或
狼毒大戟来源的狼毒药材中岩大戟内酯 B的含量，Agilent C18色谱柱(5μm，250mm ×4． 6mm)，乙腈 －水(65∶ 35)为流
动相，流速 1． 0 ml·min －1，柱温 30℃，238nm紫外线检测。结果 岩大戟内酯 B在 2． 125 ～ 27． 2μg·ml －1范围内浓度与峰
面积成良好线性关系(r = 0． 9999)，按干燥品计算 21 批狼毒药材中岩大戟内酯 B的含量为 0． 00910% ～ 0． 04161%，其中
狼毒大戟中的岩大戟内酯 B的含量高于月腺大戟。结论 岩大戟内酯 B可作为狼毒药材鉴定和质量控制的指标成分，研
究结果为完善其质量标准提供了科学依据。
关键词:狼毒; 岩大戟内酯 B; 月腺大戟; 狼毒大戟; 质量评价
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 08． 008
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)08-1814-03
HPLC Determination of Jolkinolide B in Commercial Euphorbiae Ebracteolatae Ｒadix and
Its Quality Evaluation
LIU Yang-xi，LU Yan* ，CHEN Dao-feng
(School of Pharmacy，Fudan University，Shanghai 201203，China)
Abstract:Objective To evaluate the quality of commercial Euphorbiae Ebracteolatae Ｒadix on the basis of the determination of
jolkinolide B by HPLC．Methods Twenty － one batches of commercial Euphorbiae Ebracteolatae Ｒadix were collected and identi-
fied as the roots of Euphorbia ebracteolata or E． fischeriana． The content of jolkinolide B in the Euphorbiae Ebracteolatae Ｒadix was
determined by HPLC，using an Agilent C18(5μm，250 × 4． 6mm)column and a mixture of acetonitrile and water (65∶ 35)as
the moile phase． The flow rate was 1． 0 ml· min － 1，the column temperature was 30℃ and the UV detector was set at 238nm．
Ｒesults The calibration curve was linear in the range from 2． 125μg·ml －1 to 27． 2μg·ml －1(r = 0． 9999)． The contents of jolk-
inolide B varied from 0． 00910% to 0． 04161% in the commercial Euphorbiae Ebracteolatae Ｒadix samples． Furthermore，the con-
tent of jolkinolide B in E． fischeriana is higher than that in E． ebracteolata． Conclusion Jolkinolide B can be used as the marker
component for the identification and quality control of Euphorbiae Ebracteolatae Ｒadix． This study provides scientific data to pro-
mote this drug＇s quality standard．
Key words:Euphorbiae Ebracteolatae Ｒadix; Jolkinolide B; Euphorbia ebracteolata; E． fischeriana; Quality evaluation
狼毒 Euphorbiae Ebracteolatae Ｒadix 来源于大戟科植物月腺
大戟 Euphoria ebracteolata Hayata和狼毒大戟 E． fischeriana Steud．
的干燥根［1］，前者在全国各地均有分布，主产于安徽、江苏、浙
江、山东、湖北、湖南、河南等省;后者主要分布于内蒙古、黑龙江、
辽宁、吉林、河北等地［2］。本品在本草中被称为“闾茹”或“草闾
茹”，始载于《神农本草经》，列为下品，有大毒，功效破积聚，下气
行水，杀虫破蛊毒，主治寒热水气、肿胀，痰饮咳逆，外用于治疗
疥癣等［3］。
目前市场流通狼毒中月腺大戟占大部分，狼毒大戟所占比例
较少，并常与瑞香科的瑞香狼毒 Stellera chamaejasme L． 相混淆。
研究表明，狼毒中的萜类和苯乙酮类成分表现出较强的抗癌、抗
结核、细胞毒等生物活性［5 ～ 8］，其中松香烷型的二萜内酯化合物
岩大戟内酯 B(jolkinolide B)含量较高［9 ～ 11］。前期通过 TLC鉴别
证实，岩大戟内酯 B 是月腺大戟或狼毒大戟区别于瑞香狼毒的
特征斑点，因此可作为狼毒药材鉴定的指标性成分。现行中国药
典狼毒标准中尚缺少专属性的鉴别和含量测定方法，文献中虽已
有狼毒中岩大戟内酯 B 的 HPLC 含量测定方法［12 ～ 14］，但相关研
究样本数量较少，且缺少月腺大戟和狼毒大戟两种来源狼毒药材
之间的比较，因此结果未能反映当前狼毒的质量现状。本研究采
取 HPLC方法测定并比较了 21 批不同收集地、不同来源的狼毒
商品药材中岩大戟内酯 B 的干燥品含量，为完善狼毒药材的质
量标准提供了科学依据。
1 仪器与试药
AB135 － S天平(梅特勒 －托利多仪器有限公司);ZX －双槽
展开缸(20cm × 5cm × 10cm，上海信谊仪器厂);N － 1100 旋转蒸
发仪(EYELA东京理化器械株式会社);US10300AH 超声波清洗
器(北京优晟联合科技有限公司)。HSGF254 硅胶板(烟台市芝
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罘黄务硅胶开发试验厂)。Agilent HP1200 型高效液相色谱仪
(四元泵，DAD紫外检测仪);AB135 － S天平(梅特勒 －托利多仪
器有限公司)。乙腈为色谱纯(美国 Adamas － beta公司)，水为超
纯水;其余试剂均为分析纯。
岩大戟内酯 B对照品(自制，经 MS、1HNMＲ、13CNMＲ确定其
化学结构，HPLC检测纯度为 99． 6%)。21 批狼毒药材购于全国
不同地区，经笔者鉴定为月腺大戟 E． ebracteolata Hayata 根、狼毒
大戟 E． fischeriana Steud．根或两者的混合品(见表 2);瑞香狼毒
为收集狼毒药材时发现的伪品，经笔者鉴定为瑞香狼毒 Stellera
chamaejasme L．的根。
2 方法与结果
2． 1 TLC鉴别 取经鉴定的月腺大戟、狼毒大戟及瑞香狼毒粉末
各 2g，分别加乙醇 30ml，超声处理(功率 300W，频率 50kHz)30
min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇 2ml溶解，作为供试品溶液。再
取岩大戟内酯 B对照品，加乙醇制成每毫升含 0． 1mg的溶液，作
为对照品溶液。吸取上述 4 种溶液各 2μl，分别点于同一硅胶 G
薄层板上，以环己烷 －乙酸乙酯(8． 5∶ 1． 5)为展开剂，展开，取
出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃下加热至斑点清晰，
置紫外光灯(365nm)下检视。
瑞 月 B 狼
瑞:瑞香狼毒;月:月腺大戟;B:岩大戟内酯 B;狼:狼毒大戟
图 1 狼毒 TLC鉴别
结果(图 1)可见，月腺大戟和狼毒大戟色谱中，在与岩大戟
内酯 B对照品色谱相应的位置上，显相同的绿色荧光斑点，而瑞
香狼毒色谱在相应的位置无明显斑点;月腺大戟与狼毒大戟色谱
也显示出明显的差别，如狼毒大戟色谱在近原点处显一特别的绿
色荧光斑点。
以上结果表明，岩大戟内酯 B 可作为区别狼毒与瑞香狼毒
的专属性成分，但狼毒具体来源的鉴定还需要采用月腺大戟及狼
毒大戟的对照药材进行对照。
2． 2 HPLC鉴别与含量测定
2． 2． 1 方法学考察
2． 2． 1． 1 色谱条件及系统适用性 Agilent C18色谱柱(5μm，
250mm × 4． 6mm)，Phenomenex C18保护柱(4． 0 mm × 3． 0mm，
4μm)，流动相乙腈 － 水(65 ∶ 35)，流速 1． 0ml· min －1，柱温
30℃，检测波长 238nm。月腺大戟与狼毒大戟来源狼毒药材的
HPLC图谱见图 2。从图中可见，月腺大戟或狼毒大戟色谱图中
均有明显的岩大戟内酯 B峰，但整体色谱行为有明显的差异，如
月腺大戟在 11 ～ 12min 内有一明显的小峰，而狼毒大戟在 7min
附近有一突出的高峰。
A:月腺大戟;B:狼毒大戟;1:岩大戟内酯 B
图 2 月腺大戟及狼毒大戟的 HPLC图谱
2． 2． 1． 2 对照品贮备溶液的制备 精密称取岩大戟内酯 B 1． 70
mg，置 10 ml容量瓶中，加 1ml乙腈溶解，用乙醇定容至刻度，即
得。
2． 2． 1． 3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过 3 号筛)1． 0g，精密
称定，置 50 ml 具塞锥形瓶中，精密加入乙醇 30ml，超声处理
30min，取出，冷却至室温，用乙醇补足失重，0． 45μm 微孔滤膜滤
过，取续滤液，即得。
2． 2． 1． 4 线性关系考察 将对照品贮备液分别用乙醇稀释至
25 /4，25 /3，25 /2，50 /3，100 /3，40，80 倍，精密吸取上述稀释
液各 20μl进样，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为 Y、进
样浓度为 X，求得线性回归方程为 Y = 104． 31071X + 32． 19763，r
= 0． 9999。结果表明，岩大戟内酯 B在 2． 125 ～ 27． 2μg·ml －1，
进样浓度与峰面积呈良好的线性关系。
2． 2． 1． 5 精密度 精密吸取岩大戟内酯 B 对照品溶液和狼毒供
试品溶液各 20μl，按上述色谱条件分别连续进样 6 次，测定峰面
积，并计算 ＲSD。对照品溶液 ＲSD 为 0． 70%，狼毒供试品溶液
为 0． 48%，说明该方法精密度良好。
2． 2． 1． 6 检测限与定量限 采用信噪比法，测定对照品溶液稀释
至约 3、10 倍信噪比高度的浓度，结果检测限为 0． 34μg /ml;定量
限为 1． 02μg /ml，其峰面积 ＲSD值为 1． 26%。
2． 2． 1． 7 稳定性 取同一狼毒供试品溶液于 0，2，4，6，8，12h 进
样，求得峰面积 ＲSD为 0． 87%，表明供试品溶液在 12 h 内稳定;
另取同一供试品溶液，分别于第 1、2、3 天进样，ＲSD 为 1． 60%，
表明供试品溶液在 3d内稳定性较好。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 8 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 8 期
2． 2． 1． 8 重复性 取狼毒适量，按供试品溶液制备方法分别制得
6 份供试品溶液，测得狼毒药材中岩大戟内酯 B 含量为
0． 02832%，ＲSD为 2． 66%，重复性良好。
2． 2． 1． 9 加样回收率 取重复性试验项下的狼毒药材 6 份，每份
约 0． 5 g，精密称重，狼毒药材中分别精密加入岩大戟内酯 B对照
品溶液(0． 034mg·ml －1)4 ml，按供试品溶液制备方法制备供试
品溶液，分别进行测定，计算回收率。狼毒药材平均加样回收率
为 102． 60%、ＲSD为 1． 10%，见表 1。
表 1 狼毒药材加样回收率
No
取样量
/g
样品中量
/μg
加入量
/μg
对照品测
得量 /μg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
1 0． 50186 142． 13 136 141． 00 103． 68
2 0． 49995 141． 59 136 136． 81 100． 60
3 0． 49934 141． 41 136 138． 77 102． 04 102． 60 1． 10
4 0． 50374 142． 66 136 140． 26 103． 13
5 0． 49867 141． 22 136 140． 51 103． 32
6 0． 50536 143． 12 136 139． 85 102． 83
n =6
2． 2． 2 样品测定 按上述含量测定方法，对 21 批狼毒药材进行
了含量测定，并扣除水分含量后按干燥品计算了岩大戟内酯 B
的含量，结果见表 2。以干燥品计算，21 批狼毒商品药材中岩大
戟内酯 B的含量为 0． 00910% ～ 0． 04161%，其中月腺大戟来源
药材的含量为 0． 00910% ～0． 02864%，而狼毒大戟来源药材的含
量为 0． 03749% ～0． 04161%，明显高于月腺大戟。
表 2 狼毒药材收集及干燥品含量测定情况
No． 收集地 植物来源
岩大戟内酯 B
含量 /%
ＲSD
/%
1 内蒙 月腺大戟 0． 02239 2． 84
2 山西 月腺大戟 0． 02169 1． 82
3 山东 月腺大戟 0． 02626 0． 38
4 辽宁 月腺(多)、狼毒大戟 0． 02433 2． 46
5 河北(张家口) 月腺(多)、狼毒大戟 0． 01607 1． 00
6 山东 月腺(多)、狼毒大戟 0． 02236 1． 35
7 吉林 月腺(多)、狼毒大戟 0． 03545 1． 18
8 吉林 月腺(多)、狼毒大戟 0． 03194 1． 05
9 四川 月腺(多)、狼毒大戟 0． 03183 1． 80
10 黑龙江 月腺大戟 0． 02808 1． 12
11 山东 月腺大戟 0． 02864 2． 09
12 山东 月腺大戟 0． 02247 1． 57
13 山东 月腺大戟 0． 01800 2． 01
14 东北 月腺大戟 0． 01202 1． 65
15 西藏 月腺大戟 0． 01248 1． 65
16 四川 月腺大戟 0． 01483 1． 14
17 青海 月腺大戟 0． 00910 1． 03
18 云南 月腺大戟 0． 02046 1． 84
19 东北 月腺(多)、狼毒大戟 0． 01313 1． 64
20 吉林 狼毒大戟 0． 03749 1． 20
21 黑龙江 狼毒大戟 0． 04161 1． 57
3 讨论
岩大戟内酯 B为狼毒药材的特征性成分，且含量较高，本研
究所建立的 TLC和 HPLC方法均可用于狼毒药材与瑞香狼毒等
伪品、混淆品的鉴别。
研究也发现，月腺大戟和狼毒大戟虽均为狼毒的正品来源，
但两者的 TLC或 HPLC色谱行为差异明显，且月腺大戟中岩大戟
内酯 B的含量明显低于狼毒大戟，即使同为月腺大戟来源，岩大
戟内酯 B的含量也有明显差异。市场上狼毒药材以月腺大戟来
源居多，但也常见月腺大戟与狼毒大戟混杂的情况，因此，狼毒药
材的质量控制应加强对其来源的鉴定和品质评价。
本实验在研究供试品溶液的制备方法时，比较了石油醚、氯
仿、乙酸乙醋、丙酮和甲醇、乙醇等不同溶剂的提取效果，结果表
明甲醇和乙醇提取效果最好，但在实验中发现岩大戟内酯 B 在
甲醇溶液中不稳定，因此选择乙醇为提取溶剂。
本实验收集到足够批次的狼毒药材样品，并比较了不同来源
狼毒药材的岩大戟内酯 B 的含量差异，结果为狼毒的质量评价
及其质量标准的提高提供了依据。根据测定结果，建议狼毒中岩
大戟内酯 B的含量以干燥品计应不低于 0． 012%。
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