全 文 ：第 n卷第 5期
1 9 9 5年 10月
生 物 化 学 杂 志
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1 9 9 5
红花菜豆 (矮生红花变种 )凝集素的生物学作用
施炜星 孙 册
(中国科 学院上海生物化 学研 究所 , 上海 2 0 0 0 3 1)
摘要 红花菜豆 (矮生红花变种 , P h a s e o zu 、 ` o e c i , , e ,` 、 v a r . r u b r o n a n u s )凝集素 ( P C L )识
别高甘露糖型寡糖并与之结合 , 它的 生物学作用都与其糖结合专一性有关 。 P C L 的血
凝作用不 显示供血动物专一性和和血型专一性 . P C L 除凝集红 细胞外亦凝集动物其它
细胞 ,如 小 鼠脾细胞 、 人精细胞及某些肿瘤细胞如黑 色素瘤细 胞 M 2 1 、 胃癌细胞等 。 此
外 P C L 亦凝集某些微生 物如野生 型和 H . B . 10 1 大 肠杆 菌以及 面 包酵母 . P C L 具有促
细胞分裂作用 ,使小 鼠脾细胞和人外周血淋 巴 细胞转化的 P C L 的最低浓度为 2 5 0 雌 /
L
.
P C L 能抑制某些癌瘤细胞的生 长 , 在测试的几种 细 胞中 , 对人 .黑色素瘤细胞 M 21 生
长的抑 制较为明显 . P C L 亦能抑制 野生 型大 肠杆 菌和 面 包酵母 的生 长 . P C L 的 细胞凝
集 、 促珠 巴细胞转化和抑制 细胞生 长的作用 ,都是首先通过它的糖结合部位与细 胞表面
的糖基结合 导致 的 .
关键词 : 红 花菜豆凝集素 , 血凝作用 , 促细胞分裂 , 抑制细胞生 长
凝集素通过其糖结合专一性 ,可对动物细胞产生各种各样的生物学作用 , 不同的凝集素对
不同细胞的作用是各异的刀 . 凝集素的血凝作用 ,可因凝集素的来源和糖专一性及不同的供血
动物产生显著的差异 . 有的凝集素有促细胞分裂作用 ,有的则不显示这种作用 . 有的凝素显示
抑制癌瘤细胞生长的作用 , 有的则没有 .
红花菜豆凝集素 (简称 P C L )是依照施等方法从红花菜豆种籽纯化的糖蛋 白 ,纯化的 P C L
在 s D S 一 P A G E 上显示一条蛋白质着色带 ,具有较强的血凝活力 ,其血凝活力不被所测试 的单
糖 、 双 搪和三糖抑制 . 只 能被含甘露糖 的糖蛋 白抑制 . P C L 专一结合 的糖是 高甘露糖 型寡
糖 2 二 为 J’ 了解 P C工 的生物学 作用 , 我们对 P C L 细胞凝集 、 促淋巴细胞转化和抑制细胞生长
的作用进行了观察 .
1 材料与方法
1
.
1 材料
藤全赤霉菌 、 变清链霉菌 、 酵母菌 ( S a c 人。 : o , ,沙 c e 、 。 e 、 ; 二 i e c a ) 、 大肠杆菌 ( E . c o l i H B 1 0 1 ) 系
植物生理 所郑幼霞教授赠送 . 野生型大肠杆菌 、 变形杆菌 、 产气杆菌 、 金色葡萄球菌 、 白色葡萄
球菌为上海第二 医科大 学微生物 教研室 赠送 . 人宫颈 癌细胞株 H e L a 、 人黑色 素瘤细胞 株
工 收稿 日期 : 1” 4一 。 6一 1 0 . 修回 口期 : 19 9 5 一川 一 2 2
5 6 7
DOI : 10. 13865 /j . cnki . cj bmb. 1995. 05. 013
M 2 1
、 人肺癌细胞株 S P L 由本所曹惠婷教授赠送 , 胃癌细胞株 S G C 7 9 O I 、 乳腺癌细胞株 M C F 7
为上海医科大学肿瘤医院病理科许 良中教授赠送 . 人 A , B . O 型血由本组人员 自愿提供 , 狗血
和猫血为生理所动物房赠 ,羊血为上海药物所李晓玉教授惠赠 ,猪血 由龙华肉类加工厂提供 ,
兔 、 鸽 、 鸡 、 豚鼠 、 大鼠 、 小鼠 、 鸭 、 鳝 、 草鱼血均为本组工作人员从动物体取得 .
F i e o l l 为 P h a r m a c i a 公司产品 , 「3H 」T dR 由 A m e r s h a m 公司生产 , ( 3一「4 , 5一 D im e t h y l t h i a -
z 。 l一 2一 y l ] 2
,
5
一
d i p h e n y l t e t r a z o l i u m b r o m id e ) (M T T )为 S ig m a 公司产品 。 其它试剂均为国产分
析纯 。 所有试剂均用双蒸馏水配制 .
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 红细胞的采集与处理 人 A 、 B 、 O 型血 , 狗 、 猫 、 兔 、 鸽 、 鸡均为静脉采血 , 豚鼠 (心脏采
血 ) ,大鼠 、 小 鼠 、 鸭 、 鳝 、 青鱼为杀头取血 . 用柠檬酸钠或 E D T A 为抗凝剂 , 经离心除去血浆后 ,
用血凝缓冲液 ( 0 . 0 7 5 m o l / L P B 一 0 . 7 5 m o l / L N a C I , p H 7 . 2 , P B S )充分洗涤 ,然后用同样缓冲液
配成 2 %血球悬液 .
1
.
2
.
2 小 鼠淋 巴细胞的分离 参照孙册等方法川 ,将 小鼠眼底放血致死 . 取出脾脏 , 剪碎 ,离
心 , 生理盐水洗涤 , 17 m m ol / L 氯化按溶液破红细胞 , 用生理盐 水反复离心洗涤 3 次 ,然后配
成适当浓度的悬液 (2 又 1 0 6 个 / m l) .
1
.
2
.
3 人外周血淋巴细胞的分离 静脉取血 (肝素抗凝 ) . 加至 H an ks 缓冲液 ,摇匀 , 稀释后
加少量 iF co H (淋巴细胞分离液 ) . 使之分层 , 离心 , 取下层淋巴 细胞层 , 用 H an k S 缓冲液洗涤 ,
计数 ,配成适当浓度的悬液 (8 . 4 x l护 个 /m l) .
1
.
2
.
4 精子悬液的制备 人精子 由生育正常的健康者志原提供 (手淫采精 ) ,猪精子购 自种猪
场 (假阴道采精 ) . 采集的精液液化后 ,离心 ,用含 0 . 1%牛血清 白蛋 白 、 不含蔗糖 、 不含钙离子
的 H a n k、 的溶液离心洗涤 3 次 , 再用不含牛血清白蛋 白的上述 H an k s 溶液洗一次 , 配成适当
浓度的悬液 ( 1 0 6 个 / m l) .
1
.
2
.
5 动物细胞凝集试验 取含不 同浓度 P C L 的 P B S 溶液 20 风 加至载玻片上 , 分别加入
20 川悬浮于 P B S 中的小鼠脾淋 巴细胞悬液或 20 川 县浮于不含牛血清 白蛋白的 H an ks 中的
人精子或猪精子悬液 , 或 20 川在 D M E M 培液 ( iG b co ) 中的癌细胞悬液 ,立即混匀 , 在显微镜
下观察细胞凝集反应 , 以不含 P C L 的相应缓冲液为对照 .
1
.
2
.
6 菌类的凝集试验 菌种用肉汤培养 ,离心 , P B S 洗 涤后 ,配成 10 8 个 /m l 的悬液 . 将溶
于 P B S 的不同浓度的凝集素溶液 20 闪滴于载玻片上 ,再加入悬浮于 P B S 的菌 ,在显微镜下
观察 , 以 P B S 为对照 .
1
.
2
.
7 促淋巴细胞转化 小鼠脾淋巴细胞或人外周血淋 巴细胞与不同浓度的凝集素 3 7 C置
酶标板中温育 6 h ,加入「, H ] T d R (小 鼠脾细胞 , 0 . 25 胖 iC /孔 ; 人外周血淋巴细胞 , 。 . 5 拼 iC /
孔 ) .继续保温 6 h , 终止反应 . 过滤 、 洗涤 、 干燥 , 在液闪仪 中计数 ,测 巨3H ] T d R 的参入量 , 由此
得出 P C L 的促细胞转化率 .
1
.
2
.
8 菌类生长的抑制试验 采用琼脂扩散孔穴法 , 经灭菌的 L B 培养基 (含琼脂 1% , W /
V ) 7 m l
, 在 4 5 一 C与 3 0 拜 l 对数生长期的菌细胞在 P B S 缓冲液 , p H 7 · 4 , 中的悬浮液 , ( A 65。 n m =
0
.
3 )
, 混匀 ,铺在 已灭菌的培养皿中 ,凝结后置 4 C保存 , 使用时皿 内等距打直径为 2 m m 的小
孔 ,滴入 2 川不同浓度的 P C L 溶液 ; 或将滴 了不同浓度 P C L 溶液 (2 川 )的 、 同样大小的滤纸 片
贴在混有酵母菌的琼脂板上 ,置 37 C培养 10 h , 肉眼直接观察抑菌圈的大小 .
1
.
2
.
9 癌细胞生长的抑制试验 按邱 惠珍川 、 王庆诚等困方法测定 P C L 对癌细胞生长的抑
制作用 . 细胞在 96 孔细胞培养板中置 37 C C O : 培养箱中孵育 , 取细胞生长均匀 、 生长情况 良
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M1 2
、 人肺癌细胞株 S P L由本所曹惠婷教授赠送 , 胃癌细胞株 S G C 7 9 O I 、 乳腺癌细胞株 M C F 7
为上海医科大学肿瘤医院病理科许 良中教授赠送 . 人 A , B . O 型血由本组人员 自愿提供 , 狗血
和猫血为生理所动物房赠 ,羊血为上海药物所李晓玉教授惠赠 ,猪血 由龙华肉类加工厂提供 ,
兔 、 鸽 、 鸡 、 豚鼠 、 大鼠 、 小鼠 、 鸭 、 鳝 、 草鱼血均为本组工作人员从动物体取得 .
F i e o l l 为 P h a r m a c i a 公司产品 , 「3H 」T dR 由 A m e r s h a m 公司生产 , ( 3一「4 , 5一 D im e t h y l t h i a -
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一
d i p h e n y l t e t r a z o l i u m b r o m id e ) (M T T )为 S ig m a 公司产品 。 其它试剂均为国产分
析纯 。 所有试剂均用双蒸馏水配制 .
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2 方法
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1 红细胞的采集与处理 人 A 、 B 、 O 型血 , 狗 、 猫 、 兔 、 鸽 、 鸡均为静脉采血 , 豚鼠 (心脏采
血 ) ,大鼠 、 小 鼠 、 鸭 、 鳝 、 青鱼为杀头取血 . 用柠檬酸钠或 E D T A 为抗凝剂 , 经离心除去血浆后 ,
用血凝缓冲液 ( 0 . 0 7 5 m o l / L P B 一 0 . 7 5 m o l / L N a C I , p H 7 . 2 , P B S )充分洗涤 ,然后用同样缓冲液
配成 2 %血球悬液 .
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2 小 鼠淋 巴细胞的分离 参照孙册等方法川 ,将 小鼠眼底放血致死 . 取出脾脏 , 剪碎 ,离
心 , 生理盐水洗涤 , 17 m m ol / L 氯化按溶液破红细胞 , 用生理盐 水反复离心洗涤 3 次 ,然后配
成适当浓度的悬液 (2 又 1 0 6 个 / m l) .
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3 人外周血淋巴细胞的分离 静脉取血 (肝素抗凝 ) . 加至 H an ks 缓冲液 ,摇匀 , 稀释后
加少量 iF co H (淋巴细胞分离液 ) . 使之分层 , 离心 , 取下层淋巴 细胞层 , 用 H an k S 缓冲液洗涤 ,
计数 ,配成适当浓度的悬液 (8 . 4 x l护 个 /m l) .
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4 精子悬液的制备 人精子 由生育正常的健康者志原提供 (手淫采精 ) ,猪精子购 自种猪
场 (假阴道采精 ) . 采集的精液液化后 ,离心 ,用含 0 . 1%牛血清 白蛋 白 、 不含蔗糖 、 不含钙离子
的 H a n k、 的溶液离心洗涤 3 次 , 再用不含牛血清白蛋 白的上述 H an k s 溶液洗一次 , 配成适当
浓度的悬液 ( 1 0 6 个 / m l) .
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5 动物细胞凝集试验 取含不 同浓度 P C L 的 P B S 溶液 20 风 加至载玻片上 , 分别加入
20 川悬浮于 P B S 中的小鼠脾淋 巴细胞悬液或 20 川 县浮于不含牛血清 白蛋白的 H an ks 中的
人精子或猪精子悬液 , 或 20 川在 D M E M 培液 ( iG b co ) 中的癌细胞悬液 ,立即混匀 , 在显微镜
下观察细胞凝集反应 , 以不含 P C L 的相应缓冲液为对照 .
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6 菌类的凝集试验 菌种用肉汤培养 ,离心 , P B S 洗 涤后 ,配成 10 8 个 /m l 的悬液 . 将溶
于 P B S 的不同浓度的凝集素溶液 20 闪滴于载玻片上 ,再加入悬浮于 P B S 的菌 ,在显微镜下
观察 , 以 P B S 为对照 .
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7 促淋巴细胞转化 小鼠脾淋巴细胞或人外周血淋 巴细胞与不同浓度的凝集素 3 7 C置
酶标板中温育 6 h ,加入「, H ] T d R (小 鼠脾细胞 , 0 . 25 胖 iC /孔 ; 人外周血淋巴细胞 , 。 . 5 拼 iC /
孔 ) .继续保温 6 h , 终止反应 . 过滤 、 洗涤 、 干燥 , 在液闪仪 中计数 ,测 巨3H ] T d R 的参入量 , 由此
得出 P C L 的促细胞转化率 .
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8 菌类生长的抑制试验 采用琼脂扩散孔穴法 , 经灭菌的 L B 培养基 (含琼脂 1% , W /
V ) 7 m l
, 在 4 5 一 C与 3 0 拜 l 对数生长期的菌细胞在 P B S 缓冲液 , p H 7 · 4 , 中的悬浮液 , ( A 65。 n m =
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3 )
, 混匀 ,铺在 已灭菌的培养皿中 ,凝结后置 4 C保存 , 使用时皿 内等距打直径为 2 m m 的小
孔 ,滴入 2 川不同浓度的 P C L 溶液 ; 或将滴 了不同浓度 P C L 溶液 (2 川 )的 、 同样大小的滤纸 片
贴在混有酵母菌的琼脂板上 ,置 37 C培养 10 h , 肉眼直接观察抑菌圈的大小 .
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9 癌细胞生长的抑制试验 按邱 惠珍川 、 王庆诚等困方法测定 P C L 对癌细胞生长的抑
制作用 . 细胞在 96 孔细胞培养板中置 37 C C O : 培养箱中孵育 , 取细胞生长均匀 、 生长情况 良
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、 人肺癌细胞株 SL P由本所曹惠婷教授赠送 , 胃癌细胞株 S G C 7 9 O I 、 乳腺癌细胞株 M C F 7
为上海医科大学肿瘤医院病理科许 良中教授赠送 . 人 A , B . O 型血由本组人员 自愿提供 , 狗血
和猫血为生理所动物房赠 ,羊血为上海药物所李晓玉教授惠赠 ,猪血 由龙华肉类加工厂提供 ,
兔 、 鸽 、 鸡 、 豚鼠 、 大鼠 、 小鼠 、 鸭 、 鳝 、 草鱼血均为本组工作人员从动物体取得 .
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d i p h e n y l t e t r a z o l i u m b r o m id e ) (M T T )为 S ig m a 公司产品 。 其它试剂均为国产分
析纯 。 所有试剂均用双蒸馏水配制 .
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2 方法
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1 红细胞的采集与处理 人 A 、 B 、 O 型血 , 狗 、 猫 、 兔 、 鸽 、 鸡均为静脉采血 , 豚鼠 (心脏采
血 ) ,大鼠 、 小 鼠 、 鸭 、 鳝 、 青鱼为杀头取血 . 用柠檬酸钠或 E D T A 为抗凝剂 , 经离心除去血浆后 ,
用血凝缓冲液 ( 0 . 0 7 5 m o l / L P B 一 0 . 7 5 m o l / L N a C I , p H 7 . 2 , P B S )充分洗涤 ,然后用同样缓冲液
配成 2 %血球悬液 .
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2 小 鼠淋 巴细胞的分离 参照孙册等方法川 ,将 小鼠眼底放血致死 . 取出脾脏 , 剪碎 ,离
心 , 生理盐水洗涤 , 17 m m ol / L 氯化按溶液破红细胞 , 用生理盐 水反复离心洗涤 3 次 ,然后配
成适当浓度的悬液 (2 又 1 0 6 个 / m l) .
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3 人外周血淋巴细胞的分离 静脉取血 (肝素抗凝 ) . 加至 H an ks 缓冲液 ,摇匀 , 稀释后
加少量 iF co H (淋巴细胞分离液 ) . 使之分层 , 离心 , 取下层淋巴 细胞层 , 用 H an k S 缓冲液洗涤 ,
计数 ,配成适当浓度的悬液 (8 . 4 x l护 个 /m l) .
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4 精子悬液的制备 人精子 由生育正常的健康者志原提供 (手淫采精 ) ,猪精子购 自种猪
场 (假阴道采精 ) . 采集的精液液化后 ,离心 ,用含 0 . 1%牛血清 白蛋 白 、 不含蔗糖 、 不含钙离子
的 H a n k、 的溶液离心洗涤 3 次 , 再用不含牛血清白蛋 白的上述 H an k s 溶液洗一次 , 配成适当
浓度的悬液 ( 1 0 6 个 / m l) .
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5 动物细胞凝集试验 取含不 同浓度 P C L 的 P B S 溶液 20 风 加至载玻片上 , 分别加入
20 川悬浮于 P B S 中的小鼠脾淋 巴细胞悬液或 20 川 县浮于不含牛血清 白蛋白的 H an ks 中的
人精子或猪精子悬液 , 或 20 川在 D M E M 培液 ( iG b co ) 中的癌细胞悬液 ,立即混匀 , 在显微镜
下观察细胞凝集反应 , 以不含 P C L 的相应缓冲液为对照 .
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6 菌类的凝集试验 菌种用肉汤培养 ,离心 , P B S 洗 涤后 ,配成 10 8 个 /m l 的悬液 . 将溶
于 P B S 的不同浓度的凝集素溶液 20 闪滴于载玻片上 ,再加入悬浮于 P B S 的菌 ,在显微镜下
观察 , 以 P B S 为对照 .
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7 促淋巴细胞转化 小鼠脾淋巴细胞或人外周血淋 巴细胞与不同浓度的凝集素 3 7 C置
酶标板中温育 6 h ,加入「, H ] T d R (小 鼠脾细胞 , 0 . 25 胖 iC /孔 ; 人外周血淋巴细胞 , 。 . 5 拼 iC /
孔 ) .继续保温 6 h , 终止反应 . 过滤 、 洗涤 、 干燥 , 在液闪仪 中计数 ,测 巨3H ] T d R 的参入量 , 由此
得出 P C L 的促细胞转化率 .
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8 菌类生长的抑制试验 采用琼脂扩散孔穴法 , 经灭菌的 L B 培养基 (含琼脂 1% , W /
V ) 7 m l
, 在 4 5 一 C与 3 0 拜 l 对数生长期的菌细胞在 P B S 缓冲液 , p H 7 · 4 , 中的悬浮液 , ( A 65。 n m =
0
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3 )
, 混匀 ,铺在 已灭菌的培养皿中 ,凝结后置 4 C保存 , 使用时皿 内等距打直径为 2 m m 的小
孔 ,滴入 2 川不同浓度的 P C L 溶液 ; 或将滴 了不同浓度 P C L 溶液 (2 川 )的 、 同样大小的滤纸 片
贴在混有酵母菌的琼脂板上 ,置 37 C培养 10 h , 肉眼直接观察抑菌圈的大小 .
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9 癌细胞生长的抑制试验 按邱 惠珍川 、 王庆诚等困方法测定 P C L 对癌细胞生长的抑
制作用 . 细胞在 96 孔细胞培养板中置 37 C C O : 培养箱中孵育 , 取细胞生长均匀 、 生长情况 良
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M 1 2
、 人肺癌细胞株 S P L由本所曹惠婷教授赠送 , 胃癌细胞株 S G C 7 9 O I 、 乳腺癌细胞株 M C F 7
为上海医科大学肿瘤医院病理科许 良中教授赠送 . 人 A , B . O 型血由本组人员 自愿提供 , 狗血
和猫血为生理所动物房赠 ,羊血为上海药物所李晓玉教授惠赠 ,猪血 由龙华肉类加工厂提供 ,
兔 、 鸽 、 鸡 、 豚鼠 、 大鼠 、 小鼠 、 鸭 、 鳝 、 草鱼血均为本组工作人员从动物体取得 .
F i e o l l 为 P h a r m a c i a 公司产品 , 「3H 」T dR 由 A m e r s h a m 公司生产 , ( 3一「4 , 5一 D im e t h y l t h i a -
z 。 l一 2一 y l ] 2
,
5
一
d i p h e n y l t e t r a z o l i u m b r o m id e ) (M T T )为 S ig m a 公司产品 。 其它试剂均为国产分
析纯 。 所有试剂均用双蒸馏水配制 .
1
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2 方法
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2
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1 红细胞的采集与处理 人 A 、 B 、 O 型血 , 狗 、 猫 、 兔 、 鸽 、 鸡均为静脉采血 , 豚鼠 (心脏采
血 ) ,大鼠 、 小 鼠 、 鸭 、 鳝 、 青鱼为杀头取血 . 用柠檬酸钠或 E D T A 为抗凝剂 , 经离心除去血浆后 ,
用血凝缓冲液 ( 0 . 0 7 5 m o l / L P B 一 0 . 7 5 m o l / L N a C I , p H 7 . 2 , P B S )充分洗涤 ,然后用同样缓冲液
配成 2 %血球悬液 .
1
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2 小 鼠淋 巴细胞的分离 参照孙册等方法川 ,将 小鼠眼底放血致死 . 取出脾脏 , 剪碎 ,离
心 , 生理盐水洗涤 , 17 m m ol / L 氯化按溶液破红细胞 , 用生理盐 水反复离心洗涤 3 次 ,然后配
成适当浓度的悬液 (2 又 1 0 6 个 / m l) .
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3 人外周血淋巴细胞的分离 静脉取血 (肝素抗凝 ) . 加至 H an ks 缓冲液 ,摇匀 , 稀释后
加少量 iF co H (淋巴细胞分离液 ) . 使之分层 , 离心 , 取下层淋巴 细胞层 , 用 H an k S 缓冲液洗涤 ,
计数 ,配成适当浓度的悬液 (8 . 4 x l护 个 /m l) .
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4 精子悬液的制备 人精子 由生育正常的健康者志原提供 (手淫采精 ) ,猪精子购 自种猪
场 (假阴道采精 ) . 采集的精液液化后 ,离心 ,用含 0 . 1%牛血清 白蛋 白 、 不含蔗糖 、 不含钙离子
的 H a n k、 的溶液离心洗涤 3 次 , 再用不含牛血清白蛋 白的上述 H an k s 溶液洗一次 , 配成适当
浓度的悬液 ( 1 0 6 个 / m l) .
1
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5 动物细胞凝集试验 取含不 同浓度 P C L 的 P B S 溶液 20 风 加至载玻片上 , 分别加入
20 川悬浮于 P B S 中的小鼠脾淋 巴细胞悬液或 20 川 县浮于不含牛血清 白蛋白的 H an ks 中的
人精子或猪精子悬液 , 或 20 川在 D M E M 培液 ( iG b co ) 中的癌细胞悬液 ,立即混匀 , 在显微镜
下观察细胞凝集反应 , 以不含 P C L 的相应缓冲液为对照 .
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6 菌类的凝集试验 菌种用肉汤培养 ,离心 , P B S 洗 涤后 ,配成 10 8 个 /m l 的悬液 . 将溶
于 P B S 的不同浓度的凝集素溶液 20 闪滴于载玻片上 ,再加入悬浮于 P B S 的菌 ,在显微镜下
观察 , 以 P B S 为对照 .
1
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7 促淋巴细胞转化 小鼠脾淋巴细胞或人外周血淋 巴细胞与不同浓度的凝集素 3 7 C置
酶标板中温育 6 h ,加入「, H ] T d R (小 鼠脾细胞 , 0 . 25 胖 iC /孔 ; 人外周血淋巴细胞 , 。 . 5 拼 iC /
孔 ) .继续保温 6 h , 终止反应 . 过滤 、 洗涤 、 干燥 , 在液闪仪 中计数 ,测 巨3H ] T d R 的参入量 , 由此
得出 P C L 的促细胞转化率 .
1
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8 菌类生长的抑制试验 采用琼脂扩散孔穴法 , 经灭菌的 L B 培养基 (含琼脂 1% , W /
V ) 7 m l
, 在 4 5 一 C与 3 0 拜 l 对数生长期的菌细胞在 P B S 缓冲液 , p H 7 · 4 , 中的悬浮液 , ( A 65。 n m =
0
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3 )
, 混匀 ,铺在 已灭菌的培养皿中 ,凝结后置 4 C保存 , 使用时皿 内等距打直径为 2 m m 的小
孔 ,滴入 2 川不同浓度的 P C L 溶液 ; 或将滴 了不同浓度 P C L 溶液 (2 川 )的 、 同样大小的滤纸 片
贴在混有酵母菌的琼脂板上 ,置 37 C培养 10 h , 肉眼直接观察抑菌圈的大小 .
1
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9 癌细胞生长的抑制试验 按邱 惠珍川 、 王庆诚等困方法测定 P C L 对癌细胞生长的抑
制作用 . 细胞在 96 孔细胞培养板中置 37 C C O : 培养箱中孵育 , 取细胞生长均匀 、 生长情况 良
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是 由生物学作用不 同的 E亚基和 L亚基组成 , 只有 L 亚基具有促淋巴 细胞转化的活性 , 而
P C L 分子是由相同亚基组成的 . 红花菜豆中 P C L 的含量比红腰子豆中 P H A 的含量高 , 而且
PC L 的纯化方法比 P H A 的简单 . 因此 , 以 P C L 取代 P H A 不仅能提高灵敏度 ,亦能提高经济
效益 .
凝集素的细胞凝集作用不仅与凝集素的性质有关 , 亦受细胞生长情况的影响 ,一般生长旺
盛的细胞易被凝集 , P C L 凝集精子的活力比小鼠脾细胞强 , P C L 对肿瘤细胞的凝集活性 , 因不
同的肿瘤细胞 而异 . 至于凝集素对肿瘤细胞的凝集活性是否与细胞的恶性程度有关 ,至今尚未
有定论 .
凝集素凝集菌类和抑制菌类生长的作用与其糖专一性有关 . P C L 只凝集大肠杆菌和酵母
菌 , 同样亦只抑制两种菌的生长 , 已知这两种菌都具有含甘露糖的糖复合物 ,我们以前的工作
已证明 P C L 与高甘露糖型的寡糖结合川 ,表 明 P C L 对这两种菌的凝集和抑制它们生长 的作
用都是首先与这两种细胞表面的糖基结合 . 根据 P C L 能凝集大肠杆菌 H . B . 1 0 1 , 可推测它亦
具有含甘露糖的糖复合物 .
P C L 不仅对黑色素瘤细胞 M ZI 有较强的凝集作用 ,亦具有对它的杀伤作用 . 不同的黑色
素瘤细胞具有不同的转移潜能及转移到不同组织 的几率 , 都与其细胞表面的糖基有关 10[ 〕 . 虽
然对黑色素瘤细胞 M ZI 的转移潜能 尚不 了解 , 但根据 P C L 对它的这些作用 , 不难推测 M 21
细胞表面存在高甘露糖型寡糖 , 这对研究 M 21 细胞的性质如浸润 、 转移潜能与糖基的关系是
很有意义的 .
本工作承郑幼霞教授和曹惠婷教授热心指导和 帮助 ,李晓玉教授 、 许良中教授以及诸多同志和单位惠赠
动物血和细胞等 ,特此一并致以衷心的感谢 .
参 考 文 献
1 L i
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,
S h a r o n N
.
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:
L i e n e r F E e t a l ( e d s )
, 乙己 c t i n s , N e w y o r k . A e a d e m i e P r e s s , H a r e o u r t B r a e e j o v a n o v i e h l n e ,
1 9 8 6 : 2 6 6一 2 8 5
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3 施炜 星 ,孙 册 . 生物化学与生物物理学报 , 1 9 94 , 26 : 5 65 一56 9
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5 邱惠珍 ,等 . 生物化学与生物物理学报 , 1 9幻 , 2s : 39 一 43
6 W a n g Q in g
一
C h e n g
, e t a l
.
aC
n c e r R e s
, 1 9 9 1 , 5 1
: 3 3 5 3一 3 3 5 5
7 S P o h r U e t a l
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C
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e
m
, 1 9 8 5 , 6 3
:
2 6 4 4一 26 52
8 D e lb a e r e L T J
, e t a l
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C a n J C h
e m
, 19 8 7
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6 8
: 1 1 1 6一 1 1 2 1
9 H i n d s g a u l O
, e t a l
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C a ” J C h e从 , 1 9 8 5 , 63 : 2 6 5 3一 26 5 8
1 0 N i e o l s o n G L
.
B i
o e h : m B IOP hy
s A c at
, 1 9 8 2 , 6 9 5 : 1 1 3一 1 7 5
5 7 2
T he Bi o lo i ge a lE f fe c to S fe a r le t Re n ne r Be a n
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,
W e i
一
X i n g S u n
,
C e
( S h a n g h a i I n s t i t u t e of B i
o e h e m i s t勺 , A c a d e m i a S i n i c a , S h a n g h a i 2 0 0 0 3 1 )
A b s t r a e t S e a r l e t r e n n e r b e a n ( P h a s e o l u s c o c c i n e u s v a r
.
r u b r o n a n u s ) l e e t i n ( P C L ) s h o w e d
t h e a b i l i t y t o r e e o g n i z e a n d b i n d w i t h w i t h h i g h m a n n o s e o l i g o s a e e h a r i d e
.
T h e b i o l o g i e a l e f
-
f e e t o f P C L w a s r e l a t e d t o i t s e a r b o h y d r a t e b i n d i n g s p e e i f ie i t y
.
T h e h e m a g g l u t i n a t i n g a e t i v i t y
o f P C L d id n o t s h o w b l o o d d o n o r a n d b l o o d t y p e s P e e i f i e i t y
.
I n a d d i t i o n t o h e m a g g l u t i n a t i o n
,
P C L a l s o a g g l u t in a t e d o t h e r e e l l s f r o m a n im a l s
,
f o r i n s t a n e e s p l e e n e e l l o f m ie e
,
h u m a n s p e r m
a n d s e v e r a l k i n d s o f t u m o r e e l l
, s u e h a s h u m a n m e l a n o m a M Z I a n d s t o m a e h e a n e e r e e l l
.
P C L
a l s o a g g l u t i n a t e d m i e r o o r g a n i s m s
, a s w i l d t y p e a n d H
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m i t o g e n ie a e t i v i t y
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t h e l e a s t a m o u n t o f P C L f o r t r a n s f o r m a t i o n o f m i e e s p l e e n e e l l a n d h u m a n
p e r i p h e r a l l y m p h o e y t e w a s o
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2 5 拌g /m l . P C L h a d s h o w n t h e i n h ib i t i n g e f f e e t o n g r o w t h o f
s e v e r a l t u m o r e e l l s
.
A m o n g t h e e e l l s t e
s t e d t h e e f f e e t o n h u m a n m e l a n o m a M 2 1 w e r e s h o w n
t o b e t h e m o s t s t r o n g l y i n h ib i t e d
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P C L a l
s o i n h i b i t e d t h e g
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T h e a g g l u t i n a t i n g a e t i
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, e e l l t r a n s f o r m a t io n a n d e e l l g r o w t h I n h ib i t i n g e f f e e t o f P C L w e r e
i n d u e e d b y l t
s c a r
b o h y d
r a t e b i n d i n g
s z t e b o u n d t o t h e e a r b o h y d r a t e s o n t h e e e l l s u r f a e e
.
K e y w o r d s : S e a r l e t r e n n e r b e a n l e e t i n
,
H e m a g g l u t i n a t i o n
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M i t o g e n e s is
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I n h ib i t i o n o f e e l l
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5 7 3