全 文 : 收稿日期:2004-08-03
花烛的低成本快速繁殖技术研究
赵玉芬 ,刘满光 ,孟维英
(河北省林业科学研究院 , 河北 石家庄 050061) 马孟良(石家庄市园林规划设计研究所 ,河北 石家庄 050000)
摘要:该文通过大量对比试验 ,选择出以中龄叶片为外植体的最佳诱导培养基 MS+6-BA1.0+KT0.5+2, 4 -
D0.5、分化增殖培养基 MS+6-BA1.0+NAA0.1+IBA0.1、生根培养基 1/2MS+NAA0.1+IBA0.1。采用刻伤的方式使
愈伤组织的诱导率达到了 80%;并采用自然光照条件 , 用白砂糖代替蔗糖 ,在生根阶段试用了无糖培养及瓶外生根等简
化的培养条件和程序 ,降低了生产成本 , 达到快速 、实用 、经济的效果和目的。
关键词:花烛;低成本;繁殖
中图分类号:S682· 14 文献标识码:A 文章编号:1002-3356(2005)04-0073-02
1 引言
花烛(Anthuriumscherzeranum), 天南星科花烛属 , 又
称火鹤花 、安祖花或红鹤芋等 , 多年生常绿草本 , 是目前
国际上流行的高档盆花 , 其贸易量仅次于兰花而在热带
花卉中位居第 2, 在亚洲的增长速度尤为迅速。我国从
80年代开始大批引种 ,其繁殖方法除分株外可以种子繁
殖 , 但从授粉到种子成熟需 8 ~ 9个月且采后要及时播
种 , 3 ~ 4a后才能开花 , 且种子繁殖有较大的变异 [ 1] 。早
在 70年代 ,国外就开始了花烛组织培养的研究 , 并已取
得较大成功 [ 2-3] 。 80年代后期 ,国内也开始了这方面的
研究 , 现已取得成功 , 但是多数仅限于实验生产 , 对于简
化培养程序 , 降低生产成本 , 适合规模化 、工厂化生产的
报道很少。花烛在我国北方地区为高温温室花卉 , 每年
要从荷兰大量引进 , 为满足市场的需求 , 通过选择最佳的
激素种类和浓度 、无糖培养及试管外生根等培养程序 ,找
到一条适合花烛规模化 、工厂化生产的简易培养程序 ,达
到快速 、经济 、实用的目的。
2 试验材料和方法
2.1 试验材料
以荷兰引进的盆栽花烛 cv.sunlight的叶片做外植
体。
2.2 试验方法
2.2.1 最佳外植体的选择 将盆栽花烛叶片按发育状
态分为幼叶(叶片紫红色 ,未展开)、初展叶(叶片刚展开 ,
叶片开始变绿)、中龄叶(叶片生长发育到最大 , 呈黄绿
色)、老龄叶(已停止生长的叶子 ,呈深绿色)。老龄叶由
于已革质化 , 不做外植体使用。
2.2.2 消毒方法 将 3种不同叶龄的叶片 , 用自来水流
水冲洗干净 , 用毛刷蘸洗衣粉刷洗后再冲洗干净 , 在无菌
条件下 , 将叶片边缘去掉 ,只留叶中脉及其左右 1cm, 切成
1cm×1cm的方块(称为切块)并将部分切块沿叶中脉再
切割 1个 0.6cm左右的切口 , 形成刻伤。将幼叶 、初展
叶 、中龄叶分别在 70%的酒精中漂洗 10、 20、30s, 接着用
无菌水冲洗 2次 , 在加入 1 ~ 2滴吐温— 20的 0.1%Hgcl
2
溶液中分别浸泡 3、4、5min, 并不停地摇晃溶液 , 使外植体
充分浸泡消毒 ,然后用无菌水冲洗 4 ~ 5次 , 直至没有泡
沫为止。
2.2.3 培养基的筛选 将刻伤的叶片接种到愈伤组织
诱导培养基(Y1)MS+6-BA1.0mg/L+KT1.0mg/L+2, 4-D0.5mg/L(单位下同);(Y
2
)MS+6-BA1.0+KT0.5+
2, 4-D0.5;(Y3)MS+6-BA1.0+KT0+2, 4 -D0.5,同
时做切块和刻伤 2种处理 , 分别接种到(Y2)上 , 进行暗培养 , 比较愈伤组织的诱导率。
(1)芽的诱导与增殖培养基:(F1)MS+6-BA1.5 +IBA0.5;(F2)MS+6 -BA1.0+IBA0.2;(F3)MS+6 -BA0.5+IBA0.2;(F4)MS+6 -BA1.0+IBA0.1+NAA0.1
上进行光照培养。
(2)生根培养基:(S1)1/2MS+IBA0.5;(S2)1/2MS+NAA0.1+IBA0.5;(S3)1/2MS+NAA0.5;(S4)1/2MS+IAA1.0。
2.2.4 培养条件 培养温度为 25 ~ 28℃,在自然光照培
养室中培养。试验用培养基以 MS为基本培养基 , pH5.8,
琼脂 7%, 用白砂糖代替蔗糖 ,愈伤组织诱导及芽的增殖
培养基均加入白砂糖 3%, 生根培养基加入 2.5%。
3 结果与分析
3.1 诱导愈伤组织发生与不定芽的分化
3.1.1 外植体及外源植物激素 KT的浓度对愈伤组织诱
导的影响 外植体及外源植物激素 KT的浓度是愈伤组
织诱导发生的重要因素 , 从表 1可看出 , (Y1)、(Y2)、(Y3)3种培养基 , 在相同的培养条件下 , 中龄叶最容易诱
导愈伤组织的发生 , 诱导率最高达 80%。表 1的试验结
果还表明:3种外植体的诱导率(Y2)>(Y3)>(Y1),这说明高浓度的 KT对愈伤组织的分化诱导有一定的抑制作
用 , 且在其他激素不变的条件下 , KT浓度为 0.5mg/L优
于不使用 KT, 因此 KT在愈伤组织的诱导中存在最适浓
度。试验结果表明 , 以中龄叶片为外植体 , 采用 MS+6 -
BA1.0+KT0.5 +2, 4-D0.5的愈伤组织培养基 , 其诱导
率最好。
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第 4期 河北林业科技 2005年 8月DOI :10.16449/j.cnki.issn1002-3356.2005.04.040
表 1 不同外植体和不同激素水平对愈伤组织诱导的影响
外植体 愈伤组织诱导培养基序号
外植体数
/片
愈伤组织
诱导率 /%
(Y1) 30 20
幼叶 (Y2) 30 36.7
(Y3) 30 23.3
(Y1) 30 26.7
初展叶 (Y2) 30 50
(Y3) 30 33.3
(Y
1
) 30 46.7
中龄叶 (Y2) 30 80
(Y3) 30 63.3
3.1.2 刻伤对愈伤组织诱导与不定芽分化的影响 为了
提高愈伤组织和不定芽的诱导率 , 对材料采取了刻伤 , 并
以切块为对照。分别接种到(Y2)中 , 30d后 , 叶片开始增
厚 ,叶表面及伤口周围有颗粒状突起。 50d后 ,以中龄叶片
为观察对象, 将有颗粒状突起的叶片统计入内 , 计算愈伤
组织的诱导率。然后 ,将切块和刻伤产生的愈伤组织分别
接种到(F
2
)上 , 60d后统计芽的分化率 ,结果见表 2。
表 2 刻伤对愈伤组织诱导与不定芽分化的影响
处理 外植体数 /个
产生愈伤组织
的块数 /块
不定芽平均
分化率 /%
平均
分化苗数 /株
切块 20 7 28.6 1.5
刻伤 20 16 75 3.5
由表 2可看出 , 叶片刻伤后 , 可诱导产生大量愈伤组
织 , 同时也显著提高不定芽的分化率。这是由于刻伤造
成外植体多处受伤 ,增加了与培养基的接触面积 , 刺激伤
口尽快形成愈伤组织 ,最后形成团块分化不定芽 , 形成芽
丛;而切块处理 , 只是受伤的叶片边缘先形成愈伤组织 ,
然后由这些愈伤组织不断向内蔓延 , 最终将切块包埋起
来 , 而后才逐渐分化 ,因此 ,同刻伤相比 , 不定芽的分化率
较低 , 这一点与高遐虹 [ 4]等人的试验结果相符。
3.2 植物外源激素对芽丛分化的影响
将培养 50d的愈伤组织 , 转接到分生增殖培养基上 ,
观察不同培养基上芽的分化率 、每块平均芽数 、芽丛增殖
倍数及生长情况。结果见表 3。
表 3 不同激素组合对不定芽发生的影响
培养基
序号 6-BA IBA NAA
愈伤块数
/块
分化率
/%
平均芽
数 /块
芽丛增
殖倍数 生 长 情 况
(F1) 1.5 0.5 0 10 40 2.5 6.4 芽小而多 ,有少数畸形
(F2) 1.0 0.2 0 10 70 3.3 4.24 芽正常 ,健壮 ,有愈伤组织产生
(F3) 0.5 0.2 0 10 60 2.0 3.0 粗壮 ,有少数生根
(F4) 1.0 0.1 0.1 10 80 4.0 5.75 芽正常 ,健壮 ,有少量根毛
由表 3可见 , (F1)的分化增殖倍数较高 , 但芽小细
弱 , 有少数畸形苗 ,而(F3)的增殖倍数虽低 , 但苗粗壮 ,在继代过程中有生根现象 ,可将生根苗直接移栽到基质中。
在试验过程中 , (F1)和(F3)可交替使用。 (F4)的分化率
及增殖倍数较高且芽健壮 ,为最佳的分化增殖培养基。
3.3 生长激素及糖分对试管苗生根的影响
将 1 ~ 2cm高的无菌芽接种在仅加 IBA、NAA、IAA及
同时加入 IBA和 NAA的 4种生根培养基上 , 50d后统计生
根结果。生根情况见表 4。
表 4 不同生长激素对生根培养的影响
培养基
序号 IBA NAA IAA
接种
数 /个
生根
率 /% 生 根 情 况
(S1) 0.5 50 100 根绿色 ,短粗 ,光滑 , 3 ~ 5条
(S2) 0.5 0.1 50 100 根绿色 ,短粗 ,有少量根毛 , 3 ~ 5条
(S3) 0.5 50 86 根绿色 ,短粗 , 2 ~ 4条
(S4) 1.0 50 96 根绿色 ,细长 ,气生根多
由表 4中可见 , (S2)培养基生根情况较其他好 , 说明
适当浓度的 IBA和低浓度 NAA配合较单独使用 IBA、IAA
要好。在(S2)培养基上的试管苗 , 根粗壮 , 有根毛 , 易移
栽 , 成活率高。
在(S
2
)培养基中加入不同浓度的砂糖 , 比较砂糖浓
度与生根的关系 , 结果见表 5。
表 5 不同砂糖浓度对生根的影响
接种数 /个 砂糖浓度 /% 生根率 /% 平均生根条数 /条
50 2.5 100 4.52
50 1.5 100 4.48
50 1.0 100 4.42
50 0 100 4.32
由表 5可以看出 , 培养基中砂糖浓度从 0 ~ 2.5%,其
生根情况相差不大 , 含 2.5%的砂糖浓度的培养基中生根
条数虽较其他浓度稍高 , 但并不明显。培养基中不添加
砂糖 , 试管苗也能够正常生长 , 这可能是试管苗已初步具
备了在自然光照条件下进行光合作用的能力 , 完全能提
供试管苗生根所需的营养 , 所以 , 为降低生产成本 , 在生
根阶段可以采用无糖培养。
3.4 栽培基质对试管苗移栽成活率的影响
将试管苗洗净后 ,用 800倍多菌灵溶液浸泡 10 min,
栽在盛有用 1‰KMnO4消毒过的不同基质组合的育苗箱
内 , 1周内盖塑料薄膜保温保湿 , 20d后 , 每周喷施 1次全
量 MS营养液 , 保持温度在 20 ~ 22℃,相对湿度在 80%左
右 , 60d后调查其成活率和生长势 ,结果见表 6。
表 6 不同基质对炼苗的影响
基质 苗数/株
成活率
/% 生 长 势
珍珠岩 1+泥炭 2 100 64 叶色绿 ,新生叶 1片
珍珠岩 1+蛭石 2+泥炭 1 100 87 叶色浓绿 ,健壮 ,新生叶 2 ~ 3片
泥炭 100 55 叶色黄绿 ,生长势弱 ,极少生新叶
蛭石(CK) 100 72 叶色浓绿 ,植株健壮新生叶 1 ~ 2片
由表 6可见 ,最佳的基质组合为珍珠岩 +蛭石 +泥
炭。这是因为珍珠岩和泥炭可增加介质的透气性 , 泥炭
既可提供部分营养物质 ,又因本身是酸性介质 , 为火鹤提
供弱酸性的环境条件 , 蛭石具有保水 、保温性 , 三者按 1:
2:1的比例搭配使用 ,利于提高试管苗的成活率。
3.5 瓶外生根对试管苗移栽成活率的影响
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第 4期 河北林业科技 2005年 8月
红王子锦带扦插试验初探
王春荣 ,毕 君 ,赵京献
(河北省林业科学研究院 ,河北 石家庄 050061) 孟军英(正定县林业局 ,河北正定 050800)
摘要:于初秋采用不同浓度的激素处理红王子锦带插穗 , 进行扦插试验 ,调查分析各处理对红王子锦带生根率及
根系生长状况的影响 。结果表明:扦插红王子锦带以速蘸 500×10-6和 1000×10-6萘乙酸后蘸硫磺粉效果较好。
关键词:红王子锦带;扦插;萘乙酸;硫磺粉
中图分类号:S685· 99 文献标识码:A 文章编号:1002-3356(2005)04-0075-02
红王子锦带(Weigelafloridacv.redprince)为忍冬科
锦带花属落叶灌木。单叶对生 , 聚伞花序生于短枝顶及
叶腋 , 花玫瑰红色 , 花色艳丽 , 自然花期 4 ~ 5月 , 正值春
花凋零 , 夏花不多之际 ,其耐寒 、耐旱 、也耐强光 ,是东北 、
华北地区重要观花灌木之一 , 通过扦插 、播种 、分株均可
繁殖 , 以扦插繁殖为主。
1 试验材料与方法
于 8月 11日结合生产进行。取当年生木质半木质
化枝条作插穗 , 2 ~ 3节剪成一段 ,上部切口剪平 ,下部切
收稿日期:2004-08-30
口剪成斜面 , 去掉基部 1 ~ 2对叶片 , 仅留上部叶片的 1/3
~ 1/4,经处理后扦插于干净的河沙中。 扦插后用遮光率
为 70%遮阳网遮光 , 插床喷水 ,使近床面处空气湿度保持
80% ~ 95%。
本试验共设 8个处理:(1)NAA1000:速蘸 1000 ×10-6
萘乙酸;(2)NAA1000 +S:速蘸 1000×10-6萘乙酸后蘸硫
磺粉;(3)NAA500:速蘸 500×10-6萘乙酸;(4)NAA500 +S:
速蘸 500×10-6萘乙酸后蘸硫磺粉;(5)ABT6100:速蘸 100
×10 -6ABT生根粉 6号;(6)ABT6100 +S:速蘸 100×10-6
ABT生根粉 6号后蘸硫磺粉;(7)ABT650:速蘸 50×10-6
将无根试管苗打开瓶口在炼苗室中炼苗 3 ~ 4d后 ,
洗净试管苗基部培养基 , 蘸 100 ×10-6的 IBA溶液 , 扦插
于盛有蛭石的育苗箱中 , 20d内盖塑料薄膜保温保湿 ,待
试管苗恢复生长后 , 再行与生根试管苗同样的管理 , 60d
后调查其生根及成活率情况。
表 7 瓶外生根与瓶内生根的异同
途径 生根率/%
根条数
/株
诱导根突 1mm
需要的天数 /d
试管苗恢复生长
所需天数 /d
瓶外 85 3 ~ 5 35 25
瓶内 100 3 ~ 5 15 15
由表 7可见瓶外生根较瓶内生根所需时间长 , 生根
率低于试管内的生根率 , 而且较带根试管苗移栽后开始
恢复生长所需的时间长 , 但是试管苗在瓶外诱导出根突
后 , 根系生长迅速 , 60d后其根系状况与生根试管苗缓苗
后根系恢复生长的状况没有差异 , 植株生长势亦无显著
差异。无根苗的瓶外生根率低于瓶内生根率 , 相应地无
根试管苗的移栽成活率也就低于生根试管苗的移栽成活
率。瓶外生根率低的原因可能与生长激素的种类与浓度
及管理水平有关。
4 讨论及小结
(1)通过试验 , 基本上找到了一条适合花烛规模化 、
工厂化生产的有效途径:外植体※愈伤组织诱导※不定
芽的产生※增殖继代培养※生根培养※移栽。本文在研
究愈伤组织诱导方面 , 试用了 6 -BA、KT和 2, 4 -D配
合 , 取得了良好的效果 , 采用刻伤的方式 , 增加外植体伤
口与培养基的接触面积 ,提高了愈伤组织的诱导率。
(2)采用自然光照条件 , 以白砂糖代替蔗糖 , 及瓶外
生根等方式 , 简化培养条件和程序 , 大大降低生产成本。
(3)瓶外生根 ,省去了做生根培养基所需要药品 、工
时和其他消耗 ,简化培养程序 , 缩短了试管苗在培养室内
的培养周期 , 有利于培养器皿的周转。瓶外生根率低于
瓶内生根率 , 关键原因可能与生长激素的种类和浓度及
移栽温湿度有关 ,这有待于进一步研究。
(4)试管内生菌问题是研究天南星科属的一大难题 ,
本试验中也观察到在花烛的外植体接种后和继代增殖过
程中极易产生内生菌 ,且易产生交叉感染 , 这一问题有待
于进一步研究 。
参 考 文 献
[ 1]北京林业大学园林系花卉教研组.花卉学 [ M].北京:中国林
业出版社 , 487-488.
[ 2] Pierk.R.L.M.CalusnultiplicationofAnthuriumandraeanum
Lind.Inliquidmedia.NethJ.Agric.Sci., 1975, 23(4):299-
302.
[ 3] Rierik.R.L.M.Anthuriumandraeanumplantletsproducedfrom
caluescultivatedinvitro.Physiol.Plant.1976, 37(1):80-82.
[ 4]高遐虹 ,李梅 ,安祖花叶片的离体培养 [ J].北京农学院学报,
1995, 10(2):35-37.
致谢:本文得到北京林业大学园林学院王燕老师的悉心指
导 ,在此表示感谢 !
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第 4期 河北林业科技 2005年 8月