全 文 ：癌变·畸变·突变　　2000年 1月第 12卷第 1期　　　　　　　　　　　Carcinogenesis Teratogenesis and Mutagenesis Vol 12 No 1 Jan., 2000
文章编号:1004-616X(2000)01-0056-01
紫露草雄蕊毛突变检测法①
陈锐章
(中国科学院　广西植物研究所 , 广西桂林　541006)
中图分类号:X83　　　　　　　　文献标识码:A
1　紫露草的栽培管理
　　紫露草 4430号是种间杂交产生的具有兰/红等
位基因的杂合体 ,兰色为显性 ,花瓣和雄蕊毛均为兰
色。诱变剂能引起雄蕊毛发生红色突变 。
紫露草可在温室中盆栽或水培 ,也可在大田栽
培。盆土由两份砂 ,一份草灰 ,四份土壤混合而成;水
培可用砂或蛭石 、珍珠岩为支撑物 ,用水或 1/3的霍
格兰氏营养液培植;大田栽培应选择沙质土 ,采用分
株繁殖。诱导开花需要 16/8小时的光/暗周期 ,日温
21 ～ 25℃,夜温 16℃左右 ,相对湿度 60 ～ 80%的生长
环境 。在短日照季节如能补充光照时数 ,用萤光灯使
植物顶部的光强达到 180 烛光 ,则常年都可开花供
检测之用。如果每天需要 100 ～ 150个花序供检测 3
～ 4 个样品和 1 个对照 ,那么需要栽 150 ～ 200 盆
(丛),余类推。
2　检测方法
选用含有 9个花蕾 ,约在 1周以后才能开花的幼
嫩花序 ,每一处理用 20 ～ 25个 ,插于样品液中 。水溶
性样品可直接溶于水(或 1/3霍格兰氏营养液)中;不
溶于水的样品 ,可先溶于少量的二甲亚砜或酒精 ,然
后再用水稀释。气态样品 ,可将花序插于营养液中 ,
置动力气流箱内 ,用已知含量的样品 ,由气泵将样品
匀速地通过气流箱 。处理持续时间视样品的毒性大
小 ,从 6小时至数天。如作现场检测 ,花序应在洁净
的容器中运送 ,避免途中的污染。
花序经处理后 ,移到 1/3霍格兰氏营养液中恢复
生长 。观察记录雄蕊红色突变 ,应在处理后第 8 ～ 14
天 ,突变的高峰期中进行 。
将充分开放的花朵摘下 ,置冰箱中冷冻 30 ～ 60
分钟 ,使雄蕊毛膨胀易于观察(据译者多年的经验 ,此
举并非必要)。用镊子取出六个雄蕊 ,排列于载玻片
上的甘油滴中 ,(互相之间要有足够的距离 ,避免互相
重叠 ,不便观察)。用 25倍的解剖镜在白色背景下观
察红色突变的次数 。以每 1000个雄蕊毛中含有的红
色突变次数表示。
通常每朵花有 6个雄蕊 ,每个雄蕊约有 40 ～ 75
个雄蕊毛 ,每个雄蕊毛平均含有 24个细胞 ,这些细胞
超源于花丝的一个表皮细胞经过有丝分裂产生的。
所以 ,在雄蕊发育的早期阶段发生的红色突变 ,往往
形成一串的相连续的红色细胞 ,在记录时 ,不论这一
串红色细胞含有多少个都看作是一次红色突变。不
相连续的红色细胞 ,每一个算作一次红色突变。
每朵花的雄蕊毛平均数 ,可在突变高峰期从对照
组随机取三朵花 ,观察记录每朵花的三个雄蕊的雄蕊
毛数 ,乘以 2便得到三朵花的雄蕊毛总数 ,再除以 3 ,
便得到每朵花的雄蕊毛平均数。这个数值可在一周
或一个月内使用。除非生长环境有较明显改变才需
要重新测算。
每个处理组的突变次数 ,每天需要在该处理组的
20个花序中收集 10 ～ 12朵花 ,记录突变次数 。每一
朵花平均有 300个雄蕊毛 ,可以看作一个样品群 。以
每 1000个雄蕊毛的突变次数称为突变率。
每处理组在突变高峰期连续三天每天 10 ～ 12朵
花的突变率可以计算突变率的均值和标准差。
为了结果更加可信 ,试验必需重复三次 ,因此突
变率均值和标准差是以九组数据为基础计算得到的。
然后用 F 检测和邓肯氏 t 检测 ,分析各处理与对照
之间在 0.05水平上的显著性差异 。
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① 译自美国国家环保局 、联合国环境署 、国际劳工组织和世界卫生组织 1994年联合出版的专著《Fundamental and Molecular Mechanisms
of Mutagenesis》 ,陈锐章为该文作者之一。收稿日期:1999-09-13;修订日期:1999-10-28作者简介:陈锐章(1931-　),男 ,广东五华县人 ,中国科学院广西植物研究所研究员 ,世界卫生组织化学品安全植物检测国际合作研究组成员。长期从事植物生理 、环境与植物和环境诱变剂的教学和科研工作。