全 文 ：收稿日期:2015 － 05 － 13 修回日期:2015 － 07 － 07
基金项目:福建省特色花卉品种创新与种苗设施繁育产业化工程项目(2014S1477-7)。
作者简介:唐淑玲(1986 －) ，女，硕士研究生，从事园林植物种质资源与育种研究。E-mail: fjzzztsl@ 126． com。通讯作者彭东辉
(1971 －) ，男，教授，博士，从事园林植物种质资源与应用研究。E-mail:fjpdh@ 126． com。
DOI:10． 13324 / j． cnki． jfcf． 2016． 01． 011
毛稔叶片离体培养及植株再生研究
唐淑玲，徐江宇，江鸣涛，林仙淋，卓孝康，彭东辉
(福建农林大学园林学院，福建 福州 350002)
摘要:以毛稔叶片作为外植体，MS为基本培养基，研究不同种类激素的浓度配比对毛稔叶片离体再生的影响。结果表
明，黑暗条件与光照 12 h·d －1有利于毛稔愈伤组织形成，毛稔叶片愈伤组织最佳诱导培养基为 MS + 0． 5 mg·L －1 6-BA +
2． 0 mg·L －1 2，4-D + 0． 1 mg·L －1 NAA，光照 12 h·d －1诱导 40 d，愈伤诱导率为 96%;叶片形成的愈伤组织分化率极低，
分化率随 6-BA浓度升高而升高，愈伤组织分化最适培养基为 MS + 0． 1 mg·L －1 NAA + 2． 0 mg·L －1 6-BA，分化率为 10%;
最适生根培养基为 1 /2 MS + 0． 1 mg·L －1 NAA，生根率为 88． 89%。
关键词:毛稔;离体培养;愈伤组织;再生植株
中图分类号:S339． 4 + 1 文献标识码:A 文章编号:2096 － 0018(2016)01 － 0067 － 06
Plant regeneration in vitro from leaves of Melastoma sanguineum
TANG Shuling，XU Jiangyu，JIANG Mingtao，LIN Xianlin，ZHUO Xiaokang，PENG Donghui
(College of Landscape Architecture，Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou，Fujian 350002，China)
Abstract:The tissue culture and plant regeneration of Melastoma sanguineum was studied by using leaves as material． The explants
were cultivated in MS medium added with different concentrations of hormones to examine their effects on regeneration． The results
indicated as follows． The dark condition was benefit to callus induction as well as 12 h·d －1 light condition． The optimum medium
for callus induction was MS + 0． 5 mg·L －1 6-BA + 2． 0 mg·L －1 2，4-D + 0． 1 mg·L －1 NAA with the induction rate of 96%，which
inducted 40 days under 12 h·d －1 light condition． The differentiation rate increased as the concentration of 6-BA increased． The best
medium for differentiation was MS + 0． 1 mg·L －1 NAA + 2． 0 mg·L －1 6-BA with a low differentiation rate of 10% ． The best rooting
medium was 1 /2 MS + 0． 1 mg·L －1 NAA with the rooting rate of 88． 89% ．
Key words:Melastoma sanguineum Sims．;in vitro culture;callus;plant regeneration
毛稔(Melastoma sanguineum Sims．)是野牡丹科(Melastomataceae)野牡丹属(Melastoma)的一种常绿大
灌木［1］，其植株挺拔，花大色艳，是优良的园林观赏植物，可作庭园孤植树或行道树，观赏效果良
好［2 － 4］。野牡丹属植物种子极小，发芽率不高，发芽周期多在 1 个月左右［5］。目前，对毛稔的研究主要
集中在药理作用［6］、无性繁殖［2，5］及种间杂交［7］等方面，而组织培养快速繁殖技术研究相对较少，仅何
长信等［8］利用毛稔种子进行组织培养，发现 6 －苄氨基腺嘌呤(6-benzylaminopurine，6-BA)对毛稔不定芽
繁殖有显著影响。采用离体组织培养技术建立毛稔再生体系，可以缩短繁殖周期，提高繁殖系数及整齐
度。本课题组对毛稔叶片离体培养与植株再生进行试验，旨在建立高效、优良的毛稔繁殖体系并探索适
合毛稔叶片离体培养的优化条件，为其快速繁殖提供参考，对推动毛稔的广泛应用有重要意义。
1 材料与方法
1． 1 试验材料
外植体来自福建农林大学园林学院组培实验室的毛稔无菌苗。培养温度为(25 ± 1)℃，光源为日光
灯，光照强度 1 800 － 2 500 lx。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 叶片愈伤组织诱导 试验采用 L9(3
4)正交设计。选取长势一致的顶生新叶，切成 0． 5 － 1 cm2 大
小，叶背朝上接种于添加不同浓度 6-BA、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-dichlorophenoxyacetic acid，2，4-D)、萘
乙酸(1-naphthaleneacetic acid，NAA) (表 1)的 MS 培养基(蔗糖 30 g·L －1，琼脂 6． 5 g·L －1，pH = 5． 8)
森林与环境学报 2016，36(1) :67 － 72 第 36 卷 第 1 期
Journal of Forest and Environment 2016 年 1 月
中，对照组(CK)为不添加任何激素的 MS培养基。将 9 个处理及对照组放于 3 个不同光照(0、6、12 h
·d －1)条件下进行培养，20 d后全部转移至同一光照条件下(12 h·d －1)。每瓶接种外植体 5 个，每个处
理 10 瓶，2 个重复。40 d后统计愈伤组织的诱导率。
表 1 愈伤组织诱导 L9(3
4)正交设计
Table 1 Orthogonal experiment design of callus induction
水平
Levels
试验因素 Factors
6-BA浓度 Concentration of 6-BA
mg·L －1
2，4-D浓度 Concentration of 2，4-D
mg·L －1
NAA浓度 Concentration of NAA
mg·L －1
1 0． 1 1． 0 0． 1
2 0． 5 1． 5 0． 5
3 1． 0 2． 0 1． 0
1． 2． 2 愈伤组织分化 利用 1． 2． 1 最佳诱导培养基诱导出的愈伤组织作为接种材料，将生长良好的愈
伤组织切成 0． 5 cm2 大小的小块，转接至以 MS培养基(蔗糖 30 g·L －1，琼脂 6． 5 g·L －1，pH =5． 8)为基
本培养基、添加不同浓度 6-BA、NAA的分化培养基中，每瓶接种 5 个，每个处理 6 瓶，2 次重复。30 d
后统计愈伤组织分化率，筛选出最佳的分化培养基。愈伤组织分化培养基激素配比见表 2。
表 2 愈伤组织分化培养基激素配比
Table 2 Hormones design of the mediums on callus differentiation
编号
Number
6-BA浓度
Concentration of 6-BA
mg·L －1
NAA浓度
Concentration of NAA
mg·L －1
编号
Number
6-BA浓度
Concentration of 6-BA
mg·L －1
NAA浓度
Concentration of NAA
mg·L －1
1 0． 5 0． 1 6 1． 0 0． 5
2 0． 5 0． 2 7 2． 0 0． 1
3 0． 5 0． 5 8 2． 0 0． 2
4 1． 0 0． 1 9 2． 0 0． 5
5 1． 0 0． 2
1． 2． 3 不定芽生根 利用 1． 2． 2 最佳分化培养基分化出的不定芽作为接种材料，在原培养基上继代增
殖 15 d后，挑选长势一致的不定芽接种在添加不同浓度 NAA的MS、1 /2 MS培养基(蔗糖 30 g·L －1，琼
脂 6． 5 g·L －1，pH =5． 8)中进行生根培养。每瓶接种 3 个茎段，每个处理 15 瓶，2 次重复。培养 40 d
后，统计生根率，筛选出最佳的生根培养基。生根培养基见表 3。
表 3 生根培养基
Table 3 The mediums of rooting
编号
Number
基本培养基
Basal medium
NAA浓度
Concentration of NAA
mg·L －1
编号
Number
基本培养基
Basal medium
NAA浓度
Concentration of NAA
mg·L －1
1 MS 0． 1 4 1 /2 MS 0． 1
2 MS 0． 2 5 1 /2 MS 0． 2
3 MS 0． 5 6 1 /2 MS 0． 5
1． 2． 4 炼苗与移栽 将组培苗移出培养室，每隔 3 d 将瓶口逐步打开，早晚喷雾，保证一定湿度。炼
苗 9 d后，从培养瓶取出幼苗，用清水清洗幼苗并去掉部分须根，移栽到 1 /4 黄心土 + 1 /4 沙土 + 1 /2
泥炭土(体积比)经过高压灭菌的基质中，放在温室大棚中，每天浇水 1 次，30 d后统计移栽成活率。
1． 3 数据统计分析
参考伍成厚等［9］的方法计算愈伤组织诱导率和愈伤组织分化率，参考段超［10］的方法计算生根率。
用 Excel软件进行图表分析，用 SPSS软件对试验数据进行显著性分析和多重比较。
·86· 森 林 与 环 境 学 报 第 36 卷
2 结果与分析
2． 1 毛稔叶片愈伤组织诱导
毛稔叶片在添加不同激素的培养基培养 5 d后叶片开始反卷，10 d后由边缘切口处开始往叶片中部
形成小球状愈伤组织;不添加任何激素的 MS培养基中的叶片无法形成愈伤，最后干枯、死亡。通过观
察发现，黄白色愈伤组织结构较松散，在后期生长中容易出现玻璃化，黄绿色的愈伤组织结构致密。个
别愈伤组织在 32 d时出现褐化，无法分化出不定芽。同时，个别愈伤组织出现红色斑点，且不断扩大，
这类愈伤组织无法分化出不定芽，这种现象在野牡丹科植物组织培养中未见报道。
2． 1． 1 不同光照条件对愈伤组织诱导的影响 光照条件下毛稔叶片愈伤组织开始形成的时间为 10 d，
黑暗条件下叶片接种 15 d后开始形成愈伤组织。黑暗条件下形成的愈伤组织结构松散，后期生长状况
较好，颜色为黄绿、黄绿偏白，光照条件形成的愈伤组织颜色多为黄绿色，但容易出现褐化。不同光照
条件下愈伤组织诱导率差别较大，黑暗条件平均诱导率为 68． 44%，光照 6 h·d －1的平均诱导率为
54． 67%，光照 12 h·d －1的平均诱导率为 77． 0%。第 1、2、3、4 组在 3 种光照条件下诱导率差别不大，
第 4 组在黑暗和 6 h·d －1光照条件下诱导率均最高(表 4)。
用 LSD法多重比较光照时间对毛稔叶片愈伤组织诱导率的影响，结果表明，6 h·d －1与 12 h·d －1差
异极显著(Sig． = 0． 000 ＜ 0． 01) ，与 0 h·d －1差异显著(Sig． = 0． 020 ＜ 0． 05) ，0 h·d －1与 12 h·d －1差异不
显著(Sig． = 0． 075 ＞ 0． 05)。0 与 12 h·d －1条件下均有利于毛稔愈伤组织形成，最差的为 6 h·d －1。
表 4 毛稔叶片愈伤组织诱导情况1)
Table 4 The callus induction of M． sanguineum
光照时间
Illumination
time /(h·d －1)
试验号
Number
处理数
Treatment
number
愈伤组织诱导
率 Induction
rate /%
愈伤生长情况 Callus growth condition
评价
Evaluation
0 1 100 48 ± 2． 83 黄绿色，松散。Yellow-green，friable． +
2 100 69 ± 4． 24 黄绿偏白，个别愈伤上有红点，松散。Yellow-green with white，reddened
individually，friable．
+
3 100 59 ± 1． 41 愈伤面积较小，黄白，松散。Smaller areas，yellow-white，friable． + +
4 100 93 ± 7． 07 黄绿 偏 白，个 别 有 红 点，松 散。 Yellow-green with white， reddened
individually，friable．
+ + +
5 100 77 ± 4． 24 黄绿色，松散。Yellow-green，friable． + + +
6 100 68 ± 8． 49 黄白，致密。Yellow-white，compact． + + +
7 100 58 ± 2． 83 仅叶片边缘形成白色愈伤，个别愈伤上有红点，致密。White callus formed
on the margin，reddened individually，compact．
+ +
8 100 76 ± 5． 66 仅叶片边缘形成少量黄白色愈伤，松散。A few yellow-white callus formed
on the margin，friable．
+ + +
9 100 68 ± 2． 83 仅叶片边缘形成少量黄白色愈伤，松散。A few yellow-white callus formed
on themargin，friable．
+ +
6 1 100 48 ± 5． 66 叶片边缘形成愈伤，黄绿色，致密。Yellow-green callus formed on the
border of leaves，compact．
+ +
2 100 73 ± 4． 24 叶片边缘形成愈伤，黄绿偏白，松散。Yellow-green with white callus formed
on the margin，friable．
+ + +
3 100 44 ± 5． 66 叶片边缘形成少量黄褐色愈伤，较差，致密。A few tawny callus formed on
the margin，compact．
+
4 100 89 ± 4． 24 叶片边缘形成少量愈伤，黄绿偏白，个别出现球状白色愈伤，致密。A few
yellow-green with white callus formed on the margin，compact．
+ + +
5 100 34 ± 2． 83 黄绿偏黄，致密 Yellow，compact． +
6 100 43 ± 7． 07 黄褐，长势较差，3 个愈伤分化出不定芽，松散。Tawny friable callus with
bad growth，adventitious buds induced from three callus．
+ +
7 100 46 ± 0． 00 黄绿色，轻微玻璃化，个别愈伤红色，致密。Yellow-green，reddened
individually，compact，a little vitrification．
+ +
8 100 53 ± 4． 24 黄白偏黄，松散。Yellow-white，friable． + +
9 100 62 ± 2． 83 黄白，松散。Yellow-white，friable． + + +
·96·第 1 期 唐淑玲等:毛稔叶片离体培养及植株再生研究
续表 4
光照时间
Illumination
time /(h·d －1)
试验号
Number
处理数
Treatment
number
愈伤组织诱导
率 Induction
rate /%
愈伤生长情况 Callus growth condition
评价
Evaluation
12 1 100 56 ± 0． 00 愈伤黄绿色，致密。Yellow-green，compact． +
2 100 80 ± 2． 83 愈伤黄绿色偏黄，致密。Yellow-green，compact． + +
3 100 55 ± 4． 24 黄绿，少数玻璃化，松散。Yellow-green，friable，a little vitrification． +
4 100 92 ± 2． 83 形成的愈伤面积较大，黄绿偏白，个别愈伤上 有 红 点，松 散。
Yellow-green with white，reddened individually，friable．
+ +
5 100 65 ± 1． 41 黄绿偏黄，个别几个褐化，致密。Yellow-green，browned individually，compact． + +
6 100 96 ± 5． 66 黄绿，个别愈伤上有红点，致密。Yellow-green，reddened individually，compact． + + +
7 100 78 ± 2． 83 黄绿偏白，松散。Yellow-green with white，friable． + + +
8 100 84 ± 0． 00 黄绿，个别偏白，2个愈伤分化出不定芽，致密。Yellow-green and some with
white，compact，adventitious buds induced from two callus．
+ + +
9 100 87 ± 4． 24 黄白，松散。Yellow-white，friable． + +
1)+ + +表示好; + +表示一般; +表示差。Notes:+ + + good，+ + general，+ bad．
2． 1． 2 不同激素组合对愈伤组织诱导的影响 对光照 12 h·d －1的 9个正交处理组进行极差分析，第 4、6
组愈伤诱导率与其他各组差异显著，第 6组(0． 5 mg·L －1 6-BA +2． 0 mg·L －1 2，4-D +0． 1 mg·L －1 NAA)愈伤诱
导率最高，平均为 96%，第 3组(0． 1 mg·L －1 6-BA +2． 0 mg·L －1 2，4-D +1． 0 mg·L －1 NAA)诱导率最低，平均
为 55%(表 5)。比较 Ｒ值显示，3种不同激素对愈伤组织诱导影响的主次关系为6-BA ＞NAA ＞2，4-D。通过极
差分析得出，在此光照条件下，最适宜毛稔叶片愈伤组织诱导的激素组合为0． 5 mg·L －1 6-BA +2． 0 mg·L －1 2，
4-D +0． 5 mg·L －1 NAA。通过组间效应检验，6-BA的 Sig． =0． 007 ＜0． 01，2，4-D的 Sig． =0． 443 ＞0． 05，NAA
的 Sig． =0． 017 ＜0． 05，6-BA对毛稔叶片愈伤组织诱导率的影响极显著，NAA显著，2，4-D不显著。
用 LSD法多重比较 6-BA、NAA 对毛稔叶片愈伤组织诱导率的影响。不同浓度水平的多重比较表
明，0． 1 mg·L －16-BA处理与 0． 5 mg·L －16-BA 处理的差异极显著(Sig． = 0． 003 ＜ 0． 01) ，0． 1 mg·L －16-
BA处理与 1． 0 mg·L －16-BA处理的差异显著(Sig． = 0． 014 ＜ 0． 05) ，0． 5 mg·L －1与 1． 0 mg·L －16-BA处理
差异不显著(Sig． = 0． 381 ＞ 0． 05)。6-BA 浓度为 0． 5、1． 0 mg·L －1时均有利于毛稔叶片愈伤组织形成，
0． 1 mg·L －1效果较差。0． 5 mg·L －1NAA处理与 1． 0 mg·L －1NAA处理差异极显著(Sig． = 0． 007 ＜ 0． 01) ，
0． 1 mg·L －1与1． 0 mg·L －1差异显著(Sig． = 0． 026 ＜ 0． 05) ，0． 1 mg·L －1与 0． 5 mg·L －1差异不显著(Sig． =
0． 476 ＞ 0． 05) ，NAA浓度为 0． 1、0． 5 mg·L －1时可促进毛稔愈伤组织形成。
表 5 不同激素对毛稔叶片愈伤组织诱导的影响1)
Table 5 The effects of different concentration of hormones on callus induction
试验号
Number
6-BA浓度
Concentration of
6-BA /(mg·L －1)
2，4-D浓度
Concentration of
2，4-D /(mg·L －1)
NAA浓度
Concentration of
NAA /(mg·L －1)
空列
Blank
愈伤组织诱导率
Induction rate /%
反正弦平方根
Arcsine square-root
1 1 1 1 1 56 ± 0． 00ABa 48． 446 05
2 1 2 2 2 80 ± 2． 83BCDbcd 63． 434 95
3 1 3 3 3 55 ± 4． 24Aa 47． 869 59
4 2 1 2 3 92 ± 2． 83DEde 73． 570 06
5 2 2 3 1 65 ± 1． 41ABCab 53． 728 80
6 2 3 1 2 96 ± 5． 66Ee 78． 463 04
7 3 1 3 2 78 ± 2． 83ABCDbc 62． 027 90
8 3 2 1 3 84 ± 0． 00CDcd 66． 421 82
9 3 3 2 1 87 ± 4． 24CDEcd 68． 865 71
K1 159． 750 60 184． 044 00 193． 330 90 171． 040 60 － －
K2 205． 761 90 183． 585 60 205． 870 70 203． 925 90 － －
K3 197． 315 40 195． 198 30 163． 626 30 187． 861 50 － －
k1 53． 250 20 61． 348 00 64． 443 64 57． 013 52 － －
k2 68． 587 30 61． 195 19 68． 623 57 67． 975 30 － －
k3 65． 771 81 65． 066 11 54． 542 10 62． 620 49 － －
Ｒ 15． 337 11 3． 870 92 14． 081 48 10． 961 78 － －
1)同列数据后不同大写字母表示差异达 0． 01 显著水平，同列数据后不同小写字母表示差异达 0． 05 显著水平。Notes:different capital
and small letters indicate P ＜ 0． 01 and P ＜ 0． 05．
·07· 森 林 与 环 境 学 报 第 36 卷
2． 2 毛稔愈伤组织分化
在培养过程中发现，转接至分化培养基的愈伤组织第 1 周无明显变化，之后缓慢向四周进行增殖，
结构逐渐变松散，15 d后开始分化出不定芽，芽体细弱。无法分化的愈伤组织逐渐褐化、死亡。
分化培养终期有 6 个处理组的愈伤组织已经分化出不定芽，但分化率不高(表 6) ，第 7 组培养基
(MS +2． 0 mg·L －1 6-BA +0． 1 mg·L －1 NAA)分化不定芽最多，平均分化率 10%，其次为第 8 组，即 MS
+2． 0 mg·L －1 6-BA +0． 2 mg·L －1 NAA，平均分化率 6． 67%，1、2、6 组均未分化。通过主体间效应检
验发现，6-BA对分化率有显著影响(Sig． = 0． 042 ＜ 0． 05)。用 LSD 法多重比较不同浓度水平 6-BA 对毛
稔愈伤组织分化的影响，结果表明，6-BA 浓度为2． 0 mg·L －1时与0． 5、1． 0 mg·L －1时差异显著(Sig． =
0． 012 ＜ 0． 05，Sig． = 0． 043 ＜ 0． 05) ，0． 5 mg·L －1与 1． 0 mg·L －1差异不显著(Sig． = 0． 515 ＞ 0． 05)。
表 6 不同浓度 6-BA和 NAA配比对毛稔愈伤组织分化的影响1)
Table 6 Effects of different combination of 6-BA with NAA on callus differentiation
编号
Number
处理数
Treatment number
分化率
Differentiation rate /% 愈伤生长状况
Callus growth condition
1 60 0． 00 ± 0． 000a 黄绿色，结构松散。Yellow-green，friable．
2 60 0． 00 ± 0． 000a 黄绿色，结构致密。Yellow-green，compact．
3 60 1． 67 ± 2． 360ab 黄绿色，结构致密。Yellow-green，compact．
4 60 3． 33 ± 4． 710ab 黄绿色，多数愈伤结构松散。Yellow-green，friable．
5 60 1． 67 ± 2． 360ab 黄绿色，结构致密。Yellow-green，compact．
6 60 0． 00 ± 0． 000a 黄绿色，结构致密。Yellow-green，compact．
7 60 10． 00 ± 9． 430b 黄绿偏白，结构松散。Yellow-green with white，friable．
8 60 6． 67 ± 0． 000ab 黄绿偏白，结构松散，个别玻璃化。Yellow-green with white，friable，some vitrification．
9 60 1． 67 ± 2． 360ab 黄绿偏白，结构松散。Yellow-green with white，friable．
1)同列数据后不同小写字母表示差异达 0． 05 显著水平。Note:different small letters stand for P ＜ 0． 05．
2． 3 毛稔不定芽生根培养
不定芽接种 3 d后，基部伤口出现小团乳白色愈伤组织，6 d后第 4组开始长出不定根，7 d后第 2组开
始长出不定根，其余各组从第 8 d开始陆续长出不定根，根尖红色，随着根继续生长，红色变淡但不会消失。
6组生根培养基的生根率相差不大(表7)。MS +0． 5 mg·L －1 NAA的生根率最低(70． 56%)，第4组生根率、生
根数、平均根长均达到最大，生根率为 88． 89%。毛稔生根的最佳配方为处理 4:1 /2 MS +0． 1 mg·L －1NAA 。
表 7 毛稔生根培养结果1)
Table 7 The root culture of M． sanguineum
编号
Number
基本培养
基 Basal
medium
NAA浓度
Concentration
of NAA
(mg·L －1)
处理数
Treatment
number
生根率
Ｒooting rate
%
生根数
Ｒoot
numbers
Pieces
平均根长
Average root
length /cm
植株长势 Growth condition
长势评价
Evaluation
1 MS 0． 1 90 80． 00 ± 6． 28ABab 6 2． 1 株高 3． 5 cm，新生芽细弱。3．
5 cm tall，weak sprouts．
+
2 MS 0． 2 90 85． 55 ± 1． 58ABbc 5 1． 7
株高 2 － 2． 5 cm。2 － 2． 5 cm
tall．
+ +
3 MS 0． 5 90 70． 56 ± 0． 78Aa 5 2． 4 株高
1． 5 － 2． 0 cm，新生芽强
壮。1． 5 － 2． 0 cm tall，strong
sprouts．
+ +
4 1 /2 MS 0． 1 90 88． 89 ± 3． 14Bc 7 3． 3 株高 2． 5 － 2． 8 cm，个别新生
芽细弱。2． 5 － 2． 8 cm tall，
some weak sprouts．
+ + +
5 1 /2 MS 0． 2 90 83． 34 ± 4． 72ABbc 5 3． 1 植株长势差别大，株高 2 － 2．
5 cm。2 － 2． 5 cm tall．
+
6 1 /2 MS 0． 5 90 84． 44 ± 0． 00ABbc 6 2． 7 株高
2． 5 － 2． 8 cm，新生芽强
壮。2． 5 － 2． 8 cm tall，strong
sprouts．
+
1)同列数据后不同大写字母表示差异达 0． 01 显著水平，同列数据后不同小写字母表示差异达 0． 05 显著水平。 + + +表示好; + +
表示一般; +表示差。Notes:different capital and small letters stand for P ＜ 0． 01 and P ＜ 0． 05． + + + good，+ + general，+ bad．
·17·第 1 期 唐淑玲等:毛稔叶片离体培养及植株再生研究
2． 4 炼苗与移栽
炼苗后组培苗成活率达 92%，移栽到 1 /4 黄心土 + 1 /4 沙土 + 1 /2 泥炭土的基质中，30 d 后移栽成
活率达89． 13%。
3 结论与讨论
研究表明，黑暗培养有利于诱导愈伤组织［11 － 12］。马国华等［13］以多花野牡丹(M． affine D． Don．)和野
牡丹(M． candidum D． Don．)的嫩叶为外植体，黑暗培养 2 周后形成黄绿色的愈伤组织，但无法观察到芽
的形成。本课题组通过比较 3种不同光照条件的愈伤组织诱导率发现，黑暗和 12 h·d －1光照均能有效地诱
导毛稔愈伤组织的形成，但 12 h·d －1光照下愈伤容易褐化，黑暗条件下形成的愈伤后期生长较好。在毛稔
叶片愈伤组织诱导中，可以采用一定时间的黑暗培养。
MS培养基对多花野牡丹、地菍(M． dodecandrum Lour．)、毛稔均适合［14］。分裂素及生长素影响植物
组织培养方向，分裂素促进细胞分化与不定芽的发生，常用的分裂素为 6-BA，浓度0． 5 －3． 0 mg·L －1，生
长素主要促进细胞生长、伸长及根的发生，生长素多用 0． 05 －1． 0 mg·L －1 NAA［15 － 16］。通过正交试验发现，
6-BA对毛稔叶片愈伤组织形成的影响最大，其次是 NAA，2，4-D对其影响最小，12 h·d －1光照下适宜愈伤组
织诱导的培养基为0． 5 mg·L －1 6-BA +2． 0 mg·L －1 2，4-D +0． 1 mg·L －1 NAA，这与伍成厚等［9］的研究结果相似。
出现红色愈伤组织的现象在野牡丹属植物组织培养中未见报道，这可能与激素浓度配比或光照时间有关。
植物愈伤组织分化受基因型、外植体的影响，常用的外植体为茎尖、幼嫩茎段，而叶片、花器官分
化效果较差［16］。选择合适的培养基、激素、光照、温度等外界因素可以改善分化状况。梁钾贤等［17］发
现，光质对甘蔗(Saccharum officinarum L．)愈伤组织分化影响显著，分化效果为红光 ＞白光 ＞蓝光，本
试验未对光质进行探究，采用日光灯源。6-BA 对毛稔愈伤组织分化有显著影响，分化过程中一定浓度
分裂素结合低浓度的生长素才能在实现分化的同时又满足愈伤组织继续生长的需求，试验筛选出适宜毛
稔愈伤组织分化的培养基为 MS + 2． 0 mg·L －1 6-BA + 0． 1 mg·L －1 NAA ，这与胡松梅等［18］、蒋道松
等［19］的愈伤组织分化的研究结果较一致，均以较高浓度的 6-BA 结合低浓度的 NAA 为最佳激素浓度组
合。在毛稔不定芽生根试验中发现，低浓度无机盐可提高生根数，低浓度 NAA 促进根的发生，不定芽
生根的最佳配方为 1 /2 MS + 0． 1 mg·L －1NAA，这与角茎野牡丹(Tibouchina granulose Cogn．)［20］生根试验
的结果相似。
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(责任编辑:温凤英)
·27· 森 林 与 环 境 学 报 第 36 卷