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HPLC测定环翠楼高丽红参中人参皂苷compound K的含量



全 文 :人参研究 GINSENG RESEARCH 2016 年第 4 期
HPLC测定环翠楼高丽红参中人参皂苷 compound K的含量
黄建军 1 李桂荣 2 姜志辉 3 姜鸿骁 1 张崇禧 1*
(1. 山东大学(威海)海洋学院,威海 264209;2.山东药品食品职业学院,威海 264210;
3.环翠楼红参生物科技股份有限公司,威海 264211)
摘 要:目的 测定环翠楼高丽红参中人参皂苷 compound K的含量。方法 采用 HPLC色谱法。结果 环翠楼
高丽红参中人参皂苷 compound K的含量为 0.035% 。 结论 环翠楼高丽红参具有抗癌活性。
关键词:环翠楼高丽红参;人参皂苷 compound K
Determination of Ginsenoside Compound K in Huancuilou Red
Gingseng from Korea by HPLC
HUANG Jian-jun1 LI Gui-rong2 JIANG ZHi-hui3 JIANG Hong-xiao1 ZHANG Chong-xi1*
(1.Marine College of Shangdong University at Weihai, Weihai 264209;
2.Shandong Pharmaceutical Food Vocational College, Weihai 264210;
3.Huancuilou Red Ginseng Biotechnology joint stock Co., LTD., Weihai 264211)
人参来源于五加科人参属植物人参 Panax gin-
seng C.A.Mey.的干燥根,主产于我国东北,尤以吉林
省产量最大,质量最佳,是我国传统的珍贵药材,人参
根据加工方法不同,分为鲜人参、生晒参、红参等产
品。
人参是百草之王,红参是人参的熟制品,能大补
元气,复脉固脱,益气摄血功效。红参的加工方法是用
人参经过浸润、清洗、分选、蒸制、烘干等工序加工而
成。红参在蒸制过程中,因为热处理会发生化学反应,
成份上发生变化, 生成红参特有的生理活性物质,例
如人参皂苷-Rg3、Rh2、CK 等抗癌活性成分, 具有抑
制癌细胞增长的作用。 在补虚方面红参强于白参,久
服红参可以补气、滋阴、益血、生津、强心、健胃、提高
人体免疫力、抗疲劳、抗辐射、抑制肿瘤、调整人体内
分泌系统。 在癌症手术后,红参还能够减轻放化疗后
产生的许多毒副作用[1~4]。
环翠楼高丽红参系由产自韩国的高丽园参的新
鲜根经韩国红参加工工艺和中国红参加工技术加工
而成。 本文采用 HPLC色谱法测定环翠楼高丽红参中
人参皂苷 compound K 的含量, 为环翠楼高丽红参抗
癌活性提供理论依据。
1实验材料、仪器与试剂
1.1实验材料
环翠楼高丽红参系由产自韩国的高丽园参的新
鲜根经韩国红参加工工艺和中国红参加工技术加工
而成。
1.2 仪器
Agilent 1100 高效液相色谱仪,包括:四元泵,在
线脱气机,柱温箱,VWD 检测器,化学工作站(chim-
station system 工作站)。
1.3试剂
乙腈(美国 Fisher 公司,色谱纯),其他试剂为分
作者简介:黄建军,男,研究员,主要从事食品、保健食品和药品研究。
* 通讯作者:张崇禧,男,教授,博士,主要从事生药学研究。 Email:zcx_11@126.com.
Abstract:Objective Determination of Ginsenoside Compound K in Huancuilou Red Gingseng from Korea .
Method Determination of Ginsenoside by HPLC.Result Content of ginsenosides compound K in red
ginseng from Korea was 0.035%.Conclusion Ring cui Lou Korea red ginseng has antitumor activity.
Key words:theHuancuilou Korea Red Ginseng;Ginsenoside-compound K
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人参研究 GINSENG RESEARCH 2016 年第 4 期
析纯。 人参皂苷 compoundk 对照品为自制, 纯度为
99.05% ( 经 MS,NMR,IR,HPLC 等标定 )。
2 测定方法
2.1色谱条件
色 谱 柱 :Agilent ZORBAX SB -C18 (4.6mm ×
150mm,5μm ); 柱温:40℃,检测波长:203nm;流速:
1.0ml/min;流动相:乙腈-水二元梯度洗脱, A:水;B :
乙腈; 梯度洗脱程序为:0~16 min:56%B;16~20 min:
56%→100%B;20~38 min:100%B ;38~45 min: 100%
→56%B ;45~60 min: 56%B ;所有组分均 50min 内出
完(图 1.4.2.1-1)。分析时间:60min;流速:1.0ml/min;进
样量:供试品溶液与对照品溶液各 20μl。
2.2对照品溶液的制备
精密称取以 60℃减压干燥 10 小时的人参皂苷
compoundK 10mg,置 10ml 量瓶中,用甲醇溶解并稀
释至刻度,然后精密吸取 0.4ml 对照品溶液置于 10ml
容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
2.3供试样品的制备
取 2 份粉碎后的环翠楼高丽红参 (40 目), 每份
2g,精密称定,一份干燥测含水量,一份置索氏提取器
中,加氯仿-甲醇(15∶1)混合溶剂 100 ml ,于水浴上
加热回流提取至无色。提取液滤过后置蒸发皿水浴挥
干,加甲醇稀释溶解,滤过并定容于 25ml 量瓶中,摇
匀,微孔滤膜过滤,作为供试样品溶液。
2.4方法学考察
2.4.1线性关系
精密称取以 60℃减压干燥 10 小时的人参皂苷
compound K10mg,置 10ml 量瓶中,用甲醇溶解并定
容。使对照品溶液(母液)的浓度约为 1mg/ml。然后分
别吸取 50μl、100μl、200μl、400μl、800μl、1.6ml、3.2ml
对照品溶液(母液)分别置于各个 10ml 容量瓶中,加
甲醇稀释至刻度, 制备成不同浓度的对照品溶液,分
别精密吸取不同浓度的对照品溶液各 20μl 进样。 以
色谱峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲
线, 经统计学计算得直线回归方程, 回归方程为:Y=
33.5042+501.2928X,r=0.9995
2.4.2稳定性试验
取人参皂苷 compound K 的对照品溶液, 精密吸
取 20μl,按上述色谱条件,分别于 0、2、4、8h 检测,峰
面积 RSD为 1.98%。
2.4.3精密度试验
取人参皂苷 compound K 的对照品溶液, 精密吸
取 20μl,按上述色谱条件进样分析,连续 5 次,测定峰
面积,其 RSD为 1.86%。
2.4.4重现性试验
取同一粉碎后的环翠楼高丽红参样品 5 份,分别
处理后,分别精密吸取 20μl,按上述色谱条件测定,峰
面积 RSD为 2.59%。
2.4.5回收率试验
采用加样回收法,取已知含量(0.035%)的环翠楼
高丽红参粉末 2g,精密称定,分别准确加入一定量的
人参皂苷对照品,按上述色谱条件测定,平均回收率
为 99.82%,RSD为 3.18%。
2.5样品测定
取三批粉碎后的环翠楼高丽红参(40 目),每批两
份 ,每份 2g,精密称定,按上述样品的制备方法处理
后, 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 20μl,以
外标法按上述色谱条件测定。测定结果环翠楼高丽红
参 compound K含量为 0.035% 。
3 结果与讨论
以上测定结果表明,环翠楼高丽红参中含人参皂
苷 compound K 约为 0.035%左右。 采用 Agilent 1100
高效液相色谱仪;Agilent ZORBAX SB-C18 色谱柱,
测定环翠楼高丽红参中的人参皂苷 compound K 含
量, 分析方法具有分离效果好、准确、快速、样品制备
简单等特点。 结果表明环翠楼高丽红参具有抗癌活
性。
参 考 文 献
[1]杨秀伟.红参化学、药理与临床研究进展[J].中
成药研究,1984,(5):30~33.
[2]Helms S. Canner prevention and therapertics:
Panax Ginseng[J].Altern Med Rev(United States),2004,9
(3):259~274.
[3]国家药典委员会编.中国药典[S].北京.中国医
药科技出版社,2015,Vol I 06:153~154.
[4]金若敏,毛平,郁玉明,等.红参、活性参与生晒
参几种药理作用的比较研究 [J].中药通报,1983,8(1):
34~40.
黄建军等:HPLC 测定环翠楼高丽红参中人参皂苷 compound K 的含量 27