全 文 ：中药新药与临床药理 2010年 5月第 21卷第 3期
RP- HPLC法测定木豆叶中球松素的含量
袁 捷，陈志维，武 文，卢小凤，黄日明，苏子仁（广州中医药大学，广州 510006）
摘要： 目的 建立RP-HPLC法测定木豆叶中球松素含量的方法。方法 采用Phenomenex Luna C18（250 mm ×
4.60 mm，5 μm） 色谱柱；流动相：甲醇-水，梯度洗脱；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：287 nm；柱温：35
结果蒙花苷平均含量为2.205 mg·g-1（RSD=2.19 %），
表明重复性良好。
2.8 加样回收率试验 取6份已知含量的双柏散（批号
081230）0.18 g，精密称定，精密加入蒙花苷对照品
0.396 mg，按双柏散供试品溶液的制备与样品的测定
同法操作，结果蒙花苷的平均加样回收率为101.00 %
（RSD=0.89 %），见表1。
表1 蒙花苷加样回收率试验结果（n=6）
2.9 样品的测定 分别精密吸取对照品溶液、双柏散
供试品溶液、薄荷供试品溶液各10 μL，注入液相色
谱仪中，测定峰面积，按外标法计算中各供试品溶液
的含量，结果见表2。
表2 双柏散及薄荷饮片中蒙花苷含量测定结果（x±s，n=2）
3 讨论
文献采用甲醇-乙腈-0.5 %醋酸溶液[5]、乙腈-0.5
%冰醋酸溶液[6]、乙腈-0.5 %磷酸[7]等为流动相分析蒙
花苷，试验考察乙腈-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液-
冰醋酸、乙腈-0.1 %磷酸溶液、甲醇-0.1 %磷酸溶液
等流动相系统，结果以甲醇-0.1 %磷酸溶液（49 ∶ 51）
为流动相，阴性无干扰，且峰形尖锐对称，故选择甲
醇-0.1 %磷酸溶液的流动相系统。考察了Nucleodur
C18 Gravity与Zorbax Eclipse XDB C18色谱柱对峰的影
响，以Nucleodur Gravity C18对目标峰分离效果较好。
经二极管阵列检测器紫外光谱分析，蒙花苷在334
nm处有最大吸收，无杂质干扰，故选择334 nm为检
测波长。
供试品溶液的制备试验曾比较甲醇、70 %甲醇、
50 %甲醇、95 %乙醇、70 %乙醇、50 %乙醇对双柏
散中蒙花苷的提取效果，结果以甲醇为溶媒提取为
佳。比较了超声处理、水浴回流的提取效果，结果水
浴回流法效果优于超声处理法，且水浴回流2 h即可
提取完全，故采用甲醇水浴回流2 h的制备方法。
研究结果表明，薄荷饮片与同批次薄荷饮片制成
的双柏散中蒙花苷的含量呈现一定正相关性；但不同
批次薄荷饮片的蒙花苷含量相差3倍多，说明薄荷饮
片质量差异大。研究中还发现，薄荷的茎叶比例差异
与薄荷脑、蒙花苷的含量差异呈现一定规律性，即叶
比例较大的饮片中薄荷脑含量较高[4]，而蒙花苷的含
量较低。
参考文献：
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[J] ．中国现代中药，2008，2（10）：20-22．
（编辑：修春）
取样量/g
0.1811
0.1802
0.1808
0.1810
0.1804
0.1807
样品量/mg
0.399
0.397
0.399
0.399
0.398
0.398
加入量/mg
0.396
0.396
0.396
0.396
0.396
0.396
测得量/mg
0.794
0.802
0.798
0.797
0.802
0.798
回收率/%
99.75
102.08
100.88
100.42
101.98
100.91
平均回收率/%
101.00
RSD /%
0.89
样品
双柏散
双柏散
双柏散
批号
081230
081231
090102
蒙花苷/mg·g-1
2.25±0.03
0.94±0.03
2.98±0.01
样品
薄荷
薄荷
薄荷
批号
080825
080827
080725
蒙花苷/mg·g-1
16.33±0.15
6.16±0.18
20.37±0.57
收稿日期：2009-11-17
作者简介：袁捷（1971-），男，副研究员，主要从事中药新药开发研究。Email：yuanjie@gzhtcm.edu.cn。通讯作者：苏子仁，研究员，主要从事
中药开发研究。Email：suziren@gzhtcm.edu.cn。
·293·
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 May,Vol．21 No．3
木豆叶，又名柳豆叶，来源于豆科植物Cajanus
cajan（L.）Millsp.的干燥叶。基源植物木豆在我国海
南、广东、广西、四川、云南、福建及台湾等省区均
有栽培，资源丰富 [1-2]。木豆叶有解痘毒、消炎肿之
功效，现代药理实验与临床研究提示该药对骨及软组
织感染等疾病有显著的疗效，且使用安全 [3-7]。广州
中医药大学与浙江海正药业在此基础上将木豆叶开
发成为治疗股骨头缺血性坏死的药物“通络生骨胶
囊”，临床治疗股骨头坏死安全有效[8-9]。目前对木豆
叶药材的质量研究尚欠缺。我们参照文献报导[10]从木
豆叶药材中分离得到异美五针松二氢黄酮（Pinos－
trobin，球松素）作为对照品，采用高效液相色谱法对
不同木豆叶药材样品中的含量进行了分析。
1 仪器与试药
1．1 仪器 DIONEX SUMMIT高效液相色谱仪（P680
HPLC四元梯度泵、STH585柱温箱、PDA-100检测
器、ASI-100自动进样器）；Chromeleon色谱工作站；
KQ3200DE型医用数控超声仪；艾科浦U系列试验室
专用超纯水机（重庆颐洋企业发展有限公司）；Sarto－
rius CT225D电子分析天平。
1．2 药品与试剂 木豆叶 3批，批号： 090811、
090812、090813，购于广州中医药大学大药房，经广
州中医药大学苏子仁研究员鉴定为豆科植物木豆Ca－
janus cajan（L.）Millsp. 的干燥叶；球松素对照品，自
制（纯度≥99.0 %，中国广东分析测试中心测定）；试
剂：超纯水、甲醇（色谱纯、分析纯），乙醇（分析纯）。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex luna C18柱（250
mm × 4.60 mm，5 μm）；流动相：甲醇 - 水，梯度
洗脱，洗脱程序见表1；流速：1.0 mL·min-1；柱温：
35 ℃；检测波长为287 nm。理论板数按球松素峰计
算均不低于10000。在以上色谱条件下，木豆叶中的
球松素与其他组分的色谱峰分离度良好。见图1。
表1 梯度洗脱程序
2．2 对照品溶液的制备 精密称取球松素对照品
0.010 81 g，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇
匀，得球松素对照品储备液（1.081 mg·mL-1）。分别
精密吸取0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.5 mL
球松素对照品储备液至10 mL容量瓶中，加甲醇稀释
至刻度，即得不同浓度的球松素对照品溶液（0.011
mg·mL-1～0.162 mg·mL-1）。
2．3 供试品的制备 取木豆叶，粉碎，取约0.5 g，精密
称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，
称定重量，超声处理30 min（功率250W，频率50 kHz），
放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，
滤过，取续滤液，以0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2．4 线性关系的考察 分别精密吸取不同浓度的球
松素对照品溶液，进样10 μL，按上述色谱条件测定
℃。 结果 球松素在0.011 mg·mL-1～0.162 mg·mL-1的浓度范围内，线性关系良好，r=0.999 9；平均回收率为
100.13 %，RSD=1.01 %（n=9）。三批木豆叶中球松素的含量为2.429 mg·g-1～2.617 mg·g-1。结论 该方法专属性
强、操作简易、准确灵敏、可用于木豆叶中球松素含量的测定。
关键词： 木豆叶；球松素；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）03-0293-04
Determination of Pinostrobin in Folium Cajani by RP-HPLC
YUAN Jie，CHEN Zhiwei，WU Wen，LU Xiaofeng，HUANG Riming，SU Ziren（Guangzhou University of Chinese
Medicine，Guangzhou 510006，China）
Abstract：Objective To develop a RP-HPLC method for the determination of pinostrobin in Folium Cajani. Meth－
ods RP-HPLC was carried out on Phenomenex Luna C18（250 mm × 4.60 mm，5 μm）at 35 ℃. The mobile phase
consisted of a mixture of methanol-water at a flow rate of 1.0 mL·min-1 in gradient elution. The detection wavelength
was 287 nm. Results The calibration curve was linear within the concentration range of 0.011~0.162 mg·mL-1，r=
0.999 9，and the average recovery was 100.13 %，RSD = 1.01 %（n=9）. The average content of pinostrobin in three
batches of Folium Cajani was in the range of 2.429~2.617 mg·g-1. Conclusion The established method is simple，
rapid and precise，and can be used for the determination of pinostrobin in Folium Cajani.
Keywords: Folium Cajani；Pinostrobin；RP-HPLC；Content determination
甲醇/％
水/％
0～10
75→80
25→20
10～25
80→85
20→15
25～30
85→75
15→25
时间/min
·294·
中药新药与临床药理 2010年 5月第 21卷第 3期
峰面积，并以浓度（mg·mL-1）为横坐标，以峰面积为
纵坐标进行线性回归，得标准曲线。结果表明，球松
素在0.011 mg·mL-1 ～ 0.162 mg·mL-1浓度范围内线性关
系良好，回归方程为Y = 568.06X-0.76，r=0.999 9。
2．5 精密度试验 精密吸取浓度为0.043 mg·mL-1的球
松素对照品溶液10 μL，按上述色谱条件进行测定，
重复6次，测得球松素的平均峰面积为24.462，RSD
为1.23 ％，说明本方法精密度良好。
2．6 稳定性试验 取同一批木豆叶样品（批号：
090811）按供试品制备方法制成供试品溶液，分别于
第0 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h进样10 μL，按上
述色谱条件进行测定，测得球松素的平均峰面积为
15.705，RSD为1.41 ％，结果表明供试品溶液在24 h
内稳定。
2．7 重复性试验 取同一批木豆叶样品（批号：
090811），按供试品制备方法平行制备6份供试品溶
液，分别进样10 μL，按上述色谱条件进行测定，计
算测得球松素的平均含量为2.613 mg·g-1，RSD为1.49
％，结果表明本方法重复性良好。
2．8 加样回收率试验 取已知含量的木豆叶样品（批
号：090811），粉碎，取约0.25 g，精密称定，置具
塞锥形瓶中，精密加入球松素对照品储备液（1.081
mg·mL-1）0.3 mL、0.5 mL、0.8 mL，按供试品制备方
法制备。每一浓度平行操作3份，按上述色谱条件进
行测定。测得球松素平均回收率为100.13 %，RSD为
1.01 %，结果见表2。
2．9 样品含量测定 取3批木豆叶样品，按供试品制
备方法制备供试品溶液，分别进样10 μL，并按上述
色谱条件进行测定，计算各批木豆叶中球松素的含
量。结果见表3。
表3 样品含量测定结果（x± s，n=3）
3 讨论
3.1 在提取溶剂的选择上，分别考察了甲醇、75 %乙
醇、乙酸乙酯。结果发现，使用甲醇作为提取溶剂能
有效提取出木豆叶中的球松素，故选用甲醇作为提取
溶剂。在提取方法的选择上，考察了加热回流及超声
处理，结果发现二者对球松素的提取效果没有明显差
异。考虑到超声处理操作更为简便，故选用超声处理
作为提取方法。
3.2 有文献[11-13]采用HPLC法测定木豆叶中牡荆苷、异
牡荆苷的含量，而未见球松素含量测定的报道。本文
采用RP-HPLC法测定木豆叶中球松素的含量，为木
豆叶质量控制提供了新的参考依据。
参考文献：
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B. 木豆叶样品
图1 木豆叶HPLC图
A. 球松素对照品
表2 回收率测定结果（n=9）
称样量/g
0.250 3
0.251 1
0.250 9
0.249 8
0.251 8
0.253 1
0.252 5
0.253 6
0.249 2
样品含量/mg
0.654
0.656
0.656
0.653
0.658
0.661
0.660
0.663
0.651
对照品加入量/mg
0.324
0.324
0.324
0.541
0.541
0.541
0.865
0.865
0.865
实测量/mg
0.985
0.979
0.979
1.196
1.199
1.208
1.515
1.517
1.516
回收率/％
102.2
99.7
99.7
100.4
100.0
101.1
98.8
98.7
100.0
平均回收率/％
100.1
RSD/％
1.1
批 号
090811
090812
090813
1
2.620
2.411
2.514
2
2.649
2.440
2.517
3
2.582
2.435
2.500
平均含量/mg·g-1
2.617
2.429
2.510
球松素/mg·g-1
·295·
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 May,Vol．21 No．3
珠黄吹喉散收载于《中国药典》2000年版一部[1]，
由珍珠、牛黄、儿茶、黄连、黄柏、冰片等中药组
成，具有解毒化腐功效，临床用于治疗咽喉口舌肿
痛、糜烂。方中儿茶具有收湿生肌敛疮功效[2]，黄连
具有清热燥湿、泻火解毒功效[3]，黄柏具有清热燥湿、
泻火除蒸、解毒疗疮功效[4]，均为主药。其中儿茶含
有效成分儿茶素[5]，黄连和黄柏均含有效成分盐酸小
檗碱[6-7]，皆为《中国药典》2005年版一部中该药材的
2007，42（4）：386-391．
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476．
（编辑：修春）
收稿日期：2009-10-22
作者简介：阮桂平（1966-），硕士，副主任中药师，研究方向：中药质量研究与药品检验质量控制研究。Email：nhm_2000@126.com。
HPLC法同时测定珠黄吹喉散中儿茶素和盐酸小檗碱的含量
阮桂平1，袁旭江2（1. 广东省药品检验所，广州 510180；2. 广东药学院，广州 510006）
摘要：目的 建立同时测定珠黄吹喉散中儿茶素和盐酸小檗碱含量的方法。方法 采用HPLC法，色谱柱：
Agilent Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.1 %磷酸溶液梯度洗脱，检测波长：270 nm，
流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL。结果 儿茶素在0.024 0～0.480 0 μg范围内与峰面积呈现良好的线性关系，
r=0.999 8；平均回收率为98.65 %，RSD=1.10 %（n=6）；盐酸小檗碱在0.013 2～0.264 0 μg范围内与峰面积呈现
良好的线性关系，r=0.999 7；平均回收率为97.87 %，RSD=1.17 %（n=6）。结论 该方法准确、重复性好，可
用于珠黄吹喉散的质量控制。
关键词：珠黄吹喉散；儿茶素；盐酸小檗碱；HPLC法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）03-0296-03
Simultaneous Determination of Catechin and Berberine Hydrochloride in Zhuhuang Chuihou Powder by
HPLC
RUAN Guiping1，YUAN Xujiang2（1.Guangdong Institute For Drug Control，Guangzhou 510180，China；2.Guang－
dong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China）
Abstract: Objective To establish a method to determine the contents of catechin and berberine hydrochloride in
Zhuhuang Chuihou Powder simultaneously. Methods HPLC was applied with the chromatographic condition as fol－
lows: Agilent Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），ACN-0.1 % H3PO4 as the mobile phrase，gradient elution，
detection wavelength being 270 nm，flow rate being 1.0 mL·min-1 and injection volume being 10 μL. Results The
calibration curves were linear within the range of 0.024 0~0.480 0 μg for catechin and 0.013 2 ~0.264 0 μg for
berberine hydrochloride，with the average recovery being 98.65 %（RSD=1.10 %），r=0.999 8 for catechin and 97.87
%（RSD=1.17 %），r=0.999 7 for berberine hydrochloride. Conclusion This accurate and reproducible method can be
used to control the quality of Zhuhuang Chuihou Powder.
Keywords：Zhuhuang Chuihou Powder；Catechin；Berberine hydrochloride；HPLC；Content determination
·296·