全 文 ：紫外分光光度法测定酒葡萄原汁中的维生素 C
朱兆富 ,沈喜梅 ,邵丽君①
(河北职业技术师范学院化学系 ,昌黎 066600)
中图分类号:O657.32 文献标识码:A 文章编号:1000-0720(2002)06-0100-03
还原型维生素 C在紫外区 243.8 nm处有最大
吸收峰 ,而且在较大范围内具有良好的线性关系 ,
因此可用紫外分光光度法测定。但由于酒葡萄原
汁有很深的颜色 ,含有大量在紫外区也有吸收的其
它成份(主要是葡萄糖和多种有机酸),影响测定结
果的准确性 ,因此 ,必须对样品紫外区本底吸收进
行校正。谭延华[ 1] 提出一种以 Cu2+作氧化剂 ,对
样品中紫外干扰物质 ,进行本底校正的方法 ,但由
于使用了 243.8 nm 处有紫外吸收的 EDTA对体系
中的剩余 Cu2+进行掩蔽 ,严重影响了测定结果的
准确性。为此 ,李军[ 2]对紫外分光光度法测定食品
中还原维生素 C 的方法作了进一步研究 , 发现
Cu2+在反应体系中并不是作为氧化剂 ,而是一种
催化剂 ,加速了溶液中的氧对还原型维生素 C 的
氧化。作者也得到类似结论:还原型维生素 C 含
量和 Cu2+的用量有关 ,极微量 Cu2+催化效果就相
当明显 ,尤其在加热条件下 ,反应速度很快 ,无需加
掩蔽剂。据此 ,建立了一种测定酒葡萄原汁中还原
型维生素 C的新方法。该方法用于测定酒葡萄原
汁中的维生素 C含量 。
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂
UV-2201紫外可见分光光度计(日本 ,岛津);
RF-5000荧光分光光度计(日本 ,岛津);高速冷冻
离心机(日本 ,岛津);HCl(1+3);维生素 C 标准溶
液:准确称取 0.0500 g 维生素 C ,以 10 mL HCl(1+
3)溶解 ,并以蒸馏水定容到 500 mL。
Cu(NO3)2溶液:准确称取 Cu(NO3)2 0.1890 g ,
以蒸馏水溶解并定容到 500 mL 的容量瓶中 ,使
Cu(Ⅱ)的质量浓度为 100 μg/mL 以上试剂均为分
析纯 ,水为二次蒸馏水。
1.2 样品处理及测定方法
标准曲线的绘制:准确吸取维生素 C 标准溶
液 0.2 mL ,0.5mL ,1.0 mL ,3.0 mL ,5.0mL于 50mL
容量瓶中 ,以蒸馏水作空白试剂 ,在 243.8 nm 下测
定吸光度 ,然后以维生素 C 的量(μg)为横坐标 ,以
相应的吸光度为纵坐标 ,作标准曲线。
样品的处理与测定:准确称取 5.00 g 样品 ,加
入 10 mL HCl(1+3),快速搅匀 ,然后用高速冷冻离
心机以 10000 r/min离心 10 min ,取 2 mL 的澄清
液 ,加入盛有 1mL HCl(1+3)的容量瓶中 ,用蒸馏
水定容至 50 mL。取 50 mL 的容量瓶 ,加入定容后
的样液 2 mL ,1 mL HCl(1+3),0.3 mL Cu(NO3)2溶
液 ,然后在 70 ℃的恒温水浴锅中 ,加热 13 min后 ,
以冰水冷却 ,以蒸馏水作空白 , 243.8 nm 下测定吸
光度。用样液与经Cu(Ⅱ)加热处理后的样液的吸光度
值之差 ,查标准曲线 ,即可计算出样品中维生素C 。
ω(Vc)=C×V2×10V1×m×1
C为标准曲线上查得还原 Vc 的质量比(μg/
g);V1为测定用样液的体积(mL);V2为样液定容后
的体积(mL);m 为样品的质量(g)。
2 结果与讨论
2.1 Cu2+的催化性试验
Cu
2+的加入量对实验的影响 ,结果表明 Cu2+
尽管加入量不同 ,但在 243.8 nm 处的吸光度相差
非常小 ,这在一般的仪器已经不能分辨出 ,说明用
Cu2+破坏Vc 不会因为本底吸收而影响实验的准
确性 。再选定 Vc 的量不变 ,改变 Cu2+的量 ,观察
Cu2+对 Vc 的破坏作用 。一段时间以后 , 也就是
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① 收稿日期:2001--;修订日期:2001--作者简介:朱兆富(1956-), 副教授
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2002.0190
说 ,反应完全后 , Vc 几乎已经完全破坏掉了 ,而
Cu2+的量并没有改变 ,可见在此反应里 ,Cu2+不是
作为氧化剂参与反应 ,而是作为催化剂 ,来催化溶
液中的氧 ,氧化还原型Vc ,使之变成在243.8 nm处
无吸收的氧化型Vc ,选择极微量Cu2+作为催化剂 ,
试验选为 0.3 mL即 30μg 。
2.2 温度的影响
取5 个容量瓶 ,分别加入 2.0 mL 的 Vc 和 0.3
mL 的 Cu2+溶液于20 ℃、40 ℃、60 ℃、80 ℃、100 ℃
的恒温水浴锅中加热 10 min ,然后取出冰水冷却 ,
测定其吸光度 ,结果如图 1。从图中可以看出 ,在
60 ℃～ 80 ℃之间为一段直线 ,吸光度非常低 ,几乎
为零 ,为此选择的温度范围为 60 ℃～ 80 ℃,试验
确定为70 ℃。
2.3 反应时间的影响
采用 2.2的溶液配制方法 ,然后放于 70 ℃的
恒温水浴锅中在0 min 、5 min 、10 min 、15 min 、20 min
时测定其吸光度 , 见图 2。从图中可以看出:加热
5 min 后吸光度即很快下降 ,但此时仍有还原Vc存
图 1 温度对反应的影响
Fig.1 Effect of temperature
图 2 时间对反应的影响
Fig.2 Effect of time
在 ,在 10 min ～ 15 min之间吸光度值基本稳定 ,说
明此时Vc 已被完全破坏 ,试验选择为13 min 。
2.4 干扰因素对实验的影响
对酒葡萄原汁中所含糖类和有机酸的干扰情
况进行了实验 ,主要是葡萄糖 、柠檬酸 、草酸 、苹果
酸 、酒石酸的影响 ,将上述 5种物质配成 100倍 Vc
浓度的溶液 ,测定在 Cu2+加入以后吸光度值变化 。
结果表明 ,在试验条件下 , 100 倍的上述干扰物质
对还原型 Vc的测定没有显著影响。
2.5 回收率实验
酒葡萄原汁样液的提取同前面的样品处理 ,吸
取 1 mL的提取液定容至 50 mL ,测定吸光度值 A1 ,
然后再取一个容量瓶分别加入 1 mL 的提取液 ,0.3
mL Cu2+的溶液 ,定容 , 70 ℃的恒温水浴锅中加热
13min 以后 ,冷却 ,测定吸光度值为 A2。 A1-A2即
为 1 mL 提取液中Vc的吸光度值 A3;再取提取液1
mL ,标准 Vc 溶液 0.5 mL ,加入 0.3 mL Cu2+溶液 ,
定容后 ,70 ℃的恒温水浴锅中加热 13 min以后 ,冷
却 ,测定吸光度 ,从标准曲线上查出各自对应的 Vc
量 ,结果见表 1。
表 1 回收率实验结果
Tab.1 Recovery results
样品号 样品中 Vc量
m/μg
标准 Vc加入量
m/μg
实测值
m/μg
回收率
/ %
1 35.4 50.0 84.6 100.2
2 35.2 50.0 86.0 100.8
3 34.7 50.0 82.3 97.6
4 36.5 50.0 84.9 98.4
5 36.3 50.0 86.1 99.8
2.6 样品的测定结果与荧光法的比较
用试验方法对酒葡萄原汁中的还原型Vc进行
了测定。样液的提取同前面的样品处理 ,与荧光法
比较结果基本一致(表 2)。
表 2 两种方法测定酒葡萄原汁 Vc含量的结果比较
Tab.2 Comparation of two methods results
样品 样品中Vc量ρ/(μg/ mL)实验方法 荧光法
相对标准
偏差/ %
1 85.39 85.74 0.41
2 36.50 36.83 0.89
3 9.12 9.05 0.77
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