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刺五加叶总黄酮固体分散体的制备及其体外评价



全 文 :2014 第十六卷 第四期 ★Vol.16 No.4
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
收稿日期:2013-10-15
修回日期:2013-11-13
* 四川省教育厅青年基金项目(10ZB076):中药浸膏粉末改性技术在固体制剂中的应用研究,负责人:慈志敏。
** 通讯作者:尹蓉莉,博士生导师,主要研究方向:药物新制剂,新剂型,新技术。
刺五加叶总黄酮固体分散体的制备及其体外评价*
甘林建,刘 静,余泉毅,孙彩霞,尹蓉莉**,苏建春,赵俊霞
(成都中医药大学药学院 成都 611137)
摘 要:目的:通过制备刺五加叶总黄酮固体分散体,提高其生物利用度。方法:以 PEG4000、
PEG6000、F68、PVPK30 为载体材料制备 4种不同的固体分散体,筛选最优载体材料,并考察载体用量对
溶出度的影响。以芦丁为对照品,亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色体系,用紫外分光光度计在 500 nm
处测定吸光度,考察各比例固体分散体的体外溶出特性。结果:与原料药相比,以 PVPK30 为载体材料制
得的固体分散体体外释放速率明显提高,并且累积释放度也明显增加。结论:固体分散体能显著提高药物
在水中的体外释放度。
关键词:刺五加叶总黄酮 载体材料 固体分散体 溶出度
doi: 10.11842/wst.2014.04.025 中图分类号:R284.1 文献标识码:A
刺五加叶总黄酮为五加科植物刺五加 Acan-
thopanax senticosus(Rupr .et Maxim.) Harms 的干燥
叶提取物,刺五加味辛、微苦,性温,具有益气健脾、
补肾安神功效,用于脾肺气虚、体虚乏力、食欲不
振、肺肾两虚、久咳虚喘、肾虚腰膝酸痛、心脾不足、
失眠多梦等。现代药理学研究发现,刺五加中总黄酮
成分具有明显的增强免疫[1]、抗疲劳、抗缺血损伤[2,3]等
作用,可用于心血管疾病治疗。但由于刺五加叶总
黄酮在水中的溶解度小,在体内吸收差,进而影响
其临床疗效,故本课题利用固体分散体技术改善该
药在水中体外溶出行为,提高其生物利用度,以达
到保证疗效目的。
1 材料和仪器
UV-1102 型紫外分光光度计(上海天美科学仪
器有限公司),ZRS-8G 智能溶试验仪(天津天大天
发科技有限公司),79HW-1 型恒温磁力搅拌器(江
苏金坛市金城国胜实验仪器厂),DGG-9240 电热恒
温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司),
BUG25-12 型超声波清洗器(必能信超声上海有限
公司)。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批
号:100080-200707),刺五加叶总黄酮提取物由成
都中医药大学中药化学实验室提供,经分析测定纯
度为 95.4%。聚乙烯吡咯烷酮 K30(PVPK30 成都市
科龙化工试剂厂),PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆
188(F68 成都科龙化工试剂厂),其他试剂均为分析
纯,蒸馏水(脱气)。
2 方法
2.1 固体分散体制备 [4]
2.1.1 溶剂-熔融法
分别称取适量的刺五加叶提取物和 PEG -
4000、PEG6000、F68 载体,将 PEG-4000、PEG-6000、
F68 分别于水浴 80℃恒温加热至熔融;刺五加叶总
黄酮用少量的无水乙醇溶解,然后缓慢向水浴锅滴
加刺五加叶总黄酮的无水乙醇溶液,继续加热,搅
拌直至除去无水乙醇,最后迅速倒在冰浴冷却的瓷
盘中,迅速摊成薄片,快速转移至冰箱冷冻室(-
26℃)中固化 12 h,移入硅胶干燥器中干燥数日,粉
碎后过 14 目筛备用。
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〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
2.1.2 溶剂法
称取适量的刺五加叶提取物和 PVPK30 载体,
分别将载体和刺五加叶提取物各加适量的无水乙
醇溶解,并将提取物溶液缓慢滴入载体溶液,充分
搅拌后,于 50℃恒温水浴锅旋蒸,除去无水乙醇,取
出固体物于 60℃干燥箱干燥 12 h,然后粉碎过 14
目备用。
2.2 刺五加叶总黄酮测定
2.2.1 测定波长的选择 [5]
取 0.309 8 g·L-1芦丁对照品溶液 4 mL,2 g·L-1
提取物 0.5 mL 分别置于 25 mL 容量瓶中,加 5%亚
硝酸钠溶液 1 mL,摇匀,静置 6 min,加入 10%硝酸
铝溶液 1 mL,摇匀,静置 6 min,加入 10%氢氧化钠
溶液,加水定容至刻度。再利用紫外分光光 400~
700 nm 处行光谱扫描,其最大吸收波长为 500
nm,且载体辅料、空白无吸收。
2.2.2 标准曲线的制备
精密量取 0.309 8 mg·mL -1 芦丁对照品溶液
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 分别置于 25 mL 量瓶
中,显色方法参照“2.2.1”项下方法。以相应的溶液为
空白,在 500 nm波长处测定吸光度。以吸收度(A)
为纵坐标,浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线,得回归
方程为:A=0.013 1C-0.007 4,R2=0.999 1,表明芦丁
在 12.39~61.95 μg·mL-1范围内线性良好。
2.3 扫描电镜的测试
将固体分散体研磨过 80 目筛,用扫描电镜观
察固体分散体和原料药的表面及晶体结构。
2.4 溶出度测定
按照 2010 版《中国药典》(二部)附录 XC 溶出
度测定的第二法 [6],以 800 mL 纯化水为溶出介质,
转速为 100 rpm 进行测定,温度(37±0.5)℃。分别取
约 143 mg 刺五加叶总黄酮原料药及含等量总黄酮
的 4 种固体分散体分别置于溶出杯中,当药物的粉
末充分接触溶液时,开始计时,分别于 5、10、20、
40、60、90、120 min 取样 4 mL(同时补加 4 mL 等温
纯化水),经 0.45 μm 微孔滤膜过滤,在 500 nm 波
长处测定吸光度,代入上述标准曲线中,再换算为
累积释放百分率,绘制溶出曲线。
3 结果与讨论
3.1 溶出速率实验结果
由图 1 可知,4 种不同载体材料制成的固体分
散体其溶出度都有明显提高,120 min 内 PEG4000、
PEG6000、F68、PVPK30 固体分散体最大溶出度分别
为 42.89%、44.00%、49.67%、83.97%。其中 PVPK30
作为载体材料制成的固体分散体溶出度明显高于
其它 3 种材料。因此,选择 PVPK30 作为制备固体分
散体的载体材料。
以 PVPK30 为载体材料,用溶剂法按刺五加叶
总黄酮提取物-PVPK30 比例 1 ∶1、1 ∶2、1 ∶4 制备 3 种
不同比例的固体分散体,按“2.4”项下方法测定溶
出度,考察不同用量的 PVPK30 载体对提高溶出度
的作用,结果如图 2~4。
将刺五加叶总黄酮提取物和不同比例的固体分
散体分别用威布尔公式进行拟合,回归计算 td值 [7],
结果见表 1。
对 td值进行 t 检验,与原料药相经,3 种比例的
固体分散体均有极显著性差异(P<0.01),而物理混
合物也有显著性差异(P<0.05);各比例固体分散体与
其物理混合物相比有极显著差异(P<0.01)。
原料药在 120 min 内的累积释放度为 34.21%,
图 1 4 种不同材料固体分散体及原料药溶出曲线比较
图 2 1∶1 固体分散体、物理混合物及提取物溶出曲线比较
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而 3 种比例分散体 120 min 内累积释放度分别为
80.75%、86.31%、86.99%。可见,加入 PVPK30 载体
材料能显著提高刺五加叶总黄酮在水中的体外累
积释放度和释放速率。且随着 PVPK30 用量增加,效
果增强,但当 PVPK30 用量达到一定程度后达到饱
和状态,其增溶作用不再增加。
3.2 扫描电镜测试结果
比较图 5(A)与图 5(B),原料药与固体分散体
的表面结构完全不同。原料药以大小不一的药物结
晶体存在,而固体分散体中已经没有晶体存在,表
明固体分散体中药物以无定形的形式均匀的分散
在载体中,这是由于 PVP 的存在大,抑制了原料药
的晶体的生长,故晶体以无定形形态存在于载体
中。此外,固体分散体的表面分布很多小孔,分析其
原因可能为在以溶剂法制备固体分散体的时候,乙
醇蒸发造成的。这些微孔的存在增加了固体分散体
的表面积,也有利于药物的溶出。
3.3 讨论
固体分散体制备方法和载体材料有很多种,目
前关于其增溶机制尚无明确的定论。本实验制备的
固体分散体能显著提高刺五加叶总黄酮在水中的
溶出度,原因可能有:①由于氢键作用或络合作用,
PVPK30 的粘度增大而抑制药物晶核的形成及成
长,使药物呈无定形态,从而增加其在水中的溶解
度。②对于难溶性药物而言,利用水溶性载体制备
的固体分散物,不仅可以保持药物的高度分散状
态,而且对药物具有良好的润湿性。对提高药物溶
解度,加快药物溶出速度,提高药物的生物利用度
具有重要的意义。载体材料可以提高刺五加叶总黄
酮的润湿性,在分散体中总黄酮分子被载体分子包
围,与水接触后,载体分子迅速溶解,药物润湿,从
图 3 1∶2 固体分散体、物理混合物及提取物溶出曲线比较
图 4 1∶4 固体分散体、物理混合物及提取物溶出曲线比较
图 5 原料药与固体分散体扫描电镜照片
注:A.原料药,B.固体分散体。
表 1 固体分散体、物理混合物及原料药体外溶出参数 td值(n=3)
编号 提取物
1∶1 1∶2 1∶4
分散体 混合物 分散体 混合物 分散体 混合物
1 12031 4.08 2 217 3.28 874 3.07 1 037
2 11472 4.23 2 100 2.97 834 3.09 923
3 10681 4.17 2 031 3.33 845 3.22 894
均值 - 4.16 2 116 3.19 851 3.13 951
P - 0.007 3 0.041 0.005 6 0.032 0.005 2 0.029
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而增加了溶出速率。③载体可以使刺五加叶总黄酮
保持高度分散状态,药物成分散状态而不聚集成,
从而增加了药物的溶出度 [8]。
参考文献
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制备及体外溶出度考察.中国实验方剂学杂志,2013,19(2) ∶58~60.
Preparation and Study of Acanthopanax Leaves Total Flavonoids Solid Dispersions In Vitro
Gan Linjian, Liu Jing, Yu Quanyi, Sun Caixia, Yin Rongli, Su Jianchun, Zhao Junxia
(College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China)
Abstract: This study was aimed to prepare solid dispersions of Acanthopanax leaves total flavonoids in order to im-
prove its bioavailability. PEG4000, PEG6000, F68, PVPK30 were used as carrier materials in the preparation of four
different types of solid dispersion to screen the best type of carrier material and evaluate the amount of carrier mate -
rial and its influence on the drug dissolution. Rutin was used as reference substance. NaNO2-Al(NO3)3-NaOH was
used as the color system, with a UV spectrophotometer measured absorbance at 500 nm. The dissolution characteris-
tics of different proportions of solid dispersions were examined in vitro. The results showed that compared with raw
material, the in vitro drug release rate with PVPK30 as carrier material in the obtained solid dispersion of the pro-
portion of the raw material was significantly improved, and the cumulative release rate was also increased significant-
ly. It was concluded that the solid dispersion prepared by solvent method significantly improved in vitro drug release
in water.
Keywords: Acanthopanax leaves total flavonoids, carrier material, solid dispersion, dissolution
(责任编辑:李沙沙 张志华,责任译审:王 晶)
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