全 文 ：红活麻提取物镇痛抗炎和免疫抑制活性研究
苏志强 1 ,赵增宇1 ,谢胜男 1 ,侯文睿 1 ,陶　恩2 ,向　明 1
(1.华中科技大学同济医学院药学院 , 湖北 武汉　430030;2.湖北民族学院附属医院 ,湖北 恩施　445000)
收稿日期:2008-10-14,修回日期:2009-01-03
资金项目:国家自然科学资金资助项目(No30672655)
作者简介:苏志强(1983-), 男 ,硕士生 , 研究方向:中药免疫药理
学 , E-mail:tjszhq@yahoo.com.cn;
向　明(1967-), 女 ,教授 , 博士生导师 , 研究方向:免疫
药理学研究 ,通讯作者 , Tel:027-65328668
Efectsofanalgesia, anti-inflammationandimmu-
nosuppressionofaceticetherextractofchinese
medicinehonghuoma
SUZhi-qiang1 , ZHAOZeng-yu1 , XIESheng-nan1 ,
HOUWen-rui1 , TAOEn2 , XIANGMing1
(1.SchoolofPharmacy, TongjiMedicalColege, HuazhongUni-
versityofScienceandTechnology, Wuhan　430030;2.Afiliated
HospitalofHubeiInstituteforNationalities, Enshi, Hubei　
445000)
中国图书分类号:R-332;R 284.1;R 329.24;R 392.12;
R593.22;R971.1;R979.5
文献标识码:A 文章编号:1001-1978(2009)04-0559-02
关键词:红活麻;镇痛;抗炎;免疫抑制活性
keywords:honghuoma;analgesia;anti-inflammation;immuno-
suppression
　　民族药红活麻为分布于湖北恩施自治州 、宜昌 、神农架 、
襄樊等地市的以治疗类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis,
RA)为主的习用药材 , 又名蛆儿麻(恩施 、神农架)、活麻草
(恩施)、蛇麻草(宜昌 、神农架), 主要来源于荨麻科艾麻属
植物珠芽艾麻 Laporteabulbifera(SiebetZucc)Wedd的干燥
根。鄂西民族医常用于治疗风湿关节痛 、跌打损伤 、营养不
良性水肿 , 效果显著 [ 1] 。目前对它的研究仅限于生药鉴定方
面 [ 2] , 基于红活麻民间良好的治疗价值及其潜在的开发应用
前景 , 本实验拟进一步探讨其提取物的镇痛抗炎和免疫抑制
活性 , 以逐步阐明民族药红活麻治疗类风湿关节炎的物质基
础和作用机制。
1　材料
1.1　药材　红活麻(购自湖北恩施 , 经湖北省药材志专家鉴
定)。红活麻提取物的制备:95%乙醇浸泡红活麻 , 蒸馏回收
乙醇得到总膏 , 用蒸馏水混匀后依次用石油醚 、乙酸乙酯萃
取 , 蒸馏回收溶剂后得红活麻乙酸乙酯浸膏(LWB-6),提取
率约为 2%,用前真空冷冻干燥并以蒸馏水配成一定浓度的
混悬液。
1.2　动物　昆明种小鼠 ,体重(20±2)g, ♀, 华中科技大学
同济医学院实验动物中心提供。
1.3　试剂　RPMI1640完全培养液(Gibco公司 , 美国)、刀
豆蛋白(ConA, Sigma公司 , 美国)、四甲基偶氮唑盐(MTT,
Amresco公司 , 美国)、胎牛血清(FCS, 杭州四季青公司);IL-
4、INF-γ和 IL-2 试剂盒(R＆D公司 , 美国);环孢霉素 A
(CsA,山东新华制药股份有限公司);提取分离试剂均为分
析纯。
1.4　仪器　旋转蒸发仪(上海予华仪器有限公司)、YLS-6A
智能热板仪(山东省医学科学院设备站生产)、SW-CJ-2FD
型双人单面净化工作台(苏州净化设备有限公司)、高速冷
冻离心机(HERMLE, 德国)、XDS-1B倒置显微镜(重庆光
电仪器有限公司)、二氧化碳培养箱(Napco, 法国)、真空冷
冻干燥机(VirTis, 美国)。
2　方法
2.1　热板法致痛实验　参照文献 [ 2]进行热板法实验 , 取合
格小鼠 50只 ,随机分成 5组 , 每组 10只。根据体重分别给
予:LWB-6组:50、25和 12.5 g· kg-1 , ig;溶媒对照组:等体
积的 NS, ig;阳性对照组:阿司匹林 80mg· kg-1 , ip。每天给
药 1次 ,连续 7d。末次给药后 30、60和 120 min分别测定其
痛阈 ,并计算痛阈提高百分率。痛阈提高百分率 /% =(给药
后痛阈 -给药前痛阈)/给药前痛阈 ×100%。
2.2　醋酸扭体实验　参照文献 [ 3]取进行醋酸扭体实验 , 取
体重 20 g左右小鼠 50只 ,随机分成 5组。分组 、给药方法 、
给药量及给药时间同热板法实验。末次给药后 1 h(溶媒对
照组 30 min), 腹腔注射体积分数 0.6%的醋酸溶液 0.2 ml/
只。观察并记录注射后 15 min内小鼠扭体次数 , 计算镇痛
百分率。镇痛百分率 /% =(对照组扭体次数 -给药组扭体
次数)/对照组扭体次数 ×100%。
2.3　二甲苯致耳廓肿胀实验　参照文献 [ 3]取体重 20 g左
右小鼠 50只 , 随机分为 5组 , 每组 10只。方法同前述。末
次给药后 1 h(阳性对照组 30 min), 将 25 μl二甲苯涂布于
各鼠右耳前后两面致炎 ,半小时后同量二甲苯再次涂布于同
一位置。末次涂完 15 min后 , 颈椎脱臼处死小鼠 ,沿耳廓基
线剪下两耳 ,打孔称重。每鼠右耳片减去左耳片重量即为耳
片炎症肿胀度 ,计算肿胀抑制率。肿胀抑制率 /% =(对照组
平均肿胀度 -给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度 ×
100%。
2.4　T淋巴细胞增殖实验　根据文献 [ 4]制备脾细胞悬液 ,
台盼蓝计数 ,调整细胞浓度为 1×109 L-1。设溶媒组 、阳性
组(环孢霉素 A5mg· L-1)和 1、0.1、0.01和 0.001 g· ml-1
LWB-6浓度组。细胞悬液接种于 96孔板内 ,并加入药物 ,将
96孔板置于 37℃、体积分数 5% CO2培养箱培养 44 h, 每孔
加入 20 μl质量浓度为 5 g· L-1的 MTT, 混匀后再培养 4 h,
·559·中国药理学通报　ChinesePharmacologicalBuletin　2009 Apr;25(4):559 ～ 60
离心去上清 , 加入 150μl的二甲亚砜 ,充分混匀溶解后于酶
标仪 492 nm处测定每孔的吸光度值 , 计算抑制率。抑制率
=(溶媒对照组 OD值 -药物组 OD值)/(溶媒对照组 OD值
-空白组 OD值)。
2.5　细胞因子分泌测定　取按步骤 “ 2.4”操作的脾细胞上
清液 , 采用酶联免疫分析法(ELISA)并按试剂盒说明测定 I
NF-γ、IL-2和 IL-4的含量。结果单位以 ng· L-1表示。
2.6　统计学方法　数据以 x±s表示 , 采用 SPSS12.0软件
进行方差分析和卡方检验 ,卡方检验用于率的比较。
3　结果
3.1　LWB-6对热板法小鼠痛域的影响　给予 LWB-6药物
后 , 小鼠痛阈值较给药前有所提高 , 其中高浓度组(生物材
50 g· kg-1)尤为明显 ,在给药后 30min痛阈值达到最大 , 给
药 120 min后作用仍明显 , 痛阈提高百分数为 173%,与溶媒
组(痛阈提高率 28%)比较 , 差异有显著性(P<0.05)。中
浓度组给药后 60min痛阈值最大 , 低浓度组效果不明显 , 与
溶媒组比较 , 两者差异均无显著性。
3.2　LWB-6对化学刺激引起的小鼠疼痛的影响　由 Tab1
可见 , 给予 LWB-6药物后小鼠的平均扭体次数均较给药前
明显减少 , 高浓度组尤为明显 , 与溶媒组比较差异有显著性
(P<0.05, P<0.01)。高浓度组镇痛率达到 90.74%, 与阿
司匹林的镇痛效果相当。
Tab1　EfectsofLWB-6ontheaceticacidinduced
writhingmodelinmice( x±s, n=10)
Group Dosage/g· kg-1 Twistnumber
Analgesic
percentage/%
Normal — 　40.50±9.14 —
Positive 0.08 1.67±1.03＊＊ 95.88
LWB-6 50 3.75±2.99＊＊ 90.74
25 　22.50±8.02＊ 44.44
12.5 　31.32±4.54 22.67
　　＊P<0.05, ＊＊P<0.01 vsnormalgroup
3.3　LWB-6对二甲苯所致耳肿胀的影响　由 Tab2可见 ,
LWB-6高浓度组(生药材 50 g· kg-1)的肿胀抑制率与阳性
对照组相当 , 高达 70.53%, 与溶媒组比较差异有显著性
(P<0.01),中 、低浓度组与溶媒组比较也表现出较高的抑
Tab2　EfectsofLWB-6onthexylene-induced
earedemamodelinmice( x±s, n=10)
Group Dosage/g· kg-1 Edemadegree/g
Inhibition
percentage/%
Normal NS 10.52±7.02 —
Positive 0.08 2.90±2.58＊＊ 72.43
LWB-6 50 3.10±2.95＊＊ 70.53
25 3.85±1.21＊ 63.40
12.5 4.12±2.43＊ 53.23
　　＊P<0.05, ＊＊P<0.01 vsnormalgroup
制率(P<0.05),抑制率都在 50%以上。
3.4　LWB-6对淋巴细胞增殖的影响　LWB-6高浓度组(1
g· ml-1)对淋巴细胞增殖抑制作用较强 ,抑制率为 35%,接
近于 CsA的 46%。 与空白组相比差异具有显著性 (P<
0.05)。
3.5　LWB-6对细胞因子分泌的影响　LWB-6(1 g· ml-1)
对淋巴细胞上清液中的 INF-γ148 ng· L-1和 IL-2 247 ng·
L-1分泌较空白组(INF-γ921 ng· L-1 , IL-2 692 ng· L-1)具
有明显的抑制作用(P<0.05, P<0.01), 随着药物浓度降
低 ,含量逐渐增加 , 抑制作用逐渐降低 , 呈现一定的剂量依赖
性。
4　讨论
　　镇痛抗炎实验结果显示 , LWB-6高剂量组(生药材 50 g
· kg-1)对由热板和醋酸引起的物理和化学疼痛均有较好的
抑制作用 ,对二甲苯所致的非特异性炎症也有很好的对抗作
用。研究结果还表明 LWB-6可体外剂量依赖性地抑制脾 T
淋巴细胞增殖 , 且抑制 T细胞培养上清液内 IL-2和 IFN-γ的
分泌 ,提示 LWB-6具有一定的免疫抑制作用。
　　LWB-6具有较好的镇痛抗炎和体外免疫抑制作用 , 其抗
T淋巴细胞增殖和抑制 IL-2和 IFN-γ的分泌作用与红活麻
民间治疗类风湿关节炎密切相关 , 本研究结果对红活麻抗类
风湿关节炎的物质基础和作用机制及开发成治疗类风湿关
节炎新药具有一定的指导意义。
参考文献:
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