全 文 ：表 6　生白饮对照射损伤小鼠 TNF的影响(μg L - 1 , x±s , n
=15)
Tab 6 　Effect o f Shengbaiyin o ral liquid on TNF count in
blood of ir radiated mice(μg L -1 , x±s , n=15)
组别 剂量
g kg- 1
照射后 /d
7 14 21
正常组 — 2. 6±1. 0 2. 6±1. 0 2. 6±1. 0
模型组 — 1. 4±0. 6a 1. 7±0. 7a 2. 5±0. 8
生白饮 20 1. 6±0. 6 2. 3±0. 8b 2. 8±1. 6
40 1. 9±0. 6b 2. 3±0. 8b 2. 9±0. 9
60 2. 0±0. 6b 2. 4±0. 6c 3. 1±1. 2
鲨肝醇 0. 12 2. 0±0. 5b 2. 4±0. 7b 2. 9±1. 4
注:与正常组比较 , a P<0. 01;与模型组比较, bP<0.05 , cP<0. 01
4　讨论
生白饮采用中药和当地民族药物为主选药组方
而成 ,主要有黄芪 、苡仁 、鸡血藤 、炮山甲 、号桐杆 、荞
麦七 、北三七 、女贞子 、山芋 、黄精等 。黄芪重补脾肺
之气 ,气生则血生;鸡血藤 、号桐杆活血补血以生血;
荞麦七不仅助苡仁健脾消食以生血 ,同时清热解毒 ,
有助肿瘤消散;炮山甲渗透力强 ,以利诸药达病所;
北三七益气补血;黄精 、女贞子 、山芋温补脾肾 、养阴
生津 ,以强其本 。全方共奏温肾健脾 、益气养血生精
之功效。
本实验采用60Co γ射线损伤所致小鼠白细胞减
少症 ,小鼠受照射后造血系统受到损伤 ,外周血白细
胞 、网织红细胞 、骨髓有核细胞数以及淋转指数均明
显降低 ,说明实验造模成功 。机体在受到辐射损伤
后 ,分子代谢失常 ,细胞损伤和植物神经功能紊乱 ,
从而导致免疫功能失调 ,造血组织破坏及由此而引
发的一系列严重合并症 。本实验结果显示 ,生白饮
能促进受照射小鼠外周血白细胞 、网织红细胞 、骨髓
有核细胞数的恢复 ,特别是在照射后第 7 , 14天效果
更为显著(P<0. 05 , P <0 . 01),明显表现出其调节
造血系统 ,升高白细胞 ,刺激机体的造血能力 ,其作
用不逊于鲨肝醇。同时 ,研究还表明生白饮不仅能
单独刺激小鼠淋巴细胞的转化 ,而且还诱导小鼠细
胞因子的释放 , 实验中照射受损后的小鼠血液中
IL-6 、TNF 活性表现出明显降低 ,生白饮在照射后
第 7 , 14天具有显著升高 I L-6 、TNF 水平 。 IL-6为
多功能生物活性的细胞因子 ,具有广泛的免疫调节
功能和促进细胞的增殖分化 、加速血小板的再生[ 4] 。
其为参与造血 、炎症反应 、免疫反应和急性期反应的
多潜能细胞因子[ 5] 。TNF 对辐射所致白细胞计数
和血小板计数的减少有促进恢复的作用[ 6] 。提示生
白饮具有全面调节机体的免疫力作用。综上所述 ,
生白饮对放疗所致免疫力低下及造血系统损伤有较
好的治疗效果 ,其机制可能与提高免疫力有关。
参考文献:
[ 1] 　姜锦林.生白饮治疗白细胞减少症疗效观察[ J] .中国民族民间
医药杂志 , 2001 , 53:331-332.
[ 2] 　蒋晓燕 ,王晓雯 ,王雪飞 , 等.肉苁蓉总苷对60C oγ射线照射小
鼠造血系统损伤保护作用的研究[ J] . 中国药理学通报 , 2000 ,
16(3):332-325.
[ 3] 　黄志坚 ,黄依明 , 邱承亮 , 等. M TT 比色法检测孕牛淋巴细胞
转化的效果[ J] .福建农业大学学报 , 1996 , 25(4):475-477.
[ 4] 　Patch en ML , Macvi t tie TJ , William JL. Administ ration of in-
terleukin-6 st imulates mu lti lineage hematopoiesis and acceler-
ates recovery f rom radiation-induced h ematopoiet ic depression
[ J] . Blood, 1991 , 77(3):472.
[ 5] 　张浩 ,毛秉智 ,罗庆良 ,等. I L-6促进受照小鼠造血和免疫功能
恢复的实验研究[ J] .中国辐射卫生, 2000 , 9(4):193-195.
[ 6] 　周华云 ,周剑影 ,王国权 ,等.白细胞介素-6及肿瘤坏死因子对
受照小鼠造血恢复的影响[ J] . 辐射防护 , 2001 , 21(4):232-
237.
[收稿日期] 2006-01-04
[ 作者简介] 向明 , 女 ,博士 ,电话:027-83657813 , E-mai l:xiangming517@yah oo. com
红活麻有效部位干预 II型胶原所致关节炎的作用
向明1 ,陶恩2 ,储潼1 ,袁思佑1 　(1 .华中科技大学同济医学院药学院药理室 , 湖北 武汉 430030;2 . 湖北民族学院附属医
院 ,湖北 恩施 445000)
[ 摘要] 　目的:探讨红活麻有效部位 LWB-6 抗 CIA 关节炎的作用及机制。方法:在 BALB/c 小鼠体内建立 II 型胶原所致关
节炎模型。采用隔日灌胃的给药方式观察 LWB-6对关节炎发病和关节损伤的影响;并通过 DC 表型和 DC T-be t基因 mRNA
的转录水平测定 ,探讨 LWB-6 抗 CIA 作用机制。结果:给药 40 d 后发现 , LWB-6 呈剂量依赖性地降低 CIA 关节炎的发病率 ,
与空白对照组相比有显著差异;足关节滑膜组织 HE 染色检查 ,未观察到炎性细胞浸润 , 关节间隙完好。 20 mg L - 1 LWB-6
对 BALB /c小鼠骨髓来源 DC T-bet mRNA 转录水平有明显下调作用 , FACS 分析显示此部位对 CD11c+DC 表面分子 MHC-
II和 CD86 表达无明显影响。结论:LWB-6 预防给药对 CIA 关节炎有明显的干预作用 ,此作用与负调控 DC T-be t表达相关。
[ 关键词] 　红活麻;II 型胶原所致关节炎;树突状细胞;转录因子
[中图分类号] R967　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2006)10-1201-05
1201 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2006 Oct , Vol 26 , No.10
Preliminary study on preventing effects of the active component of Honghuoma on CIA model
XIANG Ming1 , TAO En2 , CHU Tong1 , YUAN Si-you 1(1 . Dept. of Pharmaco lo gy , College o f Pharmacy , Tong ji
Medical College , Huazhong Science and Techno lo gy Univ ersity , Hubei Wuhan 430030 , China;2. Affiliated Hospital , Hubei
Ethnolog ical Co lleg e , Hubei Enshi 445000 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investig ate the preventiv e effect o f the activ e component LWB-6 o f H onghuoma on CIA model
and the unde rly ing mechanism. METHODS　Collag en II induced ar thritis w as set up in BA LB /c mice. LWB-6 w as administered
every other day , the incidence o f ar thritis and injury inside the joint w as obser ved;the under lying mechanism w as explo red by
detecting the pheno type of DC and mRNA level of DC T-bet. RESULTS　After 40 day s of treatment , the incidence o f ar thritis
was significantly dec reased by LWB-6 in a do se related manner , compared w ith that in the blank contro l g roup;No inflamma to-
ry cells infiltra tion was found in synovium by histolog ical analy sis , and the inter space of joint w as intact. T-be t mRNA level in
bone mar row deriv ed DC w as dow n-regulated by 20 mg L - 1 LWB-6 , and the phenotype expre ssion of MH C-II and CD86 on
CD11c+DC w as unaffected by LWB-6 by FACS analy sis. CONCLUSION　LWB-6 show s obviously preventiv e effects on CIA
model , and which is asso ciated w ith the negative contro l of DC T-bet transcription.
KEY WORDS:Honghuoma;CIA;DC;T-bet
　　民族药红活麻是分布于湖北恩施自治州 、宜昌 、
神农架 、襄樊等地市的以治疗类风湿性关节炎(RA)
为主的习用药材。民间单用或配方 ,用于类风湿关
节炎 、风湿关节痛 、坐骨神经痛 、肾炎 、体虚浮肿 、荨
麻疹及风湿心脏病等症[ 1] 。因药材资源分布的限
制 ,其抗 RA 药理作用和机制以及有效成分的研究
一直未得到深入的开展 ,使得有限的研究局限在药
材生药鉴定方面[ 2] 。我们课题组经过系列研究发现
红活麻醋酸乙酯部位(LWB-6)具有一定的抗炎镇
痛作用。
类风湿关节炎是一种慢性进行性的自身免疫
病 ,以关节滑膜炎及对称性 、破坏性关节病变为主要
特征[ 3] 。类风湿关节炎病人的滑膜组织中观察到与
天然免疫有关的多种细胞如巨噬细胞(MΥ)、树突
状细胞(DC)、NK(自然杀伤)细胞和肥大细胞浸
润[ 4] 。因此最新的观点认为 RA 是抗原提呈细胞
(APC)和 CD4+细胞相互作用的结果[ 5] 。Wang JS
等研究[ 6] 发现 DC内转录因子(T-bet)的表达是 RA
发病所必需的 ,而且足以致病 。基于 DC T-bet 在
RA 发病中的重要调控作用 ,结合“华中天然药库”
湖北恩施地区红活麻治疗 RA 的良好功效 ,本课题
组拟通过建立模拟人 RA 发病的 CIA(II 型胶原所
致关节炎)小鼠模型 ,探讨红活麻有效部位 LWB-6
抗 CIA 作用及机制。
1　材料
DTC 基因扩增热循环仪(PCR ,西安天隆科技
有限公司);ZF1紫外分析仪(江苏太仓市科教器材
厂);XDS-1B倒置显微镜(上海光学仪器厂);Napco
二氧化碳培养箱(法国);ELX- 800型流式细胞仪
(BD公司 ,美国);Balb /c小鼠 , ♂, 18 ～ 22 g(武汉市
疾病预防控制中心 ,批号 19 - 002);红活麻有效部
位 LWB-6(红活麻采自湖北恩施州 ,根据湖北药材
志组织专家鉴定;采用本室建立的甲醇提取 ,醋酸乙
酯萃取的方法制得 LWB-6有效部位 ,用前以生理
盐水配制成不同浓度的溶液备用);Fico ll细胞分层
液(瑞典 Amersham 公司 ,批号 303232);完全弗氏
佐剂(CFA)(美国 Sigma公司 ,批号 F - 5503);Ⅱ型
胶原(C Ⅱ)(美国 Sigma公司 ,批号 C - 7806);RNA
提取 Trizo l试剂盒(美国 Gibco 公司 ,批号 15596-
026);RT 试剂盒 (美国 Promega 公司 , 批号
DRR019A );地塞米松注射液(上海信谊制药厂 ,批
号 20040809)。
2　方法
2. 1　LWB-6对小鼠 CIA 关节炎的防治作用 　取
BALB /c小鼠 50只 ,随机分成 5组 ,模型对照组 、地
塞米松(0. 2 mg kg d-1)阳性对照组 、LWB-6剂量
低 、中 、高(50 ,100 ,150 mg kg - 1)组各 10只。除空
白对照组外 ,各组小鼠于尾根部皮内注射0. 1 mL
Ⅱ型胶原乳化剂(CII∶CFA =1∶1 ,其中含 C Ⅱ 100
μg),11 d 后于小鼠腋窝皮下激发注射 CFA 0. 1
mL ,建立 CIA模型 。LWB-6 和地塞米松分别于模
型建立前 7 d和前 1 d开始灌胃给药 ,隔日给药 ,连
续 40 d。模型对照组给予同体积生理盐水 。每周观
察小鼠 3次 ,以Wood关节损伤评价法[ 7] 为标准判
断关节炎发病情况 ,以连续两周内关节出现红斑和
水肿视为关节炎发病。实验结束后处死小鼠 ,取足
跖关节用 10%甲醛浸泡 ,固定 、染色 、镜检 ,观察病
理组织学变化 。
1202 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2006 Oct , Vol 26 , No. 10
2. 2　树突状细胞的分离 、培养及表型鉴定　取小鼠
胫骨骨髓 ,过无菌尼龙网去除杂质 ,清洗 ,即可获得
骨髓细胞悬液。以淋巴细胞分层液分离细胞 ,清洗
后。取 3×107细胞加入含 10%胎牛血清(FCS)的
RPM I 1640液 ,置于 37 ℃, 5%二氧化碳培养箱内
培养过夜 。次日弃上清液和悬浮细胞 ,清洗并加入
RPM I 1640完全培养液(含 20 μg L- 1 GM-CSF 和
20 μg L- 1 I L-4)以及不同浓度的 LBW-6水溶液 ,
于 37 ℃ 5%二氧化碳培养箱内培养 。至第 7 天收
获细胞 ,于 200μL 的 1×10 6 /m l细胞悬液中分别加
入 FITC 标记抗小鼠 CD11 、抗小鼠 CD86和抗小鼠
MHC-II (I-Ad)单克隆抗体。 4 ℃孵育 30 min后 ,
以PBS 离心洗 2次 ,重新悬于0. 4 mL 的 PBS 液后 ,
采用流式细胞仪(FACS)检测树突状细胞表型 。
2. 3　DC T-bet mRNA 转录水平分析　同上法分
离 、培养树突状细胞 ,加入不同浓度的 LWB-6 水溶
液共育 ,并设 IFN-γ(50μg L- 1)刺激组为阳性对照
组。采用 PCR 方法 , 按照 Trizo l试剂盒说明书要
求 ,提取 DC 内总 RNA 。 cDNA 第一链合成按照
RT 试剂盒说明书操作 , T-be t 上游引物为:5 ˊ-
G TGACCCAGATGA TTGTGCT-3 ˊ , 下游引物
为:5 ˊ-GGT TGGGTAGGAGAGGAGAG-3 ˊ 。
PCR扩增 30个循环 , 94 ℃变性 45 s ,58 ℃退火 45
s ,72 ℃延伸 50 s。循环开始前 ,置 94 ℃预变性 4
min ,循环结束后再在 72 ℃中孵育 7 min。PCR产
物用 2%琼脂糖凝胶电泳分离鉴定 ,凝胶电泳图像
采用紫外扫描分析。
2. 4　统计学处理　两组间比较采用(χ2检验 , P <
0. 05为有统计学意义 。
3　结果
3. 1　LWB-6 对关节炎发病的影响　如图 1所示 ,
自模型建立后 28 d ,CIA 关节炎发病率明显升高 ,
接近 80%;LWB-6高剂量组从 28 d 开始显示出降
低关节炎发病的作用 ,与模型对照组相比差异有显
著意义。中剂量组自模型建立后 36 d 也表现出抗
关节炎作用 ,但弱于高剂量组;低剂量组未显示出降
低关节炎发病的作用 。病理结果如图 2 所示:CIA
模型(C)关节腔内有明显的血管翳形成和炎性细胞
浸润 ,骨和关节软骨组织有明显损伤;LWB-6 高剂
量(A)和中剂量组(结果未示出)关节腔可见完好的
关节间隙 ,几无炎性细胞浸润;LWB-6低剂量(B)关
节腔可见血管翳形成 ,有炎性细胞浸润 ,骨和关节软
骨组织遭到一定程度的破坏。
3. 2　LWB-6对 BA LB /c小鼠骨髓来源 DC 表型的
影响　实验结果(图 3)显示 ,经混合细胞因子培养
95%的骨髓来源 DC 表达 CD11c+, 即为典型 DC
细胞 。DC表面抗原和表面分子 MHC II 及 CD86 ,
在有无 LWB- 6(高 、低浓度)均无明显变化 ,提示
LWB- 6对 DC 结构 、形态和表面分子没有影响。
图 1　红活麻有效部位 LWB-6对 CIA 关节炎发病的影响(n=10)
—◆—模型组 , —●—低剂量组 , —▲—中剂量组 , —■—高剂量组
Fig 1　Ef fect of LWB-6 on the developm en t of arthrit is in CIA mu-
rine model (n=10)
—◆—model g rou p , —●—low group , —▲—midd le g rou p , —■—high
group
图 2　病理组织分析
Fig 2　Pathological Analy sis
图 3　树突状细胞表面抗原分析
Fig 3　Analy si s of the su rface marker on dendrit ic cells
3. 3　LWB-6对 DC T-bet mRNA 水平的影响　如
图 4所示 ,经 IFN-γ刺激后 DC 细胞内 T-bet mR-
1203 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2006 Oct , Vol 26 , No.10
NA 表达水平明显增高 ,在 300bp 附近有一条强度
很高的条带。而 LBW-6 则呈浓度依赖性的下调
DC T-bet mRNA水平 ,300bp处条带弱于正常对照
组。提示 LBW-6 具有明显抑制 DC T-be t 信息
RNA 转录的作用。
图 4　DC T-bet RT-PCR产物电泳图
Fig 4　PCR analy sis of DC T-bet
4　讨论
红活麻系荨麻科植物珠芽艾麻 Laportea bulb-
i fera (S ieb. et Zucc. )Wedd . 的干燥根 ,又名蛆儿
麻 、活麻草 、蛇麻草 , 为多年生草本(春季采收有效
成分含量较高), 是一种民间和所分布地区医院常
用的以治疗类风湿性关节炎为主的习用药材 。对于
红活麻抗 RA作用及物质基础的研究国内外均未见
报道 。近年来针对 RA 发病的病理免疫研究提示天
然免疫是 RA发病中的重要组成部分[ 8] ,并且连接
炎症性疾病中天然免疫和获得性免疫的重要细胞就
是迄今为止已知功能最强的专职抗原提呈细胞--树
突状细胞(DC)[ 9] 。基于大量的最新研究事实 ,以及
本课题组对红活麻活性部位的研究结果 ,我们探讨
了红活麻抗炎镇痛作用较强的有效部位 LBW-6(主
要含黄酮类成分)对 CIA 的免疫抑制作用及对 DC
关键转录因子的影响。研究显示 , 150 mg kg- 1
LWB-6隔日灌胃给药 ,自 CIA 模型建立后第 28 天
起 ,明显降低关节炎的发病率 ,至实验第 40 天与模
型对照相比差异有极显著意义;通过病理组织分析
发现高剂量药物防治组关节滑膜组织间隙完好 ,几
乎观察不到炎症细胞浸润 , 关节无明显损伤 , 且
LWB-6抗 CIA 关节炎作用有剂量依赖性。LWB-6
对 DC 细胞形态和表型的影响显示 , 该部位对 DC
表面抗原无明显作用 ,经 LWB-6 处理组与空白对
照组 CD86 和 MHC II 均无明显区别;研究发现
LWB-6可明显抑制 DC T-bet mRNA 水平 ,且调控
作用也呈剂量相关性。因此实验结果提示 LWB-6
抗 CIA 作用与其负调控 DC T-bet 转录因子表达有
一定的关联 ,而与破坏 DC结构无关。
DC是炎性因子和趋化因子的主要来源 ,DC 对
于促进自身抗原特异性免疫应答 ,导致 RA 慢性增
殖性滑膜炎形成和关节破坏至关重要 。Leung BP
等[ 9] 将 II型胶原肽处理 DC 过继转移 ,可在小鼠体
内诱导侵蚀性关节炎模型;Sarkar S 等[ 10] 通过研究
提出 DC将类风湿滑膜组织中关节组织抗原呈递至
T 细胞 ,进而促进 T 细胞增殖 , B 细胞活化和免疫
球蛋白亚型的转换等 ,很可能是引发记忆性 T 和 B
细胞应答 ,激发 RA 发病的主要驱动力的观点;除此
之外 ,许多经典的抑制 T 、B 细胞活化 ,强烈抑制
Th1型细胞因子分泌的免疫抑制药物包括雷帕霉
素 、FK506和 CsA 等均可以作用于 DC 分化发育的
各个环节 ,发挥抗移植排斥及预防和治疗自身免疫
病的作用[ 11] 。因此 DC在 RA 发病的起始阶段和病
情发展中扮演重要的角色。
T-bet是 DC 产生 IFN-γ及促进抗原特异性
Th1应答所必需的转录因子 ,而且也是刺激 B细胞
产生不同抗体亚型的特异性介质[ 12] 。根据关节炎
滑膜组织和 RA 患者外周血 DC T-bet 表达异常升
高;T-bet 调控炎症的主要部位在树突状细胞 ,因为
将野生型 DC 过继转移至处于保护状态下的 T-
bet-/-缺陷宿主 ,可诱导出 CIA 关节炎;DC分泌炎性
介质及刺激初始 T 细胞的作用都会因 T-bet 基因
的缺乏而受到抑制等研究事实[ 6] ,推测 DC 源性 T-
bet很可能是 RA 发病中所必需的关键转录因子 ,
T-bet通过 DC发挥调控 RA 发病的作用。
综上所述 ,我们从 LWB-6 体外对 DC 形态 ,表
面分子以及 DC T-bet mRNA 转录水平的影响 ,以
及 LWB-6体内抗 CIA 关节炎的作用 ,初步断定红
活麻发挥抗 RA 作用的物质基础和作用机制 。研究
对开发红活麻单体化合物 ,从分子水平阐明红活麻
治疗 RA 机制将具有重要的理论和实践意义 。
参考文献:
[ 1] 　万定荣 ,陈家春 ,余汉华. 红活麻 , 湖北药材志[ M ] . 湖北科学
技术出版社 , 2002 , 234-238.
[ 2] 　万定荣 , 冯颂桥 , 李安娟. 民族药红活麻与活麻的生药鉴定
[ J] . 中草药 , 1989 , 20(1):34-36.
[ 3] 　Firestein GS . Evolving concepts of rheumatoid arthri tis[ J] .
Natu re , 2003 , 423 (6937):356-361.
[ 4] 　Sw eeney SE , Firestein GS. Medicine in focus-Rheumatoid ar-
thriti s:regulat ion of sy novial inf lammation[ J] . Intern al J Bio-
chem &C ell Bio , 2004 , 36 (3):372-378.
[ 5] 　张义滨 ,刘志敏 ,熊凌霜. 类风湿关节炎发病机制及其治疗方
法研究进展[ J] . 细胞与分子免疫学杂志 , 2005 , 21(suppl):
88-90.
[ 6] 　Wang JS , Fathm an JW , Lu go-Villarin o G , et a l . T ran scrip-
ti on factor T-bet regulates inf lammatory arth ri ti s th roug h it s
fu nct ion in dend ri ti c cell s[ J] . J C lin In vest , 2006 , 116(2):
414-421.
[ 7] 　Larsson P , Klein au S , Holmdahl R , et a l . Homologu s type 1I
collagen-in du ced arthrit is in rat s:characterization of th e disease
an d demons t rat ion of clinical ly dist inct forms of arthrit is in tw o
st rains of rat s af ter immunization wi th the same col lagen prep-
1204 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2006 Oct , Vol 26 , No. 10
aration[ J] . Arthrit is Rh eum , 1990 , 33(5):693-701.
[ 8] 　C orr M and Firestein GS. Innate immunity as hi red gun:is it
rheum atoid arth ri tis  [ J] J Exp M ed , 2002 , 195(8):F33-F35.
[ 9] 　Leung BP , Conacher M , H unter D , et al . A novel dendriti c
cel l-indu ced model of erosive inf lamm atory arth ri ti s:distinct
roles for dendrit ic cells in T cell activat ion and induct ion of lo-
cal inf lammation [ J] . J Imm unol , 2002 , 169(12):7071-7077.
[ 10] S ark ar S and Fox DA. Dend ri tic cell s in rheumatoid arth riti s
[ J] . Front Biosci , 2005 , 10(1):656-665.
[ 11] M atsue H , Yang C , Matsue K , et a l . Cont rast ing impacts of
immunosuppressive agents (rapamycin , FK506 , cyclosporin
A , and dexamethas one) on bi-directional den dri ti c cell-T cell
interaction during antigen presentat ion [ J] . J Immunol , 2002 ,
169(7):3555-3564.
[ 12] Lu go-Villarin o G , Maldonado-Lopez R , Possem ato R , et al .
T-bet is required for opt imal product ion of IFN-γand ant igen-
specifi c T cell activation by dendriti c cells[ J] . PNAS , 2003 ,
100(13):7749-7754.
[收稿日期] 2006-05-28
[ 作者简介] 谢敏 ,女 ,硕士 ,副教授 ,电话:0371-66912312　[ 通讯作者] 乔海灵 ,男 ,博士 ,教授 ,博士导师 ,电话:0371-66658190 , E-mai l:qiaohl
@z zu. edu . cn
高效液相色谱法测定人体内氯苯那敏血药浓度及药动学
谢敏 ,贾琳静 ,郜娜 ,郭玉忠 ,田鑫 ,乔海灵　(郑州大学临床药理研究所 , 河南 郑州 450052)
[ 摘要] 　目的:建立高效液相色谱法测定人血浆中马来酸氯苯那敏药物浓度 , 并研究马来酸氯苯那敏健康人体药动学。方
法:Agilent C18柱(4 . 6 mm×250 mm , 5 μm),流动相为乙腈-0 . 025 mo l L -1磷酸二氢铵溶液(pH 3 . 5)(27∶73), 检测波长为
200 nm。10 名健康志愿者单剂量口服 8 mg 马来酸氯苯那敏片后 , 体内药时数据采用 3P97 程序统计方法处理。结果:本实验
条件下 ,血浆样品中氯苯那敏无杂质干扰 ,线性关系良好 , 所得回归方程为:C=0. 323 5 A- 0 . 703 , r=0. 999 2 , 线性范围为
0 . 75～ 48. 00 μg L - 1 , 本方法最低定量浓度为 0. 75 μg L -1 , 高 、中 、低 3 浓度日内和日间的 RSD<15%, 提取回收率大于
75%,满足生物样品的测定要求。马来酸氯苯那敏健康人体药动学参数 Cmax为 (16. 4±8 . 9)μg L - 1 , tmax为(3 . 8±1 . 5)h , t1 /2ke
为(13 . 1±2. 3) h , V /F 为(871 . 7±187. 3)L , AUC0-t为(181 . 5±52 . 3)μg h L -1 , AUC0-∞为(208. 2±60. 1)μg h L - 1 。结论:
本法操作简便快速 ,定量准确可靠 , 适用于马来酸氯苯那敏片的人体药动学研究。
[ 关键词] 　马来酸氯苯那敏;高效液相色谱法;药动学
[中图分类号] R969. 1 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2006)10-1205-03
Determination of chlorpheniramine in plasma by HPLC and its pharmacokinetics
XIE M in , JIA Lin-jing , GAO N a , GUO Yu-zhong , TIAN Xin ,QIAO Hai-ling (Institute of Clinica l Pharmacol-
ogy , Zhengzhou Univer sity , Henan Zhengzhou 450052 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish an H PLC to determine the concentration in human pla sma and study the pharmacoki-
netics of chlo rpheniramine maleate in young healthy volunteer s. METHODS　The separation w as perfo rmed on Agilent C18(5
μm , 4. 6 mm×250 mm)column. The mobile phase consisted o f ace tonitrile and 0 . 025 mo l L -1NH 4H2PO 4 w ater solution(pH
3 . 5)w ith the ra tio o f 27∶73 . The detection w aveleng th w as at 200 nm. The healthy vo luntee rs w ere g iven o rally w ith a single
do se o f 8 mg chlorpheniramine malea te table ts and the data of concentrations-time in plasma we re handled w ith 3P97 prog ram.
RESULTS　The de te rmination was no t interfered under the optimal chroma tog raphic conditions. The good linearity wa s ob-
tained and the linear equation was C=0 . 323 5 A- 0. 703 6(r=0 . 999 2)in the range of 0. 75 - 48. 00 μg L -1 . The limit of
quantitation w as 0. 75 μg L -1 . The RSDs of w ithin-day and between-day w ere less than 15%(n=5), and ex tract r ecoveries
were larg er than 75%. The assay method w as in confo rmity with the requirement of bio log ical determina tion. The main pha r-
macokinetic parame te rs w ere as fo llow s:The Cmax w as(16. 4±8 . 9)μg L - 1 , tmax was (3 . 8±1. 5)h , t1 /2ke w as(13 . 1±2. 3) h ,
V /F w as(871 . 7±187. 3)L , AUC0-t was (181 . 5±52. 3) μg h L - 1 , AUC0-∞w as (208. 2±60. 1) μg h L - 1 , respectively .
CONCLUSION　The a ssay me thod appear ed to be simple , quick , accurate , reliable and suitable for the pharmacokinetic study
of chlo rphenir amine ma leate.
KEY WORDS:chlorpheniramine maleate;H PLC;pharmacokinetics
　　马来酸氯苯那敏(chlorpheniramine maleate , CPM)是 H 1受体阻断剂 ,抗变态反应作用强 ,常用
1205 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 10期 Chin H osp Pharm J , 2006 Oct , Vol 26 , No.10