全 文 ：树舌液体深层发酵浸膏多糖在
粘附中的作用
胡　静1 , 杜　金1 , 杨　扬1 , 吴宗翰1 , 邢亚丽1 , 宋　慧1 , 2
(1.吉林农业大学生命科学学院 ,长春 130118;2.吉林农业大学 食药用菌教育部工程研究中
心 ,长春 130118)
摘　要:采用 Sw1116细胞进行粘附试验 , 研究树舌液体深层发酵浸膏多糖(GAP)能否影响细菌对细胞的粘
附。结果表明:GAP质量浓度为 300μg/ mL时 , 对大肠杆菌 、沙门菌的细胞粘附抑制最为明显 , 粘附率分别降
至(22.8±1.2)、(31.2±1.6)个细菌/细胞 , 对乳酸杆菌粘附有明显的促进作用 , 粘附率达(40.0±1.3)。说明树
舌液体深层发酵浸膏多糖对大肠杆菌 、沙门氏菌的细胞粘附具有抑制作用 ,对于乳酸杆菌的粘附有促进作用 ,
提示该GAP 具有调节肠道微生态的潜在应用价值。
关键词:树舌液体深层发酵浸膏多糖;细菌粘附;大肠杆菌;沙门氏菌;乳杆菌
中图分类号:Q538;S567.31　　　文献标识码:A　　　文章编号:1672-3538(2013)02-0113-03
引文格式:胡静 , 杜金 ,杨扬 , 等.树舌液体深层发酵浸膏多糖在粘附中的作用[ J] .菌物研究 , 2013 , 11(2):113-
115.
Research on the Function of GAP in Bacterial Adherence Condition
HU Jing
1 , DU Jin1 , YANG Yang1 , WU Zong-han1 , XING Ya-li1 , SONG Hui1 ,2＊＊
(1.College of Life Science , Jilin Agricultural University , Changchun 130118 , China;2.Engineering
Research Center of ChineseMinistry of Education for Edible and Medicinal Fungi , Jilin Agricultural Uni-
versity , Changchun 130118 , China)
Abstract:Using Sw1116 cells , the effect of GAP on the adherence of E.coli Sw1116 cells was studied.
The data showed that GAP can obviously inhibit the adherence to Lactobacillus and Salmonella at the con-
centration of 300μg/mL , and the adherence ratewas reduced to (22.8±1.2)and(31.2±1.6)bacteri-
a/cell respectively.GAP can inhibit bacterial adherence and has potential value in regulating enteromi-
croecology .
Key words:GAP;bacterial adherence;Escherichia coli;Salmonella ;Lactobacillus
　　树舌[ Ganoderma applanatum(Pers.ex Gray.)
Pat] 隶属担子菌亚门(Basidiomycotina), 层菌纲
(Hymenomycetes),灵芝目(Ganodermatales),灵芝科
(Ganodermataceae),灵芝属(Ganoderma)[ 1-2] , 是一
种名贵的药用真菌。树舌液体深层发酵浸膏多糖
(GAP)是从树舌液体发酵浸膏中提取的水溶性多
糖 ,具有提高免疫力 、抗肿瘤 、抑菌消炎等多种生
物功效 。有关该多糖的微生态调节作用未见报
道 , 本试验采用大肠杆菌标准株 、沙门氏菌标准
株 、乳杆菌标准株和 Sw1116细胞进行细菌粘附试
验 , 测定不同浓度的GAP 对细菌粘附的影响 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　菌种　大肠杆菌 Escherichia coli 由吉林农
业大学生化实验室提供 , 鼠李糖乳杆菌(Lacto-
bacillus ,ATCC53103)由吉林农业大学动物科学学
院馈赠 ,鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella 由吉林大学

通讯作者:宋慧 , E-mail:songhuinongda@163.com
基金项目:吉林省世行贷款农产品质量安全项目(2011-Y18)
作者简介:胡静 ,女 ,在读硕士 ,研究方向:菌物生物化学。
收稿日期:2013-04-10
　第 11卷第 2 期 菌　物　研　究 Vol.11 No.2　
　2013 年 5月 Journal　of　Fungal　Research May 2013　
DOI :10.13341/j.jf r.2013.02.022
生命科学学院馈赠。
1.1.2　细胞株　人结肠癌细胞株Sw1116由长春
肿瘤医院提供。
1.1.3　样品　树舌液体深层发酵浸膏多糖(白
求恩医科大学制药厂),为经除脂 ,醇沉 ,水提 ,除
蛋白处理后的粗多糖 。
1.1.3　主要试剂　LB 液体培养基 、乳杆菌 MRS
培养基 、沙门氏菌葡萄糖基础培养基 、RPMI1640 、
小牛血清及D-Hanks液 。
1.2　方法
1.2.1　GAP 细胞培养液配制　准确称取 GAP
1.0 g 于少量 RPMI1640细胞培养液溶解 , 定容至
100 mL , 用5%NaHCO3调节pH 7.2 ～ 7.4 , 过滤除
菌。无菌条件下 ,按 V(培养液)∶V(小牛血清)=
9∶1加入小牛血清 ,配制 GAP-RPMI1640 细胞培养
液 , 再用含 10%小牛血清的 RPMI1640 稀释 ,使
GAP终质量浓度依次为 50 , 100 , 200 , 300 μg/mL
的 RPMI1640细胞培养液 。
1.2.2　细菌的制备　大肠杆菌 、沙门氏菌经液
体有氧培养法扩大培养 。24 h后收集菌液;乳酸
杆菌兼性厌氧培养 ,扩大培养 ,48 h后收集菌液。
检测菌悬液于 600 nm处的 OD值 ,以 OD值代表
其生长量。分别用含不同浓度 GAP 的 10%小牛
血清 RPMI1640 培养液(包括空白对照)调整菌悬
液浓度为 1×107CFU/mL ,备用 。
1.2.3　细胞爬片的制备　Sw1116细胞按常规方
法培养[ 3] , 在 24孔板中放入盖玻片 , 每孔加入
1×105 个细胞/mL 的细胞悬液 500 mL ,于 37℃、
5%CO2培养箱中孵育24 h , 以备细菌粘附试验 。
1.2.4　细菌粘附试验　用 D-Hanks液洗上述细
胞 3次 , 加入 1 mL 上述制备好的菌悬液(每个浓
度做 3个复孔), 于 37℃、100 r/min摇床孵育1 h ,
吸尽培养液 , 用 D-Hanks 液洗 3 次 , 甲醛固定
0.5 h , 蒸馏水漂洗 , 革兰氏染液染色 。中性树脂
封片 ,干燥后镜下观察 , 每孔随机计数 10个细胞
粘附的细菌数 , 计算 3孔平均值 , 显微照相并记
录结果 ,进行统计学计算[ 4] 。
2　结　果
2.1　细菌粘附试验结果
细菌对 Sw1116 细胞呈局灶性粘附[ 5] , 其特
征为细菌成斑状局限性粘附在 Sw1116细胞表面 ,
并且具有趋向性(图 1)。
A.大肠杆菌对 Sw1116细胞的粘附 Adherence of Escherichia coli in Sw 1116;B.沙门氏菌对 Sw1116细胞的粘附 Adherence of Lactobacillus
in Sw1116;C.乳酸杆菌对 Sw1116细胞的粘附 Adherence of Salmonella in Sw 1116;1, 2 , 3 , 4 , 5.GAP质量浓度分别为 0 , 50 , 100 , 200 ,
300μg/mL GAP dose 0 , 50 , 100 , 200, 300μg/mL
图 1　细菌对 Sw1116细胞粘附试验结果
Fig.1.Test of Sw1116 cell adherence to bacteria
114 菌　物　研　究 2013 年
2.2　GAP对细菌粘附的影响
细菌对Sw1116细胞粘附试验结果表明:不同
浓度的 GAP 对细菌粘附均有抑制作用(表 1),
GAP 对大肠杆菌 、沙门菌的粘附具有抑制作用 ,但
300μg/mL 时 , 效果最明显 , 粘附率降至(22.8±
1.2)、(31.2±1.6)个细菌/细胞 。粘附类型为弥
散性粘附 , 细菌无规则地粘附在 Sw1116 细胞表
面。GAP 对乳杆菌的粘附具有促进作用 。
表 1　GAP浓度对细菌粘附的影响( X±S)
Table 1.Effect of GAP dose on bacterial adherence( X ±S)
GAP 质量浓度/(μg·mL-1)
GAP dose
粘附率(细菌/细胞)
Adherence assay(bacteria/ cell)
大肠杆菌
Escherichia coli
沙门氏菌
Lactobacillus
乳杆菌
Salmonella
0 37.2±2.3 46.4±3.3 33.0±2.6
50 32.6±1.4 41.6±1.8 33.2±3.1
100 32.2±2.0 37.0±2.5＊ 35.8±1.7
200 29.8±1.8＊ 33.4±1.4＊＊ 36.7±2.0
300 22.8±1.2＊＊ 31.2±1.6＊＊ 40.0±1.3＊
　　注:与空白对照(GAP 质量浓度为 0μg/mL)组相比“ ＊”表示差异显著(P<0.05),“ ＊＊”表示差异极显著(P<0.01)
Notes:Compared with control group , “ ＊” shows P<0.05;“＊＊” shows P<0.01
3　讨　论
人体内存在约 1×1014个天然的菌群[ 6] ,主要
寄居胃肠道系统中 ,种类繁多 、数量庞大 、结构复
杂。按照一定比例分布 ,参与机体的营养吸收 、消
化及免疫调节 ,这类菌群被称之为肠道正常菌群 ,
通过调节其动态平衡来维持机体正常功能 ,不致
病且多数为厌氧菌。根据功能不同可将肠道菌分
为三大类[ 7] 。①双向性细菌:双歧杆菌 、肠球菌 、
大肠杆菌等。肠杆菌是革兰氏阴性短杆菌 ,约占
肠道菌中的 1%。能抑制肠道内分解蛋白质的微
生物生长 ,减少蛋白质分解产物产生的危害 ,一般
不致病 ,在一定条件下可引起肠道外感染 ,引起腹
泻。 ②共生性细菌:双歧杆菌 、类杆菌等 。③致病
性细菌:金黄色葡萄球菌 、弧菌等。当机体菌群动
态平衡被打破时 ,即发生疾病 。
细菌感染是从细菌对特定宿主细胞表面组织
的粘附开始的 ,与细菌的定居有关 ,定居因子也称
粘附素 ,由蛋白结构或糖脂成分组成 ,细菌粘附素
可与细胞表面相应的受体相互结合 ,受体多为真
核细胞表面的糖蛋白 。受体与粘附素的特异性结
合时 ,结合部位多为靶细胞上的单糖或寡糖残基
成分。多糖添加后 ,细菌粘附素或受体能与对应
结构的类似物相互结合 ,可以降低粘附素与受体
间的结合率 ,这些类似物与粘附素或受体越相近 ,
则抑制作用越强 。在本试验中 ,树舌液体深层发
酵浸膏多糖能够抑制大肠杆菌 、沙门氏菌的细胞
粘附能力 ,促进乳杆菌的粘附能力 ,这提示在大肠
杆菌的细胞粘附机制中 ,可能存在与树舌液体深
层发酵浸膏多糖结构类似的粘附素或受体结构 ,
所以 ,树舌液体深层发酵浸膏多糖在调节肠道微
生态方面可能具有潜在的药用价值 ,对于更好地
开发利用GAP的药用价值具有积极的意义。
参考文献:
[ 1] 　曹艳菲 ,宋高臣 ,刘欣 ,于英君.树舌多糖 GF抗肿瘤的研究
进展[ J] .牡丹江医学院学报 , 2007 ,28(3):69-72.
[ 2] 　刘晓晴 ,余涛 ,宋慧 , 等.树舌发酵浸膏粗多糖对 Sw1116 细
胞的生长抑制作用[ J] .吉林农业大学学报 , 2011, 33(6):617-
619.
[ 3] 　鄂征.组织培养和分子细胞学技术[M] .北京:北京出版社 ,
1999:78.
[ 4] 　Evance D G , Graham D Y.Recept or-mediat ed adher ence of-
Campy lobacter pylorito muse Y-1 adrenal , cell monol ayers [ J] .
Infect Immun , 1989, 57:2272-2278.
[ 5] 　徐建国.分子医学细菌学[ M] .北京:科学出版社 ,2000:208.
[ 6] 　缪月秋 ,吴婷 ,张卫明 ,等.胡芦巴多糖酸解和酶解产物对肠
道菌群体外生长影响的实验研究[ J] .食品工业科技 , 2007
(7):62-68.
[ 7] 　王尤丽.低聚半乳糖调节小鼠肠道菌群的作用[ D] .郑州:郑
州大学 , 2012.
(责任编辑:刘兆娟)
115　第 11卷　第 2 期 胡静等:树舌液体深层发酵浸膏多糖在粘附中的作用