全 文 ：○实验研究 ○
鬼毛针多糖对小鼠细胞免疫功能的影响
王惠国1 ,关洪全1■
,赵依娜2 ,李忻红1
(1.辽宁中医药大学病原生物与免疫教研室 , 辽宁 沈阳 110032;2.齐齐哈尔医学院 , 黑龙江 齐齐哈尔 161005)
【摘要】 目的 研究鬼毛针多糖对小鼠细胞免疫功能的影响。方法 实验小鼠分为 4 组 ,经腹腔注射(i.p)给予不同
剂量(高 、中、低)的鬼毛针多糖 ,对照组给予等量的生理盐水 ,每天给药 1次 , 连结给药 14d。给药结束后 ,检测各组小鼠细
胞免疫功能:用形态学方法检测各组小鼠在植物血凝素(PHA)诱导下淋巴细胞的转化率;MTT法检测各组小鼠脾脏T 淋巴
细胞增殖能力;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清中 IL-2 水平。组间比较采用 t 检验。结果 腹腔注射鬼毛针多
糖后 ,小鼠的淋巴细胞转化率 、血清中 IL-2水平 、脾脏 T淋巴细胞的增殖能力均高于对照组 ,其中以中、高剂量组升高尤为
明显 ,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 中 、高剂量的鬼毛针多糖具有提高小鼠细胞免疫功能的作用。
【关键词】 鬼毛针多糖;淋巴细胞转化率;T 细胞增殖力;IL-2
【中图分类号】 R 281.5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1004-0501(2007)10-1085-02
Effect of Marasmius Androsaceus Polysaccharide on cell immunologic function in mice.Wang Huiguo1 , Guan Hongquan1 ,
Zhao Yina
2 , et al.1.Department of Microbiology and Immunity , Liaoning University of Traditional Chinease Medicine , Shenyang , Liaon-
ing 110032;2.Qiqihaer Medical University , Qiqihaer , Helongjiang 161005 , China
【Abstract】 Objective To research the immune regulating effect of marasmius androsaceus polysaccharide on cell immunologic
function in mice.Methods Divide the experimental mice into four groups , each group i.p with different dosage of marasmius an-
drosaceus polysaccharide(high ,middling , low), the group of comjparison i.p the same volume saline water once a day.14 days after , ex-
amine the mouse cell immunologic function.Observe the lymphocyte transform by microscope , test the ability of the spleen T cell prolifera-
tion by MTT;measure the IL-2 level in the serum with ELISA.Adopt t test for statistic.Results The group of i.p middling and high
dose of marasmius androsaceus poly saccharide , the rate of lymphocyte transform;the ability of the spleen T cell proliferation , the level of
IL-2 in the serum are all higher than the comparative group(P<0.05).Conclusion The middling and high dose of marasmius an-
drosaceus polysaccharide can increase the cell immunologic funtion of the mice.
【Key words】 marasmius androsaceus polysaccharide;rate of lymphocyte transform;ability of the spleen T cell proliferation;IL-2
20世纪 80年代后多种真菌多糖的抑瘤活性被发
现以来 ,真菌多糖作为一类新型药物引起越来越多的
关注 ,成为一个非常活跃的研究领域。目前以证实多
种真菌多糖可以通过激活 T 、B 淋巴细胞 、活化巨噬细
胞和 NK 细胞 、调节细胞因子分泌等作用对免疫系统
发挥多方面的调节活性[ 1] 。我国真菌资源丰富 ,但对
药用真菌的研究还很不深入 ,目前应用到临床的具有
自主知识产权的新产品较少 。鬼毛针(Marasmius an-
drosaceus Fr.)又称安络小皮伞 、茶褐小皮伞 ,系担子菌
纲 、伞菌目 、白蘑科 、小皮伞属真菌[ 2] 。现代医学研究
表明:鬼毛针在镇痛方面呈现突出的药理功效[ 3 ,4] ,但
迄今为止 ,有关鬼毛针多糖的免疫调节活性 ,国内外报
道较少[ 5] 。本研究采用形态学观察 、MTT 、ELISA实验
方法 ,研究鬼毛针多糖对小鼠细胞免疫功能的影响和
免疫药用价值。
1 材料与方法
1.1 主要药品和试剂 、鬼毛针多糖 ,按照文献报道制
备[ 6] 。RPMI1640细胞培养液购自 Hyclone ,小牛血清
购自Gibco 公司 ,酸性异丙醇购自苏州博洋化学品有
限公司 ,植物血凝素(PHA)、噻唑蓝(MTT)购自 sigma
公司 ,小鼠 IL-2ELISA试剂盒购于深圳晶美生物公司。
1.2 方法
1.2.1 实验动物分组及给药:昆明小鼠 80 只 , (20±
2)g ,6 ～ 8周 ,雌雄各半 ,由中国医科大学实验动物中
心提供。上述小鼠随机分为 4组:A组为正常对照组
(i.p 生理盐水 0.2ml/d);B组为鬼毛针多糖低剂量组
[ i.p鬼毛针多糖 5mg/(kg·d)] ;C 组为鬼毛针多糖中
剂量组[ i.p鬼毛针多糖 10mg/(kg·d)] ;D组为鬼毛针
多糖高剂量组[ i.p鬼毛针多糖 20mg/(kg·d)] ,于给药
·1085·四川医学 2007年 10月第 28卷(第 10期) Sichuan Medical Journal , 2007, Vol.28 , No.10
■ 通讯作者
DOI :10.16252/j.cnki.issn1004-0501-2007.10.002
14d后进行细胞免疫功能检测。
1.2.2 小鼠淋巴细胞转化率的测定:于用药第 11天 ,
每组取出 10只小鼠 ,每日给药同时肌注 PHA 8mg/kg ,
最后 1次给药后 2h ,小鼠剪尾取血 ,推片 ,姬母萨-瑞士
染液染色 ,油镜观察 ,计算外周血淋巴细胞转化率 。
1.2.3 小鼠血清 IL-2水平的测定:小鼠摘眼球取血 ,
1000r/min离心 ,取上层血清 ,按试剂盒说明操作 ,检测
各组小鼠血清中 IL-2的水平 。
1.2.4 小鼠 T淋巴细胞增殖能力的测定:无菌取脾 ,
将脾撕碎 ,经 200目筛网过滤 ,用红细胞裂解液裂解红
细胞后 ,用 Hanks液洗 3次 ,调整细胞浓度为 2×106/
min。加入 24孔培养板中 ,每孔 1ml(每只鼠占 2孔),
其中 1孔加浓度为100μg/ml PHA 液 50μl ,另 1孔不加
PHA作为对照 ,置 5%CO2 ,37℃培养 72h 。培养结束前
4h ,每孔轻轻吸去上清液 0.7ml ,加入 0.7ml不含小牛
血清 RPMI 1640 培养液 , 同时每孔加入 MTT(5g/L)
50μl ,继续培养 4h ,每孔加入 1ml酸性异丙醇 ,完全溶
解紫色结晶后 ,分装到 96孔板中 ,每孔分装 3孔作为
平行样 ,在酶标仪 570nm 波长处测定光密度值 。用加
PHA孔的光密度值减去不加 PHA孔的光密度值代表
T 淋巴细胞的增殖能力。
1.3 统计学方法:用 SPSS10.0软件处理实验数据 ,结
果用 x ±s表示 ,组间比较采用 t 检验 , P <0.05为差
异有统计学意义 。
2 结 果
腹腔注射鬼毛针多糖 14d后 ,小鼠外周淋巴细胞
转化率 、小鼠脾脏T 淋巴细胞增殖能力均高于对照组 ,
见表 1。其中以中 、高剂量组升高尤为明显 ,差异具有
统计学意义(P<0.05), IL-2是一种可以通过自分泌或
旁分泌对自身发挥正向免疫调节作用的细胞因子[ 7] 。
B 、C 、D组小鼠血清中 IL-2水平均高于 A组 ,差异具有
统计学意义 ,见表 1 ,提示鬼毛针多糖可以通过提高小
鼠血清中 IL-2水平从而起到提高机体免疫力的作用 。
表 1 鬼毛针多糖对小鼠细胞免疫功能的影响
组别 淋巴细胞转化率(%) 血清 IL-2水平(OD) 脾脏 T淋巴细胞增殖能力(OD)
A组 39.33±3.91 0.315±0.021 0.422±0.061
B组 42.11±7.72 0.474±0.062① 0.435±0.037
C组 54.33±5.94① 0.582±0.073① 0.621±0.104①
D组 50.44±7.27① 0.670±0.064① 0.579±0.049①
注:与 A组比较 , ①P<0.05
3 讨 论
食用菌多糖与动物和植物多糖相比具有分布广 、
易培养 、世代短 、生物量大等优点而成为多糖类新药研
发的一个热点。在日本 ,香菇多糖已用于肿瘤等疾病
的免疫治疗;巴西蘑菇多糖 、裂褶菌多糖等也已在欧美
临床上得到广泛应用 。我国的真菌多糖研究也有很大
的进展 ,但同时也存在一些不容忽视的问题:在真菌类
药物研究范围方面 ,对药用真菌的研究还很不深入 ,我
国真菌资料丰富 ,刘波著的《中国药用真菌》收集了
117种药用真菌 ,但目前我国仅对少数真菌进行了深
入探讨 ,其他真菌的药用价值亟待进一步发现和开发。
鬼毛针为我国民间传统的药用真菌 ,本次实验研
究结果显示:鬼毛针多糖能增强小鼠细胞免疫功能。
给小鼠 i.p鬼毛针多糖 14d后 ,鬼毛针多糖能明显增
强小鼠淋巴细胞的转化率 、促进小鼠淋巴细胞增殖能
力 、增加小鼠血清中 IL-2的水平 ,因此我们认为鬼毛
针多糖是一种具有提高小鼠细胞免疫功能的药物 ,具
有较好的药用价值 ,是极具开发潜力的和应用前景的
食用菌多糖 ,因此 ,今后应对鬼毛针多糖免疫活性进行
详细的研究 ,为鬼毛针的进一步开发提供更多的依据。
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(收稿日期:2007-04-18)
·1086· 四川医学 2007年 10月第 28卷(第 10期) Sichuan Medical Journal ,2007 , Vol.28, No.10