全 文 ：红毛五加叶水提液对羟自由基清除率的测定
杨鑫嵎1，杨文宇1* ，叶 强2 (1．西华大学生物工程学院，四川成都 610039;2．成都中医药大学药学院，四川成都 610075)
摘要 ［目的］测定红毛五加叶水提液对羟自由基的清除率并评价其抗氧化活性。［方法］利用 Fenton反应产生羟自由基，用二甲亚砜
(DMSO)捕获羟自由基并与之反应生成甲醛，甲醛经 2，4 －二硝基苯肼衍生成相应的苯腙，通过 HPLC检测加或不加样品时该苯腙的峰
面积的变化，从而计算红毛五加叶水提液对羟自由基的清除率。色谱条件:色谱柱为 Diamonsil C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)，流动相为
乙腈 －水(65∶ 35，V/V)，流速为 0． 8 ml /min，检测波长为 365 nm。［结果］Fenton反应体系为 2． 0 mmol /L Fe2 + + 107． 7 mmol /L H2O2 +
225． 2 mmol /L DMSO;在该反应体系中红毛五加叶水提液清除羟自由基的 IC50为 0． 67 mg /ml(即每 1 ml含药材量为 0． 67 mg);红毛五加
叶总皂苷是清除羟自由基的活性成分。［结论］红毛五加叶水提液能够清除 Fenton反应产生的羟自由基，具有较强的抗氧化活性。
关键词 红毛五加(Acanthopanax giraldii Harms．);Fenton反应;HPLC;抗氧化
中图分类号 R282． 2 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)35 －21653 －04
Determination on Scavenging Activity of Acanthopanax giraldii Leaves Aqueous Extract to Hydroxyl Radicals
YANG Xin-yu et al (School of Bioengineering，Xihua University，Chengdu，Sichuan 610039)
Abstract ［Objective］The aim was to determine the hydroxyl radicals scavenging capacity by the leaves aqueous extract of Acanthopanax giral-
dii Harms． for its antioxidant activity evaluation．［Method］The proposed method employed the reaction between hydroxyl radicals generated by
the Fenton system and dimethyl sulfoxid(DMSO)to form formaldehyde，which then reacted with 2，4-dinitrophenylhydrazine (DNPH)to produce
the corresponding hydrazone (HCHO-DNPH)． The hydroxyl radicals scavenging rate was calculated by the HPLC peak areas of HCHO-DNPH in
the above reaction system with or without A． giraldii as a scavenger． The chromatographic conditions included a Diamonsil C18 column(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm)，a mobile phase consisting of acetonitrile-water (65∶ 35，V/V)，a flow rate of 0． 8 ml /min and ultraviolet detection at 365 nm．
［Result］The optimized Fenton system for HCHO-DNPH generation was 2． 0 mmol /L Fe2 + + 107． 7 mmol /L H2O2 + 225． 2 mmol /L DMSO． The
half-scavenging concentration (IC50)of the A． giraldii leaves aqueous extract was 0． 67 mg /ml (i． e． 0． 67 mg crude leaves to 1 ml volumes)． The
total saponins of A． giraldii leaves were one part of active ingredients．［Conclusion］The A． giraldii leaves aqueous extract is a potent hydroxyl
radicals scavenger with potential antioxidant activity．
Key words Acanthopanax giraldii Harms．;Fenton reaction;HPLC;Antioxidation
基金项目 四川省教育厅科研基金项目(10zc057) ;西华大学重点科研
基金项目(Z0820503)。
作者简介 杨鑫嵎(1986 － ) ，男，四川乐山人，在读硕士，从事天然产物
的提取及其功能研究。* 通讯作者，中药学博士，副教授，
从事中药及天然药物活性成分研究，E-mail:youngwenyu@
hotmail． com。
鸣 谢 试验同时得到西华大学“中药生物技术二级试验室(川中医
药函 2009-119)”和“天然药物研究与工程校重点试验室
(XZD0821-09-1)”的资助。
收稿日期 2011-09-02
红毛五加(Acanthopanax giraldii Harms．)在四川阿坝藏
族羌族自治州有较多分布，并有栽培，为《四川省中药材标
准》(1987)收载品种。红毛五加以茎皮入药，具有祛风除湿
和强筋壮骨的功效。现代研究表明其有抗肿瘤、增强免疫力
和抗氧化等活性［1 －2］。五加叶作药用见载于《日华子本草》:
“治皮肤风，可作蔬菜食。”长期以来，阿坝当地羌族和藏族居
民习惯以红毛五加叶作为茶叶饮用，认为其有祛风通络、强
身健体和延年益寿等作用。红毛五加茎皮含有皂苷、多糖及
一些酚性化合物，其叶中也含有这些成分［3 －5］。研究表明五
加属(Acanthopanax Miq．)多种药用植物的叶及茎皮多具有
较强的抗氧化活性，抗氧化作用与其功效有密切关系［6 －11］。
天然产物抗氧化作用的机理之一是清除羟自由基;机体在一
定的病理条件下能够产生较多的羟自由基，多种疾病与羟自
由基所致的氧化性损伤有关［12 －14］。目前有关红毛五加叶的
抗氧化作用鲜有报道，试验借鉴 Tai等的方法，用 HPLC对红
毛五加叶的清除羟自由基活性进行了分析［15］。该方法的基
本原理是利用 Fenton反应产生羟自由基，羟自由基与二甲亚
砜反应生成甲醛(HCHO) ，甲醛经 2，4-二硝基苯肼(DNPH)
衍生后生成腙(HCHO-DNPH) ，通过 HPLC 分析反应体系中
加或不加待测样品时 HCHO － DNPH峰面积的变化，测得样
品的羟自由基清除率，以此来评价样品的抗氧化活性，以期
为红毛五加叶的抗氧化作用的进一步研究提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。红毛五加叶，采于四川省茂县羌寨农副
土特产品开发有限公司红毛五加栽培基地，经鉴定为 Acan-
thopanax giraldii Harms．，晒干后使用。
1． 1． 2 主要仪器。依利特 P-200 II 高效液相色谱仪(含
UV200 II紫外检测器、EC2000 色谱数据处理系统) ，购自大
连依利特分析仪器有限公司;DENVER TB-214 电子天平，购
自美国丹佛仪器公司;HH-S数显恒温水浴锅，购自郑州佳创
仪器设备有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。抗坏血酸(分析纯) ，购自成都金山化学
试剂有限公司;二甲亚砜、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)、30%过
氧化氢、甲醛溶液(37%)、2，4-二硝基苯肼、甲醇、乙醇、盐
酸、镁粉、醋酐、α-萘酚、浓硫酸均为分析纯，购自成都科龙化
学试剂有限公司;中性氧化铝(化学纯) ，购自成都科龙化学
试剂有限公司;乙腈(色谱纯) ，购自美国 Tedia公司;水为重
蒸水。
1． 2 方法
1． 2． 1 Fenton 反应体系储备液的配制。硫酸亚铁储备溶
液。精密称得硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)0． 139 0 g，置 50 ml量
瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成 10． 0 mmol /L 的溶液备
用。过氧化氢储备溶液。精密吸取 2． 0 ml浓度 30%过氧化
氢溶液，置 100 ml 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成
195． 8 mmol /L的溶液，备用。二甲亚砜储备溶液。精密吸取
1． 0 ml二甲亚砜，置 50 ml 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(35):21653 － 21656，21659 责任编辑 石金友 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.35.094
制成 281． 5 mmol /L 的溶液备用。以上储备溶液，根据试验
需要稀释成适当浓度使用。
1． 2． 2 红毛五加叶水提液的制备及化学成分定性分析。
1． 2． 2． 1 水提液的制备。取红毛五加叶药材，粉碎(过 80
目筛) ，称取 5． 500 g，加水 1 000 ml，回流 1 h，滤过，精密量取
滤液10． 0 ml，置50 ml量瓶中，用水稀释至刻度，得每1 ml含
药材量为 1． 1 mg的红毛五加叶水提液。
1． 2． 2． 2 三氯化铁反应。取红毛五加叶水提液 2． 0 ml，加
三氯化铁试液 1滴，观察现象并记录。
1． 2． 2． 3 盐酸 －镁粉反应。取红毛五加叶水提液 5． 0 ml，
水浴挥干，加无水甲醇 5． 0 ml 溶解，加镁粉 1． 000 g，滴加盐
酸，观察现象并记录。
1． 2． 2． 4 α-萘酚 －浓硫酸反应。取红毛五加叶水提液 50． 0
ml，浓缩至 10． 0 ml，加乙醇 40． 0 ml，放置 24 h，滤取沉淀，于
试管中加水 5． 0 ml使溶解，加 α-萘酚试液 1． 0 ml，沿管壁加
浓硫酸 2． 0 ml，观察现象并记录。
1． 2． 2． 5 醋酐 －浓硫酸反应。取红毛五加叶水提液 50． 0
ml，过中性氧化铝小柱，流出液挥干，加无水甲醇 10． 0 ml，滤
过，滤液挥干，加醋酐 2． 0 ml 使溶解，加浓硫酸 1． 0 ml，观察
现象并记录。
1． 2． 3 HPLC分析。
1． 2． 3． 1 色谱条件［16］。色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱
Diamonsil C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈 －水
(65∶ 35，V /V) ;检测波长为 365 nm;流速为 0． 8 ml /min;进样
量为 20 μl。
1． 2． 3． 2 系统适应性试验。将对照品、维生素 C、红毛五加
叶水提液和红毛五加叶总皂苷按照“1． 2． 3． 1”中色谱条件进
行分析。
注:A．对照;B．维生素 C;C．红毛五加叶水提液;D．红毛五加叶总皂苷;1． DNPH;2． HCHO-DNPH。
Note:A． Reference;B． Vitamin C;C． A． giraldii leaves aqueous extract;D． Total saponins from the leaves of A． giraldii;1． DNPH;2． HCHO-DNPH．
图 1 反应体系色谱图
Fig． 1 Chromatogram of reaction system
1． 2． 3． 3 方法学考察。①线性关系的考察。配制浓度为
322． 7 nmol /L的甲醛对照品溶液，分别取 0． 1、0． 5、1． 0、1． 5
和 2． 0 ml，加水使成 2． 0 ml，然后加 0． 1 ml浓度 10． 0 mmol /L
的 2，4-二硝基苯肼乙腈溶液，置 60 ℃水浴中反应 20 min，取
出，冰浴冷却，加乙腈使成5． 0 ml，摇匀，精密吸取20 μl，注入
液相色谱仪，测定HCHO-DNPH峰面积，用峰面积(Y)对甲醛
量(X，nmol)进行线性回归，计算回归方程。②精密度试验。
取 1． 0 ml 浓度为 322． 7 nmol /L的甲醛溶液，同法平行测定 6
次，计算 HCHO-DNPH 峰面积的 RSD。③稳定性试验。取
1． 0 ml浓度为322． 7 nmol /L的甲醛溶液，按照“①”操作进行
反应，反应完毕后，反应液每隔 30 min进样测定，共 6 次，计
算 HCHO-DNPH峰面积的 RSD。
1． 2． 4 Fenton反应体系试验条件的考察。
1． 2． 4． 1 Fe2 +浓度对衍生物峰面积的影响。取 6 支具塞试
管，各加入 1． 0 ml二甲亚砜储备液，分别加 1． 0 ml浓度分别
为 0． 5、1． 0、1． 5、2． 0、2． 5和 3． 0 mmol /L的 Fe2 +溶液，再分别
加 1． 0 ml浓度为 97． 9 mmol /L的过氧化氢溶液，摇匀，置 37
℃水浴中反应 30 min后，各加 0． 5 ml浓度为 10． 0 mmol /L 2，
4-二硝基苯肼乙腈溶液，然后置 60 ℃水浴中反应 20 min，取
出，冰浴冷却，加乙腈使成5． 0 ml，摇匀，精密吸取20 μl，注入
液相色谱仪，测定 HCHO-DNPH 峰面积，分析不同浓度的
Fe2 +对衍生物峰面积的影响。
1． 2． 4． 2 过氧化氢浓度对衍生物峰面积的影响。取 6 支具
塞试管，各加入 1． 0 ml二甲亚砜储备液和 1． 0 ml浓度为 2． 0
mmol /L 的 Fe2 + 溶液，再分别加 1． 0 ml 浓度分别为 9． 8、
39． 2、78． 3、107． 7、117． 5 和 137． 1 mmol /L的过氧化氢溶液，
摇匀，同法操作，测定 HCHO-DNPH峰面积，分析不同浓度的
过氧化氢对衍生物峰面积的影响。
1． 2． 4． 3 二甲亚砜浓度对衍生物峰面积的影响。取 6 支具
塞试管，分别加入 1． 0 ml 浓度分别为 2． 8、5． 6、28． 1、112． 6、
225． 2和 281． 5 mmol /L的二甲亚砜溶液，再各加 1． 0 ml浓度
为 2． 0 mmol /L的 Fe2 +溶液和 1． 0 ml 浓度为 107． 7 mmol /L
的过氧化氢，摇匀，同法操作，测定 HCHO-DNPH 峰面积，分
析不同浓度的二甲亚砜对衍生物峰面积的影响。
45612 安徽农业科学 2011 年
1． 2． 5 红毛五加叶水提液对羟自由基清除率的测定［15，16］。
取 6支具塞试管，加 1． 0 ml 浓度为 225． 2 mmol /L的二甲亚
砜，再分别加 0、0． 2、0． 5、0． 6、0． 75和 1． 0 ml (相当于原药材
0、0． 22、0． 55、0． 66、0． 825 和 1． 1 mg;添加 0 ml 者为空白对
照)红毛五加叶水提液，再加 1． 0 ml 浓度为 2． 0 mmol /L 的
Fe2 +溶液和 1． 0 ml 浓度为 107． 7 mmol /L的过氧化氢，按照
上述方法反应、测定。另取 2． 8 mmol /L抗坏血酸水溶液 1． 0
ml，同法操作、测定(作为阳性对照)。此外，按“1． 2． 2． 5”制
备红毛五加叶总皂苷，配制成 1． 0 mg /ml 的溶液，同法操作、
测定。根据空白对照的 HCHO-DNPH峰面积(A1)和添加样
品时 HCHO-DNPH峰面积(A2)计算样品对羟自由基的清除
率，计算公式为清除率(%)=(A1 － A2)/A1 × 100。
1． 2． 6 红毛五加叶水提液清除羟自由基的机理初步分析。
通过分别考察反应体系中各要素添加与否对 DNPH 和
HCHO-DNPH峰面积(ADNPH、AHCHO-DNPH)的影响，对红毛五加
叶水提液清除羟自由基的机理进行初步的分析。
2 结果与分析
2． 1 红毛五加叶水提液的制备及化学成分定性分析 三氯
化铁反应结果显示，溶液颜色由黄色变为墨绿色，且有沉淀，
表明有酚性成分存在。盐酸 －镁粉反应结果显示，有气泡产
生、溶液由黄色变为粉红色，表明有黄酮类成分存在。α-萘
酚 －浓硫酸反应结果显示，在分层处溶液呈紫红色，表明有
多糖类成分存在。醋酐 －浓硫酸反应结果显示，溶液由无色
变为黄棕色，结合文献，可确定存在皂苷类成分［3］。
2． 2 方法学考察 ①系统适应性试验。由图 1 可知，供试
品色谱与对照品色谱在相同的保留时间有对应的吸收峰。
②线性关系的考察。用峰面积(Y)对甲醛量(X，nmol)进行
线性回归，计算回归方程得 Y = 3 778． 2 X + 209． 08，r =
0． 999 6，表明甲醛在 64． 54 ～ 1 290． 8 nmol /L 浓度范围内线
性关系良好。③精密度试验。计算 HCHO-DNPH 峰面积的
RSD为 2． 85%，表明精密度良好。④稳定性试验。计算
HCHO-DNPH峰面积的 RSD为 2． 15%，表明稳定性良好。
2． 3 Fenton反应体系试验条件的考察
2． 3． 1 Fe2 +浓度对衍生物峰面积的影响。由图 2可知，Fe2 +
浓度过高或过低均不利于 HCHO-DNPH的产生，所添加 Fe2 +
的浓度以 2． 0 mmol /L为宜。
图 2 Fe2 +浓度对 HCHO-DNPH峰面积的影响
Fig． 2 Effect of Fe2 + concentration on the peak area of HCHO-
DNPH
2． 3． 2 过氧化氢浓度对衍生物峰面积的影响。由图 3 可
知，过氧化氢的浓度以 107． 7 mmo /L为宜。
图 3 过氧化氢浓度对 HCHO-DNPH峰面积的影响
Fig． 3 Effect of H2O2 concentration on the peak area of HCHO-
DNPH
2． 3． 3 二甲亚砜浓度对衍生物峰面积的影响。由图 4 可
知，二甲亚砜浓度在 112． 6 mmol /L以上时，HCHO-DNPH 峰
面积趋于稳定，为保证反应完全，二甲亚砜以稍过量为好，故
试验最终选择添加 225． 2 mmol /L二甲亚砜进行反应。
图 4 二甲亚砜浓度对 HCHO-DNPH峰面积的影响
Fig． 4 Effect of DMSO concentration on the peak area of
HCHO-DNPH
2． 4 红毛五加叶水提液对羟自由基清除率的测定 各反应
体系的 HPLC图谱见图 1。阳性对照抗坏血酸对羟自由基的
清除率为 91． 4%。以红毛五加叶药材在反应体系中的折合
浓度(药材量，mg /ml)为横坐标、对羟自由基的清除率为纵
坐标作图。结果如图 5所示，随着红毛五加叶水提液浓度的
增加，对羟自由基的清除率增大，但是当浓度增大到一定程
度后，清除率的变化趋于平缓。用Logit法计算红毛五加叶
水提液对羟自由基的半数清除率(IC50)
［17］，得IC50 = 0． 67
图 5 红毛五加叶水提液对羟自由基的清除率
Fig． 5 Elimination rate of A． giraldii leaves aqueous extract to-
wards ·OH
mg /ml。红毛五加叶总皂苷(1． 0 mg /ml)为清除羟自由基的
活性成分，对羟自由基的清除率为 72． 4%。
5561239卷 35期 杨鑫嵎等 红毛五加叶水提液对羟自由基清除率的测定
2． 5 红毛五加叶水提液清除羟自由基的机理初步分析 由
表 1可知，样品 1 ～ 5 号中，Fe2 +、H2O2、DMSO和红毛五加叶
水提液单独均不会与 DNPH发生反应，但 Fe2 +、H2O2 和 DN-
PH共反应(样品 6 号)后，DNPH面积明显减小，表明 DNPH
也会直接与羟自由基发生部分反应(试验条件下羟自由基将
消耗约 30%的 DNPH)。样品 8 ～ 10号，在 Fe2 + -H2O2-DMSO
反应体系中添加抗坏血酸、红毛五加叶水提液、红毛五加叶
总皂苷后，HCHO-DNPH 峰面积较对照(样品 7 号)明显下
降，表明他们均能够使由羟自由基与 DMSO反应生成的甲醛
量减少;但样品 8号、9 号的 DNPH峰面积也明显下降，表明
抗坏血酸或红毛五加叶水提液在反应体系中与 DNPH发生
了其他反应，而样品 10号的 DNPH峰面积变化不大，表明红
毛五加叶水提液中与 DNPH发生其他反应的成分不是皂苷
类物质。
表 1 反应体系各要素对 DNPH和 HCHO-DNPH峰面积的影响
Table 1 Effect of each factor of the reaction system on the peak area of DNPH and HCHO-DNPH
试验号
Test No． Fe
2 + H2O2 DMSO DNPH
抗坏血酸
Ascorbic acid AEAG
* TSAG＊＊ ADNPH AHCHO-DNPH
1 0 0 0 0． 5 0 0 0 12 726． 09 －
2 1． 0 0 0 0． 5 0 0 0 12 457． 21 －
3 0 1． 0 0 0． 5 0 0 0 12 867． 47 －
4 0 0 1． 0 0． 5 0 0 0 12 661． 22 －
5 0 0 0 0． 5 0 1． 0 0 12 584． 21 －
6 1． 0 1． 0 0 0． 5 0 0 0 8 988． 40 －
7 1． 0 1． 0 1． 0 0． 5 0 0 0 9 430． 59 1 260． 79
8 1． 0 1． 0 1． 0 0． 5 1． 0 0 0 475． 11 108． 31
9 1． 0 1． 0 1． 0 0． 5 0 1． 0 0 1 136． 45 294． 13
10 1． 0 1． 0 1． 0 0． 5 0 0 1． 0 9 254． 75 348． 04
注:* AEAG:红毛五加叶水提液;＊＊TSAG:红毛五加叶总皂苷。
Note:* AEAG． A． giraldii leaves aqueous extract;＊＊TSAG． Total saponins of A． giraldii leaves．
3 讨论
测定天然产物对羟自由基的清除率常采用分光光度
法［18］。由于植物提取物含有多种成分，并且在 Fenton 反应
体系中可能会发生比较复杂的反应，因此，用分光光度法测
定时往往易受干扰。与分光光度法相比，HPLC 法能够对捕
获羟自由基的特定产物衍生物进行分离和直接测定，具有更
高的灵敏度和准确度［19］。羟自由基清除率也可通过 HPLC
分析芳香酸类成分如苯甲酸、水杨酸等与羟自由基的反应产
物而得以测定［20］，但由于他们的最终反应产物通常较多，且
不易获得反应产物的对照品，故其应用受到一定限制;相比
之下，DMSO捕获羟自由基的产物甲醛更易于测定，且 DMSO
与羟自由基的高反应性(k =7． 1 × 109 mol /L·s)有利于保证
测定结果具有较好的重复性和可靠性［21］。
DMSO捕获羟自由基并产生甲醛的主要机理是·OH +
(CH3)2SO→CH3SOOH + ·CH3;·CH3 + O2→CH3OO·;
2 CH3OO·→ HCHO + CH3OH + O2
［15］。反应过程中产生了
多种自由基，这些自由基也可能会与抗坏血酸、红毛五加叶
化学成分和 DPNH发生较复杂的反应;结合试验数据可知，
反应体系中，消耗 DPNH的因素应当包括自由基、甲醛和样
品。因此，试验时应控制样品的浓度，使 HCHO-DNPH 的产
生量在线性范围之内。经试验表明，反应体系中红毛五加叶
浓度超过 3． 0 mg /ml时，HPLC图谱中将出现很多杂峰，而检
测不到 DPNH和 HCHO-DNPH。
反应体系反应完毕后，添加了适量乙腈，目的是增加产物
HCHO-DNPH的溶解度以便于 HPLC分析［22］。由于无水甲醇
能够被氧化为甲醛而干扰分析，因此不能添加无水甲醇助溶。
参考文献
［1］WANG J Z，TSUMURA H，SHIMURA K，et al． Antitumor activity of poly-
saccharide from a Chinese medicinal herb，Acanthopanax giraldii Harms
［J］． Cancer Lett，1992，65(1):79 －84．
［2］王祝伟，孙毓庆．红毛五加药理作用研究进展［J］．沈阳药科大学学报，
2003，20(1):65 －69．
［3］程东亮，邵宇，杨立．红毛五加叶的三萜皂甙［J］．植物学报，1994，36
(1):75 －79．
［4］张莅峡，刘泓．红毛五加茎皮、叶及果实挥发油的 GC － MS 比较分析
［J］．中国中医基础医学杂志，2001，7(5):344 －347．
［5］王祝伟，张莅峡，孙毓庆．中药红毛五加根、茎、叶和果实的 LC/DAD/
MS2 分析［C］/ /卢佩章，张玉奎，许国旺．第十五次全国色谱学术报告
会文集(下册)．郑州:［出版者不详］，2005:462 －463．
［6］SITHISARN P，JARIKASEM S． Antioxidant activity and phenolic content of
Acanthopanax trifoliatus and Toddalia asiatica［J］． Kasetsart J (Nat Sci)，
2010，44(2):234 －242．
［7］PARK H R，PARK E，RIM A R，et al． Antioxidant activity of extracts from
Acanthopanax senticosus［J］． Afr J Biotechnol，2006，5(23):2388 －2396．
［8］CHEN R，LIU Z，ZHAO J，et al． Antioxidant and immunobilological activity
of water － soluble polysaccharide fractions purified from Acanthopanax sen-
ticosu［J］． Food Chem，2011，127(2):434 －440．
［9］KIM J Y，YANG K S． Screening of antioxidant activity of Acanthopanax
species in vitro［J］． J Pharm Soc Korea (Yakhak Hoeji)，2003，47(5):361
－364．
［10］WANG X，HAI C X，LIANG X，et al． The protective effects of Acantho-
panax senticosus Harms aqueous extracts against oxidative stress:Role of
Nrf2 and antioxidant enzymes［J］． J Ethnopharmacol，2010，127(2):424 －
432．
［11］孟庆繁，于笑坤，徐睦芸，等．刺五加多糖的提取及其抗氧化性［J］．吉
林大学学报:理学版，2005，43(5):683 －686．
［12］SCHMIDT N，FERGER B． The biogenic trace amine tyramine induces a
pronounced hydroxyl radical production via a monoamine oxidase depend-
ent mechanism:an in vivo microdialysis study in mouse striatum［J］． Brain
Res，2004，1012(1 /2):101 －107．
［13］WANG S，LEONARD S S，YE J，et al． The role of hydroxyl radical as a
messenger in Cr(VI)-induced p53 activation［J］． Am J Physiol Cell Phys-
iol，2000，279(3):868 －875．
［14］CHEN C L，CHI C W，LIU T Y． Hydroxyl radical formation and oxidative
DNA damage induced by areca quid in vivo［J］． J Toxicol Environ Health
A，2002，65(3 /4):327 －336．
［15］TAI C，PENG J F，LIU J F，et al． Determination of hydroxyl radicals in ad-
vanced oxidation processes with dimethyl sulfoxide trapping and liquid
chromatography［J］． Anal Chim Acta，2004，527(1):73 －80．
［16］陈笑梅，施旭霞，朱卫建，等．高效液相色谱直接测定甲醛衍生物反应
条件的研究［J］．分析化学，2004，32(11):1421 －1425．
［17］MCPHERSON G A． Computer － assisted analysis of complex concentration
－ response data［J］． J Pharmacol Methods，1985，13(2):125 －134．
［18］CAILLET S，YU H，LESSARD S，et al． Fenton reaction applied for screen-
ing natural antioxidants［J］． Food Chem，2007，100(2):542 －552．
(下转第 21659页)
65612 安徽农业科学 2011 年
表 2 10批辽细辛样品共有指纹峰相对峰面积比值
Table 2 Relative peak area ratio of common fingerprint peak from ten batch of RADIX ET RHIZOMA ASARI(n =10)
样品编号
Sample
No．
共有峰编号 No． of common peak
1 2 3 4 5 6 7 8(S) 9 10
1 0． 015 4 0． 018 9 0． 015 9 0． 024 5 0． 017 9 0． 286 8 0． 328 4 1 0． 132 4 0． 144 6
2 0． 010 0 0． 008 1 0． 017 6 0． 080 7 0． 034 2 0． 305 6 0． 310 5 1 0． 129 6 0． 075 8
3 0． 012 3 0． 016 3 0． 034 7 0． 152 5 0． 010 1 0． 069 3 0． 097 1 1 0． 034 7 0． 036 4
4 0． 024 2 0． 022 2 0． 033 5 0． 226 8 0． 025 8 0． 157 2 0． 244 8 1 0． 079 9 0． 049 0
5 0． 029 3 0． 044 4 0． 070 4 0． 070 4 0． 031 1 0． 514 8 0． 511 1 1 0． 074 1 0． 096 3
6 0． 016 4 0． 019 4 0． 014 6 0． 023 2 0． 021 2 0． 267 0 0． 322 4 1 0． 136 0 0． 065 5
7 0． 038 8 0． 030 1 0． 035 6 0． 123 0 0． 042 1 0． 304 2 0． 650 5 1 0． 171 5 0． 103 6
8 0． 059 9 0． 041 0 0． 072 6 0． 116 7 0． 034 7 0． 384 9 0． 599 4 1 0． 176 7 0． 044 2
9 0． 051 7 0． 058 6 0． 041 4 0． 134 5 0． 055 2 0． 482 8 0． 734 5 1 0． 113 8 0． 031 0
10 0． 021 8 0． 035 6 0． 069 3 0． 186 1 0． 010 5 0． 033 7 0． 049 5 1 0． 021 8 0． 043 6
∑共有峰峰面积 96． 25 96． 36 95． 26 96． 36 97． 54 95． 88 97． 34 96． 85 98． 21 96． 57
Area of common peak∥%
∑非共有峰峰面积 3． 75 3． 64 4． 74 4． 64 2． 46 4． 12 2． 66 3． 15 1． 79 3． 43
Area of uncommon peak∥%
算法，由 10批辽细辛挥发油指纹图谱生成对照谱图，将各样
品指纹图谱与对照谱图进行比较，计算各批次辽细辛药材指
纹图谱的相似度(图 2)。由图 2可知，不同产地辽细辛药材
指纹图谱与对照指纹图谱(R)的相似度均大于 0． 90。
图 2 辽细辛挥发油指纹图谱相似度分析结果
Fig． 2 Similarity analysis on the fingerprints of volatile oil in
RADIX ET RHIZOMA ASARI
3 结论与讨论
指纹图谱的整体性、模糊性汲取蕴藏了众多特征指纹信
息，使得指纹图谱成为中药材资源开发和质量控制的重要手
段。试验所建立的 10批辽细辛挥发油指纹图谱相对保留时
间的 RSD小于 1%，非共有峰总面积小于总峰面积的 5%，不
同产地辽细辛药材指纹图谱与对照指纹图谱(R)的相似度
均大于 0． 90，说明该方法可靠，可操作性强，为辽细辛药用资
源的开发评价和辽细辛内在质量的控制提供了一定的研究
基础。
对中药材挥发油样品的指纹图谱进行研究，高分离能
力、高分析速度、高灵敏度的毛细管气相色谱是理想的手段。
其中，程序升温条件的优化、色谱柱的选择和保证进样的重
复性都是获得理想分离色谱峰和多色谱峰的重要因素。
试验所建立的辽细辛挥发油指纹图谱分析方法，不仅可
用于辽细辛药材的鉴定，同时可用于挥发油中的有效成分甲
基丁香酚及致癌物质黄樟醚的含量测定。试验所建立的方
法精密度、稳定性和重复性不仅符合指纹图谱研究的技术要
求，也符合挥发油中成分含量测定要求。两者的结合，可更
好地控制辽细辛药材的质量。
10个共有指纹峰虽然为 10 批次辽细辛样品所共有，但
某些指标成分(如甲基丁香酚和黄樟醚)个体差异还是较大，
这种个体差异可能与药材产地以及采收期不同有关。指纹
图谱及其主要指标成分相对含量的确定，对客观评价辽细辛
的内在优劣和真伪具有重要意义。
参考文献
［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［S］．北京:化学工业出版
社，2010．
［2］杨春澍，孙建宁，黄建梅．细辛属和八角属中药研究与应用［M］．北京:
人民卫生出版社，2006．
［3］谢培山．中药色谱指纹图谱鉴别的概念、属性、技术与应用［J］．中国中
药杂志，2001，26(10):653．
［4］姜泓，姜永梅，张建逵，等．北细辛 G C指纹图谱研究［J］．中华中医药
学刊，2007，25(8):21 －23．
［5］张海丰，滕坤，吴艳 ．通化县产细辛的 H P L C指纹图谱研究［J］．中
医研究，2010，23(12):17 －19．
［6］国家药品监督管理局．中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)
［S /OL］．(2000 －08 －15)http:/ /www． bwaic． com/ law/00005． htm．
［6］XIA L Y，ZHANG X Y，WANG T X，et al． Study on the chromatographic
fingerprint of volatile constituents from acacia honey［J］． Agricultural Sci-
ence ＆ Technology，2010，11(6):42 －44．［7］王俊斌，王海凤，王海英，
等．气相色谱 －质谱联用仪测定植物茉莉酸含量的研究［J］．华北农学
报，2009(4):226 －230．
［8］SHAO D L． Determination of dichlofluanid residue in soybean by capillary
collumns gas chromatography［J］． Agricultural Science ＆ Technology，
2010，11(3):7 －8，64．
［9］富丰珍，冷平生，蒋湘宁，等．阿月浑子中酚类物质提取方法与气相色
谱 －质谱分析［J］．华北农学报，2007(S1):207 －209．
［10］HAO X L，ZHOU Y M，ZHANG X Y． Construction of fingerprint of rape
pollen by using HPLC［J］． Agricultural Science ＆ Technology，2010，11
(3):107 －109，138．
［11］景延秋，张欣华，刘剑君，等．烤烟不同叶位叶片有机酸含量的差异分
析［J］．华北农学报，2011(4):
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
111 －114．
(上接第 21656页)
［19］郭华，侯冬岩，回瑞华，等． HPLC测定中草药对羟基自由基的清除率
［J］．中国药学杂志，2007，42(16):1214 －1217．
［20］JEN J F，LEU M F，YANG T C． Determination of hydroxyl radicals in an
advanced oxidation process with salicylic acid trapping and liquid chro-
matography［J］． J Chromatogr A，1998，796(2):283 －288．
［21］JAHNKE L S． Measurement of hydroxyl radical － generated methane sul-
finic acid by high － performance liquid chromatography and electrochemi-
cal detection［J］． Anal Biochem，1999，269(2):273 －277．
［22］OLIVA-TELES M T，PAIGA P，DELERUE-MATOS C M，et al． Determi-
nation of free formaldehyde in foundry resins as its 2，4-dinitrophenyl-
hydrazone by liquid chromatography［J］． Anal Chim Acta，2002，467
(1 /2):97 －103．
9561239卷 35期 鄢景森等 辽细辛挥发油气相色谱指纹图谱研究