全 文 ：中国兔疫学蜀今志 195 8年 第一卷 第二期
人参花总皂戒在体外对小 鼠 NK 活性的影响
于永利 杨贵 贞
(白求恩医科大学 , 长春 )
人参是著名的补益类中草药 , 具有广泛
的药理作用 。 而人参皂贰是人参的主要药用
有效物质 。 国内已有人从免疫学的角度研究
人参花总皂试 〔门 , 但尚未见到人参花总皂试
影响 N K活性的报导 。 本实验首先就 ` , . I U d R
释放法的方法学作了一些探讨 , 然后观察了
人参花总皂贰在体外对小鼠脾细胞 N K活性
的影响 。
材料与方法
一 、 材料 :
( 1 ) 人参皂贰 ( g i n s e n o s i d e 缩 写
G )S
〔 ” : 本校化学教研室制备 、 鉴定后供
给 。 ( 2 ) Y A C一 1细胞 : 医科院基础研究
所免疫室惠赠 。 ( 3 ) IM D M 培养基 : 美
国 G r a n d I s l a n d B i o l o g i e a l C o m p a n y生
产 。 ( 4 ) ’ 2 . I U d R ( ` 2 ` I脱氧尿啥咤核昔 ) :
购于北京原子能研究所 。 ( 5 ) F U d R (5 一
氟一 2 尹一脱氧尿啥咤 ) : 瑞士 F l u k a 公司 出
品 。 ( 6 ) D N A酶 : 购于 S I G M A 公司 。
( 7 ) 胰酶 : D i f co 产品 , 上海试剂 商 店
分装 。
二 、 动物 :
普通小鼠 ( S w i s s种 ) , 雌性 , 体重 1 5 ~
2 克 , 本校动物室供给 。
三 、 Y A C一 1细胞培养基的组成 :
10 %新生小牛血清 ,青霉素 1 0 单位 / m l ,
链霉素 1 0 0林g / m l , p H 7 . o 。 实验中亦采用
此液 。
四 、 方法 :
( 1 ) Y A C一 ] . 细胞的标记 : 取传代 24
小时的 Y A C一 1 细胞 1 x l 沪个 (用0 . 4 %台
酚兰染色 , 活力 > 95 % ) , 用 1 m l 新鲜培养
液悬于青霉素小瓶中 , 加人。 . l m 1 F U d R溶
液 ( i 沐 2 0 一 ” M , 生理盐水配制 ) , 5林 C i ’ 2 ` I U d R
于 37 ℃标记 5~ 6小时 。 离心洗涤三次 , 用培
养液调细胞浓度为 1 x l沪个 I m l 。
( 2 ) 小鼠脾细胞悬液的制备 : 拉颈处
死 , 无菌取脾 , 用糙面玻片研碎 , 悬于培养
液中 , 离心后用蒸馏水崩解红 细 胞 , 用 高
渗盐水恢复等渗 , 再离心弃上清 , 用培养液
调细胞浓度为 2 x 10 7个 / m l 。 经此 处 理 的
脾细胞活力 > 95 % 。
( 3 ) N K 活性的检测。 取标记细胞悬
液和效应细胞悬液各 0 . l m l 加入玻璃试管 ,
用培养液补足至 1 m l , 自发释放管 仅 含 靶
细胞 。 离心 , 37 ℃培养 15 小时 。 再离心沉淀
后取 。 . 5m l 上 清 , 用 卜计数仪分别测定上
0
.
5m l 和下 0 . 5 m l (含细胞沉淀 ) 的 cP m ,
按下列公式计算细胞毒结果 :
, 2 . IU d R释放 % =
上 0 . s m l上清 e P m 火 2上 。 . 5 m l上清 cP 二 十下 O。 5m l上清
只 10 0
(含细胞沉淀 ) c p m
结 果
一 、 方法学的探讨
1
. 标记率与 自发释放的关系
在本实验中每个 Y A C一 1 细胞可标上
0
.
6一 3个 c p m 。 若标记时间小于 6小时 , 标
记率的高低几乎不影响 自发释放 , 结果见图
1
。 图中横坐标代表每个 Y A C一 1细脚标 _ L
的 c P m 。
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卜硫一一一 ,图 i 标记 率与自发释放的关系
2
. 标记时间对 自发释放率的影响
标记 5~ 6小时就可获得较佳的标记率 ,
若标记时间大于 6小时可致 自发释放率明显
升高 , 见图 2 。
数 。 应用不同的效靶比 , 可以测得不同的细
胞毒百分数。 本实验亦如此 , 见图 4 。 效靶
比大于 1 0 0 :l 时 , 细胞毒百分数近似成直线
上 升 , 本实验选择的效靶 比是 20 。 : 1 。
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图 生 不 同效靶 比对细胞毒的影响
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图 2 标记时间与自发释放率的关系
3
. 酶处理与细胞毒 、 自发释放的关系
国内有报导 〔 ’ 〕以 K 56 2细胞为 靶细胞 ,
用 ` 2 ` I u d R 测定人外周血单个核细胞 N K 活
性时 , 要在测定结果前用 D N A 酶 、 胰酶混
合液处理 30 分钟 。 采用 Y A C一 1为靶细胞测
定小 鼠脾细胞 的 N K 活性时 , 不用上述双酶
混合液处理亦可得到 满 意 的 结果 。 若采用
0
.
2 m l 双酶 混 合 液 ( 0 . 0肠 % D N A 酶 和
0
.
3% 胰酶各 半 ) 处理 , 可使释放率高于无
酶处理管 , 但由于自发释放率明显升高 , 而
致 净释放率下降 , 在效靶 比 处 于 50 : 1 和
1 0 :0 1 时细胞毒百分数为负 值 , 见 图 3 。
二 、 人参花总皂试在体外对小鼠 N K 活
性的影响
1
. 不同剂量 的人参花总皂武对靶细胞
的影响
为了寻找不影响靶细胞而可促进效应细
胞 的用药剂量 , 在 自发释放管中加人不同剂
量 的人参花总皂贰 , 然后测定 自发释放率 ,
结果见图 5 。 人参花总皂试的剂量在 1 0协g一
5 0卜g / m l的范围内并不影响自发释放率 , 当
达到 1 0 林g /m l 时可明显增强 自发释放率 ,
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图 5 不同剂量 G S对自发释放的影响
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图 3 酶处理与 ` “ “ I U d R释放的关系
4
. 效靶比对细胞毒的影响
在细胞毒测定中 , 效靶比是个重要的参
2
. 人参花总皂贰对小鼠脾细胞 N K 活
性的促进作用
根据上述 筛 选 , 选 择 了 10 件 g /m l 、
2 5协g /m l 、 5 0件g /m l 三个剂量进行了实验 ,
结果见图 6 。 此三个剂量 的人参花总皂贰皆
可增强小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤 , 且三个
剂量 的作用之间无甚差别 , 呈平台型作用曲
线 。 选择 1 0林 g了m l的剂量重复实验亦得阳性
结果 , 见图 7 。
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渗】6 不同剂量的 G S对小鼠 N K 活性的 影响
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图 7 G S ( 1 0林 g /m l ) 在体外对小鼠N K
活性的促进作用
讨 论
目前国内外测定 N K活性的方法大致有
两种 , 一种是应用同位素的方法 , 一种是单
个细胞水平的方法 〔 ` ’ 。 应 用同位素的方法
有 “ , C r释放法 、 ’ Z O I U d R释放法 〔 , ’ 、 ` 2 “ I U d R
标记传代肿瘤细胞体内清除法 仁 5 ’ 。 国 外 多
采用 “ ` C r释放法 。 “ , C r 能透人细胞浆 , 在细
胞破损后即被释放出来 , 效靶共育只需 4 小
时 。 ’ 2叮 U d R可以掺入到靶细胞的D N A分子
上 , 且在细胞存活时不会自动释放出来 , 亦
无重复利用 , ’ 2 “ IU d R 的释放也可以代表细
胞的死亡 〔 ` ’ 。 ’ 2 ` I U d R有如下优点 : ( i ) 半
衰期较长 , 为59 . 7天 , 过了一个半衰期亦可
应用 ; ( 2 ) 比活性高 , 很小剂量就可获得较
高的标记率 ; ( 3 ) 自发释放率较低 , 一般在
1 0 %左右 , 结果较稳定 。
本实验的结果表明 , 人参花总皂贰在一
定的剂量范围内 ( 1 0协g ~ 5 0卜g / m l ) 可 在
体外增强小鼠脾细胞的 N K活性 , 若剂量达
1 0 卜g /m l 时 , 可使自发释放率明显升高 ,
这似说明高剂量的人参花总皂贰对靶细胞有
毒性作用 。
N K 细胞在抗肿瘤 、 抗病毒及免疫调节
方面发挥着重要的作用 , 筛选可以提高 N K
活性的中药是一项非常有益 的工作 。 当然以
上结果仅限于体外给药实验 , 体内效应如何
尚待进一步探讨 。
参 考 文 献
1
. 鲍涛 , 等。 中西医结合杂志 19 84 ; 4 ( 3) 二1 7 2
2
. 邵春杰 , 等。 药学通报 1 9 8 2 ; 1 7 ( 8 ) ` 5 2 。
3
. 金宜德 , 等。 上海免疫学杂志 1 9 8 4 ; 4 ( 2 ) : 8 2 。
` . B l o o m , e t a ! . C e l l I m m u n o l 1 9 8 3 : 7 9 : 1 9 7 .
5
.
R i e e a r d i
, e t a l
.
l o t
.
J
.
C a n e e r 19 8 0 ; 25
: 4 7 5
6
.
R o b e r t
,
e t a l
.
J
.
l m m u n o l 1 97 3
: 1 1 1 : 18 6 2
.
T h e e f f e e t s o f G i n s e n o s i d e o n N K a e t i v i t y i n o i t r
·
o
Y u y o n g
一
L i Y a n g G u卜 z h e n
( B e t h “ n e M e d i c a l U n I’ v e r s i t y )
T h
e p a p e r r 叩。 r t e d h e r e 15 a b e u t t h e m o t h e d o l o g ) u s e d i n a s s a y o f N K a o t i v i t y a : l d t h 。
。
f f e e t s o f G i n s
e l x o s i d e o n N K a e t i v i t y I t h a s b e e n f o u o d t h a t t h e i n e o r p o r a t i u n o f l : 。 IU d R i n t 。
Y A C
一 1 〔: e ll l i o e w a s a b 。 u t 0 . 6、 s e p m / P e : c e l l w h e n t h e y w e : e e o e u l t u r e f o r s ~ 6 h r s a t 3 7 ℃ .
B u t t h e s p o u t a o e o u s r e l e a s e o f 二Z O IU d R w o u l d s n e r e a s e m a r k e d l y i f t五e e u e u l t u r e t i m e w a s
o v e r 6 h r s
.
A s a t i s f i
e d r e s u l t s e o u l d b e o b t a i n e d w i t h o u t t h e t r e a t m e n t o f Y A C 一 1 e e l l s w i t h
D N A a s e a n d t r y p s i n
.
T h
e s p e e i f i e e y t o t o x i e i t y b e e a m e o b v i u u s w h e n e f f e : t o r / t
a r g e t r a t i o w a s
h 19五e r t h a n 10 0八 . A d d i t i o n o f G i n s e n o s sd e i n v i t r o i n 10 、 5 0卜g / m l e o u l d o n h a n e e N K o e t i v i t y
o f m u r 主n e s p l e e n e e l l s w h i l e t h e s p o n t a n e o u s r e l e a s e w a s s i m 全l a r w i t h t ll e 刀 o r m a l e o n t r o ! . ! 1
w a s i n t e r e s t i n g t h a t 之h e s p o n t a n e o u s r e l e a s e w o u ld b e m u e h h i g h e r t h a n t卜。 。 。 r m a l 。 。 n l l· 。` I
w h
o n t h e G i
n s e n o s i d
e w a s a d d e d a t 1 0 林g / m l
.
K e y w o r d s
:
N a t u r l K i l l e e l l G i n s e n o s i d e