全 文 ：EDIBLEFUNGI食用菌 2008(3)
野生杨口蘑菌丝分离试验
吴 珂
(河北张家口市农业科学院,河北宣化075131)
摘 要 针对杨口蘑菌丝体分离困难,分离成活率低问题,采
用4种培养基配方,对张家口地区杨口蘑子实体的不同部位进
行组织分离。结果表明,菌褶为最佳分离部位,获得慢生型菌丝
体分离菌株,从菌柄基部获得3支快生型菌丝体分离菌株,杨
树枝叶浸汁+PDA培养基为最佳培养基。
关键词 野生杨口蘑 菌丝分离
文章编号 1000-8357(2008)03-0022-02
杨口蘑又叫杨树口蘑(T.populinumj.jange)是杨树林中生
长的野生食用菌,是口蘑属中的一个种。杨口蘑口感鲜美,香
味浓郁,肉质滑嫩,一直是国内外热销的产品之一。近年来由
于张家口坝上地区连年干旱,生态环境破坏严重,适合杨口蘑
生长的杨树林地逐渐减少,以及人们过渡采收,造成口蘑菌盘
破坏严重,自然生产的杨口蘑产量逐年降低。因此保护野生杨
口蘑资源已经迫在眉睫。由于杨口蘑是与杨树形成菌根的活
体菌根菌,至今尚未实现人工栽培。杨口蘑菌丝分离和培养也
是难题之一。国内外未见有杨口蘑菌丝分离的报道。我们经过
几年的研究,摸索出了分离、培养杨口蘑菌丝的方法,为杨口
蘑驯化奠定基础。现将试验结果报道如下:
1 材料与方法
1.1 供试菇体 在每年的杨口蘑出菇期8-10月,到河北省张
北小二台等地,采集收获符合种菇标准的野生杨口蘑,从采收回
来的杨口蘑中,选取性状优良的个体作种菇,要求是单菇,朵形
好,中等到偏大,肉厚,孢子未弹射,无病虫害的子实体3~5个。
1.2 供试母种培养基 ①PDA:马铃薯 200g,葡萄糖 20g,
琼脂20g,MgSO41g加水至 1000mL;②改良 PDA:马铃薯
200g,葡萄糖 20g,琼脂 20g,MgSO41g,KH2PO40.5g,加水
至1000mL;③PDA+麸皮;④PDA+杨树木屑。
1.3 试验方法 ①分离及培养:常规操作分别取子实体的菌
盖、菌肉、菌褶、菌柄上部、中部、基部5个部位,每个部位分离
至不同的4种培养基上,每个处理重复10次。分离好的试管
置于可控温的恒温箱中,温度保持 22℃,每隔 2d观察并记
录分离情况、菌丝生长情况。②温度试验:设计了温度梯度值
-20℃,-10℃,0℃,20℃,25℃,30℃,观察杨口蘑菌种在不同
的温度条件下培养的生长情况。③pH试验:将母种培养基分
别调到5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0,分别接入杨口蘑菌种进
行培养。
2 结果与分析
2.1 不同部位分离结果 从野生杨口蘑子实体的三个不同
部位(时期)取下小块组织,接种到 4种培养基中,22℃恒温条
件下培养,见表1。从表1可以看出,菌褶最适合菌种分离,不
易污染萌发快,菌丝生长旺盛,而且具有很强的再生能力。在
②、③、④培养基上分离成活率分别为 96%、93%、93%,菌柄
基部成活率较低,在②、③、④培养基上分离成活率分别为
60%、56%、60%。
2.2 不同部位分离效果 从表 1与表 2可以看出,从菌盖、
菌柄上部及菌柄基部分离出来的菌丝生长状况没有什么差
异,从菌柄基部分离出来的菌丝与从菌褶分离出来的菌丝在
生长速度上存在显著差异。从菌柄基部分离出来的菌丝生长
速度特别快,满管时间为6d,日生长量为1.6mm,在不同的培
养基上都表现了同样的情况;而从菌褶分离出来的菌丝生长速
度慢,满管时间为18d,日生长量为0.4mm。在对菌柄基部分
离中,得到了紫色的深紫被孢霉,用显微镜观察可见孢子囊,杨
口蘑与深紫被孢霉之间究竟有什么关系,有待进一步研究。
2.3 杨口蘑菌丝在不同温度条件下的生长情况 从表 3可
以看出,杨口蘑菌丝的最适合生长温度为 20℃。但在 0℃以
下,25℃以上基本停止生长。试验还表明其菌丝体在 0℃的冰
箱中保存一个月后仍然存活,而在高温 30℃保存 7d后菌丝
体已死亡。这一结果对于杨口蘑菌种保存具有重要的指导意
义,可以按照常规方法置于冰箱内保存。
2.4 杨口蘑菌种在不同酸碱度培养基上生长情况 将 PDA
培养基的pH值分别调到 5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0然后分
别接入杨口蘑菌种,置于 22℃恒温条件下培养,观察菌丝生
长情况。从表 4中可以看出,杨口蘑菌丝体生长的最适合
pH6.5~7.5.这一结果与野外杨口蘑生长环境中土壤的酸碱度
是相吻合的。
收稿日期:2007-11-05
表1 不同部位杨口蘑组织分离结果
分离部位 接种支数 培养基 成活支数 萌发时间/d 成活率/%
菌 褶 30 ②③④ 29、28、28 16、16、17 96、93、93
菌柄上部 30 ②③④ 25、24、27 15、14、15 83、80、90
菌柄基部 30 ②③④ 18、17、18 8、7、8 60、56、60
注:第一行的为“菌 褶-②-29-16-96”的对应关系,并以此类推。
表3 杨口蘑菌丝在不同温度条件下的生长情况
温度/℃ 满管时间/d 菌丝生长情况
-20 菌丝不长没死亡,温度升高20℃时,有50%菌丝恢复生长。
-10 同上,有80%菌丝恢复生长。
0 处于休眠状态,菌丝生长缓慢。
10 15~20 菌丝密,健壮,平整。
20 7~10 菌丝密,健壮,平整。
25 7~10 菌丝绒毛长,细弱,易老化。
30 7 90%菌丝死亡。
表2 杨口蘑菌丝体在不同培养基的生长情况
分离部位 培养基 平均生长速度/(mm·d-1) 菌丝生长情况
菌 褶 ②③④ 0.5、0.6、0.4 洁白、生长速度慢
菌柄基部 ②③④ 1.5、1.5、1.5 洁白、生长速度快
菌柄上部 ②③④ 0.4、0.4、0.5 洁白、生长速度慢
表4 不同pH值对杨口蘑菌丝生长的影响
pH值 菌丝生长情况
5.0 菌丝不长
5.5 生长缓慢
6.0 菌丝生长较快,但不健壮
6.5 菌丝生长速度快,较健壮
7.0 菌丝生长速度快,健壮
7.5 菌丝生长速度快,健壮
8.0 菌丝生长速度极慢
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EDIBLEFUNGI食用菌 2008(3)
3 结果和讨论
3.1 杨口蘑子实体的菌褶部位是最佳的分离部位,从菌丝生
长速度和分离成功率方面综合考虑,杨树枝叶浸汁+PDA培
养基为最佳培养基。
3.2 在杨口蘑组织分离中,前人也经常得到两种菌丝。究竟
那一种是杨口蘑的纯培养物,由此引起了杨口蘑营养特征和
营养生理等方面的许多争议。2000年曾东方首次应用 DNA
技术对松口蘑菌种进行鉴定,确认慢生型菌种为松口蘑,快生
型菌种是深紫被孢霉。杨口蘑与松口蘑在分类学上是同一属
的食用菌,也就是说它们之间有共同的特性。笔者从多次分离
试验中也发现,从杨口蘑菌柄基容易分离出生长快速的菌丝,
从杨口蘑菌褶菌盖分离的生长缓慢菌丝,而且通过显微观察
两者在显微特征有明显差异,这与前人描述是一致的。因此可
以断定本试验中从杨口蘑菌褶菌盖分离的生长缓慢菌丝是杨
口蘑本身菌丝,从菌柄基部分离生长快速菌丝是深紫被孢霉。
青海省双孢菇引种比较试验
韩 梅 杨文辉 郭石生
(青海省农林科学院土肥所,青海西宁810016)
摘 要 通过对几个双孢菇菌株进行品种比较及试验。结果表
明,双孢菇抗杂菌能力强,栽培技术简单,产量较高,易于成功。
关键词 双孢菇As2796 引进 筛选
文章编号 1000-8357(2008)02-0023-02
引进省外双孢菇优势菇种进行比较试验,以期筛选出青
海地区适宜种植且能充分利用当地资源(麦草、青稞草、牛羊
粪等)的双孢菇优势品种。
1 材料和方法
1.1 供试菌株 双孢菇品种:双孢菇 2796,来自福建轻工研
究所;双孢菇119来自华中农业大学;双孢菇297,来自上海食
用菌研究所。以上品种均由青海省农科院土肥所引进,在PDA
培养基上进行扩繁后,以相同菌龄的菌种进行品比试验。
1.2 试验方法
1.2.1 菌丝生长速率 将试验用菌种接种于 PDA斜面培养
基上,置于 25℃的培养箱中培养,对菌丝生长进行观察,包括
其萌发时间,生长速率,菌丝色泽,致密度和布满管时间。每组
设7次重复。
1.2.2 不同温度对菌丝生长的影响 将试验用菌株接种于
PDA斜面培养基上,分别置于 5℃、10℃、20℃、25℃、30℃、
35℃温度下培养,测量在不同温度下对菌丝萌发,生长速率,
生长势及布满管时间。每组设5次重复。
1.2.3 抗杂菌性试验 在一、二、三级种生长期间,观察细菌
绿色木霉、黑曲霉等杂菌对菌种的感染情况,比较菌株间抗杂
能力的差异。每菌株设5次重复。
1.2.4 出菇试验 双孢菇每个品种设置200m2的栽培试验面
积,栽培料配方:干麦草1000kg,干牛粪400kg,菜籽饼60kg,石
膏粉20kg,过磷酸钙10kg,石灰4kg,加水堆制发酵15d左右。
栽培料厚度20~22cm,1m2播种2瓶,播种 25d后覆土,
其它管理按常规生产操作。
2 结果分析
2.1 菌丝生长情况、长势、生长速率及抗杂菌能力 通过不
同菌株菌丝生长情况、长势及其抗杂菌能力的研究,在室内条
件下培养观察,其测定结果见表1。
从表1可见,在相同培养条件下,菌丝生长存在明显差
异。其中双孢菇2796日长速最快,菌丝粗壮、致密,活力强。
2.2 不同温度对各菌株生长影响 从表 2可以看出,各供试
菌株在不同温度下的菌丝生长速度及长势存在明显差异。在
4℃及 35℃几乎不生长,4℃下菌丝萌发需要很长时间,35℃下
菌丝虽然萌发很快,但是长时间的置于此高温下,菌丝即被烧
死而不生长。对所有菌株来讲,在一定温度范围内随着温度升
高菌丝生长速度加快,但是 30℃下菌丝稀疏无力,爬壁力弱,
而 25℃下菌丝浓密粗壮,爬壁力强,故 25℃是所有菌株的最
适生长温度。双孢菇2796各项指标明显优于其它菌株。
2.3 出菇试验结果 双孢菇床栽试验于 2002年 7月 17日
铺料、整平,19日播种,播种后萌发时间都为 36h左右,不同
表2 不同温度对菌丝生长的影响
温度 菌丝生长各项指标 2796 119 297
4℃ 萌发时间/h 101 110 109
生长速度/(mm·d-1) - - -
满管时间/d - - -
菌丝长势 - -
10℃ 萌发时间/h 41 45 47
生长速度/(mm·d-1) 1.52 1.45 1.42
满管时间/d >15 >15 >15
菌丝长势 + - -
15℃ 萌发时间/h 24 25 26
生长速度/(mm·d-1) 4.40 3.88 4.01
满管时间/d >15 >15 >15
菌丝长势 + + +
20℃ 萌发时间/h 18 19 20
生长速度/(mm·d-1) 5.45 4.85 5.12
满管时间/d 11 12 14
菌丝长势 ++++ +++ ++++
25℃ 萌发时间/h 15 16 16
生长速度/(mm·d-1) 8.5 8.23 8.12
满管时间/d 7 7 8
菌丝长势 ++++ +++ ++++
30℃ 萌发时间/h 14 14 15
生长速度/(mm·d-1) 9.68 9.23 9.12
满管时间/d 6 7 7
菌丝长势 ++++ +++ +++
35℃ 萌发时间/h 14 14 14
生长速度/(mm·d-1) - - -
满管时间/d - - -
菌丝长势 - - -
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
收稿日期:2007-10-23
表1 菌丝生长情况
双孢菇
菌株
萌发时
间/h
菌丝
颜色
菌丝
长势
菌丝粗壮
及致密度
生长速度
/(mm·d-1)
布满管
时间/d
杂菌感染
株数/个
2796 19 浓白 ++++ ++++ 9.1 9 0
119 20 灰白 +++ +++ 6.88 10 1
297 20 白 ++++ ++++ 8.51 11 1
注:++++表示长势旺盛、粗壮致密,+++较好、++一般、+较差。
注:-表示菌丝几乎不生长;+表示菌丝长势程度,越多表示越好。
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