全 文 ：FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食 品 科 技
2011年 第 36卷 第 4期
Isolation of Tricholoma mongolicum and test of growth factor on
mycelium
MA Rong-shan1, LING Lan2, FANG Rui1, LU Yuan1
(1.College of Food Science, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161;
2.China Agricultural University, Beijing 100083)
Abstract: Tricholoma mongolicum is one of the rare and precious mushroom resources. As grassland
degradation and human over-harvesting, production are decline. in order to protect Tricholoma mongolicum
and exploit this resources better,different nurtrition for growth of Tricholoma mongolicum mycelium were
studied. The result indicates that: lamella are select to separate mycelium, the rate of bourgeon is about 35%.
Saccharose is best carbon source, and the best nitrogen source is yeast extract; when the carbon and nitrogen
ratio is 20 ∶1~30 ∶1, mycelium is growing well. The optimum temperature is 22~28 ℃ , and the optimum pH is
6.5~7.0. Vc, VB6, and α-NAA can better promote the growth of mycelium.
Key words: Tricholoma mongolicum; mycelium separation; growth factor
马荣山 1， 凌 岚 2， 方 蕊 1， 卢 媛 1
(1.沈阳农业大学食品科学学院，沈阳 110161；2.中国农业大学，北京 100083)
摘要： 草原白蘑是我国宝贵的珍稀食用菌资源，由于草场退化及人为过度采集，产量不断下降。
为了保护草原白蘑且对其进行更好的开发利用，现对其生长因子进行研究。结果表明：选取菌
褶处的组织进行分离菌丝体，萌发率在 35%。草原白蘑的菌丝体生长的最佳碳源为蔗糖；最佳
氮源为酵母膏；当碳氮比为 20:1~30:1时，菌丝生长较快。最适合菌丝体生长的温度为 22~28
℃，最适 pH为 6.5~7.0。Vc、VB6和 α-萘乙酸能较好地促进菌丝体的生长。
关键词： 草原白蘑；菌丝分离；生长因子
中图分类号： Q 93-331 文献标志码： A 文章编号： 1005-9989(2011)04-0018-04
草原白蘑菌种分离及菌丝体
生长因子试验
收稿日期： 2010-09-14
作者简介： 马荣山(1961—)，男，辽宁锦州人，副教授，主要从事食品发酵、生物技术、白酒、饮料及食品添加剂的研究工作。
草原白蘑 (Tricholoma mongolicum Imai，Proc.
Imp.)[3]，又称草原口蘑、蒙古口蘑。草原白蘑是一
种十分珍贵的大型野生食用菌，分布于我国的河
北、内蒙古、黑龙江、吉林、辽宁等省区。白蘑
是伞菌中最珍贵的品种，含有丰富的蛋白质、维
生素及钾、钙、铁、磷等矿物质。菌体肥嫩，味
鲜香浓，风格独特，有很好的食用和保健价值 [7]。
然而由于草原退化及人为过度采集等原因，其生
境受到破坏，产量不断下降，近年来也比较少见，
且草原白蘑的人工栽培至今尚未获得实质性的突
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破，因此，在保护这一珍贵资源的同时，开展人
工驯化栽培技术的研究，无疑具有重要的学术价
值和广阔的开发前景。本试验旨在探寻和研究其
主要生长因子，主要包括碳、氮源营养研究，温
度和酸碱度的研究，以及无机盐、微量元素和生
长调节因子对草原白蘑的影响，以期给人工驯化
栽培提供依据。
1 材料和方法
1.1 菌种
草原白蘑：采摘自蒙古草原。
1.2 培养基
分离培养基：马铃薯 200 g/L，葡萄糖 20 g/L，
磷酸氢二钾 3 g/L，硫酸镁 0.5 g/L，VB1 10 mg/L，
酵母膏 3 g/L，琼脂 20 g/L，pH自然。
基础培养基：葡萄糖 20 g/L，蛋白胨 2 g/L，
磷酸氢二钾 3 g/L，硫酸镁 0.5 g/L，VB1 10 mg/L，
pH自然。
1.3 试验方法
1.3.1 草原白蘑菌种分离 配置分离培养基，121
℃灭菌 30 min。采用组织分离法，将采集无病虫
害侵染的草原白蘑子实体，用 75%的酒精棉球擦
拭菌体消毒，分别在菌盖、菌柄、菌褶以及菌盖
和菌柄交界处取 0.2~0.5 cm见方的小块组织，接
入分离培养基中，于 24℃恒温箱培养，每隔 3 d
检查 1次，除去污染管。待长满试管后，进行扩
大培养。
1.3.2 碳源对比试验[8] 分别用蔗糖、淀粉、麦芽
糖、甘露醇、乳糖替换基础培养基中的葡萄糖，
配置不同的碳源培养基，121℃灭菌 30 min。接种
后，于 24℃恒温箱培养 10 d，每 2 d观测 1次。
1.3.3 氮源对比试验 [8] 分别用酵母膏、氯化铵、
硝酸钾、牛肉膏替换基础培养基中的蛋白胨，配
置不同的氮源培养基，121 ℃灭菌 30 min。接种
后，于 24℃恒温箱培养 10 d，每 2 d观测 1次。
1.3.4 碳氮比对比试验 将基础培养基中的蛋白胨
换成氯化铵，分别加入 6、12、24、36、48、60
g/L的葡萄糖，制成碳氮比分别为 5∶1、10∶1、20∶
1、30 ∶1、40 ∶1、50 ∶1 的培养基，121 ℃灭菌 30
min。接种后，于 24℃恒温箱培养 10 d，每 2 d观
测 1次。
1.3.5 pH对比试验 配置基础培养基，分别调整
pH 至 5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0。121 ℃
灭菌 30 min。接种后，于 24 ℃恒温箱培养 10 d，
每 2 d观测 1次。
1.3.6 生长调节因子对比试验 分别用赤霉素、α-
萘乙酸、吲哚乙酸、烟酸、肌醇、VB2、VB6、VC替
换基础培养基中的 VB1，121℃灭菌 30 min。接种
后，于 24℃恒温箱培养 10 d，每 2 d观测 1次。
1.3.7 温度对比试验[4] 配置基础培养基，121℃灭
菌 30 min。接种后，分别于 15、18、20、22、24、
26、28、30、32 ℃，恒温箱培养 10 d，每 2 d 观
测 1次。
2 结果与分析
2.1 草原白蘑菌种分离结果
表 1 不同部位组织分离结果
分离部位 萌发时间/d 萌发率/% 生长速度/(mm/d) 满管时间/d 菌丝体长势
菌盖 7 15 0.43 35 白色，绒毛状，菌丝浓密，生长缓慢
菌褶 8 35 0.45 33 白色，绒毛状，菌丝浓密，生长较快
菌盖菌柄交界处 5 10 0.51 30 白色，绒毛状，菌丝较密，生长迅速
菌柄 5 15 0.42 36 白色，绒毛状，菌丝浓密，生长缓慢
由表 1 可见，采用组织分离法分离菌种时， 菌褶处组织萌发率较高，菌丝白色，浓密，粗壮，
表 2 不同碳源对菌丝生长的影响
碳源
菌丝 10 d生长量/mm
菌丝长速/(mm/d) 菌体长势
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅴ Ⅵ
蔗糖 58.0 60.0 57.0 59.0 58.0 5.84 +++
葡萄糖 39.5 41.5 40.0 41.5 41.0 4.07 +++
可溶性淀粉 70.0 68.0 68.5 70.0 68.5 6.90 ++
麦芽糖 27.5 28.0 25.5 26.0 27.5 2.69 ++
乳糖 11.5 12.5 11.5 12.0 11.5 1.18 +
甘露醇 47.0 47.5 47.0 48.0 48.0 4.75 +
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但生长缓慢；菌盖菌柄交界处组织萌发率低，菌
丝白色，较密，健康，但生长迅速。菌盖和菌柄
处组织萌发率较低，菌丝白色，健康，生长缓慢。
2.2 不同碳源对草原白蘑菌丝体生长的影响
由表 2可见，在这几种碳源培养基上，菌丝
都能生长，最佳碳源为蔗糖，菌丝白色，粗壮，
浓密，长势较强；其次是可溶性淀粉和葡萄糖，
菌丝白色，健康，密集；在乳糖和甘露醇培养基
中，菌丝白色，细弱，稀疏，生长较弱。
2.3 不同氮源对草原白蘑菌丝体生长的影响
由表 3可见，在这几种氮源培养基上，菌丝
都能生长，最佳氮源为酵母膏，长势较强且长速
较快，菌丝白色，健康，浓密；其次是牛肉膏和
蛋白胨，菌丝白色，健康，较密。并且菌丝对有
机氮的利用要好于对无机氮的利用。
2.4 不同碳氮比对草原白蘑菌丝体生长的影响
由表 4 可见，白蘑菌丝在碳氮比为 5∶1~50∶1
的培养基上都能生长。当碳氮比为 20∶1~30∶1时，
菌丝生长较快，且长势较强，最适合菌丝生长。
碳氮比小时，菌丝细长，稀疏，长势弱；碳氮比
大时，菌丝生长较慢，菌丝短小，长势弱。
2.5 不同 pH对草原白蘑菌丝体生长的影响
由表 5可见，白蘑菌丝在 pH为 5.0~8.0之间
的培养基上都能良好的生长，最适合菌丝体生长
的pH为 6.5~7.0。该 pH范围内菌丝生长最快，长
势最好，菌丝粗壮、浓白、致密。
2.6 不同生长调节因子对草原白蘑菌丝体生长的
影响
由表 6可见，Vc对草原白蘑菌丝体生长的促
进作用较显著，菌丝体长势好，VB6促进菌丝生
长，但长势较弱，VB1和α- 萘乙酸对草原白蘑菌
丝体生长的促进作用也较明显，且长势较好。烟
酸和肌醇对菌丝体的促进生长作用不显著。
2.7 不同温度对草原白蘑菌丝体生长的影响
由表 7 可见，白蘑菌丝在温度为 15~32 ℃之
间的培养基上都能良好的生长，最适合菌丝体生
长的温度为 22~28 ℃。该温度范围内菌丝生长
最快，长势最好，菌丝粗壮、浓白、致密。低
于 15 ℃，或高于 30 ℃时，菌丝生长较为缓慢，
表 3 不同碳源对菌丝生长的影响
氮源
菌丝 10 d生长量/mm 菌丝长
速/(mm/d)
菌体
长势Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅴ Ⅵ
酵母膏 54.0 54.0 53.0 53.0 55.0 5.38 +++
蛋白胨 37.5 38.0 37.0 37.5 38.5 3.37 ++
氯化铵 43.0 42.5 41.5 42.0 42.5 4.23 +
硝酸钾 19.0 23.5 22.5 22.0 21.0 2.16 +
牛肉膏 35.0 33.4 34.0 34.0 33.0 3.39 ++
表 4 不同碳氮比对菌丝生长的影响
碳氮
比
菌丝 10 d生长量/mm 菌丝长速/
(mm/d)
菌体
长势Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅴ Ⅵ
5:1 28.0 28.5 32.0 31.0 32.0 3.03 +
10:1 36.5 35.5 35.5 35.0 35.5 3.56 +
20:1 40.0 40.0 37.5 36.5 38.0 3.84 ++
30:1 35.5 33.0 33.0 32.0 34.0 3.35 ++
40:1 19.0 22.5 21.0 21.0 22.5 2.12 +
50:1 12.0 11.5 14.0 12.5 14.0 1.28 +
表 5 不同 pH对菌丝生长的影响
pH
菌丝 10 d生长量/mm 菌丝长
速/(mm/d)Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅴ Ⅵ
5.0 21.5 22.0 21.0 21.0 21.5 2.14
5.5 22.5 21.0 22.0 23.5 22.0 2.22 +
6.0 20.0 22.0 23.5 23.5 24.0 2.26 ++
6.5 21.0 23.0 23.5 24.0 22.5 2.28 +++
7.0 24.0 25.0 24.0 23.5 26.0 2.45 +++
7.5 19.0 17.5 18.5 17.5 16.0 1.77 +
8.0 16.0 17.5 18.0 15.0 16.0 1.65 +
菌体
长势
+
表 6 不同生长调节因子对菌丝生长的影响
生长调节
因子
菌丝 10 d生长量/mm 菌丝长
速/(mm/d)
菌体
长势Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅴ Ⅵ
赤霉素 22.5 20.5 23.0 22.0 23.0 2.22 ++
α-萘乙酸 28.5 26.5 27.0 26.5 26.0 2.69 +
吲哚乙酸 21.0 21.0 22.5 20.5 20.0 2.10 ++
烟酸 18.5 19.0 20.0 18.5 18.5 1.89 +
肌醇 14.0 15.0 14.5 13.0 15.0 1.43 +
VB1 25.0 26.5 25.0 25.0 25.5 2.54 ++
VB2 24.0 24.5 24.0 23.0 23.5 2.38 +
VB6 30.0 31.5 30.5 30.0 29.5 3.03 +
Vc 33.0 33.5 33.5 34.0 32.0 3.32 ++
表 7 不同生长调节因子对菌丝生长的影响
温度/℃
菌丝 10 d生长量/mm 菌丝长速/
(mm/d)
菌体
长势Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅴ Ⅵ
15 19.0 19.5 18.0 18.5 18.5 1.87 +
20 19.5 20.0 20.0 19.0 19.5 1.96 +
22 22.0 22.5 22.5 19.5 19.5 2.12 ++
24 25.0 23.5 25.5 24.5 25.5 2.48 +++
26 25.5 24 26.0 25.5 25.0 2.53 +++
28 22.0 22.5 23.5 23.0 23.0 2.28 ++
30 19.0 18.5 18.5 18.0 18.0 1.84 +
32 19.0 18.5 17.5 18.0 17.5 1.81 +
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长势较弱。
3 结论
试验结果表明：采用组织分离法分离菌丝体
时，最好选取菌褶处的组织，8 d萌发，萌发率在
35%，萌发后 30 d长满试管。草原白蘑的菌丝体
生长的最佳碳源为蔗糖、可溶性淀粉；最佳氮源
为酵母膏、牛肉膏、蛋白胨；当碳氮比为 20∶1~30∶
1时，菌丝生长较快，且长势较强，最适合菌丝生
长。最适合菌丝体生长的温度为 22~28℃，低于
15℃或高于 30℃时，菌丝生长较为缓慢,长势较
弱。菌丝在 pH为 6.5~7.0的培养基生长效果较好。
VC、VB6和α- 萘乙酸能较好地促进菌丝体的生长。
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