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南美蟛蜞菊根系分泌物中2种化学物质的化感潜力



全 文 :西北农业学报 2014,23(10):170-178
Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica  doi:10.7606/j.issn.1004-1389.2014.10.028
网络出版日期:2014-10-21
网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/doi/10.7606/j.issn.1004-1389.2014.10.028.html
南美蟛蜞菊根系分泌物中2种化学物质的化感潜力
收稿日期:2013-10-11  修回日期:2014-03-06
基金项目:国家自然科学基金(31200317,31170386);中国博士后基金(2012M521000);江苏大学高级专业人才科研启动基金
(11JDG1147,09JDG020)。
第一作者:吴 易,女,硕士研究生,研究方向为生物入侵。E-mail:244964866@qq.com
通信作者:孙见凡。E-mail:michaelsjf@126.com
吴 易1,司春灿1,孙见凡1,2,王从彦1,2,杜道林1,2
(1.江苏大学 环境与安全工程学院,江苏镇江212013;2.江苏大学
现代农业装备与技术教育部重点实验室,江苏镇江212013)
摘 要 采用水培法收集南美蟛蜞菊(Wedelia trilobata)根系分泌物,GC-MS分析鉴定得出其根系分泌物中
存在邻苯二甲酸二异丁酯、硬脂酸甲酯、棕榈酸甲酯和邻苯二甲酸二异辛酯。采用不同质量浓度硬脂酸甲酯
和棕榈酸甲酯对玉米、黄豆、黄瓜、水稻4种农作物种子进行处理,以探究硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯对4种农
作物种子萌发和幼苗生长的影响,进而分析这2种物质的化感潜力。结果表明,质量浓度为0~2 000mg/L
时,这2种物质均呈现出不同程度的化感作用,均可在一定程度上抑制玉米、黄豆、黄瓜、水稻的发芽势、发芽
率、发芽指数和活力指数。其中,硬脂酸甲酯对黄豆的胚根、胚芽的生长无显著的影响,但对玉米、黄瓜、水稻
的胚根、胚芽的生长均有显著的抑制作用;棕榈酸甲酯对这4种作物胚根、胚芽的生长均有显著的抑制作用。
关键词 南美蟛蜞菊;根系分泌物;化感作用;硬脂酸甲酯;棕榈酸甲酯;种子萌发;幼苗生长
中图分类号 Q946.8   文献标志码 A     文章编号 1004-1389(2014)10-0170-09
Alelopathic Effects of Two Chemicals in Wedelia trilobata Root Exudates
WU Yi 1,SI Chuncan1,SUN Jianfan1,2,WANG Congyan1,2 and DU Daolin1,2
(1.School of Environmental Sciences,Jiangsu University,Zhenjiang Jiangsu 212013,China;
2.Key Laboratory of Modern Agricultural Equipment and Technology,Ministry of Education &Jiangsu
Province,Jiangsu University,Zhenjiang Jiangsu 212013,China)
Abstract The root exudates of Wedelia trilobata were colected through water culture method and
then disobutyl phthalate,methyl stearate,methyl palmitate and 1,2-Benzenedicarboxylic acid,bis(2-
ethylhexyl)ester were identified via GC-MS.Maize,soybean,cucumber,and rice were chosen and
treated with simulated gradient concentrations of methyl stearate and methyl palmitate(0,250,500,
1 000,2 000mg/L)in order to insights into the alelopathic effects of the two substances in the root
exudates of W.trilobata on the seed germination and growth of maize of those four plant.Results
showed that the two substances could present alelopathic effects with different levels.Both the two
substances al posed negative effects on the germination rates,germination potential,germination in-
dex,and germination vitality index of maize,soybean,cucumber,and rice.Methyl stearate did not
give significant effects on the growth of soybean seeding,but it afforded negative effects on the
growth of maize,cucumber,and rice seeding significantly.Meanwhile,methyl palmitate had inhibito-
ry effects on the growth of the four kinds of crops significantly.
Key words Wedelia trilobata;Root exudates;Alelopathy;Methyl stearate;Methyl palmitate;Seed
germination;Seedling growth
   南美蟛蜞菊 (Wedelia trilobata)为菊科
(Compositae)蟛蜞菊属(Wedelia)植物,现广泛分
布于中国华南地区及沿海部分地区,是该地区危
害严重的区域性入侵植物之一[1]。南美蟛蜞菊一
般生长在道路、水沟、农田边沿和湿润草地等处,
农民在清除田埂杂草时,常将其踩入水田中作为
有机肥,或作为旱地作物的覆盖绿肥,结果发现这
种肥料对作物有很强的化感作用[2],常导致作物
严重缺苗、长势变差、产量降低。目前,有研究表
明,南美蟛蜞菊植株水提物[3-4]、有机溶剂浸提
物[1,5]、挥发性物质[5-6]以及根系分泌物[7]对农作
物以及其他一些邻近植物发育的抑制效果明显,
具有显著的化感作用,其中,南美蟛蜞菊浸提物和
挥发性物质的成分分析已有相关报道,主要是一
些萜类物质[8-10],但是,迄今有关对南美蟛蜞菊根
系分泌物成分的研究还未见报道。
基于此,本研究采用水培的方法收集南美蟛
蜞菊根系分泌物,用乙酸乙酯萃取得到脂溶性较
高的一些根系分泌物,通过 GC-MS分析证明收
集到的根系分泌物中含有邻苯二甲酸二异丁酯、
邻苯二甲酸二异辛酯、棕榈酸甲酯和硬脂酸甲酯
这4种化学物质。其中,邻苯二甲酸二异丁酯和
邻苯二甲酸二异辛酯均已被证明具有化感作用,
为对后2种化学物质的化感潜力进行验证,本研
究以硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯为材料,以玉米、黄
豆、黄瓜、水稻为受体植物,探究不同质量浓度硬
脂酸甲酯和棕榈酸甲酯对4种农作物种子萌发以
及幼苗生长的影响,旨在明确2种物质的化感潜
力,进而揭示南美蟛蜞菊根系分泌物对作物的化
感作用机制。
1 材料与方法
1.1 材 料
南美蟛蜞菊取自海南省海口市。玉米(山东
登海11号)、黄豆(开心绿)、黄瓜(津优1号)、水
稻(屉优267)为试验材料,均购于江苏省镇江市
市场。
1.2 药 品
邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二异辛酯、
硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯均为分析纯,购于阿拉
丁试剂(上海)有限公司,甲醇和乙酸乙酯为分
析纯。
1.3 方 法
1.3.1 南美蟛蜞菊根系分泌物的收集 在长×
宽×高为60cm×50cm×10cm的收集槽中放置
4块长×宽为40cm×5cm的玻璃板,玻璃板上
放置不透光的长宽略小于收集槽尺寸的定植板,
定植板上开有定植孔(共99孔)并接有5㎝长的
定植管(图1,该装置已申请专利)。收集槽中加
入4L0.5倍的灭过菌的霍格兰营养液[11],扦插
南美蟛蜞菊茎段于定植管(每管1株,5大盆,共
495株)。放置在光照时间为16h,温度为28℃
的温室进行培养,待长出根后每5d收集1次根
系分泌物。
  将收集的根系分泌物水溶液用定性滤纸过滤
后,用真空旋转蒸发仪(45℃)浓缩,浓缩体积比
为50∶1,用盐酸将浓缩液pH 调至2.0(以抑制
微生物的生长)后置于4℃冰箱。将3个月的收
集量合并后,用等体积的乙酸乙酯萃取3次,用真
空旋转蒸发仪(40℃)浓缩得到浸膏,用乙酸乙酯
图1 根系分泌物收集装置示意图
Fig.1 The colection device of root exudates
·171·10期 吴 易等:南美蟛蜞菊根系分泌物中2种化学物质的化感潜力
溶解并确定质量浓度(450mg/L),置于4℃冰箱
待用。
1.3.2 南美蟛蜞菊根系分泌物成分鉴定 通过
GC-MS(气相色谱和质谱联用)测定,在江苏大学
食品与生物工程学院 GC-MS室完成。GC-MS
型号为Thermo ITQ 1100,电子轰击源70eV,扫
描量程 M/Z33~453,0.4s扫全程,离子源温度
200℃。毛细管柱DB-5(30m×0.25mm,0.25
μm),进样口温度250℃,柱温50℃,保持2min,
以6℃/min程序升温至250℃,保持15min。载
气为 He,流量1mL/min,进样量为1μL。
1.3.3 种子萌发试验 将棕榈酸甲酯和硬脂酸
甲酯各设5个质量浓度,分别为0、250、500、1 000
和2 000mg/L,其中以0mg/L为对照(CK),甲
醇为溶剂。取2层定性滤纸平铺于直径9mm的
培养皿,分别吸取8mL样品溶液加至滤纸,然后
将培养皿放入通风橱,待甲醇挥发尽后向培养皿
中加入8mL的无菌水,每个质量浓度均设3次
重复。然后在各培养皿的滤纸上均匀放置15粒
(水稻为30粒)供试种子,在温室中(25~28℃)
避光培养,每天统计种子萌发数,待对照组种子不
再萌发时结束统计,2d后测量胚根和胚芽长。
1.4 数据处理
发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数参照参
考文献[12]测定,化感效应指数参照参考文献
[13-14]测定。采用Excel 2003进行数据统计,用
SAS9.1软件进行方差及显著性分析,用 Origin
8.1软件绘图。
2 结果与分析
2.1 南美蟛蜞菊根系分泌物成分鉴定结果
通过与质谱数据库比对,由表1和图2-B可
知,南美蟛蜞菊根系分泌物中可能存在邻苯二甲
酸二异丁酯、棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯和邻苯二甲
酸二异辛酯等物质,其分别在保留时间为27.49、
28.37、31.55和37.78min时出峰。GC-MS标
准图谱能给出所检测物质的可能性,但还不能确
定就是该物质,所以为进一步确定表1中这4种
物质的存在,在同一条件下分析这4种物质的标
准样品图谱。由标准样品图谱(图2-A)可知,其
出峰的保留时间一致,再分别与其分子离子峰和
特征离子峰比较,可以确定在收集到的南美蟛蜞
菊根系分泌物中存在这4种物质。
表1 南美蟛蜞菊根系分泌物中4种物质的鉴定
Table 1 Identified of four kinds of chemicals of Wedelia trilobata root exudates
保留时间/min
Time of apex
名 称
Compound name
质量分数/%
Mass fraction
相似度/%
Similar degree
27.49 邻苯二甲酸二异丁酯 Disobutyl phthalate  10.28  12.39
28.37 棕榈酸甲酯 Hexadecanoic acid,methyl ester  13.14  73.53
31.55 硬脂酸甲酯 Octadecanoic acid,methyl ester  9.37  56.03
37.78 邻苯二甲酸二异辛酯1,2-Benzenedicarboxylic acid,bis(2-ethylhexyl)ester 17.43  27.16
A.标准样品 Standard sample;B.根系分泌物样品 Root exudates sample
图2 GC-MS鉴定图谱
Fig.2 GC-MS spectrum
·271· 西 北 农 业 学 报 23卷
2.2 硬脂酸甲酯、棕榈酸甲酯对玉米、黄豆、黄
瓜、水稻种子萌发的影响
由图3可知,硬脂酸甲酯对玉米种子的发芽
势、发芽率、发芽指数、活力指数均有显著抑制作
用(P<0.05),并且随着质量浓度的增高抑制作
用加强,在质量浓度为2 000mg/L时,抑制作用
最强。棕榈酸甲酯对玉米种子的发芽率、发芽势、
发芽指数、活力指数也均存在抑制作用(P<0.05),
但在质量浓度为500mg/L时抑制作用最弱。
由图4可知,硬脂酸甲酯、棕榈酸甲酯对黄豆
种子的发芽势、萌发率、发芽指数、活力指数均有
较显著抑制作用(P<0.05),并且随着质量浓度
的增高抑制作用加强,在质量浓度为 1 000、
2 000mg/L时,棕榈酸甲酯对黄豆种子的发芽
率、活力指数抑制作用最显著。
由图5可知,硬脂酸甲酯可抑制黄瓜种子的
发芽势、发芽指数、活力指数,质量浓度为2 000
mg/L时抑制作用最强(P<0.05)。棕榈酸甲酯
对黄瓜的发芽势、发芽率和发芽指数均无显著
(P>0.05)抑制作用,但对种子的活力指数抑制
作用显著(P<0.05)。
由图6可知,硬脂酸甲酯在质量浓度为2 000
mg/L时,对水稻种子的发芽势、发芽率和发芽指
数均有显著抑制作用(P<0.05),在其他质量浓
度时抑制作用均不显著(P>0.05),但对活力指
数均有显著地抑制作用(P<0.05),在最高质量
浓度时抑制作用达到最强。棕榈酸甲酯在质量浓
度为1 000mg/L时,对水稻种子发芽势、发芽指
数均有显著地抑制作用(P<0.05),在其他质量
浓度时抑制作用不显著(P>0.05),对水稻种子
发芽率均没有显著抑制作用(P>0.05),但对水
稻种子的活力指数均有显著抑制作用 (P<
0.05),并在质量浓度为500mg/L时抑制作用
最弱。
2.3 硬脂酸甲酯、棕榈酸甲酯对玉米、黄豆、黄
瓜、水稻种子胚根、胚芽生长的影响
由图7-Ⅰ可知,硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯在
质量浓度为250mg/L时对玉米胚根、胚芽、总长
均有显著抑制作用(P<0.05),在质量浓度为
500、1 000mg/L时抑制作用减弱,但在质量浓度
为2 000mg/L时抑制作用又加强(P<0.05)。
由图7-Ⅱ可知,硬脂酸甲酯对黄豆胚根、胚
芽、总长均没有显著抑制或促进作用(P>0.05)。
棕榈酸甲酯在质量浓度为1 000、2 000mg/L时
对黄豆胚根、胚芽、总长均有显著抑制作用(P<
0.05)。
  同一处理上不同字母表示差异显著(P<0.05),下同 Data with different superscript letters for the same treatment indicate a signif-
icant difference(P<0.05)
图3 硬脂酸甲酯(MS)和棕榈酸甲酯(MP)处理后玉米种子的萌发状况
Fig.3 Effects of methyl stearate(MS)and methyl palmitate(MP)on seed germination of maize
·371·10期 吴 易等:南美蟛蜞菊根系分泌物中2种化学物质的化感潜力
图4 硬脂酸甲酯(MS)和棕榈酸甲酯(MP)处理后黄豆种子的萌发状况
Fig.4 Effects of methyl stearate(MS)methyl palmitate(MP)on seed germination of soybean
图5 硬脂酸甲酯(MS)和棕榈酸甲酯(MP)处理后黄瓜种子的萌发状况
Fig.5 Effects of methyl stearate(MS)methyl palmitate(MP)on seed germination of cucumber
·471· 西 北 农 业 学 报 23卷
图6 硬脂酸甲酯(MS)和棕榈酸甲酯(MP)处理后水稻种子的萌发状况
Fig.6 Effects of methyl stearate(MS)methyl palmitate(MP)on seed germination of rice
  由图7-Ⅲ可知,4个质量浓度硬脂酸甲酯对
黄瓜胚根、胚芽、总长均有显著抑制作用(P<0.05),
并且在低质量浓度时抑制作用最强,随着质量浓度
的增高抑制作用减弱。棕榈酸甲酯对黄瓜胚根、总
长均有显著抑制作用(P<0.05),在质量浓度为250
mg/L时抑制作用最强,随着质量浓度的增高抑制作
用减弱,但对胚芽无显著作用(P>0.05)。
由图7-Ⅳ可知,4个质量浓度硬脂酸甲酯和
棕榈酸甲酯对水稻胚根、胚芽、总长均有显著抑制
作用(P<0.05)。
2.4 硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯对4种农作物的
化感效应指数分析
对照(0mg/L)的化感效应为0,故未在表中
列出。当RI>0时,表示促进作用,RI<0时为
抑制作用,RI的绝对值代表作用强度的大小。
由表2可知,除黄豆在硬脂酸甲酯质量浓度为
250mg/L处理下表现为促进作用(RI>0),其他
均表现为抑制作用(RI<0)。
3 讨 论
化感作用是指某种植物通过向环境释放化学
物质而对其他植物(包括微生物)所产生的有益或
有害的作用[15-16]。生态系统中化感作用是通过植
物向环境中释放某些化感物质来实现的[17-18],化
感物质的作用影响植物生长的每个过程及不同的
生理过程[4]。根系分泌物可能是植物释放到土壤
环境中化感物质的主要来源[19],根系分泌物对农
作物最直接的作用便是影响其种子的萌发及幼苗
的生长。种子萌发和幼苗生长抑制试验是鉴定化
感作用存在的最常用的方法[20]。发芽势、发芽
率、发芽指数和活力指数是评价种子发芽很常用
的指标,反映种子的发芽速度,发芽整齐度和幼苗
健壮的潜势[21]。
邻苯二甲酸、十四烷酸、十五烷酸、十六烷酸
(棕榈酸)、十七烷酸、十八烷酸(硬脂酸)、二十烷
酸等长链脂肪酸是一类潜在的化感物质[22]。在
人参[23]、茄子[24]和大豆[25]根系分泌物里均发现
有邻苯二甲酸二异丁酯,邻苯二甲酸二异辛酯也
在多种植物的根系分泌物中被发现,如百合[26]、
大葱[27]和大豆[28]等。这2种化学物质以及其同
分异构体(邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二辛
酯)均被证明具有化感作用[29-32]。本研究也发现
南美蟛蜞菊根系分泌物中存在邻苯二甲酸二异丁
酯、邻苯二甲酸二异辛酯,并且质量浓度均较高。
·571·10期 吴 易等:南美蟛蜞菊根系分泌物中2种化学物质的化感潜力
图7 硬脂酸甲酯(MS)和棕榈酸甲酯(MP)处理后玉米(Ⅰ)、黄豆(Ⅱ)、黄瓜(Ⅲ)、水稻(Ⅳ)胚根、胚芽生长状况
Fig.7 Effects of methyl stearate(MS)and methyl palmitate(MP)on seedling growth
of maize(Ⅰ),soybean(Ⅱ),cucumber(Ⅲ)and rice(Ⅳ)
·671· 西 北 农 业 学 报 23卷
表2 硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯对玉米、黄豆、黄瓜、水稻的化感效应指数
Table 2 Inhibitory rate of methyl stearate(MS)and methyl palmitate(MP)on maize,soybean,cucumber and rice
名称
Name
化感效应指数Inhibitory rate(RI)
硬脂酸甲酯质量浓度/(mg/L)
Mass concentration of MS
250  500  1 000  2 000
棕榈酸甲酯质量浓度/(mg/L)
Mass concentration of MP
250  500  1 000  2 000
玉米 Maize 平均 Avg -0.54c -0.49b -0.45bc -0.86d -0.54c -0.30b -0.41bc -0.59c
标准误SE  0.01  0.03  0.02  0.03  0.04  0.04  0.07  0.02
黄豆Soybean 平均 Avg. 0.03a -0.31b -0.31b -0.25b -0.24b -0.25b -0.62c -0.60c
标准误SE  0.11  0.02  0.02  0.03  0.04  0.09  0.03  0.02
黄瓜Cucumber 平均 Avg. -0.43bc -0.35b -0.39bc -0.48c -0.42b -0.39b -0.39b -0.33b
标准误SE  0.03  0.05  0.04  0.02  0.05  0.02  0.05  0.03
水稻 Rice 平均 Avg. -0.35b -0.37b -0.30b -0.56c -0.44b -0.32b -0.46b -0.38b
标准误SE  0.02  0.05  0.00  0.03  0.07  0.05  0.03  0.04
注:同行数据后不同字母表示差异显著(P<0.05)。
Note:Data with different letters in the same row indicate significant difference(P<0.05).
  在很多植物的根系分泌物中均发现存在硬脂
酸甲酯和棕榈酸甲酯,如西芹[33]、大蒜[34]、黄花蒿
(Artemisia annua)[21]等根系分泌物中均发现有
棕榈酸甲酯,在黄花蒿根系分泌物中还发现有硬
脂酸甲酯[22]。虽然在黄花蒿及其他植物分泌的
化感物质中均检测到棕榈酸甲酯和硬脂酸甲酯的
存在,但对于这2种物质的化感作用的研究还很
少见。本研究表明,在南美蟛蜞菊根系分泌物中
也存在这2种物质,并且具有较高的质量浓度。
硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯对玉米、黄豆、黄瓜、水
稻种子萌发过程的某些指标均有显著抑制作用,
对种子的活力指数抑制作用都较明显,而活力指
数是表示种子活力比较全面的一项指标,可综合
表示种子的发芽能力和幼苗长势,活力指数数值
高,种子活力大。硬脂酸甲酯对黄豆的胚根、胚
芽、总长的生长均无显著抑制或促进作用,但对玉
米、黄瓜、水稻的胚根、胚芽以及总长均有显著抑
制作用。棕榈酸甲酯对这4种农作物的胚根、胚
芽、总长的生长均存在较显著抑制作用。另外,随
着质量浓度增加的趋势,对4种作物的作用趋势
并不十分一致,这一方面与作物自身有关系,另一
方面这可能与这2种物质在水中溶解度较低有
关。
在实验室收集到的南美蟛蜞菊根系分泌物中
发现邻苯二甲酸二异丁酯、邻苯二甲酸二异辛酯、
硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯,这4种物质的相对质
量浓度均较高,并且其化感作用也得到验证,这4
种物质很可能就是南美蟛蜞菊对作物化感作用的
机制之一。植物根系分泌物的成分较复杂,作用
也较多样,对南美蟛蜞菊根系分泌物的成分以及
其作用机理研究还有待进一步开展。
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·871· 西 北 农 业 学 报 23卷