全 文 ：承 德 医 学 院 学 报
JOURNAL OF CHENGDE MEDICAL COLLEGE
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Vol.31 No.2 2014
基础医学
凤尾草总黄酮抑制U251细胞迁移的体外研究*
刘银凤1，张 龙1，杨大为2，李玉斌2，张海垠2，冯 继2△
(1.承德医学院，河北承德 067000;2.秦皇岛第一医院)
【摘要】目的:观察凤尾草总黄酮对人脑胶质瘤U251细胞体外迁移能力的影响。方法:Transwell 迁移实验观察
不同浓度凤尾草总黄酮(5、10g/L)对人脑胶质瘤U251细胞迁移能力的影响，Western Blot法检测U251细胞
IL-6蛋白的表达水平。结果:不同剂量凤尾草总黄酮可抑制脑胶质瘤U251细胞的体外迁移能力，并下调U251
细胞IL-6的表达水平。结论:凤尾草总黄酮抑制人脑胶质瘤U251细胞迁移能力的作用可能与其抑制IL-6蛋
白的表达水平有关。
【关键词】凤尾草总黄酮;人脑胶质瘤U251细胞;IL-6;迁移
【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】1004-6879(2014)02-0093-03
INHIBITORY EFFECTS OF TOTAL FLAVONOIDS IN PTERIS MULTIFIDA ON U251 CELL MIGRATION
IN VITRO
LIU Yin-feng, ZHANG Long, YANG Da-wei, et al
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)
【ABSTRACT】Objective:To investigate the effects of total fl avonoids in pteris multifi da on human brain glioma U251
cell migration.Methods:Transwell migration experiment was used to observe the effects of different dose total fl avonoids
in pteris multifi da (5, 10 g/L) on U251 cell migration; Western Blot to detect the expression of IL-6 protein in U251 cells.
Results:Different dose total fl avonoids in pteris multifi da could inhibit U251 cell migration in vitro, and could down regulate
the expression of IL-6 in U251 cell.Conclusions: Downregulation of IL-6 protein expression may be the mechanism that
total fl avonoids in pteris multifi da inhibits U251 cell migration.
【KEY WORDS】Total fl avonoids in pteris multifi da; Human brain glioma U251 cells; Migration
脑胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发恶性肿瘤，
外科手术很难完全切除肿瘤周围浸润到正常脑组织中的
胶质瘤细胞，放化疗的效果亦不理想，新型抗脑胶质瘤药
物一直以来都是神经外科的研究热点[1]。凤尾草为凤尾蕨
科凤尾蕨属，主要产于贵州、浙江、江苏、湖南、陕西等地，
具有清热利湿、消肿解毒、凉血止血的功效[2]。近年来已经
证实凤尾草具有抗肿瘤作用，可经过多种途径干扰食管
癌、直肠癌、生殖系统相关肿瘤等的发生发展[3-4]。但尚未
见凤尾草影响脑胶质瘤细胞生物学活性的相关报道，本
研究旨在观察凤尾草总黄酮对人脑胶质瘤U251细胞体
外迁移能力的影响，并探讨其可能的机制。
1 材料与方法
1.1 细胞培养和实验分组 人脑胶质瘤U251细胞(中国
军事医学科学院馈赠)，置于37℃、5% CO2 培养箱，用含
10%胎牛血清以及青、链霉素各100U/ml的RPMI 1640
培养液培养，取对数生长期细胞用于实验。实验随机分
为3组:用不含凤尾草总黄酮的PBS液处理U251细胞为
对照组，5g/L凤尾草总黄酮处理U251细胞为实验1组，
10g/L凤尾草总黄酮溶液处理U251细胞为实验2组。
1.2 药物及制备 凤尾草干燥全草，购自河北省安国药
材市场，由承德医学院赵春颖副研究员鉴定为凤尾科蕨
类植物干燥全草，样品保留在承德医学院中药研究所。凤
尾草总黄酮制备方法参见文献[5-6]。
1.3 Transwell 迁移实验 取对数细胞生长期U251细胞，
胰酶消化并制成单细胞悬液，RPMI 1640培养基重悬细
胞，调整细胞密度为5×105/ml。Transwell 小室的上室加
入细胞悬液100μl(约5×104 个细胞)、1% BSA10μl，以维
持上室的渗透压;另外，实验1组、实验2组、对照组的上
室中分别加入浓度为5、10g/L的凤尾草总黄酮以及PBS
液100μl，每组均设3个复孔。下室中均加入600μl含15%
* 河北省医学适应跟踪项目(GL2012082)
△ 通讯作者
DOI:10.15921/j.cnki.cyxb.2014.02.037
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胶质瘤是人类最常见的、进行性恶化的原发颅内肿
瘤，尽管外科手术和放化疗水平不断提高，但在过去20年
里，胶质瘤的预后并没有得到显著改善[7]。目前为止，胶质
瘤的病因尚不清楚，其发病机制一直以来都受到广大学
者的广泛关注。自1987年开始，国内外学者先后发现人脑
胶质瘤细胞株和胚胎脑胶质细胞中有lL-6的持续分泌
和表达，证实IL-6的异常表达与胶质瘤的发生发展密切
相关[8-9]。
凤尾草主产于贵州、浙江、湖南、江苏、陕西等地，功
效是清热利湿、凉血止血、消肿解毒，民间用其治疗菌痢、
肝炎、淋浊、便血、痈肿疮毒、扁桃体炎、湿疹等[1]。凤尾草
含黄酮类、萜类化合物、挥发油、甾醇类、苯丙素类等成
分，具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤作用[2-4]。近期研究发
现，凤尾草总黄酮可通过调节IL-6蛋白的表达水平影响
血液系统肿瘤和骨肉瘤的迁移能力[10]。
IL-6是一种具有复杂生物学功能的细胞因子，参
与调节免疫应答、应激反应、造血功能、炎症反应和防御
反应，与多种自身免疫性疾病的发生发展密切相关。另
外，IL-6在某些肿瘤的发生和转归过程中起着重要作
用，并应用于多种肿瘤的辅助诊断和疗效观察[11]。研究发
现，IL-6的表达水平与恶性肿瘤的转移有关，与直肠结
肠癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌的转移呈正相关
[11-13]。同时，体外实验和动物实验均已证明IL-6可影响胶
质瘤的迁移和侵袭能力，临床研究亦发现IL-6与胶质瘤
的复发和预后关系密切，IL- 6的表达水平可作为免疫
治疗胶质瘤的监测指标[14-15]。
本研究发现，不同剂量凤尾草总黄酮可抑制脑胶质
瘤U251细胞的体外迁移能力，并下调U251细胞IL-6的
表达水平。结合前人的研究结果推测，凤尾草总黄酮抑
制脑胶质瘤U251细胞迁移的机制可能与其抑制IL-6蛋
白的表达水平有关;但IL-6是否在凤尾草总黄酮抑制
U251人脑胶质瘤细胞体外迁移中起主要作用，以及凤尾
草总黄酮通过哪些途径影响IL-6蛋白的表达还有待进
一步的研究。
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胎牛血清的RPMI 1640完全培养基。37℃、5% CO2 培养
箱常规培养24h后取出Transwell 小室90%乙醇固定。棉
签拭去聚碳脂膜上室面的细胞，0.1%结晶紫溶液染色聚
碳脂膜下室面的细胞，风干，显微镜下观察并拍照。随机
选取4个视野(×400)计数穿膜细胞数，并计算平均值。实
验重复3次。
1.4 检测U251细胞IL-6蛋白的表达 采用Western Blot
法。取对数生长期U251细胞，胰酶消化成单细胞悬液，接
种于培养瓶中，不同组的细胞分别加入不同浓度的凤尾
草总黄酮和PBS，常规培养24h后收取细胞，提取蛋白，
BCA法测定蛋白浓度。12% SDS-PAGE电泳，蛋白上样
量40μg，电泳后转膜，5%脱脂奶粉TBS液封闭2h，IL-6
抗体(1:500)、抗β-actin 抗体(1:500)4℃孵育过夜，化学
发光法检测，Image Quant LAS凝胶成像系统采集图像，
Imagepro-Plus 6.0软件定量分析。
1.5 统计分析 采用SPSS 17.0统计软件处理数据，行
方差分析和q 检验，P ＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Transwell 迁移实验结果 两个凤尾草总黄酮组穿膜
细胞数明显低于对照组(P ＜0.05); 并且，10g/L凤尾草
总黄酮组(实验2组)穿膜细胞数明显低于5g/L凤尾草总
黄酮组(实验1组，P ＜0.05)。见附表。
附表 穿膜细胞数和U251细胞IL-6的表达( ±s，n=3)
组别 穿膜细胞数 IL-6
对照组 137±10.7 0.987±0.046
实验 1组 60±7.7* 0.686±0.019*
实验 2组 32±6.1*# 0.205±0.024*#
与对照组比较:*P ＜0.05;与实验1组比较:#P ＜0.05
2.2 U251细胞IL-6的表达 两个凤尾草总黄酮组U251
细胞IL-6蛋白的表达明显低于对照组(P ＜0.05); 并且，
10g/L凤尾草总黄酮组(实验2组)U251细胞IL-6蛋白的
表达明显低于5g/L凤尾草总黄酮组(实验1组，P＜0.05)。
见附表，附图。
[1]
[2]
[3]
附图 U251细胞IL-6的表达
3 讨论
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丝胶对2型糖尿病大鼠脾脏IFN-γ表达的作用*
李 强1、2，梁秀军2，王永为2，陈志宏2，宋鸿儒2△，裴银辉1△
(1.河北联合大学基础医学院，河北唐山 063009;2.承德医学院)
【摘要】目的:探讨丝胶对2型糖尿病大鼠脾脏干扰素γ(IFN-γ)表达的作用。方法:小剂量链脲佐菌素连续
腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型，并给予丝胶灌胃。RT-PCR法检测脾脏IFN-γmRNA的表达。结果:与
正常对照组大鼠相比，糖尿病模型组大鼠脾脏IFN-γ的表达明显升高(P ＜0.01)，丝胶治疗组、丝胶预防组大
鼠脾脏IFN-γ的表达明显低于糖尿病模型组(P ＜0.01)。结论:丝胶可通过下调脾脏IFN-γ的表达，发挥对
2型糖尿病大鼠免疫功能的调节作用。
【关键词】丝胶;2型糖尿病;脾脏;干扰素γ
【中图分类号】R587 【文献标识码】A 【文章编号】1004-6879(2014)02-0095-03
EFFECTS OF SERICINE ON IFN-γ EXPRESSION IN SPLEEN OF TYPE 2 DIABETES MELLITUS RATS
LI Qiang, LIANG Xiu-jun, WANG Yong-wei, et al
(Basic Medical Sciences of Hebei United University, Hebei Tangshan 063009, China)
【ABSTRACT】Objective: To investigate the effects of sericine on interferon-γ (IFN-γ) expression in spleen of type 2
diabetes mellitus rats.Methods: The type 2 diabetes mellitus rats model was established by continuous peritoneal injection of
small dose streptozotocin, and then the model rats were lavaged with sericine. RT-PCR was used to detect the expression of
IFN-γ mRNA in spleen. Results:Compared with rats in normal control group, the IFN-γ expression in spleen of rats in model
group obviously increased (P＜ 0.01). While, the IFN-γ expression in spleen of rats in sericine treatment group and sericine
prevention group were obviously lower than that of rats in model group (P＜ 0.01).Conclusions:Sericine can regulate the
immune function of type 2 diabetes mellitus rats by down regulating the IFN-γ expression in spleen.
【KEY WORDS】Sericine; Type 2 diabetes mellitus; Spleen; Interferon-γ
* 河北省自然科学基金项目(H2013406096)
△ 通讯作者
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目前，糖尿病的病因尚未完全阐明，随着免疫学研究
的不断发展，越来越多的证据表明糖尿病患者存在不同
程度的免疫异常[1]。干扰素γ(interferon-γ，IFN-γ)主
要由免疫细胞Th1分泌，具有抗病毒、抗增殖活性、免疫