全 文 ：·9 6 3
· 中药新药与临床药理 2 0 03年 1月第_ 1些卷第 6 期
质 !盛夕析花开究
反相高效液相色谱法测定化橘红中野漆树普的含量
袁旭江 ’ , 林 励 ’ , 李向明 “ (l . 广州中医药大学 , 广州 51 0 405 ; 2 . 化州市绿色生命有限公司 , 广东 化州 5 2 5 10 )
摘要 : 目的 对化橘红中野漆树普进行含量测定研究 。 方法 采用反相高效液相色谱法 , 色谱柱为 M A C H E R E Y -
N A G E L 10 0 一 5 C t 、 柱 ( 25 0 m m x 4 . 6 m m , 5 卜m ) , 流动相为 甲醇和水 一 乙酸 ( 6 1 : 4 ) , 进行梯度洗脱 , 流速为 1 . 0
m L/ m in
, 检测波长 3 45 n m 。 结果 在 0 . 81 6 一 13 . 05 6 协g 范 围内 , 野漆树答与 色谱峰面积呈 良好的线性关系 , r =
0
.
9 95
, 平均 回收率为 10 1 . 0 6 4 % , R S D = 3 . 10 % ( n 二 5) 。 结论 建立 了测定化橘红中野漆树普含量的 HP LC
法 , 该方法 简便准确 , 重现性好 ; 毛橘红和光橘红中野漆树普含量有显著差异 。
关键词 : 化橘红 / 化学 ; @ 野漆树普 / 分析 ; 色谱法 , 高压液相
中图分类号 : R 2 8 4 . 1 文献标识码 : A 文章编号 : 10 0 3 一 9 7 8 3 ( 2 00 3 ) 0 6 一 0 3 9 6 一 0 3
D e t e r m i n a it o n o f t h e R h o i fo l i n i
n E x o e a r P i u m C i t r i G r a n d i s B y R P 一 H P L C
Y U AN X uj i a n g
, , L IN L i ’ , L l X ia n g m i n g , ( 1
.
G u a n g z h o u U n iv e sr i ty o f T CM
,
G u a n g z h o u 5 10 4 0 5 : 2
.
H u a z h o u C i t y G r e e n
L i fe C o
.
LT D
,
H u a z h o u 5 2 5 10 0
,
G u a n g d o n g )
A b s t r a e t : O bj e e t i v e oT
e s t a b l i s h a m e th o d fo
r t h e d e t
e
mr i
n a t i o n o f R h o i fo li n e o n t e n t i n E x
o e a印 i u m e it r i g ar n d i s ( E C G ) .
M e t h o d s T h
e R P 一 H P L C m e t h o d w a s o P e r a te d o n M AC H E R E Y 一 N A GE L 10 0 一 S C 一: , w i t h m e t h a n o l a n d w a t e r -
a e e ti e a e id ( 6 1 : 4 )
a s m o b i l e p h a s e
,
g r a d i e n t e l u t io n
,
fl o w r a t e a t 1
.
0 m L / m i n
, a n d d e t e e ti o n w a v e l e n g t h a t
3 4 5 n m
.
R e s u l st I n t h e r a n g e fr o m 0
.
8 16 林9 r o 1 3 . 0 5 6协g , Rh o i fo l in 15 i n a g o o d Ii n e a r i ty w i t h e h or m a t o g r a p h i e p e a k s
a r e a , r = 0
.
99 9 5
,
t h
e a v e r昭 e er e o v e即 r a t i o 15 10 1 . 0 6 4 % , R SD = 3 . 10 % ( n = 5 ) . T h e e o n t e n t o f R h o i fo l i n i n T o m e n t u -
l o s u s E
x o e a甲 i u m C ir r i G r a n d i s ( T E C G ) r a n g e d for m 1 . 3 3 % t o 0 . 1 7 7 % a n d t h a t in G la b or u s E x o e a印i u m C i t r i G ar n d i s
( G E C G ) 15 l e s s t h a n 0
.
17 %
.
C o n e l u s i o n s R P 一 H P LC m e t h o d 15 w i th a e e u r a e y a n d a g o o d er p or d u e ib i l i t y fo r t h e d e t e -r
m i n a ti o n o f th e R h o ifo l i n e o n te n t i n E C G ; th e d ife er
n e e o f R h o ifo l in e o n t
e n t i n T E C G a n d G E C G 15 s i g n iif e a n t
.
K e y w o r d s : E x o e a甲 iu m e i t r i g r a n d i s / e h e m i s t叮 ; @ R h o i fo l in / a n a l y s i s ; Ch or m a t o g r a p h y , h i g h p r e s s u r e l iq u i d
化 橘 红 为 芸 香 科 植 物 化 州 袖 iC t ur 、 g ar dn 此
`
to m e n to s a
’ 和袖 C it r us g r a n以i , ( L . ) o s b e e k . 未成熟果
实的干燥外层果皮 川 , 前者称毛橘红 , 后者称光橘
红 。 化橘红有散寒 、 燥湿 、 消痰 、 利气等功效 , 用于
风寒咳嗽 、 喉痒痰多 、 食积伤酒 、 呕恶痞闷等症 ”` 。
化橘红富含黄酮类成分 , 主要为袖皮昔 ( N盯 ign i n ) 、
野漆树昔 ( R ho i fol in )等 ” ’ 。 测定化橘红 中抽皮昔含量
已有文献报道 ”` , 但尚未见测定化橘红中野漆树昔含
量的报道 。 笔者建立了测定化橘红野漆树昔含量的
高效液相色谱法 , 并对毛橘红与光橘红中野漆树昔
含量进行了比较分析 。
D io n e x )
,
S a rt o
r i u s B p Z I I D 电 子 分 析 天 平 ( 德
国 ) , 电热恒温水浴锅 (北京市医疗设备厂 ) 。 野漆
树昔对照品 (自制 , 纯度为 9 8 . 5 5 % ) , 甲醇为色谱
纯 , 三蒸水 , 石油醚 ( 60 ~ 90 ℃ ) 、 冰醋酸等其他
试剂均为分析纯 。 化橘红来源见表 2 。
1 仪器与试药
S u m m it 5 8 0 型高 压 液 相色谱仪 系列 (德 国
收稿 日期 : 2 0 0 3 一 0 5 一 2 7
作者简介 : 袁旭江 ( 19 76 一 ) , 男 , 实习研究 员 , 现在广东药学院工作 ,
基金项 目 : 广东省科技计划项 目 (编号 A3 o l O2 0 10 1) 。
2 方法与结果
2
.
1 色 谱 条件 色 谱 柱 : M A C H E R E Y 一 N A GE L
10 0 一 5 C 18 柱 ( 2 5 0 m m x 4 . 6 m m , 5 林m ) ; 流动
相 : 甲醇 , 水 一 乙酸 ( 61 : 4) , 梯度洗脱 ; 流速 :
1
.
0 m L / m i n ; 检测波长 : 3 4 5 n m : 柱温 : 2 5 ℃ 。 结
果见图 1。
2
.
2 供试品溶液的制备 精密称定干燥至恒重的样品
1
.
0 9
, 置索氏提取器中 , 加石油醚 ( 6 0 一 9 0 ℃ ) 10 0
从事中药资源开发利用与中药新药研究
中药新药与临床药理 2 0 03年 1月第 1 4卷第 6期 · 3 97 .
野漆树背
口 V已
t/ m i n
a
.野漆树昔对照品
骊
野漆树昔
p阅三
t/ m i n
b
.供试品
图 1化橘红 H LC P图
m L
, 水浴回流提取 2 . s h , 弃去石油醚液 , 待样品中
残存的石油醚全部挥去后 , 加甲醇 10 m L 再置水浴
中回流提取 4 h 以上 , 提取至无色 , 放冷 , 滤过 , 滤
液浓缩并转移至 or m L 量瓶 中 , 以 甲醇少量分数次
洗涤容器及滤纸 , 洗涤液并人同一量瓶中 , 加 甲醇
定容至刻度 , 即得 。
2
.
3 对照品溶液的制备 准确称取 10 5 ℃干燥至恒重
的野漆树昔对照品 , 加甲醇溶解 , 制成 0 . 8 16 m g / m L
溶液 , 作为对照品溶液 。
2
.
4 线性关系的考察 用微量进样器分别准确吸取
对照 品溶液 l , 2 , 4 , 6 , s , 10 , 1 6 卜L 依次进样 ,
并记 录峰面积 。 以进样量为横坐标 , 峰面积为纵坐
标 , 绘制标准曲线 。 求得野漆树昔的回归方程 : Y 二
2 8
.
8 7 6 8 X 一 6
.
1 1 7 9
, r = 0
.
9 9 9 5
。 结果表明 , 野漆树
昔在 0 . 8 16 一 13 . 056 卜g 范围内与色谱峰面积呈 良好
的线性关系 。
2
.
5 稳定性试验 取同一份供试品溶液 , 分别在 0 ,
2
,
4
,
8
,
16
,
2 4 h 进行测定 , 考察保留时间和峰面
积 的一致性 。 结果 , 野漆树昔的保留时间平均值为
4 1
.
5 4 1 m i n
,
R SD = 0
.
2 4 2 % : 野漆树昔的峰面积平
均值为 19 2 . 3 15 , R SD 二 2 . 8 1 % 。
2
.
6 精密度试验 取同一份供试品溶液 , 连续进样 5
次 , 考察色谱峰保留时间 和峰面积的一致性 。 结
果 , 野漆树昔 的保 留时 间平均值为 41 . 4 78 而 n ,
R S D = 0
.
5 0 4 % ; 野 漆 树 昔 的 峰 面 积 平 均 值 为
1 9 1
.
8 3 6
,
R SD = 2
.
0 4 %
。
2
.
7 重现性试验 取同一 批供试品 5 份 , 同法检
测 , 考察色谱峰保留时间的一致性 , 各主要色谱峰
保留时间 R S D 值均低于 3 . 0 % 。 测得野漆树昔峰面
积平均值为 19 3 . 6 16 , R s D = 3 . 0 4 % 。
2
.
8 加样回收率试验 精密称取 已知含量的样品 5
份 , 准确加人野漆树昔对照品各 5 . 80 m g , 按供试品
溶液 制备方法制备 , 各取 10 林L 进样 , 测定含量 ,
计算 , 结果 野 漆树昔平 均 回收 率为 101 . 06 % ,
R SD = 3
.
10 %
。 结果见表 l 。
表 , 野漆树普加样回收率试验结果
样品含量 / m g 加人量 / m g 测得量 / m g 回收率 /% 平均回收率 /% Rs D /%
ùóó5 . 0 2 5 . 804 . 92 5 . 80
5
.
0 8 5
.
80
5
.
13 5
.
80
5
.
38 5
.
80
10
.
66
10
.
67
10
.
90
】1 . 17
11
.
4 3
10 1
.
06
表 2 化橘红中野漆树普含量 (以干燥品计 ) 测定结果 ( n = 3)
样品号 来 源 含量 /% R S D /%
09
1ù11了464.…422,J01飞ù2
毛橘红
2 0 0 年 5 月采于广东省化州市平定镇 , 药材直径约为 7 . oc m
2 0 0 0 年 4 月采于广东省化州市平定镇 , 药材直径约为 4 . sc m
2 0 0 0 年 8 月 收自广东省化州市平定镇 , 药材直径不小于 4c m
2 0 0 0 年 8 月收自广东省化州市平定镇 , 药材直径不小于 6 o m
2 0 0 2 年 4 月采于广东省化州市平定镇 , 药材直径小于 3 . oc m
2 0 0 2 年 4 月采于广东省化州市平定镇 , 药材直径约为 1 . 6 一 2 . 6c m
2 0 0 2 年 4 月采于广东省化州市平定镇 , 药材直径约为 2 . sc m
2 0 0 2 年 4 月采于广东省化州市平定镇 , 药材直径约为 3 . cs m
2 0 0 2 年 4 月采于广东省化州市平定阵 , 药材直径约为 2 . 8 一 4 . c4 m
2 0 0 2 年 6 月采于广东省化州市平定镇 , 药材直径约为 5 . 0 一 7 . cZ m
0
.
4 98 士 0
.
0 2 0
0 6 12 士 0
.
0 18
1
.
3 30 士 0
.
0 3 0
0
.
17 7 士 0
.
0 0 5
0
.
2 4 8 土 0
.
0 0 2
0
.
6 5 8 土 0
,
0 0 9
0
.
4 4 4 士 0
.
0 16
0
.
4 6 5 土 0 0 1 1
0
.
7 6 7 士 0
.
0 14
0
.
6 5 2 土 0
.
0 2 3
以`
6
1了O八
;
.
:
9l0
产自湖南 , 药材直径约 4 . oc m
产自广西 , 药材直径约 7 . 0() m
购自海南省海南大学附属医院 , 市售药材直径约 9 . cZ m
购 自北京西单金象大药房 , 市售药材 , 直径约 1 . 3 c m
购自河南省郑州市医药总公 司医药大厦 , 市售药材 , 直径约 10 . cs m
购自广东揭阳市汇康医药有限公司 , 市售药材 , 切片
购自湖南省常德市吉春堂药店 , 市售药材 , 切片
购自云南省楚雄市延寿堂连锁店 , 市售药材 , 切片
购自浙江绍兴 , 市售药材 , 切片
购自山西太古山西中药厂药材经销部 , 市售药材 , 切片
0
.
13 6 土 0
.
0 0 4
0
.
2 10 士 0
.
0 0 2
0 0 9 4 士 0
.
0 0 1
0
.
0 7 8 士 0 0 0 0
0
.
0 6 8 土 0
.
0 0 2
0
.
10 2 土 0
.
0 0 2
0
.
12 6 士 0
.
0 0 1
0
.
14 4 士 0
.
0 0 3
0
.
10 1 士 0
.
0 0 0
0
.
0 7 1 士 0
.
0 0 0
3
.
0
0
.
7
1
.
0
0 4
3
.
3
1
.
8
1
.
1
1
.
8
1
.
0
0
.
2
2134567910
光橘红
3 9 8
2
.
9 样品测定 准确吸取供试品溶液各 01 林 L , 注人
高效液相色谱仪中 , 照上述色谱条件进行试验 , 以野
漆树昔对照品为参照物 , 外标法计算含量 , 结果见表
2
。
结果表 明 , 毛橘红 中野 漆树昔含 量最 大达 到
1
.
3 %
, 最小的也达 0 . 17 % , 而光橘红中野漆树
昔含量除样品 2 外均小于 0 . 17 0 % , 表明两者野漆树
昔含量存在明显差异 。
中药新药与临床药理 20 03 年 1 月第 14 卷第 6 钮
量均较低 , 两者存在显著差异 , 故可考虑将此作为毛
橘红与光橘红的鉴别特征之一 。 本文首次建立了测定
化橘红 中野漆树昔含量的 H P L C 法 , 方法简便准确 ,
重现性好 , 空 白无干扰 , 适用于化橘红中野漆树昔含
量测定 , 同时也为化橘红的 G A P 研究奠定基础 。
3 讨论
研究结果显示 , 毛橘红中野漆树昔含量 均高于
0
.
17 7 %
, 而与毛橘红相比较 , 光橘红中野漆树昔含
参考文献 :
【l] 中华人民共和国药典委 员会 , 中华人民共和国药典 2 0 0 0 年版 一 部
〔5] . 北京 : 化学工业 出版社 , 2 0 0 . 56 .
{ 2 1黄美声 , 沈 玉刚 . 反相高效液相色普法测定化橘红 中袖皮贰的含
量 [J l . 中草药 . 1 9 90 . 2 1 ( 5 ) : 1 5 .
H P L C 法测定青辛速释贴中靛蓝的含量
彭荣珍
5 1 8 0 0 0 )
郑 国秦 ’ , 罗光 亮 “ l( . 广东省江 门市五 邑中医院 , 广东江门 5 2 9 00 ; 2 . 深圳市罗湖 区中医 院 , 广东 深圳
摘要 : 目的 建立青辛速释贴 中靛蓝的含量测定方法 。 方法 采用索氏提取 , HP L C 法测定青辛速释贴 中靛蓝的含
量 , 色谱柱 : Sh i m 一 p a e k v P 一 O D S 柱 (4 . 6 x 2 5 0 m m ) , 流动 相 : 甲醇 一 乙睛 一 0 . 1 m o l / L 乙酸按 ( 60 : 4 : 36 ) , 流
速 : 1 . 0 m L / m in , 柱温 : 30 ℃ , 进样量 : 20 林L , 检测波长 : 28 0 n m 。 结果 靛蓝在 0 . 4 一 6 . 60 此 / m L 范围 内呈 良
好的线性关 系 ( r 二 0 . 9 91 ) ; 平均 回收率为 103 . 6% , R S D = 1 . 1 % 。 结论 该方法准确 、 灵敏 、 重现性好 , 可用
于青辛速释贴 的质量控制 。
关键词 : @ 青辛速释贴 / 化学 ; 靛卡红 / 分析 ; 色谱法 , 高压液相
中图分类号 : R 2 8 4 . l 文献标识码 : A 文章编号 : 1 00 3 一 9 7 8 3 ( 2 00 3 )0 6 一 0 3 9 8 一 0 3
D e t e r m i
n a it o n o f I n d i g o C o n t e n t i n Q i
n g x in S u s h沉e b y H P L C
p E N G R o n g z h e n
` , Z H E N G G u o s h e n ,
,
LU O G u a n g li a n g
,
( 1
.
J i a n g m e n W u y i H o s p i ta l 。 f T C M
,
J i a n g m e n 5 2 9 0 0 0
,
G u a n g d o n g ; 2
.
S h e n z h e n L u o h u D i s t r i e t H o s p i t a l o f T C M
,
S h e n z h e n 5 1 80 0 0
,
G u a n g d o n g )
A b s tar e t : O 讨e e it ve oT e s ta b li s h a m e th o d fo r : h e d e te mr i n a t io n Of i n d i邵 e o n te n t i n C in多飞i n S u s h i z ie by
H PL C
.
M e t h o d s A t 3 0 ℃ , H P LC w a s p e for mr e d t o de t e mr i n e i n d i g o o n O D S e o l u m n ( 4 . 6 x 2 5 0 m m ) , th e m o b il e
p h a s e w a s e o m p o s e d o f m e t h a n o l 一 a e e to n i t r i l e 一 0
.
l m o l / L a m m o n i u m a e e t a t e ( 6 0 : 4 : 3 6 )
,
fl o w r a t e w a s 1
.
0 m L / m i n ;
inj e e t io n v o l u m e w a s 2 0 卜L a n d d e t e e t i o n w a v e l e n g t h a t 2 8 0 n m . R e s u l t s T h e li n e a ir ty o f i n d i g o w a s g o o d w i th i n 0 . 4 4 -
6
.
6 0 林g / m L ( r = 0 . 9 9 9 1 ) , th e a v e r a g e r e e o v e叮 w a s 10 3 . 6 % a n d R S D 二 1 . 1 1 % . C o n e lu s i o n T h i s m e t h o d 15 s im -
p l e
, s e n s i t iv e a n d a e e u r a t e
, a n d e a n b e u s e d fo
r q u a li t y e o n t or l o f QI l lg 不i n S u s h i ti e
·
K e y w o r d s : @ Qi门g 丫i n S o h i t i e / e h e m i s t卿 ; I n d i g o e a r m in e / a n a l y s i s ; C h r o m a t o g r a p h y , h i g h p r e s s u er li q u i d
青辛速释贴是我院自行研制的一种纯中药巴布膏
剂 , 由青黛 、 细辛 、 烟叶 3 味药组成 , 用于外感风
寒 、 风热之表证 。 青黛是主药 , 其主要成分是靛蓝 、
靛玉红川 。 本文采用 H P LC 法测定其中靛蓝的含量 ,
收稿 日期 : 20 0 3 一 0 7 一 14
作者简介 : 彭荣珍 ( 19 71 一 ) , 女 , 主管药师 , 主要从事药 品质量标准研究 。
基金项 目 : 广东省中医药管理局科研课题 (编号 0 9 9 6 2 8) 。