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紫外-可见分光光度法测定续随子种子中大环二萜类化合物



全 文 :第 4 期
收稿日期:2012-11-28
基金项目:四川省中医药管理局科技专项课题(201003);乐山市科技局重点研究计划项目(2011SZD109);四川省教育厅支持项目(10zB024)
作者简介:成 英(1974-),女,四川仁寿人,副教授,主要从事植物化学研究,(电话)13308133386(电子信箱)cying215@hotmail.com;
通讯作者,胡建平,副教授,主要从事生物物理学研究,(电话)18981384068(电子信箱)hujianping@emails.bjut.edu.cn。
第 52 卷第 4期
2013 年 2 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 52 No.4
Feb.,2013
续随子(Euphorbiae Lathyridis L.)又名千金子,
为大戟科大戟属 1~2 年生草本油料及药用植物,其
植株种含有多种二萜类化合物[1]。 这类物质不仅骨
架特殊, 而且还具有较强的细胞毒性和抗肿瘤活
性 [2],是一种尚待开发、有望成为治疗人类重大疾病
的新药源植物。 目前国内外学者对续随子种子的各
种生理活性以及大环二萜类物质性质研究较多 [3-6],
本试验主要是针对续随子种子中的两种大环类物
质(Euphorbia factor L1 和 Euphorbia factor L2,图
1),以紫外-可见分光光度法分析,建立 L1 和 L2 的
最佳提取工艺[5-7]和测定方法,以期为后续续随子开
发提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
续随子种子,购于成都五块石药材市场,经四
川大学植物系统与分子进化实验室鉴定为大戟科
(Euphorbiaceae)大戟属(Euphorbia)植物续随子(Eu-
phorbia lathylris Linn.); 标准品由本实验室从续随
子种子中提取,经 1H-NMR、13C-NMR、四原单晶等
鉴定为 Euphorbia L1 和 Euphorbia L2。 无水乙醇
(分析纯),购于国药集团化学试剂有限公司。
1.2 仪器
TU1901-紫外可见双光束分光光度计 (北京普
紫外-可见分光光度法测定续随子种子中大环二萜
类化合物
成 英,胡建平
(乐山师范学院化学与生命科学学院功能性分子设计中心,四川 乐山 614004)
摘要:通过正交试验分析了续随子(Euphorbia lathylris Linn.)中 2 种大环二萜类化合物(Euphorbia factor
L1 和 Euphorbia factor L2)的最佳提取工艺,并通过紫外-可见分光光度法对这两类大环二萜类物质的含
量进行测定。 结果表明,样品的最佳提取条件为无水乙醇提取,料液质量比为 1∶20,40 ℃下超声提取 50
min。 大戟因子 L1 在 9.6~48.0 mg / L,大戟因子 L2 在 5.9~29.5 mg / L 范围内线性关系较好,在续随子种子
中的含量分别为 0.995%和 0.538%。 该法简便可行,重现性好,可用于续随子种子中的大环二萜类化合物
的测定。
关键词:续随子(Euphorbia lathylris Linn.);大环二萜;紫外-可见分光光度法
中图分类号:O657.32 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2013)04-0927-02
Determination of Two Macrocyclic Deterpenes in the Seeds of Euphorbia lathylris Linn.
by UV-Vis Spectroscopy
CHENG Ying,HU Jian-ping
(Center for Functional Molecular Design, College of Chemistry and Life Science, Leshan Normal University, Leshan 614004, Sichuan,China)
Abstract:The extraction techniques of two macrocyclic diterpenoids (Euphorbia factor L1 and L2) in the seeds of Euphorbia
lathylris Linn. were optimized by the the orthogonal experiment and detected UV-Vis Spectroscopy. The result showed that the
optimized extration process was using enthanol as extractant with was ratio of solid to liquid at 1∶20, extract at 40 ℃ for 50
min. The liner range of L1 and L2 were 9.6~48.0 mg / L and 5.9~29.5 mg / L respectively. The content of L1 and L2 were
0.995% and 0.538% respectively. In conclusion, it was a simple, convenient, stable, repeatable method for analyzing L1 and
L2 in the seeds of E. lathylris Linn.
Key words: Euphorbia lathylris Linn; macrocyclic diterpenoids; UV-Vis spectroscopy
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2013.04.012
湖 北 农 业 科 学 2013 年
表 3 L1 加样回收率的测定结果
样品
g
2.067 4
2.065 0
2.054 9
2.054 1
2.051 4
2.051 9
样品中 L1 含量
mg
0.257 1
0.256 9
0.255 6
0.255 5
0.255 1
0.255 2
L1 加入量
mg
0.192 0
0.192 0
0.096 0
0.096 0
0.038 4
0.038 4
测定值
mg
0.456 5
0.461 2
0.343 1
0.347 2
0.290 7
0.290 1
回收率
%
101.60
102.70
97.58
98.78
99.05
98.81
平均回收率
%
99.75
RSD
%
1.96
析通用仪器有限责任公司)、KQ3200 型超声波清洗
器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.3 方法
按照药典中对紫外-可见分光光度法定量分析
的要求 [8],从样品的最大吸收波长、线性关系、仪器
的精密度、重现性、稳定性等进行分析,对 L1 和 L2
的含量进行测定。
1.3.1 样品制备 称取续随子种子粗粉,针对乙醇
浓度、料液比、提取时间以及提取温度等条件进行
单因素分析和正交试验, 建立续随子种子中 L1 和
L2 的最佳提取工艺 [5]。 将提取液静置过夜,取上清
液于 272 nm测定其吸光度。
1.3.2 标准曲线的绘制 称取 L1 和 L2, 分别以无
水乙醇配制浓度为 1.92 g / L 和 1.18 g / L 的标准母
液, 将标准母液稀释 10 倍, 从稀释液中准确量取
0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL 于各比色管中,以无水乙醇
定容至 10 mL,以对照品浓度为横坐标,吸光度值为
纵坐标,绘制标准曲线。
1.3.3 含量分析 利用回归方程计算样品提取液
浓度 c(g / L),并通过下式计算百分含量 ρ(%),ρ=
cV / m×100%其中 V (L) 为续随子提取液的体积,m
(g)为续随子种子粗粉质量。
2 结果
2.1 标准曲线
将 L1 和 L2 工作溶液于 272 nm 处测定, 其中
L1的线性方程为 y=0.016 3x+0.029 1,r=0.999 5,线性
范围为 9.6~48.0 mg / L;L2的线性方程为 y=0.026 5x+
0.044 5,r=0.999 5,线性范围为 5.9~29.5 mg / L。
2.2 提取工艺探讨
通过单因素分析和正交试验选择续随子种子
中 L1和 L2的最佳提取工艺[5]。结果表明,最佳提取
试剂为无水乙醇,料液比为 1∶20,提取温度 40 ℃,超
声提取 50 min。
2.3 精密度试验
将浓度分别为 28.8 mg / L 和 17.7 mg / L 对照品
溶液,在 272 nm 处连续测定 3 次,其吸光度平均值
分别为 0.510 3 和 0.521 8,RSD 分别为 0.89%和
0.77%(n=3),表明方法精密度良好。
2.4 重现性试验
精确称取 4 份续随子种子粗粉, 每份 2.0 g,按
照上述方法进行分析,L1 和 L2 的平均含量分别为
0.995%和 0.538%,RSD为 1.74%和 1.78%。
2.5 稳定性试验
取同一份续随子种子样品溶液,在室温下放置
0~9 h 后测定,其 RSD 分别为 1.02%和 0.99%,表明
这 2种大环二萜类物质在 9 h内稳定性良好。
2.6 样品含量的测定
准确称取续随子种子 2.0 g,按照上述方法进行
分析,取提取液 0.50 mL 于 10 mL 比色管中,无水乙
醇定容,在 272 nm 处测定吸光度,计算样品中这两
类大环二萜类物质的含量,结果见表 1,其中 L1 和
L2含量分别为 0.995%和 0.538%。
2.7 加标回收试验
准确称取续随子种子粗粉 2.0 g,在最佳提取条
件下提取,离心,取提取液 0.5 mL 分别加入不同体
积 (0.2~1.0 mL) 的 L1 和 L2 标准液 (0.192 g / L 和
0.118 g / L), 以无水乙醇定容至 10.0 mL, 测定 272
nm 处吸光度值,计算出 L1 和 L2 的回收率,结果如
表 3、表 4所示。
表 1 样品中 L1 含量的测定
样品量//g
2.013 2
2.007 9
2.001 1
2.003 7
吸光度
0.447 5
0.434 1
0.428 7
0.433 3
含量//%
1.020
0.990
0.980
0.990
平均含量//%
0.995
RSD//%
1.74
表 2 样品中 L2 含量的测定
样品量//g
2.013 2
2.007 9
2.001 1
2.003 7
吸光度
0.411 3
0.403 7
0.395 8
0.396 3
含量//%
0.550
0.540
0.530
0.530
平均含量//%
0.538
RSD//%
1.78
图 1 Euphorbia factor L1(A)和 Euphorbia factor L2(B)
的结构式
(下转第 939页)
928
第 4 期
(上接第 928页)
(责任编辑 周有祥)
表 4 L2 加样回收率的测定结果
样品
g
2.067 4
2.065 0
2.054 9
2.054 1
2.051 4
2.051 9
样品中 L2 含量
mg
0.139 0
0.138 9
0.138 2
0.138 1
0.138 0
0.138 0
L2 加入量
mg
0.118 0
0.118 0
0.059 0
0.059 0
0.023 6
0.023 6
测定值
mg
0.249 6
0.248 2
0.194 5
0.195 0
0.159 4
0.155 8
回收率
%
97.12
96.61
98.63
98.91
98.64
96.41
平均回收率
%
97.92
RSD
%
1.16
3 结论
本试验采用紫外-可见分光光度法测定了续随
子种子中 2类大环二萜类物质的含量,其中 Euphor-
bia factor L1 在 9.6~48.0 mg / L,Euphorbia factor L2
在 5.9~29.5 mg / L 范围内线性关系较好, 在续随子
种子中的含量分别为 0.995%和 0.538%, 与采用
HPLC法初步测定的结果[5]基本一致。本方法操作简
单、检测成本低,快速,重现性好、精密度高,回收率
和线性关系符合分析要求, 可用于续随子中的 L1
和 L2快速分析。
参考文献:
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版社,2010.
生产中更换生产牌号时短暂停机清理一次;原来一
次润叶清理出来的不乏有大片烟叶, 每次重 40~50
kg,每天约 250 kg 的可利用烟叶被废弃,而目前仅
有几千克的碎片和麻纤维。
5 小结
润叶作为打叶复烤预处理工艺中的重要工序,
首先应保证设备运行稳定。 通过顺逆流组合式润叶
工艺的开发运用,改善了设备运行状况,并减少了
可利用烟叶过度回潮而被废弃,对客户和企业自身
都有利,适合在行业中被推广运用。
参考文献:
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关系[J]. 烟草科技,2005(2):5-6,18.
(责任编辑 田宇曦)
表 1 福建龙岩 B2F-2011 牌号烟叶检测检验数据
一次润叶温度

54
54
56
54
56
57
57
57
55
53
57
54
53
55
56
55
57
55
一次润叶含水率
%
17.6
17.1
17.7
17.5
17.2
18.0
17.7
17.8
17.2
17.8
16.8
17.9
17.5
17.4
18.2
17.9
17.8
16.9
二次润叶温度

60
59
61
58
58
62
57
61
60
59
57
58
60
57
61
62
58
60
二次润叶含水率
%
18.5
18.6
17.5
18.4
18.2
18.5
18.0
17.9
18.5
17.8
17.5
18.5
17.7
18.4
18.6
17.4
18.4
18.2
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
陈秋荣等:顺逆流组合式润叶工艺 939