全 文 ：3． 3 紫菜藻蓝蛋白提取物对二苯代苦味酰自由基清除能力 二
苯代苦味酰自由基是一种人工合成的自由基，其在 517 nm 处有
最大吸光度值。按照“2． 3”项下方法测得紫菜蛋白提取物在不
同浓度下对二苯代苦味酰自由基的清除率如表 2 所示。
图 1 紫菜藻蓝蛋白提取物对超氧阴离子的清除作用
表 1 紫菜藻蓝蛋白·OH清除能力测定
吸光度 OD值(532nm) SA(%)
Ao 0． 320 －
Ac 1． 047 －
As 0． 373 92． 71
表 2 紫菜藻蓝蛋白对二苯代苦味酰自由基清除率
藻蓝蛋白浓度 /mg·ml －1 OD值 SA (%)
0． 3 0． 372 20． 1
0． 5 0． 321 30． 8
0． 7 0． 263 44． 2
0． 9 0． 221 55． 6
1． 1 0． 182 62． 1
1． 3 0． 169 65． 8
由表 2 作紫菜藻蓝蛋白浓度关于清除率的回归曲线，得其回
归方程。根据回归方程，其 IC50为 0． 86 mg /ml。
4 讨论
藻蓝蛋白的抗氧化活性一直是藻蓝蛋白药理活性的研究热
点，对藻蓝蛋白的体内体外抗氧化活性进行研究发现它与活性氧
自由基的消除有关，这很好地证明了它的抗炎活性。Patel A
等［6］将从 3 种藻类中提取的藻蓝蛋白进行了体外的抗氧化活性
研究，研究发现藻蓝蛋白均能很好的清除过氧化氢基团和羟基，
实验还进一步表明共价连接的四吡咯藻蓝素是与藻蓝蛋白的基
团消除活性有关。他们还首次地使用了电子自旋共振光谱对藻
蓝蛋白进行研究，结果表明自由基活性部位的存在，它也可能在
藻蓝蛋白自由基消除活性中扮演重要角色。
本实验结果表明，紫菜藻蓝蛋白提取物对超氧阴离子自由
基、羟自由基、二苯代苦味酰自由基均有明显的清除作用，其对超
氧阴离子的清除率为 33． 79%，对 OH 的清除率为 92． 71%。对
二苯代苦昧酰自由基清除能力，其 IC50为 0． 86 mg /ml。以上结果
显示紫菜藻蓝蛋白有较强的体外抗氧化活性，为其下一步活性研
究与开发利用提供实验基础。
参考文献:
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收稿日期:2011-04-21; 修订日期:2011-10-05
基金项目:吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目(No． 2008374)
作者简介:杨洪梅(1980-) ，女(汉族) ，黑龙江齐齐哈尔人，现任通化师范
学院讲师，在读博士研究生，硕士学位，主要从事药物的质谱学研究工作．
接骨木抗炎活性部位及活性成分的初步研究
杨洪梅1，郑尹佳2，戴 赟1
(1．通化师范学院，吉林 通化 134002;
2．吉林大学白求恩医科大学制药厂，吉林 长春 130012)
摘要:目的 用大鼠足肿胀模型作为活性追踪指标，对接骨木枝和叶的 60%的乙醇提取物进行抗炎活性部位和成分的追
踪鉴定;考察接骨木枝和叶的抗炎作用。方法 采用 10%鸡蛋清所致的大鼠足肿胀法观察接骨木枝和叶的抗炎作用;运
用质谱法(MS)对活性部位进行化合物的结构鉴定。结果 接骨木叶的正丁醇萃取物的高、中剂量组在致炎后 1h、3 h和 6
h足肿胀率均处于较低水平，有显著性差异(与空白组比较 P ＜ 0． 05) ;经串联质谱(MSn)测定活性部位主要为槲皮素和
山萘酚等化合物。结论 接骨木叶具有抗炎作用，活性成分主要为槲皮素和山萘酚等黄酮类物质。
关键词:大鼠足肿胀模型; 接骨木叶; 抗炎; 黄酮
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 02． 038
中图分类号:R285． 5;R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)02-0338-02
接骨木 Sambucus williamsii Hallce 系忍冬科接骨木属植物，
又名接骨草、续骨木、铁骨散、舒筋树等，为落叶灌木或乔木，其野
生资源丰富。接骨木为民间常用药，全株植物均可入药，具有祛
风、利湿、活血、止痛之功效，主要用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、
骨折及创伤出血等病症［1］。近年来药理研究表明接骨木还有抗
癌、降低血脂、抗衰老、抗糖尿病、抗氧化和健脑等的作用，是一种
较理想的保健药物［2，3］。虽然接骨木民间用药已久，但对其生物
活性方面的研究不多，尤其是化学成分的研究报道甚少，其药用
机理和物质基础还没有得到系统的阐明。本文针对接骨木抗炎
这一临床作用进行了药效学研究，确定了其有效部位。采用质谱
法对有效部位的化学成分进行了结构鉴定研究。本文旨在为接
骨木的临床用药及进一步开发利用提供科学的依据。
1 仪器与材料
仪器美国 Thermo Finnigan公司 LTQ型液相色谱 －串联质谱
仪，配有电喷雾离子化源(ESI)。
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 2
原料:接骨木采自通化并由生药教研室教师鉴定为 Sambucus
williamsii Hance。
试药:甲醇为色谱纯(天津康科德科技有限公司) ;正丁醇、
乙醚、醋酸(HAC)均为分析纯试剂;水为自制蒸馏水;中华跌打
丸(批准文号:国药准字 Z45020316) :广西梧州制药(集团)股份
有限公司，临用时用蒸馏水将药丸配成所需浓度。
2 方法
2． 1 提取分离 其具体流程见图 1。
图 1 接骨木提取分离流程示意图
2． 2 大鼠足肿胀实验
2． 2． 1 分组及给药方法 接骨木枝和叶共 6 个样品，每个样品均
按如下操作。取健康大鼠 50 只，体质量 190 ～ 210 g，雌雄各半，
随机分成 5 组，每组 10 只。接骨木设低(0． 35 g /kg)、中(0． 7 g /
kg)、高(1． 4 g /kg)3 个剂量组，同时设空白对照组和阳性药中华
跌打丸(0． 75 g /kg)组。各组均每日灌胃给药 1 次，连续 7 d，空
白对照组给予等量的蒸馏水。
2． 2． 2 致炎方法与足肿胀率 用卡尺测量各组大鼠右足跖厚度
(mm) ，作为致炎前足跖厚度值。末次给药 30 min后将大鼠右后
肢拉直，自足趾中部皮下注射 10%鸡蛋清 0． 1 ml /爪，造成大鼠
关节肿胀炎症模型。致炎后分别在 0． 5，1，3 和 6 h 分别测量各
组大鼠右足跖厚度。以此公式计算鼠足肿胀率:肿胀率 =(致炎
后足跖厚度 －致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚度。
2． 2． 3 统计方法 实验数据采用 珋x ± s表示，组间比较用 t检验。
2． 3 质谱条件 离子源为 ESI 源;源喷射电压为 3． 8 kV;加热毛
细管温度为 250℃;鞘气(N2)压力 30 Arb;辅助气(N2)压力 5
Arb;碰撞气(Ar)压力 1． 2 mTorr;碰撞诱导解离(CID)电压为 20
～ 35 eV，每个化合物均进行优化;负离子方式检测。
3 结果
3． 1 活性部位的抗炎效果 接骨木叶的正丁醇提取物为抗炎活
性部位(见表 1) ，由表 1 可知，给药前各用药组足跖厚度与空白
对照组比较差异没有统计学意义(P ＞ 0． 05)。同空白对照组比
较，接骨木叶的样品 2 的高、中剂量组和跌打丸组足肿胀率均处
于较低水平，有显著性差异(P ＜ 0． 05)。
表 1 接骨木叶的正丁醇提取物对大鼠足跖肿胀度的影响(珋x ± s)
组别
致炎前足跖厚度
/mm
足肿胀率(%)
0． 5 h 1 h 3 h 6 h
空白对照 5． 60 ± 0． 41 51． 8 ± 8． 9 53． 4 ± 8． 0 62． 5 ± 7． 2 45． 8 ± 7． 4
中华跌打丸 5． 54 ± 0． 37 10． 0 ± 3． 3 13． 5 ± 5． 6 25． 6 ± 7． 1 9． 1 ± 2． 8
接骨木(高) 5． 49 ± 0． 35 14． 6 ± 5． 1 15． 7 ± 6． 0 27． 2 ± 5． 9 10． 8 ± 3． 7
接骨木(中) 5． 52 ± 0． 28 23． 6 ± 6． 4 25． 0 ± 6． 2 40． 1 ± 5． 6 24． 1 ± 4． 9
接骨木(低) 5． 48 ± 0． 29 42． 5 ± 7． 4 45． 3 ± 5． 8 57． 9 ± 6． 3 38． 9 ± 6． 4
3． 2 活性成分的鉴定 接骨木叶的正丁醇提取物进行了负离子
化 MS全扫描分析，对 m/z为 301 和 285 的离子进行了串联质谱
研究。结果见图 2a和图 2b。图 2a 中 m/z 为 283 的峰应该是脱
水峰，其他碎片的归属见图 3。m/z 273 和 257 的离子分别为 m/z
为 301 和 285 的母离子脱去 CO后的产物离子，根据 Yan等［4］的
分析，m/z 151 的离子是黄酮母体结构在 C 环发生 RDA 反应
(Retro － Didls － Alder)的产物。由此可见，主要活性成分为槲皮
素和山萘酚等黄酮类化合物。
图 2 (a)m/z 301 的离子的产物离子质谱图和
(b)m/z 285 的离子的产物离子质谱图
图 3 (a)槲皮素和(b)山萘酚的裂解途径示意图
4 结论
接骨木的抗炎活性部位主要为接骨木叶的正丁醇提取物，与
空白对照比较，此部分高、中剂量具有显著性差异(P ＜ 0． 05)。
通过串联质谱研究检测到的主要活性成分为槲皮素和山萘
酚。另外几种黄酮苷元的准确结构信息，还需要进一步分析和鉴
定。除了活性成分外，还在接骨木中检测到了有机酸和多元醇类
物质。
本研究结果为接骨木具有抗炎活性提供了实验依据，有利于
接骨木的进一步开发利用。
参考文献:
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