全 文 ：高效液相色谱法测定金叶接骨木中熊果酸和齐墩果酸的含量
赵淑红1， 高亦珑1， 马学琴2， 杨美玲1 (1 宁夏医科大学高职学院， 银川 750004; 2 宁夏医科大学药学院)
摘要: 目的 建立高效液相色谱法(HPLC 法)同时测定金叶接骨木茎叶中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。 方法 采用
Thermo ODS-2HYPERSIL(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相为甲醇 － 0． 4%磷酸水溶液(80% ∶ 20%) ;检测波长 210 nm，流速
0． 8 ml /min，柱温 25 ℃。 结果 齐墩果酸的线性范围为 12． 17 － 243． 36 μg /ml(r = 0． 999 9) ，回收率为 98． 50%(RSD 为
3． 03%) ;熊果酸的线性范围为 3． 25 － 64． 92 μg /ml(r = 0． 999 8) ，回收率为 99． 49%(RSD为 1． 37%)。金叶接骨木茎中齐墩
果酸含量(mg /g)为 1． 485，熊果酸为 0． 348;叶中齐墩果酸为 0． 636，熊果酸为 0． 437。 结论 HPLC法操作简单，测定结果准
确，可用于金叶接骨木中齐墩果酸与熊果酸的含量测定。
关键词: 金叶接骨木; 齐墩果酸; 熊果酸; 高效液相色谱法
中图分类号: R927． 2 文献标志码: A 文章编号: 1007 － 6611(2011)03 － 0207 － 04 DOI:10． 3969 /J． ISSN． 1007 － 6611． 2011． 03． 009
HPLC for determining contents of oleanolic acid and ursolic acid in Sambucus canadensis Aurea
ZHAO Shu-hong1，GAO Yi-long1，MA Xue-qin2，YANG Mei-ling1(1Higher Vocational College of Ningxia Medical University，Yin-
chuan 750004，China;2College of Pharmacy，Ningxia Medical University)
Abstract: Objective To establish a HPLC method for simultaneously determining contents of oleanolic acid and ursolic acid in leaves
and stems of Sambucus canadensis Aurea． Methods Ursolic acid and oleanolic acid were separated and analyzed on Thermo ODS-
2HYPERSIL (250 mm ×4． 6 mm，5 μm)with methanol － 0． 4% orthophosphoric acid water(80% ∶ 20%)as mobile phase at a flow
rate of 0． 8 ml /min． UV detection was 210 nm and the column temperature was 25 ℃ ． Results An recovery rate was 98． 50% with a
RSD of 3． 03% in the range of 12． 17 － 243． 36μg /ml(r = 0． 999 9)for oleanolic acid． An average recovery was 99． 49% with a RSD of
1． 37% in the range of 3． 25 － 64． 92 μg /ml(r = 0． 999 8)for ursolic acid． The contents of oleanolic acid in the stem and leaves were
1． 485 mg /g and 0． 636 mg /g，respectively． The ursolic acid in the stem and leaves were 0． 348 mg /g and 0． 437 mg /g． Conclusion
在基质树脂中加入功能单体 PMDM，使树脂材
料的硬度从 77． 2 N /mm2 升高到 107． 4 N /mm2，提
高了 39． 1%;同时，树脂材料的挠曲强度也从 63． 6
MPa上升到 71． 5 MPa;树脂的吸水性降低(吸水能
力控制在 20 mg /mm3 左右) ，提高了树脂材料的使
用性能。4-META 引入树脂后，树脂材料的硬度下
降，挠曲强度略有增加，吸水性增加。由此可见，传
统的用来提高粘结强度的单酯功能单体 4-META对
树脂本身的物理机械性能影响较大而不合适在树脂
当中直接使用，双酯功能单体 PMDM 可以在提高树
脂粘结强度的前提下不影响树脂的机械强度。综合
机械与吸水两方面的性能考虑，PMDM 比 4-META
更适合在修复树脂中作为功能单体使用。
参考文献:
［1］ Nishiyama N，Tay FR，Fujita K，et al． Hydrolysis of functional mon-
omers in a single-bottle self-etching primer-correlation of 13C NMR
and TEM findings［J］． J Dent Res，2006，85(5) :422 － 426．
［2］ 许乾慰，张黎，商伟辉．功能单体结构对口腔正畸胶粘剂性能
的影响［J］．中国胶粘剂，2009，18(3) :26 － 31．
［3］ Chang JC，Hurst TL，Hart DA，et al． 4-META use in dentistry:A
literature review［J］． J Prosthet Dent，2002，87(2) :216 － 224．
［4］ ISO 4049:2000． Dentistry-Polymer-based filling，restorative and
luting materials［S］．
［5］ YY 1042 － 2003．牙科学聚合物基充填、修复和粘固材料［S］．
［6］ Koliniotou KE，Dionysopoulos P，Koulaouzidou EA，et al． In vitro
cytotoxicity of six dentin bonding agents［J］． J Oral Rehabil，
2001，28:971 － 975．
［7］ Van L，Mine A，De Munck J，et al． Technique sensitivity of water-
free one-step adhesives［J］． Dent Mater，2008，24(9) :1258 －
1267．
［8］ Nagakane K，Yoshida Y，Hirata I，et al． Analysis of chemical inter-
action of 4-MET with hydroxyapatite using XPS［J］． Dent Mater J，
2006，25(4) :645 － 649．
作者简介: 刘莉，女，1977 － 05 生，硕士，主治医师，E-mail:
liulilily@ msn． com．
［收稿日期: 2011 － 01 － 11］
基金项目: 宁夏医科大学 2009 年校级面上科研基金项目(XM200904)
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This is a simple，convenient，accurate and reliable method，and can be used to determine the contents of oleanolic acid and ursolic acid
in Sambucus canadensis Aurea．
Key words: Sambucus canadensis Aurea; oleanolic acid; ursolic acid; high performance liquid chromatography
金叶接骨木(Sambucus canadensis． Aurea)为忍
冬科接骨木属植物加拿大接骨木(Sambucus Cana-
densis L．)的彩色叶变种，我区作为观赏植物从外地
引进并在银川地区栽培［1］。接骨木属植物有着广
泛的临床药用价值，其中齐墩果酸、熊果酸是接骨木
属植物抗病毒性肝炎活性成分，临床用于治疗急性
病毒性肝炎疗效显著［2］。本人在前期的实验中检
测出金叶接骨木的茎叶中含有槲皮素、芸香苷以及
熊果酸、齐墩果酸等化学成分［3］。金叶接骨木如接
骨木属其他植物一样具有一定药用价值，本文对银
川地区引种的 3 年生金叶接骨木茎叶中齐墩果酸和
熊果酸 2 种成分进行含量测定，并建立高效液相色
谱法测定金叶接骨木中齐墩果酸和熊果酸含量的方
法，为进一步开发和利用其植物提供科学依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 日立 L2000 高效液相色谱仪 (L-
2455DAD)检测器，L-2300 柱温箱，L-2200 自动进样
器，L-2130 四元泵，分析天平(AP210，1 /10 万) ，超
声波提取器(KQ-500B) ，中药材粉碎机(FW100
型)。
1． 2 试药 齐墩果酸对照品(批号 110742 －
200314，中国药品生物制品检定所) ;熊果酸对照品
(批号 8502，中国药品生物制品检定所) ;甲醇(色谱
纯，美国 TEDIA天地试剂公司) ;乙腈(色谱纯，美国
TEDIA天地试剂公司) ;娃哈哈纯净水;其他试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:美国 Thermo ODS-
2HYPERSIL(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;流动相:甲
醇 － 0． 4%磷酸水溶液(80% ∶ 20%) ;检测波长:210
nm，流速 0． 8 ml /min，柱温:25 ℃。
2 ． 2 对照品溶液的制备 分别精密称量熊果酸对
照品 5． 0 mg、齐墩果酸对照品 1． 3 mg，共同置 5 ml
容量瓶中，色谱甲醇溶解，定容，得熊果酸、齐墩果酸
混合对照品溶液，临用前稀释［4，5］。在 2． 1 项所述
色谱条件下，取对照品溶液进样 10 μl 检测，理论塔
板数为 5 000，齐墩果酸和熊果酸分离度为 1． 6，得
色谱图 1。
a．齐墩果酸;b．熊果酸
图 1 齐墩果酸、熊果酸对照品 HPLC色谱图
Fig 1 High performance liquid chromatogram of oleanolic acid and ursolic acid
结果显示，齐墩果酸色谱峰保留时间为 28． 00
min，熊果酸色谱峰保留时间在 29． 59 min，两者能够
基线分离。
2． 3 供试品溶液的制备 分别取金叶接骨木的叶
和茎药材，粉碎，过 80 目筛，60 ℃干燥至恒重。分
别精密称取适量(相当生药 0． 5 g) ，置 200 ml 具塞
三角锥形瓶中，加入甲醇 10 ml，超声提取 40 min，冷
却，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至
10 ml容量瓶中得金叶接骨木叶和茎药材供试品溶
液。
2． 4 线性范围考察 取稀释后的齐墩果酸、熊果酸
混合对照品溶液(齐墩果酸、熊果酸浓度分别为
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243． 36 μg /ml，64． 92 μg /ml) ，分别稀释 1． 5，2，3，4，
10，20 倍后按 2． 1 项下色谱条件进样检测，以峰面
积为横坐标，浓度为纵坐标进行线性回归。从标准
曲线图中测得齐墩果酸回归方程 C = 0． 000 1A +
3． 440 5，r = 0． 999 9，表明齐墩果酸在 12． 17 －
243． 36 μg /ml浓度范围内线性关系良好;熊果酸回
归方程 C = 4 × 10 －5A + 0． 979 1，r = 0． 999 8，表明熊
果酸在3． 25 － 64． 92 μg /ml 浓度范围内线性关系良
好。
2． 5 稳定性试验 取同一金叶接骨木叶供试品溶
液，分别于 0，2，4，8，12，24 h 进样测定，考察其稳定
性。记录峰面积，计算齐墩果酸和熊果酸峰面积的
RSD分别为 0． 63%和 0． 81%。表明供试品溶液在
24 h内基本稳定。
2． 6 精密度试验 取同一金叶接骨木叶供试品溶
液，连续进样 6 次，记录峰面积，计算齐墩果酸和熊
果酸峰面积的 RSD，RSD 分别为 1． 05%和 0． 73%
(n = 6)。表明仪器精密度良好。
2． 7 重复性试验 精密称定同一批金叶接骨木叶
样品，按 2． 2 项下方法分别制备 6 份供试品溶液，按
2． 1 项下色谱条件进行测定，记录峰面积，分别按回
归方程计算齐墩果酸和熊果酸的含量。其 RSD 值
分别为 0． 85%和 1． 42%(n = 6) ，表明此方法重复
性良好。
2． 8 加样回收率 称取已知含量的金叶接骨木叶
样品 6 份，每份约 0． 5 g，准确计算样品中齐墩果酸
和熊果酸的含量，分别加入适量齐墩果酸和熊果酸
对照品溶液，按 2． 2 项下方法制备供试品溶液，进
样，结果见表 1。
表 1 齐墩果酸和熊果酸加样回收率的试验结果 (mg，n = 6)
Tab 1 The recovery results of oleanolic acid and ursolic acid (mg，n = 6)
成分 样品含量 加入量 测得量 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
熊果酸 0． 637 0． 612 1． 257 101． 3 99． 49 1． 37
0． 629 0． 647 1． 263 98． 0
0． 635 0． 617 1． 244 98． 7
0． 614 0． 625 1． 238 99． 8
0． 642 0． 638 1． 269 98． 3
0． 628 0． 611 1． 244 100． 8
齐墩果酸 0． 423 0． 451 0． 884 102． 2 98． 50 3． 03
0． 429 0． 435 0． 869 101． 1
0． 447 0． 418 0． 862 99． 3
0． 435 0． 427 0． 854 98． 1
0． 461 0． 436 0． 877 95． 4
0． 428 0． 441 0． 846 94． 8
结果显示，齐墩果酸和熊果酸的加样回收率分
别为 98． 50%(RSD 为 3． 03%)和 99． 49%(RSD 为
1． 37%) ，回收率良好。
2． 9 样品测定 分别取金叶接骨木叶和茎药材粉
末约 0． 5 g精密称定，按照 2． 3 项下方法制备供试
液，按 2． 1 项下色谱条件分别取 10 μl 进样检测，记
录金叶接骨木茎和叶的色谱图和峰面积，见图 2，3。
高效液相色谱法测得金叶接骨木茎和叶样品中齐墩
果酸与熊果酸含量，见表 2。
3 讨论
齐墩果酸与熊果酸均属三萜类化合物，结构相
似，其理化性质相近，因而在色谱柱上的保留时间非
图 2 金叶接骨木茎供试液色谱图
Fig 2 The chromatogram of the test solution from the stem
of Sambucus canadensis Aurea
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图 3 金叶接骨木叶供试液色谱图
Fig 3 The chromatogram of the test solution from the leaves
of Sambucus canadensis Aurea
表 2 金叶接骨木茎和叶中齐墩果酸和熊果酸含量
(mg /g)
Tab 2 The contents of oleanolic acid and ursolic acid in
the stem and the leaves of Sambucus canadensis
Aurea (mg /g)
成分 茎 叶
齐墩果酸 1． 485 0． 636
熊果酸 0． 348 0． 437
常相近，如果柱效不高并且流动相选择不当时，很难
将其分开。本实验采用 HPLC法同时测定金叶接骨
木茎叶中的这两种成分时，采用调节流动相的 pH
值，并加大流动相中水的比例，可以有效地将两者分
开。在 2． 1 所述色谱条件下，取对照品溶液进样 10
μl检测，理论塔板数为 5 000，齐墩果酸和熊果酸分
离度为 1． 6。本法定量准确，回收率高，并能同时测
出齐墩果酸与熊果酸的含量，简单易行，可做为同时
含有齐墩果酸与熊果酸植物的测定标准。
金叶接骨木在我国多省区均有栽培，其枝繁叶
茂，资源丰富，能否如接骨木属植物一样具有药用价
值，本次实验为进一步开发和利用其植物提供了一
定的科学依据。
参考文献:
［1］ 曹兵，宋丽华，马国彬，等． 银川地区 14 种绿化树种的引种试
验报告［J］．农业科学研究，2007，28(3) :72．
［2］ 陈武，李开泉，熊筱娟，等．陆英抗肝炎活性成分的研究［J］．南
昌大学学报:理科版，2001，25(2) :165 － 167．
［3］ 赵淑红，高亦珑，徐力生，等．银川引种金叶接骨木药用价值初
探［J］．宁夏医学杂志，2010，32(1) :58 － 59．
［4］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(2010 年版1 部) ［M］．
北京:中国医药科技出版社，2010:附录 28 － 30．
［5］ 邹盛勤，陈武．地榆中乌索酸和齐墩果酸含量的高效液相色谱
测定［J］．时珍国医国药，2006，17(8) :1373 － 1374．
作者简介: 赵淑红，女，1955 － 07 生，本科，高级讲师，E-
mail:shuhong-zhao@ 163． com．
［收稿日期: 2011 － 01 － 04］
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