全 文 ：千斤藤素对鼻咽癌细胞 CNE-2多药耐药性的研究
汪　建1　梁传余2　林代诚2
1广州军区广州总医院耳鼻咽喉科(广州 510010);2华西医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科(成都 610041)
　　【摘要】　目的　研究千斤藤素(cepharanthine , CEP)逆转多药耐药的能力。方法　用 MTT法检测药物敏感性 ,用流
式细胞技术检测 p170 蛋白的表达。结果　CEP能明显提高鼻咽癌细胞株对平阳霉素(pingyangcin , PYM)的敏感性 , 并能
明显降低 p170 蛋白的表达。结论　CEP可能通过抑制 p170 蛋白膜外转运功能逆转 CNE-2 细胞对 PYM 的耐药 ,增强
其敏感性。
【关键词】　千斤藤素　平阳霉素　多药耐药
　　鼻咽癌是广东地区最常见的肿瘤 ,又称“广东瘤” ,治
疗主要以放射治疗为主 ,但其 5年生存率仍不高 ,治疗失
败的主要原因为远处转移和局部复发。因此在提高放疗
水平的同时 ,应进行全身化疗的研究。多药耐药性是肿
瘤化疗失败的重要原因之一[ 1] ,当前逆转多药耐药是国
内外学者研究的重点。近期应用和研究最多的如环孢霉
素A 、异搏定等耐药调节剂都有其自身的副作用而没能
广泛应用于临床。因此 ,寻求高效 、低毒的耐药调节剂是
十分必要的。千斤藤素(cepharanthine ,CEP)是从传统中
草药中提取出来的生物碱 ,具有低毒 、升高白细胞 、诱导
肿瘤细胞分化等作用 ,本实验研究了 CEP 对鼻咽癌细胞
多药耐药性的关系。
1　材料与方法
1.1　细胞培养　低分化鼻咽癌细胞(CNE-2 购自中山
医科大学肿瘤医院),培养液为 RP-MI1640 内含 15%灭
活小牛血清 ,细胞置 CO2孵箱 , 37 ℃培养。
1.2　药物及试剂　千斤藤素(CEP),平阳霉素(pingyangcin ,
PYM)浙江海门制药厂 ,MTT(Sigma)。
1.3　细胞增殖抑制试验　参见文献[ 2] 。取对数生长期
细胞 CNE-2 ,接种于 96 孔细胞培养板 ,细胞浓度为
2×105。每孔加入细胞液 100 μl ,诱导剂量的 CEP[ 3]
4 μmol/L 100 μl为对照组 ,实验组加入不同浓度的 PYM ,
每个条件均设 4个重复孔 , 37 ℃, 5%CO2培养 72 h ,中止
培养前 4 h每孔加入MTT 100 μl ,继续培养 4 h ,在自动酶
标仪上比色(波长 600 nm),测定光密度(Dλ)值。药物对
细胞增殖抑制率由下列公式计算:
抑制率=对照孔 Dλ-实验孔 Dλ对照组 Dλ ×100%
1.4　p170 的检测　用流式细胞仪技术[ 4] ,表示单位为均
道值。
1.5　统计学处理 　实验数据在电子计算机上用 SPO软
件进行统计学处理 ,结果以 x±s表示 ,采用 t 检验。
2　结果
2.1　CEP ,PYM 对细胞增殖抑制作用　诱导剂量 CEP对
CNE-2细胞抑制作用很小 ,单用 PYM 对 CNE-2 细胞的
抑制作用约为 50%,而 CEP 和 PYM 合用细胞抑制率达
76.66%。可见 CEP 能显著提高 PYM 对 CNE-2 细胞的
抑制作用。见表 1。
2.2　CEP ,PYM对 CNE-2 细胞 p170蛋白表达的影响　
CNE-2细胞加 PYM 后 p170 的表达无变化 ,但加入 CEP
和 CEP+PYM 后 p170的表达明显降低。见表 1。
表 1　CNE-2细胞增殖抑制及 p170蛋白表达 x±s
Dλ值 抑制率(%) p170
对照组 　　0.904±0.047 　　65±3.17
CEP 0.872±0.040 　4.32 51±2.92＊■
PYM 0.461±0.035＊ 49.33 67±3.60
CEP+PYM 0.211±0.013＊■ 76.66 50±3.92＊■
　＊与对照组比较 P <0.01 , ■与 PYM 比较 P <0.01
3　讨论
　　化疗药物已广泛用于各种恶性肿瘤的治疗 ,其效果
尚不令人满意。由于肿瘤细胞对抗癌药物的耐药性常常
限制了疗效的进一步提高。PYM 在头颈部恶性肿瘤中应
用较广 ,在 CEP 诱导肿瘤细胞分化的实验中 ,我们发现
CEP加入 PYM 后鼻咽癌细胞对 PYM的敏感性大大增强 ,
推测可能与细胞的耐药性有关 ,因此我们检测了 p170蛋
白的表达。
目前认为 p170蛋白的作用就象一个泵 ,依赖耗能过
程将药物从细胞内泵出细胞外而产生耐药。研究发现加
入 PYM后 p170蛋白的表达增加 ,加入CEP后能明显降低
CNE-2 细胞 p170 的表达 ,并显著提高 CNE-2 细胞对
PYM的敏感性 ,说明 CEP 具有逆转鼻咽癌细胞 CNE-2
多药耐药性的作用 ,其机制可能是通过降低 CNE-2 细
胞 p170的表达 ,导致其泵出药物功能下降 ,提高细胞对
药物的积蓄能力而实现的 ,由于 CEP已经有大剂量用药
的临床经验而未发现毒副作用的报道 ,因此我们认为
CEP有希望作为多药耐药逆转剂而应用于临床。
参考文献
1　Sato W , Fukazawa N , Suzuki T , et al.Circumvention of multidrug resistance
by anwly synthesized quinoline derivative.Cancer Res , 1991 , 5:2420
2　汪　建 ,赵连三,林代诚 ,等.千斤藤素对头颈部恶性肿瘤细胞诱导
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DOI :10.13820/j.cnki.gdyx.2001.10.059
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3　Marks DC, Bebol L , Davey MW , et al.The MTTcell viability assay for
cytotoxicity testing in multidrug-resistant human leukemia cells.Leukemia
Res, 1992 , 10:1165
4　左连富 ,周道安 ,齐凤英 , 等.定量分析乳腺癌细胞 p53基因产物的
表达.中华物理学杂志 , 1994, 16:78
(收稿日期:2001-04-23)
583例慢性腹泻内镜检查结果分析
曾连招　许东发
广东省惠州市人民医院消化内科(516002)
　　【摘要】　目的　探讨慢性腹泻进行结肠镜检查的临床意义。方法　对 583 例因以慢性腹泻伴黏液便或黏液血便
为主诉的患者进行结肠镜检查。结果　慢性结肠炎 324 例(55.6%), 溃疡性结肠炎 106 例(18.2%), 大肠癌 67 例
(11.5%), 大肠息肉 59例(10.1%),肠黏膜正常 16例(2.7%), 肠结核 、鞭虫感染 、末端盲肠炎各 3 例(0.5%), 克隆病 2
例(0.3%)。在 67 例肠癌中青年组 33 例(49.2%), 中老年组 34 例(50.7%)。结论　慢性腹泻进行结肠镜检查是一可
行 、安全 、有效 、省时的方法 , 能明确诊断其部位 、肿瘤大小 、性质 、避免误诊 , 明显减少结肠癌的发病率和病死率 ,具有重
要的诊断价值。
【关键词】　慢性腹泻　内镜检查
　　慢性腹泻是消化系疾病最常见症状之一 ,病因复杂。
本文对我院 1993 年 6月至 2000年 6月 ,门诊和住院慢性
腹泻患者 583例 ,进行全结肠内镜检查 ,结果分析如下。
1　临床资料
1.1　一般资料 　本组 583 例 ,男 368 例 ,女 215 例;男女
之比 1.7∶1。年龄 17 ～ 78岁 ,平均 51.3岁 ,其中 ≤39岁
257例(青年组), ～ 59 岁 163 例(中年组), ≥60 岁 163例
(老年组)。
1.2　临床表现　腹泻持续或反复超过 3个月 ,每天大便
次数 3～ 5次 ,或 10 次以上;黏液便或黏液血便;轻度下
腹部疼痛或胀痛(已排除细菌性痢疾)。
1.3　病程　病程在 1 年以内 350 例(60.0%), ～ 2年 116
例(19.9%)。 ～ 3年 64 例(11.0%), ～ 4年 28例(4.8%),
～ 9年 13例(2.2%), >9年以上 12 例(2.0%)。病程短者
2 个月 ,最长 26年。
1.4　并发症　本组并发肠梗阻 8 例 ,其中完全性肠梗阻
2 例 ,不完全性肠梗阻 6例。
1.5　仪器　采用日本 Olympus GF-20I型 ,GF-40I型内
镜 ,冷光源(LE-10)检查。583例除 2 例完全性肠梗阻内
镜检查未到达回盲部外 ,其余均到回盲瓣(99.6%)。2例
完全性肠梗阻住院接受手术治疗 ,病理证实均为大肠癌。
发现病灶(包括糜烂 、溃疡 、息肉或肿块等)均取活检送病
理组织学检查。
2　结果
本组 583例内镜检查中 ,成功插入回盲部 581 例 ,成
功率 99.6%,检查出 8种疾病之多。具体见表 1。
3　讨论
慢性腹泻行内镜检查对临床诊断 、明确病因 、治疗原
则的指导都具有重要意义。本组 583 例疾病的检出率
97.3%。583例慢性腹泻受检者共检出 8种结肠疾病 ,常
见疾病依次为慢性结肠炎324例(55 .6%),溃疡性结肠
表 1　各年龄组病变检出率 例(%)
病　种 例 青年组 中年组 老年组
慢性结肠炎 　324 131(51.0) 98(60)　 95(58.3)
溃疡性结肠炎 106 38(14.7) 30(18.5) 38(23.3)
大肠癌 67 33(12.8) 18(11.0) 16(9.8)
大肠息肉 59 30(11.7) 15(9.3)　 14(8.6)
肠结核 3 2(0.8) 1(0.6) —
鞭虫感染 3 2(0.8) 1(0.6) —
克隆病 2 2(0.8) — —
末端盲肠炎 3 3(1.2) — —
正常肠黏膜 16 16(6.2) — —
合　计 583 257 163 163
　χ2=36.15 , P <0.005
炎 106例(18.2%),大肠癌 67 例(11.5%),大肠息肉 59
例(10.1%),并高频电切除等都做了相应早期治疗。4种
疾病共占受检者总数的 95.4%,其他的仅占 4.6%。排
名第 2 位的溃疡性结肠炎较文献[ 1] 报道高 ,特别是中老
年人 ,显示溃疡性结肠炎呈逐年上升趋势。另一方面结
肠镜的普及开展 ,对该病的认识和诊断水平有了逐渐提
高 ,而更重要的方面则是提高结肠镜对诊断该疾病重要
性的认识。
本组大肠癌 67 例 ,检出率 11.5%(67/583),青年组
33例 49.2%(33/67);中年组 18 例 26.9%(18/67);老年
组 16例 23.9%(16/67)。结果表明青年组发病率高于老
年组。病变部位主要累及直肠和乙状结肠 ,且组织分化
程度较差 ,淋巴转移率较老年组为高 ,预后不良。本组 4
·946· Guangdong Medical Journal　Oct.2001, Vol.22 , No.10