全 文 ：2014 年 12 月(上)
收稿日期:2014-07-20;修回日期:2014-09-15
基金项目:江苏农牧科技职业学院重点项目(ZD1207)
作者简介:陈光明(1975 －)，男，讲师，硕士，研究方向为动物
疾病的诊断与防治，chgm0610@ 163． com．
葎草等 4 种中草药对猪大肠杆菌的体外
抗菌研究
陈光明1，李巨银1，刘海军2
(1．江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300;2．九江学院 医学院，江西 九江 332005)
中图分类号:S853． 7;S858． 28 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2014)12 － 0161 － 03
关键词:蒲公英;葎草;马齿苋;紫花地丁;体外抗菌;猪大肠杆菌
摘 要:为了充分利用现有中草药资源，避免畜产品中化学抗生素的药物残留，试验选取葎草等 4 种
中草药，利用水煎法和 75%乙醇超声波辅助浸提法制备中草药的水煎提取液和 75%乙醇提取液，并
用提取液对猪源大肠杆菌进行体外抗菌试验。结果表明:4 种中草药的 75%乙醇提取液的抑菌效果
和抗菌活性均比水煎提取液好，马齿苋、蒲公英及紫花地丁 75%乙醇提取液的最小抑菌浓度(MIC)
为 62． 5 ～ 125 mg /mL，最小杀菌浓度(MBC)为 125 ～ 500 mg /mL。说明这 4 种中草药可用于防治猪
大肠杆菌病。
大肠杆菌常引发猪场发生仔猪黄痢、仔猪白痢和
猪水肿病。目前，大多数猪场通过大剂量使用抗生素
来预防和治疗猪大肠杆菌，从而导致耐药菌株不断出
现，对该病的治疗效果变差，抗生素的使用量也逐年
增加，导致猪肉产品中抗生素残留，严重危害公共健
康［1］。中草药具有分布广泛、价格低廉、作用独特、
安全、环保、病菌不易产生耐药性等优势，受到研究者
的重视。本试验选用 4 种常见的单味中草药，分别制
成水煎提取液和 75%乙醇提取液，对临床分离的猪
致病性大肠杆菌进行体外抗菌研究，为临床筛选中草
药及开发中草药资源提供依据。
1 材料与方法
1． 1 中草药
葎草、紫花地丁、马齿苋和蒲公英，采自江苏省泰
州市江苏畜牧科技示范园。
1． 2 菌株
猪致病性大肠杆菌 5 株(HL01 株、HL05 株、
JY12 株、TX01 株、XH02 株)，由江苏农牧科技职业学
院动物医学院教学动物医院提供，微生物学教研室鉴
定和保存。
1． 3 主要仪器
高压蒸气灭菌锅，广州市兴福金属制品有限公
司;电热干燥培养箱，上海玺恒实业有限公司;数显恒
温水浴锅，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司;电
子天平，购自深圳市奥美顺仪器仪表有限公司;高速
离心机，购自北京博劢行仪器有限公司。
1． 4 培养基与主要试剂
营养琼脂，购自国药集团化学试剂有限公司;胰
蛋白胨、酵母浸膏、NaCl、氢氧化钠、95%乙醇，均购自
杭州微生物试剂有限公司。
1． 5 中草药的采集与炮制
2012 年 4—9 月份采摘葎草、紫花地丁、马齿苋
和蒲公英等 4 种中草药的地上部分。除去杂质，洗
净，切段，晒干后参照参考文献［2］中的方法制成中
草药饮片，贮存在干燥容器内，置通风干燥处备用。
1． 6 中草药提取液的制备
1． 6． 1 中草药水煎液的制备 分别取 4 种中草药制
剂 500 g，加水 500 mL，室温浸泡 30 min，煮沸后文火
煎煮 30 min，用 4 层纱布过滤收取药液;药渣加水
400 mL，煮沸后文火煎煮 30 min，4 层纱布过滤收取
药液;药渣加水 300 mL，煮沸后煎煮 30 min，4 层纱布
过滤收取药液;合并 3 次所得药液，用旋转蒸发仪浓
缩药液至 500 mL，使其终浓度为 1 g /mL，用氢氧化钠
调整 pH 值为 7． 4。分别装入灭菌的生理盐水瓶中，
做好标记后高压蒸气灭菌 15 min，冷却后冰箱中保
存，备用［3］。
1． 6． 2 75%乙醇提取液的制备 分别取 4 种处理好
的中草药 500 g，粉碎，过 40 目筛。加入 75%乙醇
500 mL浸泡，然后超声波作用 30 min，4 层纱布过滤
后取滤液;滤渣加入 75%乙醇 400 mL，超声波作用
15 min，过滤取滤液;滤渣加入 75%乙醇 300 mL，超
声波作用 15 min，过滤取滤液;合并 3 次所得滤液，在
161《黑龙江畜牧兽医》科技版
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2014.1448
50 ℃条件下用旋转蒸发仪回收乙醇，剩余液体用
60 ℃水浴锅蒸发去掉水分，残渣用适量的甲醇溶解，
最后加入纯化水定容至 500 mL，使生药浓度为
1 g /mL。用细菌过滤器过滤除菌，冰箱内保存，备用［3］。
1． 7 中草药对猪致病性大肠杆菌的体外抗菌试验
1． 7． 1 大肠杆菌敏感性试验 采用牛津杯法进行体
外抗菌定性试验。挑取已经分离的 5 株猪致病性大
肠杆菌的单个菌落接种到肉汤培养基中，于 37 ℃恒
温培养 18 h，用肉汤培养基稀释 1 000 倍，使稀释后
的菌液浓度约为 1 × 105 cfu /mL，4 ℃保存，备用［4］。
将已灭菌的琼脂培养基加热融化后在超净工作
台内倒入培养皿内，每皿 15 mL。同时，另取融化好
的培养基 200 mL，冷却至 50 ℃左右加入 HL01 分离
菌株 4 mL，混合均匀，取 5 mL 倒入制好的琼脂平板
内;同种方法处理其余 4 株分离菌株。做好标记后在
培养基表面等距离放 3 个牛津杯，分别加入中草药水
煎液、75% 乙醇提取液、双黄连注射液(批号为
120209，四川倍乐瑞克动物药业有限公司生产)各
0． 2 mL，37 ℃恒温培养 24 h，观察并测量抑菌圈
直径。
1． 7． 2 分离菌最小抑菌浓度(MIC)的测定 采用二
倍稀释法对中草药提取液进行稀释，共稀释 11 个梯
度，分别为 1 000，500，250，125，62． 5，31． 25，15． 63，
7． 81，3． 91，1． 95，0． 98 mg /mL。将倍比稀释的不同
浓度中草药提取液分别加到灭菌的 96 孔微量滴定板
中，50 μL /孔，每孔再加入 50 μL 液体培养基和
50 μL制备好细菌悬液。对照组以 50 μL的灭菌生理
盐水代替。37 ℃培养 24 h，观察结果，以第 1 个不浑
浊孔所对应的中药提取液浓度作为 MIC。
1． 7． 3 分离菌最小杀菌浓度(MBC)的测定 用微
量移液器取 96 孔微量滴定板中的混合液 0． 1 mL，分
别接种到新制备的平板培养基中，37 ℃恒温培养
24 h。找出没有细菌生长的培养基所对应的中草药提
取液最低浓度即为 MBC。
2 结果与分析
2． 1 中草药提取液对大肠杆菌敏感性试验(结果见
表 1)
由表 1 可知，葎草和紫花地丁水煎提取液对临床
表 1 中草药提取液对大肠杆菌敏感性试验 mm
项目
HL01 HL05 JY12 TX01 XH02
水煎
提取液
75%乙醇
提取液
水煎
提取液
75%乙醇
提取液
水煎
提取液
75%乙醇
提取液
水煎
提取液
75%乙醇
提取液
水煎
提取液
75%乙醇
提取液
马齿苋提取液 10． 1 11． 8 10． 2 12． 4 11． 2 12． 3 12． 6 12． 9 10． 7 13． 5
葎草提取液 － 8． 5 － 7． 8 － 8． 2 － 9． 3 － 9． 2
蒲公英提取液 12． 1 14． 1 12． 5 13． 4 11． 4 14． 1 12． 4 13． 7 10． 2 13． 2
紫花地丁提取液 3． 2 13． 1 3． 5 12． 3 4． 1 14． 7 2． 8 15． 5 3． 7 14． 3
双黄连注射液 13． 3 14． 1 13． 5 12． 6 13． 1
注:－表示有细菌生长，但平板上无抑菌圈。
分离的大肠杆菌没有明显的抑菌效果。马齿苋和蒲
公英水煎提取液以及 4 种中草药的 75%乙醇提取液
都有一定抑菌作用;葎草的 75%乙醇提取液表现为
低度敏感;马齿苋的水煎提取液和 75%乙醇提取液
表现为中度敏感，而且 75%乙醇提取液的抑菌作用
比水煎提取液效果要好;蒲公英的水煎提取液和
75%乙醇提取液均表现为中度敏感;紫花地丁的
75%乙醇提取液表现为中度敏感，其中对 JY12 分离
菌株表现为高度敏感;对照组双黄连注射液表现为中
度敏感。同一种提取液对不同分离菌株的抗菌作用
差异不显著。
2． 2 中草药水提液对大肠杆菌的 MIC和 MBC(结果
见表 2)
由表 2 可知:蒲公英水煎提取液对大肠杆菌的
MIC值在 62． 5 ～ 125 mg /mL 之间，MBC 值在 125 ～
250 mg /mL之间;马齿苋水煎提取液对大肠杆菌的
MIC 值为 62． 5 ～ 250 mg /mL，MBC 值在 125 ～
500 mg /mL之间;紫花地丁水煎提取液对大肠杆菌的
表 2 中草药水提液对大肠杆菌的 MIC
和MBC mg·mL － 1
项目
HL01 HL05 JY12 TX01 XH02
MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC
马齿苋提取液 62． 5 125 125 250 62． 5 125 125 250 250 500
葎草提取液 － － － － － － － － － －
蒲公英提取液 125 250 62． 5 125 62． 5 125 62． 5 125 125 250
紫花地丁提取液 250 500 250 500 500 1 000 500 1 000 500 1 000
注:－表示没有抑菌活性。
MIC 值为 250 ～ 500 mg /mL，MBC 值 在 500 ～
1 000 mg /mL之间。
2． 3 中草药 75%乙醇提取液对大肠杆菌的 MIC 和
MBC(结果见表 3)
由表 3 可知:马齿苋 75%乙醇提取液对大肠杆
菌的 MIC值在 62． 5 ～ 250 mg /mL 之间，MBC 值均为
250 mg /mL;蒲公英 75%乙醇提取液对大肠杆菌的
MIC值均为 62． 5 mg /mL，MBC值均为 125 mg /mL;葎
261
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 12 2014
2014 年 12 月(上)
表 3 中草药 75%乙醇提取液对大肠杆菌的
MIC和MBC mg·mL － 1
项目
HL01 HL05 JY12 TX01 XH02
MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC
马齿苋提取液 125 250 250 250 62． 5 250 62． 5 250 62． 5 250
葎草提取液 250 500 250 250 125 250 125 250 125 250
蒲公英提取液 62． 5 125 62． 5 125 62． 5 125 62． 5 125 62． 5 125
紫花地丁提取液 62． 5 125 125 250 125 250 125 250 125 250
草 75%乙醇提取液对大肠杆菌的 MIC 值在 125 ～
250 mg /mL之间，MBC 值在 250 ～ 500 mg /mL 之间;
紫花地丁 75%乙醇提取液对大肠杆菌的 MIC 值在
62． 5 ～ 125 mg /mL之间，MBC值在 125 ～ 250 mg /mL
之间。
3 讨论
在本试验中，马齿苋、蒲公英及紫花地丁的 75%
乙醇提取液的抑菌效果达到了中度敏感。马齿苋的
MIC值与参考文献［4 － 5］报道的结果相比略低，可
能与植物的生长地、采摘季节、提取方法不同有关;蒲
公英的 MIC值与 MBC值与参考文献［6］报道的结果
基本一致。抑菌圈法和二倍试管稀释法是用来测量
中草药提取液抗菌效果的常用方法，但试验结果一般
作为临床选择抗菌中草药的参考，因为中草药成分复
杂，有些药物虽然体外抗菌效果不明显，但体内抗菌
效果非常明显［7］。本试验以临床上治疗肠炎效果较
好的双黄连注射液作为对照，结果体外抗菌表现为中
度敏感。
提取中草药的方法很多，提取方法不同提取的物
质也不同。一般情况下，要根据目标物质选择合适的
方法。本试验中，4 种中草药的水煎提取液和 75%乙
醇提取液在抗菌效果上表现出一定差异，75%乙醇提
取液的抑菌效果明显优于水煎提取液。可能是由于加
入乙醇有利于抑菌成分的析出;同时在乙醇溶液提取
过程中以超声波辅助提取，促进了有效成分的析出。
参考文献:
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(011)
收稿日期:2014-01-10;修回日期:2014-01-19
基金项目:吉林农业科技学院科研项目(吉农院合字［2013］第
220 号)
作者简介:刁 磊(1982 －)，男，讲师，硕士，研究方向为新药
研究与开发，
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56179115@ qq． com．
复方轮叶党参颗粒剂的制备工艺研究
刁 磊，陈惠杰
(吉林农业科技学院 中药学院，吉林 吉林 132101)
中图分类号:S859． 5 + 3 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2014)12 － 0163 － 03
关键词:轮叶党参;颗粒剂;成型工艺;茯苓;大枣;枸杞;保健
摘 要:为了制备复方轮叶党参颗粒剂，试验以颗粒的粒度合格率、溶化性和吸湿率为评价指标，通过
单因素试验和正交试验筛选颗粒剂的成型工艺。结果表明:复方轮叶党参颗粒剂的最佳配方为复方
轮叶党参多糖浸膏粉与辅料(糊精∶甘露醇 = 1∶1)以 1∶3 比例混合，并以 95%乙醇为润湿剂，在优选的
工艺条件下，制得的颗粒粒度合格率、溶化性和吸湿率均符合《中华人民共和国药典》(2010 年版)颗
粒剂项下的相关规定。说明复方轮叶党参颗粒剂的制备方法简单可行，成型工艺稳定可控。
轮叶党参又名泰山参、四叶参、山海螺、羊乳等， 为桔梗科党参属重要药用植物，以根入药。传统医学
认为，轮叶党参味甘、苦，性平，有补气、通乳、润肺、清
热解毒、消肿排脓等作用，主要用于益气体虚、气阴不
足、自汗口渴、肺燥干咳等症的治疗。现代药理研究
表明，轮叶党参具有增强机体免疫力、提高记忆力、抗
疲劳、抗突变、抗氧化等多种作用［1］。轮叶党参作为
361《黑龙江畜牧兽医》科技版
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2014.1449