全 文 ：“ ` 空互咚结合全查里丝生塑鱼壑鱼
平乐内服接骨丹对骨折愈合作用的实验研究
河南省洛阳正骨研究所 孙炳烈 徐今宇 赵 然 孙 娟 侯桂英
内容提要 本文介绍用平乐内服接骨丹进行动物实脸 , 通过 X 线 、 组织学和组织化学
检查及 3 H一 T d R放 射 自显影 . 结果证明 该药能促使骨缺损愈合时间提前 36 .6 2% , 用药组与
对照组 相比有显著差异 ( P < 0 . 01 ) 。 组织学和组织化学检查进一 步证明该方有促使骨痴提前
生长的作用 。 用 3 H 一 T d R 放射 自显影证明接骨丹有促进骨原生细胞增 殖 , 细 胞 内 D N A 合
成加速 , 成骨细胞机能活跃的作 用 , 用药组细胞标记指数比对照组多 21 1沁 (P < 0 . 0 1 ) 。 并
使碱性磷酸晦增多及活性增强 , 糖原合成和利用迅速 , 胶原结合钙盐产生新骨质快 , 从而
促进 了骨折的愈合 。
近年来 , 临床与实验研究证明中药有促进骨析愈
合的作用 《 l · 幻 、 但由于种种原因尚未列入治疗常规 。
为 了提高对骨折用药必要性的认识 , 便于在临床上合
尸理推广使用 , 我们采用平乐内服接骨丹 , 在临床使用
有效的基础上 , 进行了动物同位素放射自显影及组织
学的观察研究 , 现报告如下 。
材料和方法
一 、 实验功物 : 选择体重 2 、 3 k g 的日本 大耳
白家兔 4 只 , 雌雄不拘 , 但每周的用药组与对照组性
别相同 , 做骨缺损用 。 选择体承 1压. ~ 250 9的瑞 士 种
大白既 12 0 只 , 雌雄不拘 , 但每周的用药组与对照组
性别相同 , 做骨缺损及闭合性人工骨折用 。
二 、 骨折方法: 4 只家兔左前臂剔毛 , 按 50 m g
k g 体重静脉注射异戊巴比妥钠麻醉 , 消毒后 手 术 切
开 , 用电动骨锯造成挠骨中段 .0 sc m 长的骨缺损 , 缝
合包扎 。 取 6 0只大白鼠 , 乙醚麻醉 , 手术 切 开 右 前
肴 , 用骨据造成挠骨中段 ot c3 二 长的骨缺损 。 另 60 只
大白鼠 , 在乙醚麻醉下 , 取左小腿中下 1 3/ 处 , 徒手
造成闭合性人工骨折 。 术后均不固定 。
三 、 动物分组 : 按随机化原则分组 , 每组内均设
用药组与对照组 。 家兔按用药周数分为 1 、 2 、 3 、
4
、
5
、
6 周组共六组 。 大白鼠用合性人工骨折亦按
用药周数分为 1 、 2 、 3 、 4 、 5 周组共五组 , 大白
民骨缺损则分为 7 、 14 、 24 、 34 、 4 4天共五组 。
四 、 药物与给药方式 : 实验用药采用平乐内服接
骨丹 (处方 : 参三 七 、 土元各 9 9 , 龙 骨 、 自然 铜 各
159
, 乳香 、 没药各 5 9 , 元寸 .0 39 , 共研为细末 , 装
胶囊 ) 。 术后第二天用药组开始口 服给药 , 对照组不用
药 , 每组用药结束处死 。 用药量按人体体 表 面 积 的
l分%计算 , 将药物棍入顺粒饲料中们卧饲 , 平均每日每
只家兔 0 .2 9 , 大白鼠 0 . 19 。 此用药量比临床用量大一
倍。
五 、 实验方法
l
.
X 线检查 : 用于家免 , 按期每周处死前拍摄患
肢 X线片 , 除一般对比观察外 , 并放大成照片 , 取骨
缺损区复印在计算纸上 , 计算出骨痴阴影面积的百分
数 , 求出用药组与对照组的差数 , 进行统计学处理 。
2
. 组织学和组织化学观察 : 家兔处死后取骨缺损
处两端标本 , 固定于 10 % 中性福尔马林液 , 10 %硝酸
脱钙 , 常规石腊切片 , 每个标 本 均 用 HE 、 M “ . 。瓦
P T人H 和 P AS 四种方法染色观察 。 大白鼠骨 缺 损 标
本除按上述同样方法处理外 , 部分标本用 冷丙 酮 固
定 , 不脱钙切 片 , 用 G o m or i 法染色 检 查 碱 性 磷酸
酶 , 观察各周用药组与对照组切片中喊性礴酸酶的情
况 。
3
.
,
H
一
T d R 放射自显影检查 : 大白鼠每组处死前
1 小时 , 按每克体重 .0 5井 iC 计算用量 , 皮下注射 . H -
胸腺嚓吮核若 ( ” H一 T d R ) , 1 小时后处 死 , 取 骨 折
处标本 , 按 T o n n a氏法 ( .) 进行固定 , 用E D T A脱钙 ,
制成 5 产m 的切片 , 在暗室内徐乳胶 , 冰箱 内存放幼
天 , 取出显影定影 , 用 H E 复染 , 在高倍显微 镜下观
察标记细胞 , 进行计数并做统计学处理 。
结 果
一、 X 线检查
1
. 一般对 比观察 , 用药组除第 1 周骨缺损处为云
雾状阴影 , 影像模糊 , 范围未能确定外 , 其他备局骨
饰增生阴影 范围均比对照组大 (附图 ) 。
2
. 采用方格计算法 , 得出骨缺损处骨俪朋影面积
% )
, 结果见附表。
从表中可以看出 , 各周用药组骨疯阴影面积均比
塑遗些三丝平卫哩咦多资釜渔梦中 545
睁
附圈 上为用药组第 6 周骨缺损区达到骨性愈合 , 下为对 照
组第 6 周骨缺损 区未愈合
附衰 用药组与对照组骨痴阴影面积的比较
骨而阴影面积 (% ) M 土 S D
2周 3 周 4 周 5周 6 周 合计
用药二 , 6 2
.
7 6 4
.
6 8 8
.
6 7 3
.
4 8 3
二
2 7 3
。
8
士 17 . 士 16 .
币 对照 4 3 5
.
8
7 上 7 . 6
t 值
P 值
2
.
69
土 1 3 .
4 2
.
士 1 9 .
3
.
4 6
土 2 2,
4 5
,
士 2 1 .
1
.
5 4
< 0
.
士11 .
4 2
.
土 1 3 .
4
.
0 4
上 1乳
3 7
.
士 1 6 .
< 0
.
0 1 ) 0
.
0 5 < 0
.
0 5 2 < 0
.
0 1
6
.
0 2
< 0
.
0 1
对服姐大。 两 组总均数用药组为 73 .7 6 % , 对照 组 为
3 7
.
14%
, 相差 3 6 . 62 % ( t 二 6 . 02 , P < 0 . 0 1 ) , 说明用药
组的骨痴增长速度明显比对照组快 。
二 、 组织学和组织化学观察
1
. 组织学观察 : 第 1 周家兔骨缺损用药组骨内外
膜成骨细胞增殖活跃 , 并向缺损中间蔓延 , 骨折端有
大片多角形成骨细胞 , 缺损区血肿基本机化 , 在髓腔
可见明显充血 。 对照组骨内外膜有梭形细胞增生 , 在
骨端和缺损区仍为大片未机化的血肿 , 髓 腔 未 见 充
血。
第 2 周用药组 J骨折端 已有成片骨小梁形成 , 成骨
细胞活跃 , 血肿机化被软骨代替 , 髓腔仍有充血 。 对
照组只在骨折端有软骨形成 , 中间为大片 血 肿 机 化
区 , 蕊腔无充血现象 。
第 3 周用药组缺损区有大片新生的骨小梁 , 并沿
内侧形成带状骨饰和对侧骨端相连 , 外侧为软骨和纤
维形成的凹陷。 对照组缺损区两骨端有小片骨小梁生
成 , 软骨生长较多 , 中间仍为血肿机化区 。
第 4 周用药组缺损区均为新生的骨小梁 , 中间只
有少茸纤维软骨存在 。 对照组只在两骨端有小片新生
骨小梁 , 中间大部分被血肿机化和软骨分隔 。
第 5 周用药组缺损区余部或大部为新生骨小梁 ,
并连接两骨端 , 中间有时有少量纤维性骨样组织 。 对
照组缺损区两端有成片的新生骨小梁 , 中~间扔被纤维
组织及软骨所分隔 。
第 6 周用药组缺损区全部被新生骨质填充 。 对照
组缺损区乃被软骨及纤雄组织分隔 。
上述组织学变化在大白鼠手术组中同 样 可 以 看
到。 用M as .o n 和 P T人H染色的各组切片中 , 从胶原的
变化也可看到用药组比对照组新骨形成迅速 。
2
. 组织化学观察 . 碱性磷酸酶 ( A L )P : 大白眼
手术组标本。 用药组第 7 天骨折端大片多角形成骨细
胞内人L P丰富 , 以后随时间延 长 , A L P 迅 速 延伸 ,
范围扩大 , 到 4 天已充满骨缺损区 。 对照组 第 7 天
骨折端成骨细胞内A L P量少 , 随时间延长 虽 有 所 增
多 , 到 4 4 夭骨缺损区 A L P 的扩展范围明显不如用药
组大 。
据原 . 多在软骨组织及来俩化的胶原 周 围 出 现
P AS染色阳性 。 对照组比用药组阳性染色范围 大 , 存
在时间长 , 说明对照组软骨 区大 , 未钙化胶原多 ; 表
明用药组糖原合成和利用迅速 , 可促进骨痴增长。
兰 、 s H 一 T d R放射自显影
啊一 T dR标记物在大白鼠人工闭合性骨 折 愈合过
程中主要标记在骨原生细胞和活跃的成骨细胞核内 。
标记细胞的形态观察与计数: 第 1 周用药姐与对照组
相比 , 用药组有较多的标记细胞 , 核大赖拉多 , 多达
数十个 , D N A含量丰富 , 说明细胞机能旺盛。 第 2 周
用药组同样有较多的标记细胞 , 而对照组有许多未被
标记的梭形细胞 。 以后各周两组标记细胞逐渐减少 ,
但用药组均多于对照组 。 经计数用药组五周标记细胞
数 , 平均为3 9 8编 , 而对照组为 18 7编 , P < .0 01 。
.
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OU舟bnùj .人.
吞
奋
讨 论
骨折愈合属结缔组织修复过程 , 机体在正常情况
下骨折愈合并不难 , 因骨自身有很强的塑造能力。 故
西医认为骨折愈合慢就只有等待时间 . 不存在促进骨
折愈合的问题 。 然而 , 近 年来国外用徽电流刺激和骨
形成蛋白 ( B M )P 证明可促进骨折愈合 , 国内研究某些
中草药证明可促进骨折愈合 , 说明骨折愈合过程在某
种因素的影响下可快可慢 。
中医长期以来主张内外用药治疗骨伤科疾病 , 认
为有活血化琅、 消肿止痛 、 法旅生新 、 接骨埃筋的作
用 , 能促进创伤的修复。 平乐内服接骨丹由七味中药
组成 , 均为伤科要药 , 主要为理气理血药 。 从本文结
果看 , 用接骨丹组骨脚生长比对 照组提前 36 .6 2 % ` P <
几01 ) , 证明平乐内服接骨丹确有促进件折愈 合 的 作
用和临床应用的价值 。
54 6
!甲 H一 T dR放射自显影研究骨折愈合中的细胞 反
应是很有价值的方法 “ ~ 6) , ` H一 T d R 标 记 物 最 先 出
现在骨原生细胞 ( o s t e o Pr o g e n i t o r e e l l s ) , 也称间质
细胞或前成骨细胞中 , 这种细胞属于 干 细 胞 ( S et m
c e l s )
, 骨折后可快速分裂繁殖 , 标记物接着出 现 在
活跃的成骨细胞 。 由于 3H 一 T d R能与细胞核的 D N A 相
结合 , 使我们可看到标记细胞内D N A含量的多少和细
胞的机能状态 , 为评价中药的作用提供了有利条件。
结果表明 , 用药组各周标记细胞计数均多于对照组 ,
用药组标记指数比 对 照 组 多 Zn 编 ( P < 0.0 D , 证明
该药有促进生骨性细胞的增生繁殖 , 使成骨细胞机能
活跃 , D N A合成加快 , 细胞分裂周期缩 短 , 结 合 胶
原生成迅速 , A L P增多及活性增强 , 促进 了 钙 盐 沉
积 , 早期出现新生骨质 , 使较大的骨缺损提前愈合 ,
显示该药有较强的促进骨质生成作用 , 说明中药复方
用药有明显的优越性。 习
, 考 文 做
, . 贵阳中医学院骨折科研协作组 。 中药“ 接骨 n 号” 促进骨
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2
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中药肝乐 I 、 n 号方药理实验研究
湖南省肿瘤医院药理室 陈正玉 刘亚利 郑德新 难
对中药肝乐 I , I 号方进行实验研究 , 探讨其是
否有抗痛作用及其药理作用 。
方 法 所用中药复方肝乐 I 号和 1号的浓度 ,
每10 0 m l相当生药 2 009 , 实验方法按 197 8年抗肿瘤药
物体内筛选规程进行 , 瘤株为小鼠肝癌腹水型 (H A C ) 、
肝瘤实体型 ( ( HA )S 、 艾氏腹水癌 ( E CA )等。选择 10 天
左右 、 肿瘤生长旺盛的瘤源动物小 白鼠 , 腹腔 或 皮
下接种 10 ,个瘤细胞 /只 , 药物于接种后 24 小 时 开 始
灌胃或腹腔给药 7 “ 10 天 。 比较治疗组与对照组的实
体瘤平均瘤重 , 计算肿瘤抑制率 。 腹水癌比较两组的
平均生存时间 , 并进行统计学处理 。
结 . 两方对 H A C 、 H A S瘤株无抗肿瘤作用 。
肝乐 I 号抑瘤率为 .3 1% , I 号为 18 .5 % 。 也 选 用 了
E CA动物瘤株 , 证明两方均无生命延长作用 。 本实验
中以 5 一 F U每天 20 m g / k g , 腹 腔 注 射 , 连 续 7 次 ,
对 H A C 、 HA S瘤株有明显的抗肿瘤作用 , 抑 瘤 率 为
6 .8 2%
。 肝乐 I 、 I 号剂量根据实验动物的耐受性歹
从 10 9 、 2 09开始找出动物最大耐受量 , 4 09 / k g灌胃 ,
多次重复无效 , 说明并非用药方法与剂量影响疗效 ,
非胃肠给药也没有作用。 其毒性作用明显增加 , 动物
多在用药后 3 ~ 4 天内死亡 , 可能与药物制剂有关 。
采用小鼠热板法进行镇痛实验 , 测定 痛 反 应 时
间 , 并与用药前比较 , 求出侮组痛闭反应率 (% ) , 与
对照组作比较 , 实验证明 I 、 I 号方都有一定镇痛作
用 , 但较颅通定作用缓慢 , 其程度稍弱 (附图 ) 。
、 奋二
、
X
附圈 复肝乐合剂镇痛试验
本实验结果证明 , 中药复方肝乐 I 号 、 I 号均无
抗肿瘤作用 , 但有中等度的镇痛作用 , 可能与方剂中
活血以七疲 、 疏肝理气之品有关 。
肝乐 I 号方 : 党参 黄蔑 白术 获荃 陈皮 香附
上鳌 桃仁 大黄 郁金 沉香 苏木 获甲 牡骊 截米
鼠妇 蚤休 败昔草 炮山甲 白茅根 。
肝乐 n 号方 : 从 I 号方中减蚤休 挑仁 苏木。 中
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