全 文 ：甘肃医药 2015年第 34卷第 5期 Gansu Medical Journal，2015，Vol.34，No.5
骨缺损指骨的结构完整性被破坏，是临床常见
病。典型缺损的局部临床表现结合 X线检查，即可明
确诊断。较小的骨缺损（通常指 8mm以下）对于一个健
康的非吸烟者来说有可能自行愈合[ 1 ]。但骨缺损过大
或者在较小骨头上的骨缺损很难完全愈合。骨损伤模
型一般采用开放性骨折模型进行制作[ 2 ]。
甘肃民间中药接骨丹，其主要成分为西藏山溪
鲵，可促进细胞增殖、成骨性分化、提高碱性磷酸酶活
性、钙盐沉积量、Ι型胶原含量、骨钙素含量和钙化结
节数，口服后的代谢产物可刺激大鼠骨髓间充质干细
胞增殖，并能促进其成骨性分化。本研究运用大鼠开
放性骨折模型制作骨损伤模型，通过免疫组化的方法
考察接骨丹对于骨折愈合及骨形成的促进作用。
1 材料与方法
1.1 材料 SD大鼠 40只，雌雄各半，体重（220±10）g，
购自甘肃中医学院 SPF级动物实验中心，动物质量合
格证号：0001112。接骨丹（西藏山溪鲵，购于甘肃省渭
源县黄香沟罗家磨民间，经定西市药检所鉴定）晒干
研成粉末；盐酸氯胺酮注射液（福建吉田药业有限公
司生产，批号：110530）。仪器与设备：德国 LEICA
RM-2015生物组织切片机，Olympus BX41 显微摄影
系统，四川大学 Mias病理图像分析系统。
1.2 方法
1.2.1 骨折模型的制造。各组大鼠腹腔注射氯胺酮
20mg/kg，待麻醉后，仰卧固定、对左后肢胫骨处进行脱
毛处理、消毒，于左后肢胫骨下端切开 1.5~2cm切口，
分离肌肉，避免血管神经损伤，暴露胫骨，用专用电钻
于胫骨中端磨出宽 4mm深达髓腔骨缺损，逐层缝合，伤口
不包扎不固定[ 3 - 4 ]，每天消毒，七天后分笼饲养。
1.2.2 实验分组。将造模成功的大鼠随机分为四组：治
疗组（高、中、低剂量三组）和空白对照组，每组 10只。治
疗组大鼠经灌胃给予治疗量接骨丹（0.1g/kg，0.25g/kg，
0.5g/kg），每日 2次，连续给药 28天，空白对照组灌服
2ml生理盐水。
1.2.3 标本采集。于术后第 7、28天分别在四组内随机
各取 5只大鼠（雌雄各半），用断颈法处死，剪断左后
肢。以骨痂为中心，上、下骨端各 1cm取材，脱钙 3周，
沿骨痂组织矢状面（纵行）剖开，冲洗，脱水，二甲苯透
明，石蜡包埋，切取 4μm厚连续骨折端切片[ 5 ]，免疫组
化 BMP-2染色。
1.2.4 免疫组化 BMP-2染色。（1）抗体溶解方法：规格
为 0.1ml的冻干粉抗体，用移液器加 0.1ml双蒸水到试
管内，混匀，溶解后取部分抗体分别稀释成，1：100、
1：200、1：300、1：400、1：500，五种浓度的抗体，其余抗
体-20℃保存。（2）组织块的处理：常规烤片脱蜡，梯度
酒精脱水，自来水浸洗。（3）免疫组化染色步骤:①根据
所需工作液的量，取柠檬酸组织抗原修复液适量，按
1：100的比例稀释。取适量工作液于压力锅中，将压力
锅放置于电磁炉上，大功率加热至沸腾。将功率调至中
度，将切片置于高温塑料染色加上，放入沸腾的修复液
中，盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热。当压力阀喷气时
［7］ 丰有吉,沈铿.妇产科学［M］.第 2版.北京,人民卫生出版社,2010:426.
［8］ 田海红. 米非司酮配伍米索前列醇终止 10~16周妊娠临床观察［J］.
中外医学研究,2013,11（3）:28-29.
［9］ 张春荣.药物流产 920例临床分析［J］.中外医学研究,2012,10（14）:
133－134.
［10］吕爱萍.有关影响药物流产效果因素的临床分析［J］.中外健康文摘,
2012,9（28）:129－130.
［11］才艳丽,孙艳梅,岳晓辉.米非司酮配伍米索前列醇及卡孕栓终止
11~17周妊娠的临床观察［J］．现代中西医结合杂志,2011,20（14）:
1734－1735.
［12］林建平,杨玉慧.米非司酮配伍米索前列醇终止 l0~l4周妊娠 450
例［J］．现代中西医结合杂志,2011,20（5）:594－595.
［13］吴淑文. 米非司酮配伍米索前列醇不同使用方法终止早孕效果比
较［J］.现代中西医结合杂志,2012,21（27）:3004－3005.
甘肃民间中药接骨丹（西藏山溪鲵）促进大鼠胫骨
骨折愈合的疗效观察
牛恒立 马中兴
【摘要】 目的：探讨接骨丹对于骨折愈合及骨形成的影响。方法：采用开放性骨折模型制作大鼠骨缺损模型，通过免疫组化
BMP-2染色，观察接骨丹对于骨折愈合及骨形成的影响。结果：高剂量及中剂量组接骨丹对骨折愈合及骨形成有明显疗效，BMP-2
染色高剂量组及中剂量组其阳性率明显低于低剂量组及对照组。 结论：接骨丹对于骨折愈合及骨形成有促进作用。
【关键词】 接骨丹；胫骨；骨损伤；骨缺损；免疫组化
文献标识码：A 文章编号：1004－2725（2015）05-0353-03
作者单位：730030 甘肃 兰州，兰州大学第二医院药学部（牛恒立）；
743300 甘肃 天水，秦安县人民医院骨科（马中兴）
353· ·
DOI:10.15975/j.cnki.gsyy.2015.05.014
甘肃医药 2015年第 34卷第 5期 Gansu Medical Journal，2015，Vol.34，No.5
计时 2分钟。然后将压力锅离开电磁炉，室温下自然
冷却 10分钟后，可用流水在压力锅外壁冲淋加速锅
内修复液冷却，冷却至室温后取出切片，流水冲洗干
净。②PBS冲洗 3×3分钟。（PBS磷酸盐缓冲液为福州
迈新生物公司）③3%H2O2 水溶液处理 10min；④PBS
冲洗 3×3分钟；⑤加第一抗体（BMP-2）（北京博奥森
生物工程有限公司）室温（18~30℃）孵育 60分钟或
4℃过夜；⑥PBS冲洗 3×3分钟；⑦加生物素化第二抗
体（试剂为福州迈新生物公司 Maxvision快捷型酶标
羊抗鼠、抗兔 IgG 聚合物）孵育 25 分钟；⑧PBS 冲洗
3×3分钟；⑨DAB－H2O2 显色，室温下染色时间约 3~10
分钟：（DAB显色液为福州迈新公司）在小试管中先加
0.85ml 蒸馏水，再按试剂 A、B、C 顺序加入试剂各
50μl（一滴）混匀即成 1ml的 DAB显色液，若出现沉淀
可过滤后使用。配制好的溶液应避光存放，30分钟内
有效，染色结果为棕色。室温下染色时间为 3~10分
钟，一般在显微镜下根据颜色的发展情况掌握染色时
间。⑩水洗。（4）复染：①入苏木精染液 10分钟，水洗。
1%盐酸酒精溶液分化数十秒钟。流水洗至细胞核呈蓝
色。伊红染色液染 30秒钟。自来水洗数秒钟。②80%
乙醇溶液脱水 1分钟，95%乙醇溶液脱水 1分钟。无水
乙醇溶液 I脱水 2分钟，无水乙醇溶液 II脱水 2 分
钟。二甲苯溶液 I透明 10分钟，二甲苯溶液 II透明 10
分钟。③中性树胶封固，粘贴标签[ 6 - 7 ]。
2 结果
2.1 给药第 7天 高剂量组新生骨小梁形成，骨小梁
周围骨母细胞染色阳性，成软骨细胞区及成骨细胞区
BMP-2染色阳性；中剂量组骨母细胞及软骨母细胞分
化，BMP-2染色阳性，低剂量组及对照组 BMP-2阳性
率明显较高。见图 1-图 4。
2.2 给药第 28天 高剂量组骨小梁排列更整齐，逐
渐形成板层骨，成软骨细胞逐渐形成成熟软骨，BMP-2
进一步变淡。中剂量组骨小梁相连，成骨细胞及成软
骨细胞逐渐向成熟方向分化，BMP-2染色逐渐变淡。
低剂量组及对照组骨小梁周围骨母细胞染色阳性，成软
骨细胞区及成骨细胞区 BMP-2染色阳性，低剂量组及对
照组阳性率明显高于高剂量组及中剂量组。见图 5-图 8。
3 讨论
骨折是指由于外伤或病理等原因致使骨质部分
或完全断裂的一种疾病，常给病人带来巨大的疼痛和
不便，也是临床医生所遇到的比较棘手的病例。
骨折愈合是一个复杂的过程，涉及组织学、生物
学等多个过程，沈祥春等人将其分为五个过程[ 8 ]：骨损
伤早期、血肿形成期、肉芽组织形成期、纤维骨痂形成
期、骨重建和塑型期。在骨损伤早期骨折幸存下来的
细胞被激活积极传导信号，促进骨折愈合的速度。而
骨折时的出血填充在骨折两断端之间形成血肿，血液
中的纤维细胞在其中起到支架的作用，使新生的毛细
血管和纤维母细胞可以生长到血肿中，这些原始细胞
增殖分化产生新的毛细血管、纤维母细胞和周围的细
胞间质、血管等共同组成肉芽组织，使得血肿逐渐吸
收和机化。骨折 5天后进入纤维骨痂形成阶段，即机
化后的血肿和骨折断端的间隙和周围产生大量的新
生软骨组织和基质细胞。在这个过程中成纤维细胞一
方面大量的增殖分化，另一方面又大量的合成和分泌
Ⅰ型胶原蛋白，使肉芽组织逐渐向疏松的结缔组织转
化，将两骨折断端连接起来，形成巨大的纤维骨痂。随
着细胞的进一步增殖、分化肉芽组织生成新的软骨细
图1给药第7天对照组BMP-2染色 图2给药第7天低剂量组BMP-2染色 图 3 给药第 7天中剂量组 BMP-2染色 图 4 给药第 7天高剂量 BMP-2染色
图 5 给药第 28天对照组BMP-2染色 图 6 给药第 28天低剂量组BMP-2染色 图 7 给药第 28天中剂量组 BMP-2染色 图 8 给药第 28天高剂量组 BMP-2染色
354· ·
甘肃医药 2015年第 34卷第 5期 Gansu Medical Journal，2015，Vol.34，No.5
阴茎癌是一种泌尿外科少见的恶性肿瘤，其中鳞
状上皮癌占绝大多数。目前在男性肿瘤中仅占 1％以
下[ 1 ]。髂腹股沟淋巴结清扫术是阴茎癌根治术的重要
部分，患者经淋巴结清扫术后可获得较长的生存期。
但是，髂腹股沟淋巴结清扫术后的并发症如皮瓣坏
死、淋巴漏、淋巴囊肿、延迟愈合、感染、后期的下肢水
肿等较为常见[ 2 , 3 ]，增加了病患的痛苦，限制了该技术
的应用。我科自 2009年 7月至 2014年 10月将一种
新的负压引流装置 Drainobag 真空高负压引流瓶应
用在 12 例髂腹股沟淋巴结清扫术中，取得了良好
效果。
1 资料与方法
1.1 一般资料 观察组 12例，选取 2009年 7月至
2014年 10月甘肃省肿瘤医院行髂腹股沟淋巴结清扫
术的患者，年龄为 40～72岁。3例患者在外院行阴茎部
分切除术，3例均未同时行髂腹股沟淋巴结清扫术，术
后均未行放、化疗，2例为双侧肿大，1例为单侧肿大。9
例患者在甘肃省肿瘤医院行阴茎部分切除或阴茎全切
术，同时行髂腹股沟淋巴结清扫术。12例患者术后病
理检查均为鳞状细胞癌。UICC TNM 分期:T1N1M0 3
例；T2N1M0 6例；T2N2M0 3例。
对照组 12例，选取 2009年之前甘肃省肿瘤医院
行髂腹股沟淋巴结清扫术的患者，平均年龄为 35～76
岁。5例患者在外院行阴茎部分切除术，其中 3例未同
胞和成骨细胞，将在 1周后开始钙化，几周后出现骨
折端骨痂。最后随着骨痂中新生骨小梁的增加、排列
逐渐规则和紧密，使得骨折部位形成骨性连接而使骨
折愈合进入最后阶段。然而上述各阶段并不是依次进
行，而是不断交替重叠连续不断的。
中药治疗骨折在临床实践中有一定的优势，中医
认为“跌打损伤皆瘀血在内而不散也，血不活则瘀不
能去，瘀不去则折不能续”，肝失血养则骨折愈合的较
为缓慢。通过基原考证甘肃民间中药接骨丹为西藏山
溪鲵，属道地药材，具有明显的地域特征。
本实验结果提示高、中剂量组接骨丹具有促进大
鼠骨折愈合的药效学作用，而低剂量组接骨丹阳性率
与对照组无显著性差异，此研究为进一步的研究和临
床应用提供了实验基础。
参考文献
［1］ 汤译博 ,赵亮 ,苏佳灿 .骨折动物模型的研究进展［J］.中国骨伤 ,
2011,24（1）:91－93.
［2］ 佘昶,董启荣,周晓中.大鼠股骨开放截骨折模型与闭合骨折模型
制作的比较［J］.中国组织工程研究与临床康复 ,2008,12（46）:
9071－9075.
［3］ 王华松,黄琼霞,许申明.骨碎补对骨折愈合中血生化指标及 TGF－β1
表达的影响［J］.中医正骨,2001,13（5）:6－8.
［4］ 鲍善芬,王海鹰,赵霖,等.饲料中不同水平的铜对大鼠骨折愈合的
影响［J］.中国骨质疏松杂志,2004,10（1）:23－26.
［5］ 叶日乔,李茂,韦宝伟.生骨灵颗粒促进骨折愈合的实验研究［J］.中
草药,2004,35（8）:919－921.
［6］ Wang Shoubiao, Shen Ruowu, Gong Shaolan, et al. Experimental
study of chitin derivatives on promoting fracture healing［J］. Chinese
Journal of Marine Drugs, 2004,23（3）:7－10.
［7］ 沈祥春,张贵林,任光友.抗骨折方促进实验性大鼠骨折愈合作用的
研究［J］.中华中医药杂志,2007,22（5）:285－288.
［8］ Shen xiangchun，Zhang Guilin，Ren Guangyou. Effects of Kangguzhe
Formula on Promoting Union of Experimental Rat Fracture［J］.
China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy,
2007,22（5）:185－288.
Drainobag真空高负压引流瓶在髂腹股沟淋巴结
清扫术中的应用
张强 李军 郭斌 王建澍 李晶
【摘要】 目的：观察 Drainobag 真空高负压引流瓶在髂腹股沟淋巴结清扫术中的临床效果。方法：将 24 例髂腹股沟淋巴结清扫
术患者分为观察组（12 例）和对照组（12 例），观察组采用 Drainobag真空高负压引流瓶引流，对照组采用普通负压吸引球引流。术后
对 2组的置管时间、总引流量、拔管前每日引流量之和、拔管前更换敷料的次数、术后使用抗生素的天数、伤口愈合时间、切口完全愈
合的时间、术后住院时间、手术术后至出院的天数进行比较。结果:观察组术后持续引流时间、总引流量、抗生素使用天数、敷料更换次
数、创口愈合时间、术后平均住院天数等指标明显优于对照组（P＜0.01）。结论:Drainobag真空高负压引流瓶引流效果好，可预防创口感
染、促进创口愈合及减轻医护人员工作量, 节省住院费用，适于临床推广。
【关键词】 真空高负压引流瓶；髂腹股沟淋巴结清扫术；临床应用
文献标识码：A 文章编号：1004－2725（2015）05-0355-03
作者单位：730050 甘肃 兰州，甘肃省肿瘤医院泌尿外科（张强、李军、
郭斌），骨与软组织科（王建澍、李晶）
355· ·
DOI:10.15975/j.cnki.gsyy.2015.05.015