全 文 ：Tianjin Med J,Mar 2013,Vol 41 No 3
黄皮叶萃取物镇咳、祛痰及平喘作用研究*
黄桂红 1 邓 航 1 陈 薇 1 罗昱澜 1 董晓敏 1 罗力立 2
【摘要】 目的 研究黄皮叶不同溶剂萃取物的镇咳、祛痰、平喘作用。方法 （1）将 60只小鼠随机分为正常
组、枸橼酸喷托维林组、石油醚萃取物组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及水提物组，给予相应药物灌胃7
d，用浓氨水引咳，观察小鼠咳嗽潜伏期及2 min内咳嗽次数。（2）将另60只小鼠随机分为正常组、氯化铵组、石油醚
萃取物组、二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组及水提物组，灌胃相应药物7 d后采用腹腔注射5%酚红溶液，观察
小鼠气管酚红排泌量。（3）70小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、石油醚萃取物组、二氯甲烷萃取物组、乙酸
乙酯萃取物组及水提物组，于第1、7、14天腹腔注射卵蛋白致敏液；第18～22天给予相应药物灌胃，并用卵蛋白溶
液雾化激发，观察哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数及细胞分类计数。结果 （1）与正常组比较，石
油醚萃取物、二氯甲烷萃取物能延长小鼠咳嗽潜伏期并减少2 min内咳嗽次数，差异有统计学意义（P＜0.01）。（2）与
正常组比较，二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物及水提物能增加小鼠气管酚红排泌量，差异有统计学意义（P ＜
0.01）。（3）与模型组比较，石油醚萃取物能减少哮喘小鼠BALF液中白细胞总数、嗜酸性粒细胞比例及中性粒细胞比
例，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 黄皮叶萃取物具有明显的镇咳、祛痰及平喘作用。
【关键词】 镇咳药；祛痰平喘；酚磺酞；白细胞计数；粒细胞；疾病模型,动物；黄皮叶
Studies on Antibechic, Expectorant and Antiasthmatic Effects of Extracts from Clausena
Lansium (Lour.) Skeels Leaves
HUANG Guihong1, DENG Hang1, CHEN Wei1, LUO Yulan1, DONG Xiaomin1, LUO Lili2
1Affiliated Hospital of Guilin Medical College, Guilin 541001, China;2 Department of Pharmacy, Guilin Medical College,
Guilin 541001, China
[Abstract] Objective To study the antibechic, expectorant and antiasthmatic actions of Clausena Lansium (Lour.)
Skeels (CLLSL) leaf extracts. Methods （1）Sixty mice were randomly divided into six groups: normal control group, pent⁃
oxyverine group, petroleum ether extraction group, dichloromethane extraction group, ethyl acetate extraction group and liquid
extraction group. After corresponding drug administration for seven days, cough models were induced by concentrated ammo⁃
nia in mice. The latent phase and the cough frequency per two minutes were recorded in mice.（2）Another sixty mice were
randomly divided into six groups: normal control group, ammonium chloride group, petroleum ether extraction group, dichloro⁃
methane extraction group, ethyl acetate extraction group and liquid extraction group. After corresponding drug administration
for seven days, the concentration of tracheal phenolsulfonphthalein was detected by 5% phenolsulfonphthalein solution intra⁃
peritoneal injection.（3）Seventy mice were randomly divided into seven groups: normal control group, model group, dexameth⁃
asone group, petroleum ether extraction group, dichloromethane extraction group, ethyl acetate extraction group and liquid ex⁃
traction group. The asthmatic mouse models were established by ovalbumin（OVA）intraperitoneal injection at the 1th, 7th and
14th day, and atomization inhalation was given from 18-22 days. The asthmatic mice were treated with corresponding medi⁃
cines respectively before atomization inhalation. The total leukocyte number and different cell counts in bronchoalveolar la⁃
vage fluid (BALF) were observed. Results (1) Compared with normal control group, the latent phase was significantly longer
and the cough frequency per two minutes was significantly reduced in petroleum ether extraction and dichloromethane extrac⁃
tion groups (P＜0.01). (2) Compared with normal control group, dichloromethane extraction, ethyl acetate extraction and liq⁃
uid extraction could significantly increase the concentration of phenolsulfonphthalein of mouse trachea (P＜0.01). (3) Com⁃
pared with model group, the total leukocyte number, eosinophile granulocyte count and neutrophil count in BALF of asthmatic
mice were significantly decreased in petroleum ether extraction group (P＜0.01). Conclusion The extracts of CLLSL have
antibechic, expectorant and antiasthmatic effects.
[Key words] antitussive agents; PHLEGM EXPELLING
ANTIASTHMA; phenolsulfonphthalein;leukocyte count;granulo⁃
cytes; disease models, animal; clausena lansium(lour.) skeels
leaves
doi:10.3969/j.issn.0253-9896.2013.03.012
*广西自然科学基金项目(项目编号：2012GXNSFAA053079)；广
西中医药科技专项项目（项目编号：GZKZ10-124）；桂林市科学研究
与技术开发计划项目（项目编号：20120121-1-17）
作者单位：1桂林医学院附属医院（邮编541001）；2桂林医学院
药学院2008级
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天津医药2013年3月第41卷第3期
哮喘是一种因神经递质或吸入收缩性刺激物
导致支气管过度收缩的过敏性炎症，也是一种可逆
的以气道阻塞为特征的常见呼吸系统疾病[1]。近年
来，其发病率呈上升趋势，而中草药在哮喘的防治
方面已被广泛应用。黄皮叶 (CLLSL)是芸香科植物
黄皮属的干燥叶，其性味苦、辛。始见于《岭南采药
录》，用于“疏风解表，除痰行气。治温病身热，咳嗽哮
喘，气胀腹痛，黄肿，疟疾，小便不利，热毒疥癞”[2]。目
前国内外对黄皮叶镇咳祛痰、平喘作用的研究尚少
见报道。本研究采用黄皮叶不同极性溶剂萃取物
初步探讨黄皮叶的镇咳、祛痰、平喘作用，以期为黄
皮叶进一步开发利用提供实验基础。
1 材料与方法
1.1 材料 （1）实验动物。SPF级昆明种小白鼠210只，体质
量18～25 g，雌雄兼用，由桂林医学院实验动物中心提供，合
格证号为SCXK桂2007-0001号。（2）主要药品及试剂。黄皮
叶不同溶剂萃取物：黄皮叶干燥粗粉 500 g，70%乙醇溶液回
流提取3次，浓缩后依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，
将所得萃取液浓缩干燥得到不同极性萃取物。另将乙醇萃
取后的药渣晾干后，用水煮提取3次，干燥，得到粉状的黄皮
叶水提物。各萃取物由本实验组制备；卵清白蛋白、氢氧化
铝凝胶（美国Sigma公司）；灭活百日咳杆菌（北京生物制品研
究所，批号R201002）；氨水（西陇化工股份有限公司，批号
1006071）；苯酚红（湖南省娄底市南化化学品有限公司，批
号 20091215）；氯化铵（广东光华化学厂有限公司，批号
20100409）；枸橼酸喷托维林（桂林南药股份有限公司，批号
110502）。（3）实验仪器。402AI型超声雾化器（江苏省鱼跃医
疗设备有限公司），旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂，型号
RE-52AA）；真空干燥箱（郑州长城科工贸有限公司，型号
DZF-250）；光学显微镜（日本，Nikon，型号Eclipse-E200）；细
胞计数器（上海市精生化试剂仪器有限公司）；紫外可见分光
光度计（英国 Biochrom，型号 libra S32PC）；离心机（法国，
Jouan，c3i-multifunction）。
1.2 黄皮叶不同溶剂萃取物镇咳作用的研究 采用小鼠氨
水引咳法 [3]。取小鼠80只放入密闭玻璃器皿内，浓氨水定量
恒压喷雾，10 s后立即取出，记录小鼠接受喷雾开始到出现咳
嗽的潜伏期以及 2 min内的咳嗽次数。喷雾后 2 min内不咳
嗽者舍弃。合格小鼠3 d后按干预方式不同随机分为6组，每
组10只：正常组、枸橼酸喷托维林组（0.01 g·kg-1·d-1）、石油醚
萃取物组（1.19 g·kg-1·d-1）、二氯甲烷萃取物组（0.51 g·kg-1·
d-1）、乙酸乙酯萃取物组（0.19 g·kg-1·d-1），水提物组（0.54 g·
kg-1·d-1），正常组灌胃等体积生理盐水。连续灌胃给药 7 d。
末次给药 1 h后，按上述浓氨水喷雾法记录并比较各组小鼠
的咳嗽潜伏期，以及2 min内的咳嗽次数。
1.3 黄皮叶不同溶剂萃取物祛痰作用的研究 采用小鼠酚
红排泌法 [3]。取小鼠 60只，随机分为 6组，每组 10只。分别
为正常组、氯化铵组（1 g·kg-1·d-1）、石油醚萃取物组（1.19 g·
kg-1·d-1）、二氯甲烷萃取物组（0.51 g·kg-1·d-1）、乙酸乙酯萃取
物组（0.19 g·kg-1·d-1）、水提物组（0.54 g·kg-1·d-1），正常组灌
胃等体积生理盐水。各组连续灌胃7 d，末次给药30 min后，
腹腔注射 5%酚红生理盐水 10 mL·kg-1，30 min后，用乙醚麻
醉动物，于喉头处插入气管，5% NaHCO3溶液 0.5 mL来回灌
洗 3次，合并灌洗液，离心，得到透明红色上清液，于 546 nm
分光光度计测吸光度。根据酚红标准曲线，折算出酚红含量
（mg·L-1）。比较各给药组与正常组之间祛痰作用的差异。
1.4 黄皮叶不同溶剂萃取物平喘作用研究 卵蛋白法复制
哮喘模型[4]。取70只小鼠，随机分为7组，每组10只。除正常
组作为对照外，其余用于造小鼠哮喘模型。（1）致敏：分别于
第1、7、14天腹腔注射0.5 mL致敏液，致敏液含卵蛋白（OVA）
25 μg+氢氧化铝凝胶2 mg+灭活百日咳杆菌2×1010。（2）激发：
第18～22天，将小鼠置于自制密闭箱内，每日给予雾化吸入
25 g·L-1的OVA溶液10 mL，每次吸入20 min，1次/d。若有烦
燥不安、呼吸急促、腹肌抽搐、两便失禁等为阳性反应。正常
组用生理盐水注射液代替OVA进行致敏和激发。实验从第
18天起，在OVA溶液雾化吸入前 1 h给予灌胃相应的药物，
其中正常组、模型组等体积生理盐水灌胃，地塞米松组给予
地塞米松（0.001 5 g·kg-1·d-1），石油醚萃取物组（1.19 g·kg-1·
d-1）、二氯甲烷萃取物组（0.51 g·kg-1·d-1）、乙酸乙酯萃取物组
（0.19 g·kg-1·d-1），水提物组（0.54 g·kg-1·d-1）灌胃。第22天灌
胃给药后进行OVA激发，20 min后取血，处死小鼠，用冰生理
盐水 0.5 mL灌洗肺泡，获得支气管肺泡灌洗液（BALF)，重复
上述冲洗共 3次，合并BALF并离心，弃上清液，沉淀细胞加
0.2 mL缓冲液混悬，用于白细胞总数计数及其分类计数。
1.5 统计学方法 采用SPSS 15.0统计软件进行分析。计量
资料数据以均数±标准差(x±s)表示，多组间均数比较用方差
分析，组间两两比较采用LSD -t检验，以P＜0.05为差异有统
计学意义。
2 结果
2.1 黄皮叶不同溶剂萃取物镇咳、祛痰作用 见表
1。（1）在浓氨水引咳实验中，与正常组比较，枸橼
酸喷托维林组、石油醚萃取物组、二氯甲烷萃取物
组咳嗽潜伏期延长，2 min内咳嗽次数减少，差异有
统计学意义（P＜0.01）。枸橼酸喷托维林组与黄皮
叶各萃取物组咳嗽潜伏期和2 min内咳嗽次数差异
均无统计学意义（P ＞0.05），其中氯化铵组为小鼠
酚红排泌实验的阳性对照组，未参与小鼠的浓氨水
引咳实验，因而在潜伏期及 2 min咳嗽次数处无数
据。（2）在小鼠气管酚红排泌实验中，与正常组比
较，二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物组、水提物
组及氯化铵组酚红浓度均增加（P＜0.05）；氯化铵组
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与二氯甲烷萃取物组气管酚红浓度差异有统计学
意义（P＜0.05），其中枸橼酸喷托维林组为浓氨水引
咳实验的阳性对照组，未参与小鼠酚红排泌实验，
因而在小鼠酚红浓度处无数据。
Table 1 Effects of extracts from CLLSL on the latent
phase, cough frequency and concentration of
phenolsulfonphthalein in different groups
表1 黄皮叶萃取物对小鼠咳嗽潜伏期、咳嗽次数及气管
酚红排泌量的影响 (n=10，x±s)
组别
正常组
枸橼酸喷托维林组
石油醚萃取物组
二氯甲烷萃取物组
乙酸乙酯萃取物组
水提物组
氯化铵组
F
咳嗽潜伏期
(s)
12.40±9.77
46.00±24.39 a
44.60±29.69 a
55.20±23.03 a
58.00±12.15 a
46.60±20.77 a
-
5.955＊＊
2 min咳嗽
（次）
13.40±6.85
8.40±3.92 a
4.70±3.19 a
6.80±5.71 a
10.10±7.29
8.60±4.99
-
2.864＊
酚红浓度
(mg/L)
1.56±0.86
-
2.52±1.28
6.28±2.89 ab
3.76±1.98 a
4.49±2.76 a
3.57±0.86 a
5.289＊＊
＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，表2同；a与正常组比较P＜0.05，b与氯
化铵组比较P＜0.05
2.2 黄皮叶不同溶剂萃取物对血细胞的影响 见
表 2。模型组的白细胞总数、嗜酸性粒细胞及中性
粒细胞比例较正常组增加（P＜0.05）；地塞米松组、
石油醚萃取物组较模型组白细胞总数、嗜酸粒细胞
比例、中性粒细胞比例减少（P＜0.01）；乙酸乙酯萃
取物组的白细胞总数、嗜酸粒细胞比例、中性粒细
胞比例较地塞米松组增加（P＜0.05）。
3 讨论
咳、痰、喘是哮喘的主要症状，是由于体内外各
种有害因素的长期刺激呼吸道黏膜上皮细胞，使之
充血水肿，支气管腺体分泌物增加，大量分泌黏液
抑制纤毛运动，致使纤毛上皮细胞损伤脱落，同时
炎症细胞浸润，导致气道炎症、咳喘、痰多等临床症
状[5]。因此，对哮喘的治疗应达到镇咳祛痰、解痉平
喘的目的。有研究认为，氨水、枸橼酸引起的豚鼠
咳嗽模型涉及感受器刺激,可引起支气管平滑肌收
缩,兴奋传入神经和传出神经,从而引发咳嗽反射[6]。
本研究结果表明，黄皮叶不同溶剂萃取物均能有效
延长小鼠咳嗽潜伏期，且石油醚萃取物、二氯甲烷
萃取物能显著减少小鼠 2 min内咳嗽次数，提示黄
皮叶石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物可能是通过保
护支气管黏膜免受刺激，减少支气管平滑肌的收
缩，达到镇咳效果。有研究认为，痰液由气管和支
气管的腺体和杯状细胞所分泌，它的存在是引起咳
嗽以至喘息的重要原因，痰液的清除有赖于黏液胶
的物理特性和黏液、气道及纤毛间的相互作用 [6]。
本研究证实，二氯甲烷萃取物组、乙酸乙酯萃取物
组及水提物组能显著增加酚红在小鼠气管的排泌
量，提示黄皮叶二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物
及水提物可能是通过增强气管和支气管腺体和杯
状细胞的分泌功能，使分泌量增加，从而达到祛痰
作用。
嗜酸性粒细胞的浸润在哮喘发病机制中起着
重要的作用。研究证实哮喘严重程度与外周血、痰
液、支气管黏膜、支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒
细胞水平及其产物相关，激活的嗜酸性粒细胞可释
放多种炎症因子，引起组织损伤、支气管收缩、黏液
分泌、血管通透性增加，导致气道反应性增加和哮
喘发作，嗜酸性粒细胞已成为治疗哮喘的一个有力
的标靶 [7]。中性粒细胞和嗜酸性粒细胞一样，在哮
喘急性加剧时均被激活，它能加重嗜酸性粒细胞在
哮喘中的特征变化。哮喘急性加剧和哮喘的持续
状态与BALF中中性粒细胞数量密切相关 [1]。本研
究表明，在哮喘模型小鼠的BALF液中，模型组与正
常组比较，白细胞总数、嗜酸性粒细胞比例、中性粒
细胞比例有明显升高，表明造模成功。黄皮叶各萃
取物干预后，石油醚萃取物组的白细胞总数、嗜酸
性粒细胞比例、中性粒细胞比例较模型组明显降
低，提示黄皮叶石油醚萃取物中可能存在能降低炎
性细胞释放的物质，对哮喘的防治有一定的作用。
Table 2 Effects of extracts from CLLSL on the total
leukocyte number and different cell counts in BALF of
asthma in mice
表2 黄皮叶萃取物对哮喘小鼠BALF液中白细胞总数
及分类计数的影响
组别
正常组
模型组
地塞米松组
石油醚萃
取物组
二氯甲烷萃
取物组
乙酸乙酯
萃取物组
水提物组
F
白细胞总数
(×108/L)
7.83±2.15a
21.12±4.16
14.76±3.43a
15.91±4.10a
18.65±5.20a
17.67±4.04b
17.62±2.32a
12.419＊＊
嗜酸性粒细胞
(%)
2.14±0.83a
20.21±5.04
6.62±2.31a
13.67±4.74ab
16.87±3.94b
19.05±4.09b
17.42±4.29b
31.047＊＊
中性粒细胞
(%)
3.22±0.71a
31.97±6.69
15.72±3.83a
20.39±4.52ab
28.21±5.79ab
24.72±3.62b
26.91±4.82ab
43.710＊＊
淋巴细胞
(%)
94.40±0.95a
47.92±7.00
77.62±4.68a
65.82±8.63ab
58.40±6.84ab
52.70±9.45b
55.78±8.77ab
51.804＊＊
a与模型组比较P＜0.05，b与地塞米松组比较P＜0.05
(n=10，x±s)
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综上所述，黄皮叶具有潜在的镇咳祛痰及抗哮
喘作用，其有效部位主要存在于石油醚萃取部位及
二氯甲烷萃取部位，但有关其具体作用机制有待进
一步研究。
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（2012-07-24收稿 2012-09-25修回）
（本文编辑 陆荣展）
王贺胜
程津新
（以下按姓氏笔画为序）
王建国 刘晓程 张连云 李玉明 杜 智 杨文秀 沈中阳 周清华
于东祥 于德民 马信龙 王 林 王国林 卢彦昌 田凤石 刘 斌 刘建实
刘建恒 吕文光 孙保存 孙根义 祁 吉 吴迺峰 张 俊 张 赛 张建宁
杨建立 沈 彬 邱明才 陆 伟 陈春有 陈莉明 周孝思 庞 华 范玉强
胡明秋 徐 勇 秦英智 顾 清 高 平 高 辉 彭 林 魏 健 魏路清
杨云华
万 征 于东祥 于德民 马 骏 马信龙 马洪顺 尹利荣 尹彦玲 毛用敏
牛铭钢 王 平 王 岚 王 林 王 捷 王 磊 王广舜 王世民 王玉亮
王西墨 王邦茂 王志强 王国林 王宝利 王建华 王建国 王贺胜 王晨虹
车雅敏 邓树才 丛洪良 冯世庆 卢成志 卢彦昌 田凤石 石继红 龙 刚
刘 寅 刘 斌 刘 暌 刘光陵 刘克强 刘建实 刘建恒 刘晓程 刘德敏
吕文光 吕国义 孙大强 孙丰源 孙丽莹 孙志明 孙保存 孙根义 巩 路
曲芃芃 朱志军 祁 伟 祁 吉 闫凤英 齐 新 余剑波 佟仲生 冷希岗
吴 琦 吴迺峰 宋 力 宋芷珩 张 俊 张 逊 张 颖 张 赛 张 瑾
张云山 张云亭 张吉翔 张庆瑜 张宏艳 张志广 张连云 张建宁 张哲成
张理涛 张碧丽 李 光 李 强 李 辉 李小东 李广平 李月川 李长义
李玉明 李玉明 李志军 杜 智 杨 卓 杨 洁 杨云华 杨仁池 杨文秀
杨建立 沈 军 沈 彬 沈中阳 邱明才 陆 伟 陈 松 陈 叙 陈春有
陈莉明 周 冰 周孝思 周清华 孟庆义 庞 华 庞 雁 林 珊 林 鹏
范玉铃 范玉强 郑少雄 胡 坚 胡明秋 钟殿胜 夏 天 夏 群 夏时海
徐 勇 栗 力 殷 恺 秦英智 秦鸣放 莫春柏 郭 静 郭志刚 郭翎飞
顾 清 高 平 高 硕 高 辉 崔华雷 曹武奎 梁东春 黄 乐 黄 楹
黄灿亮 黄国伟 彭 林 彭 诚 程津新 韩 涛 詹江华 詹丽梅 潘 澄
颜 华 薛玉良 魏 健 魏民新 魏路清
名誉主任委员
主 任 委 员
副 主 任 委 员
常 务 委 员
秘 书 长
委 员
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