全 文 ：水黄皮根总黄酮抗 DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的实验研究
李　靖 1 , 　朱　毅 1＊ , 　陈国彪1 , 　陈恩斌 2 , 　黄　凌 1 , 　赵　锦 1
(1.海南省药品检验所 ,海南 海口 570216;2.武警海南省边防总队医院病理科 ,海南 海口 570208)
收稿日期:2008-01-12
基金项目:海南省自然科学基金资助项目(30530)。
作者简介:李　靖(1976-),女 ,硕士 ,研究方向:新药的研究与开发。 E-mail:lijing9478@yahoo.com
＊通讯作者:朱　毅 ,男 ,博士 ,研究员 ,硕士生导师 ,研究方向:神经药理 、中药药理和新药开发。 Tel:(0898)66832901 E-mail:hnzhuyi@
126.com
关键词:水黄皮根总黄酮;DSS;溃疡性结肠炎;T-AOC;MDA;NO;NOS
摘要:目的:观察不同剂量的水黄皮根总黄酮(PRF)对右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠产生的溃疡性结肠炎(UC)的
干预作用 , 并初步探讨其作用机制。方法:采用自由饮用 4%DSS水溶液制备 UC小鼠模型 , 以柳氮磺胺吡啶(SASP)作对
照 , 观察各组小鼠的临床症状及结肠黏膜损伤情况 , 同时检测结肠组织中 T-AOC、MDA、NO及 NOS的水平。结果:与模
型组比较 , PRF高 、中剂量组可不同程度的改善 UC小鼠的临床症状 , 减轻结肠黏膜损伤 , 降低结肠组织中 MDA、NO、NOS
的含量或活性和升高 T-AOC水平(P<0.05, P<0.01), 且 PRF高剂量组作用与 SASP相似(P>0.05)。结论:PRF对
DSS诱导的 UC小鼠作用显著 , 其机制可能与减少自由基生成 、抑制脂质过氧化反应和增强抗氧化能力作用有关。
中图分类号:R285.6　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2009)01-0031-04
EffectoftotalflavonoidsofPongamiapinnatarootsonulcerativecolitisinduced
bydextransulphatesodiuminmice
LIJing1 , 　ZHUYi1＊ , 　CHENGuo-biao1 , 　CHENEn-bin2 , 　HUANGLing1 , 　ZHAOJin1
(1.TheInstituteforDrugControlofHainanProvince, Haikou570216 , China;2.DepartmentofPathology, HainanFrontierGarisonHospitalofArmed
Police, Haikou570208 , China)
KEYWORDS:totalflavonoids;Pongamiapinnataroots;DSS;ulcerativecolitis;T-AOC;MDA;NO;NOS
ABSTRACT:AIM:TostudytheefectoftotalflavonoidsofPongamiapinnataroots(PRF)onulcerativecolitis
(UC)inducedbydextransulphatesodium(DSS)inmiceandthepossiblemechanism.METHODS:Balb/c
micewerefedwith4% DSSsolutionfor7 dtoinduceulcerativecolitisandtreatedwithsulfasalazine(SASP)as
positivecontrol.TheclinicalsymptomandthelesionofcolonicmucosawereobservedandthelevelsofT-AOC、
MDA、NOandtheactivityofNOSincolonictissueweretested.RESULTS:Comparedwiththemodelcontrol, the
clinicalsymptomandthelesionofcolonicmucosaintreatmentgroupwereremarkablyimprovedafteradministration
ofPRFinlargeormediumdose.Inthetwogroups, thedecreaseinthelevelsofMDA, NOandtheactivityofNOS,
andtheincreaseinthelevelsofF-AOCcouldbefound.(P<0.05, P<0.01).Therewasnosignificantdiference
betweenthelargedosagePRFtreatedgroupandtheSASPgroup(P>0.05).CONCLUSION:Theresultsindi-
catethatsignificantefectofPRFonDSS-inducedUCmayatributaetoreductioninfreeradical, depressionoflipid
peroxidationandenhancementofantioxidantcapability.
　　溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis, UC)是一种病
因不明的慢性非特异性炎症性肠病 ,机制尚未完全
明了 ,且近年来发病呈上升趋势。有越来越多的证
据显示 ,炎症介质的释放与过剩自由基的产生及引
发的脂质过氧化反应对其组织损伤和免疫紊乱有着
重要的影响 。右旋葡聚糖硫酸钠(DextranSulfate
Sodium, DSS)诱导小鼠结肠炎模型的症状和结肠组
织学改变更类似于人类溃疡性结肠炎 ,在国内外已
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广泛用于 UC发病机制和新药开发的研究工具 [ 1] 。
水黄皮 Pongamiapinnata(L.)Merr.(异名
Pongamiaglabra)系豆科水黄皮属半红树植物 ,别名
水流豆 ,主要分布在印度 、马来西亚及我国南部海
南 、广东 、广西等地。本课题组前期研究表明水黄皮
根总黄酮有抗炎镇痛 、抗腹泻及抗胃溃疡等作
用 [ 2, 3] 。本研究采用自由饮用 4%DSS水溶液建立
UC小鼠模型 ,观察 PRF对 UC的干预作用并初步探
讨其作用机制。
1　材料
1.1　药物及其配制　水黄皮根 ,于 2006年 11月采
自海南省文昌市 ,经海南省药品检验所中药室陈国
彪副主任药师鉴定为 Pongamiapinnata(L.)Mer
的根茎 。水黄皮根总黄酮 (Pongamiapinnataroot
flavonoids, PRF)由海南省药品检验所中药室提供 ,
通过成分鉴定和含量分析 ,总黄酮纯度 >65%,临用
时以 0.5%羧甲基纤维素钠 (CMC-Na,国药集团有
限公司 ,批号:F2005-718)配成相应质量浓度的混悬
液备用 。柳氮磺胺吡啶(SASP, 250 mg/片 ,上海三
维制药有限公司生产 ,批号 200610C20)用时用刀片
刮去包衣 ,呈现黄褐色 ,研碎后过 100目筛 ,加 0.5%
CMC-Na配成 52g/L的混悬液备用 。
1.2　主要试剂 　葡聚糖硫酸钠 (Mr5000 , Wako
PureChemicalIndustries, Japan);总抗氧化能力(T-
AOC)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合
酶(NOS)以及考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒均由南京
建成生物工程研究所提供 ,批号为 2007.7。
1.3　实验动物 　SPF级健康 ♂性 Balb/c小鼠 60
只 ,体重(22±2)g,合格证号:SCXK(粤)2003-0002,
均由广东省实验动物中心提供 。购入后饲养在海南
省药品检验所动物实验室 ,实验动物使用许可证号:
SYXK(琼)2006-0009。普通饮食喂养一周后开始
实验 ,室温(22±2)℃,湿度(55±15)%。
1.4　主要仪器　3K15低温离心机 ,美国 Sigma公
司;TU-1800紫外 -可见分光光度计 ,北京普析通用
仪器有限公司;HM340石蜡切片机 ,德国莱卡公司;
BX50显微镜 ,日本奥林巴斯;HMIAS-2000医学病理
分析系统 ,同济医科大学千屏影像工程公司。
2　方法
2.1　UC小鼠模型的建立　参照 Cooper等 [ 4]的方
法建立小鼠溃疡性结肠炎模型:将 40gDSS溶于 1L
蒸馏水 ,配成 4%DSS溶液给予 BALB/c小鼠自由饮
用 ,以代替其日常饮用水 ,连续 7 d。
2.2　实验分组及给药　60只 Balb/c小鼠随机分成
6组 ,即正常对照组(Normal)、模型对照组(Model)、
水黄皮根总黄酮高 (PRF630)、中 (PRF210)、低
(PRF70)剂量组及阳性对照药柳氮磺胺吡啶
(SASP)治疗组 ,各 10只。水黄皮根总黄酮高 、中 、
低剂量组小鼠每天以剂量分别为 630、210、70 mg/
kg水黄皮根总黄酮混悬液灌胃 , SASP组以 520 mg/
kgSASP混悬液灌胃 ,正常组和模型组每天灌服等
量溶剂(0.5%CMC-Na溶液)作对照 , 0.1 mL/10 g,
每天 1次 ,连续 7d。除正常对照组一直饮用蒸馏水
外 ,余下各组均以 4%DSS溶液代替小鼠的日常饮
用水至实验结束时为止 ,共 7 d。
2.3　观察指标　实验过程中每天观察小鼠的精神 、
活动 、毛发 、饮食等一般情况 ,详细记录每只小鼠的
体重变化 、大便性状以及隐血情况(联苯胺法检测
大便隐血),并参照文献[ 5]以体重下降百分比 、大便
性状及便血三项评分之和除以 3作疾病活动指数
(Diseaseactivityindex, DAI)评分。实验结束后以
颈椎脱臼法处死小鼠 ,剖腹取出整段结肠(回盲部
至肛门),沿肠系膜缘纵行剪开 ,冰生理盐水冲洗干
净 ,滤纸吸干后截取病变明显处结肠组织约 1.0 cm
置于 4%多聚甲醛溶液中 4 ℃固定过夜 ,常规组织
脱水 、石蜡包埋 、切片 , HE染色观察结肠组织病理
损伤 ,剩余结肠组织置于 -20 ℃冰箱中保存 ,用于
T-AOC、MDA、NO、NOS等生化指标的检测 ,以上检
测均严格按照试剂盒说明书进行操作。
2.4　统计学处理 　数据 x±s以表示 , 利用
SPSS10.0统计软件包进行单因素方差分析 ,组间差
异采用 Dunnet-t和 SNK-q检验 。 P<0.05为差异
有显著性 。
3　结果
3.1　PRF对 DSS诱导的 UC小鼠一般情况及疾病
活动指数的影响　正常组小鼠活泼好动 、毛发光亮 、
体重持续增长 ,大便正常。模型组小鼠自实验第 3
天起开始出现蜷卧懒动 、厌食 、体重减轻 、体毛凌乱 、
大便松散 、次数增多等症状 ,且逐渐加重 ,部分潜血
阳性 ,少数肛周有黄色便痕或果酱色物黏附 ,甚至肛
门口有鲜血 , DAI评分显著升高 。而 PRF630、
PRF210、PRF70及 SASP各组与模型组相比 ,临床症
状均有不同程度的减轻 , DAI评分降低。具体结果
见图 1。
3.2　PRF对 DSS诱导的小鼠结肠组织病理改变的
影响　所有模型组小鼠结肠中均有瘀血或血性黏物
质 ,部分放大镜下可见有点状出血和糜烂。光镜下 ,
正常组小鼠结肠黏膜上皮细胞完整 ,腺体排列整齐;
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图 1　PRF对 DSS诱导的小鼠疾病活动指数的影响
( x±s, n=10)
Fig.1　EffectsofPRFonDAIinducedbyDSSinmice
( x±s, n=10)
模型组小鼠结肠黏膜上皮不完整 ,上皮细胞坏死脱
落 ,局部严重缺损 ,部分腺体排列紊乱 、萎缩甚至完
全消失 ,杯状细胞减少 ,黏膜层和黏膜下层有大量炎
性细胞浸润 ,少数可达肌层 ,部分黏膜下层充血 、水
肿明显;PRF高 、中 、低剂量及 SASP治疗组与模型
组比较均有不同程度的减轻 ,尤其是 PRF630和
SASP两组黏膜损伤较轻 ,除局部伴有少量的炎性细
胞浸润外基本接近正常组织 ,具体改变见图 2。
3.3　PRF对 DSS诱导的小鼠结肠组织 T-AOC、
MDA、NO、NOS活性或含量的影响　与正常对照组
比较 , DSS诱导的 UC模型小鼠结肠组织 MDA、NO、
NOS的含量或活性均显著升高(P<0.01), T-AOC
图 2　PRF对 DSS诱导的小鼠结肠组织病理改变的影响(H-E染色 ×100)
Fig.2　EffectsofPRFoncolonhistopathologicchangesinducedbyDSSinmice(H-Estaining×100)
注:图 2ANormal图 2BModel图 2CPRF630图 2DPRF210图 2EPRF70图 2FSASP
水平却显著降低 (P<0.01)。与模型组比较 , PRF
中 、高剂量组小鼠结肠组织中 MDA、NO、NOS的含
量或活性明显降低(P<0.01或 P<0.05), T-AOC
水平显著升高(P<0.01或 P<0.05),其作用有一
定的剂量依赖性。结果见表 1。
表 1　 PRF对 DSS诱导的小鼠结肠组织 T-AOC、MDA、NO和 NOS的活性或含量的影响( x±s, n=10)
Table1　 EffectsofPRFonactivityofT-AOCandNOSandcontentsofMDAandNOfromcolonictissue
inducedbyDSSinmice( x±s, n=10)
Group T-AOC/(U/mgprot) MDA/(nmol/mgprot) NO/(μmol/gprot) NOS/(U/mgprot)
Normal 1.548±0.428 10.572±2.630 2.742±0.858 1.919±0.755
Model 0.774±0.218## 25.297±7.146## 5.538±0.919## 3.767±0.944##
PRF630 1.3±0.441△△ 13.001±3.386△△ 3.249±1.065△△ 2.210±0.880△△
PRF210 1.204±0.323△ 17.888±5.112△△ 4.151±1.318△ 2.441±0.951△△
PRF70 1.045±0.255 20.676±6.424 4.399±0.945 2.879±0.921
SASP 1.303±0.423△△ 12.132±4.274△△ 3.193±1.218△△ 2.193±0.960△△
　　注:#P<0.05, ##P<0.01vsNormalgroup;△P<0.05, △△P<0.01vsModelgroup。
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4　讨论
UC以腹痛 、腹泻 、黏液血便 、里急后重为主要临
床表现 ,病变主要累及直肠和远端结肠的黏膜层及
黏膜下层 ,且病程迁延不愈 。目前治疗常用的三类
药物(水杨酸类 、类固醇激素和免疫抑制剂)也只是
缓解症状 ,且存在停药后易复发和长期用药不良反
应多等缺点 ,因此研究开发治疗 UC的天然药物具
有重大意义。本实验采用 DSS诱导小鼠结肠炎 ,结
果显示 , SASP(520mg/kg)能显著改善 UC小鼠的临
床症状 、减轻结肠黏膜病理损伤 ,降低 DAI评分;而
PRF治疗组则是不同程度的改善 UC临床症状和减
轻黏膜损伤 ,且 PRF高剂量组(630 mg/kg)类似于
SASP作用 。
近年来 ,大量研究证实自由基损伤参与了 UC
的发病过程[ 6] 。 T-AOC,即机体防御体系抗氧化能
力的整体状态 , 包括酶促和非酶促两个部分 , 前者
主要包括超氧化物歧化酶 、谷胱甘肽过氧化物酶 、过
氧化氢酶 、谷胱甘肽 S转移酶等 , 后者如维生素 E、
维生素 C、胡萝卜素等。 T-AOC不仅可直接反映机
体抗氧化酶的活力 、抗氧化系统的功能状态以及间
接地反映出机体所受的脂质过氧化损伤程度 ,而且
能简单准确的测定其含量 。T-AOC含量与细胞抗
氧化能力呈正相关 ,与机体脂质过氧化呈负相关 ,且
体内 T-AOC水平越高 , 自由基清除速度越快 [ 7] 。
MDA为脂质过氧化的终末产物 ,其含量测定可反映
机体内脂质过氧化的程度 ,其高低又间接反映了组
织细胞受自由基攻击的严重程度。同时在结肠炎症
时 ,由被激活的 NOS催化 L-精氨酸大量生成 NO也
对肠黏膜具有杀伤毒性和促炎作用 ,且有研究表明
UC病变黏膜中 NOS活性增高及 NO浓度的增加与
炎症程度呈平行关系 [ 8] 。本课题组的研究结果显
示:与模型组比较 , PRF630治疗组的 MDA、NO及
NOS的含量或活性明显降低 , T-AOC水平显著升
高 ,与 SASP作用相似 , 并接近正常对照组水平;
PRF210组可不同程度的降低 MDA、NO及 NOS的
含量或活性 ,升高 T-AOC水平;提示:PRF可能是通
过减少自由基生成 、抑制脂质过氧化反应和增强抗
氧化能力来恢复 UC机体氧化 /抗氧化的平衡 ,从而
减轻自由基对结肠黏膜的损伤 ,最终达到干预 UC
的目的。
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中医治未病第二批试点在全国 17省区市展开
　　杭州 12月 1日电(记者璩静 、段菁菁)记者 11月 29日获悉 ,国家中医药管理局于日前确定了第二批治
未病预防保健服务试点单位 ,试点单位达 45个 ,涉及 17省(区 、市)和国家中医药管理局直属医院 ,包括中
医医院 、综合医院 、专科医院 ,社区卫生服务机构及保健服务专门机构。
卫生部副部长 、国家中医药管理局局长王国强 11月 29日在治未病高峰论坛系列专题讲坛上表示 ,治未
病区域性试点也开始起步 ,其中上海 、广东为实施治未病健康工程试点省市。两省市根据 “工程 ”总体方案 ,
结合自身实际 ,分别制定了具体实施方案 ,探索完善以治未病理念为指导的融健康文化 、健康管理 、健康保险
为一体的新型健康保障服务模式。
王国强说 ,中医药的整体观 、辨证施治 、治未病等核心思想 ,顺应了当今健康观念的深刻变化和医学模式
的深刻变革 ,顺应二十一世纪医学发展的新趋势和世界医药市场的新需求 ,其精髓如能得以进一步诠释和光
大 ,将有望对新世纪的医学模式的转变以及医疗政策 、医药工业 、甚至整个经济领域的改革和创新带来深远
的影响 。 (信息由新华社提供)
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