全 文 ：有对抗环磷酰胺大鼠骨质疏松的作用 ,该作用可能
与双丹口服液能改善血液微循环 、清除氧自由基以
及丹参抑制血管异位钙 〔7〕等作用有关 。双丹口服
液工艺稳定 、质量可控 ,且其主要成分丹参素 〔8〕和
丹皮酚 〔9〕均可与化疗药物产生明显的增效减毒作
用 ,进一步说明双丹口服液具有被开发成为临床抗
老年性骨质疏松的潜能。
参 考 文 献
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(2007-04-19收稿)
水黄皮根总黄酮对乙酸诱导大鼠
溃疡性结肠炎的作用
李　靖1 ,朱　毅 2＊ ,董　志 1 ,陈国彪2
(1.重庆医科大学药理教研室 ,重庆 400016;2.海南省药品检验所 ,海南海口 570216)
　　摘要　目的:观察水黄皮根总黄酮(PRF)对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠的干预作用 , 并探讨其作用机制。方
法:采用乙酸灌肠法制备 UC大鼠模型 ,以柳氮磺胺吡啶(SASP)作对照 ,观察各组大鼠的临床症状及结肠黏膜的损
伤情况 , 同时检测结肠组织中 MPO、SOD、NO、iNOS的变化。结果:与模型组比较 , PRF组可明显改善大鼠的临床症
状 , 减轻结肠黏膜的损伤 ,降低结肠组织中 MPO、NO、iNOS的活性或水平 , 升高 SOD的活性。结论:PRF对乙酸灌
肠诱导的 UC大鼠有显著的干预作用 , 其机制可能与抑制炎症细胞浸润和抗氧自由基损伤以及抑制 NO生成有关。
关键词　水黄皮根总黄酮;溃疡性结肠炎;乙酸;MPO;SOD;NO;iNOS
中图分类号:R285.5　文献标识码:A　文章编号:1001-4454(2008)03-0424-04
基金项目:海南省自然科学基金资助课题(No.30530)作者简介:李靖 ,女 ,硕士研究生 ,研究方向为新药研究与开发;E-mail:lijing9478@yahoo.com.cn。＊通讯作者:朱毅 ,男 ,博士 ,研究员 ,硕士生导师 ,主要从事神经药理 、中药药理和新药开发研究;Tel:0898-66832901, E-mail:hnzhuyi@
126.com。
　　水黄皮 Pongamiapinnata(L.)Merr.(异名
Pongamiaglabra)系豆科水黄皮属半红树植物 ,别名
水流豆 ,主要分布在印度 、马来西亚及我国海南 、广
东 、广西等地 。全株均有药用价值 ,民间常用来治疗
疥癞 、白斑病 、麻风病 、风湿病 、腹部肿瘤 、感冒发热 、
腹泻 、糖尿病 、痔疮等 。而现代药理研究也发现水黄
皮具有抗病原微生物 、抗炎镇痛 、抗胃溃疡 、抗氧化
及调节血糖等作用〔1 ～ 5〕。本课题组前期研究表明水
黄皮根总黄酮(PRF)有抗炎镇痛 、抗腹泻及抗胃溃
疡作用 ,且其毒性低〔6、7〕。但至今未见其抗溃疡性
结肠炎(UC)的相关报道。本研究采用乙酸灌肠法
建立 UC大鼠模型 ,观察 PRF对其干预作用并探讨
相关机制 。
1　材料
1.1　试药制备　水黄皮根采自海南省文昌市 ,经
海南省药品检验所中药室陈国彪副主任药师鉴定为
豆科水黄皮属植物水黄皮的根 ,洗净晒干后粉碎备
用。称取水黄皮根干粉 1 kg,按质量体积比 1∶8加
70%乙醇浸泡 , 60℃水浴回流 3次 ,每次 1.5 h。合
并回流液 ,用 100目尼龙网过滤后将滤液减压蒸馏
·424· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 3期 2008年 3月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.03.048
回收乙醇后加水稀释 ,通过聚酰胺柱层析 ,乙醇洗脱
部位干燥备用 。以芦丁作对照测得 PRF含量 >
65%,临用时以 0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na,国
药集团有限公司 ,批号:F2005-718)配制成相应质量
浓度的混悬液备用。
柳氮磺胺吡啶(SASP, 250 mg/片 ,上海三维制
药有限公司生产 ,批号:200610C20),用时用刀片刮
去黄色包衣 ,呈现黄褐色 ,研碎后过 100目筛 ,临用
时以 0.5%CMC-Na配制成 30g/L的混悬液备用 。
1.2 　动物　健康雄性 SD大鼠 60只 , SPF级 ,体重
(240±20)g,由广东省实验动物中心提供 ,合格证
号:SCXK(粤)2003-0002。购入后饲养在海南省药
品检验所动物实验室 ,实验动物使用许可证号:
SYXK(琼)2006-0009。普通饮食喂养一周后开始实
验 ,室温(22±2)℃,湿度(55±15)%。
1.3 　主要试剂 　乙酸:广州化学试剂厂 , 批号:
20061202-2,分析纯;MPO、SOD、NO、iNOS以及考马
斯亮蓝蛋白测定试剂盒均由南京建成生物工程研究
所提供 ,批号:20070629。
1.4 　主要仪器 　FY130药物粉碎机 (60 ～ 200
目),天津市泰斯特仪器有限公司;R502旋转蒸发
仪 ,上海申胜生物技术有限公司;DZKW-C电子恒温
水浴 ,北京光明医疗仪器厂;TU-1800紫外可见分光
光度计 ,北京普析通用仪器有限责任公司;3K15低
温离心机 ,美国 Sigma公司;AE-200电子天平 ,日本
岛津;XW-80A漩涡混和器 ,上海医科大学仪器厂;
HM340石蜡切片机 ,德国莱卡公司;BX50显微镜 ,
日本奥林巴斯;HMIAS-2000医学病理分析系统 ,同
济医科大学千屏影像公司 。
2 　方法
2.1 　溃疡性结肠炎大鼠模型的建立　根据文献 〔8〕
的报道 ,取体重相近的健康 SD大鼠 60只 ,禁食不
禁水 36h后 ,腹腔注射 3%戊巴比妥钠溶液(45mg/
kg)麻醉。而后将直径 3 mm的硅胶管经肛门缓慢
插入约 5 ～ 7 cm处 ,用注射器一次性注入 6%的乙
酸溶液(50只)或生理盐水(10只)1.5 ml,准确计
时 15 s后 ,即用 4 ml生理盐水冲洗一次。待大鼠清
醒后常规饲养。
2.2 　实验分组及给药　模型建成后 ,将乙酸灌肠
的 50只大鼠随机分成 5组 ,每组 10只 ,即模型对照
组 、水黄皮根总黄酮高(PRF450)、中(PRF150)、低
(PRF50)剂量组及阳性对照药柳氮磺胺吡啶
(SASP)组 ,同时将生理盐水灌肠的 10只大鼠作正
常对照组。 PFR450、PFR150、PFR50组大鼠每天以
剂量分别为 450、150、 50 mg/kgPRF混悬液灌胃 ,
SASP组以 300 mg/kgSASP混悬液灌胃 ,模型对照
组和正常对照组每天灌服等量的 0.5%CMC-Na溶
液。各组大鼠均在造模后第 2 d开始灌胃给药 , 1
ml/100g,每天一次 ,连续 7 d。
2.3　观察及检测指标　每天观察大鼠的精神 、活
动 、饮食及大便(次数 、性状 、隐血或血便)等情况 ,
记录每只大鼠干预前后的体重变化。实验结束后以
颈椎脱臼法处死大鼠 ,剖腹取出回盲部至肛门段结
肠 ,并沿肠系膜缘剪开 ,冰生理盐水冲洗干净后 ,平
铺于滤纸上用放大镜观察结肠黏膜的大体损伤情
况 ,并参照文献 〔9〕标准行大体形态学评分 ,具体标
准如下。黏连:0分 ,无;1分 ,轻度(结肠与其他组
织剥离较易);2分 ,重度 。溃疡形成及炎症:0分 ,
无;1分 ,局部充血(无溃疡);2分 ,一处溃疡不伴充
血或肠壁增厚;3分 ,一处溃疡伴炎症;4分 ,多于两
处溃疡伴炎症;5分 ,多于两处溃疡伴炎症 >1cm;6
～ 8分 ,溃疡和炎症 >2 cm,病变范围每增加 1 cm,
计分加 1分。称重 ,计算肠重指数(结肠重量 /体重
×100%)。最后截取两段病变严重处结肠组织 ,一
段用 10%中性甲醛溶液固定 24 h,常规石蜡包埋 、
脱水 、切片 、HE染色 ,电镜下观察结肠组织的病理
损伤;另一段置于 -20℃冰箱保存 ,用于结肠组织
MPO、SOD、NO、iNOS的测定。以上各测定方法严格
按照试剂盒说明书进行 。
2.4　统计学处理 　数据以 X±SD表示 , 利用
SPSS10.0统计软件包进行单因素方差分析 ,组间差
异采用 Dunnet-t和 SNK-q检验。 P<0.05为差异
有显著性 。
3　结果
3.1　一般情况　正常组大鼠活泼好动 ,体重持续
增长 ,大便正常 。其他各组大鼠造模后均出现弓背
蜷卧 、懒动厌食 ,体重普遍下降 。模型组大鼠前 3 d
大便少或者无大便 ,随后大便次数增加 ,稀便或半稀
便 ,部分潜血阳性或肉眼粘液脓血便 ,多有肛周体毛
沾染痕迹 ,且多数稀便持续到实验结束 ,而体重在前
4d基本是持续下降 ,之后缓慢增长。与模型组比
较 , PRF450、PRF150组以及 SASP组则随着治疗的
延续 ,大鼠临床症状均有不同程度的改善 ,摄食量普
遍增加 ,体重恢复较快 ,大便成形也较早 。
3.3　结肠组织大体形态改变　正常组大鼠结肠粘
膜纹理清晰 ,无充血 、水肿。模型组大鼠结肠肠管明
显缩短增粗变硬 ,与周围组织粘连严重 ,粘连以下部
分肠管膨大 ,肠壁变薄 ,纹理紊乱 ,甚至消失 ,可见严
重的充血水肿与糜烂 ,甚至有坏死脱落 ,也有数量不
等的溃疡形成 ,尤其是严重处的溃疡底部可见黑黄
·425·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 3期 2008年 3月
色膜状污秽物覆盖 ,尤以肛门上 4 ～ 8 cm处最为多
见 ,肠重指数明显升高 。用药各组与模型组比较均
有不同程度的改善 ,黏膜的充血水肿和糜烂程度有
所减轻 ,溃疡数量减少 。尤其是 PRF450大鼠结肠
黏膜纹理清晰 ,溃疡面积缩小 ,底部颜色同正常组
织 ,提示溃疡已愈合。
3.3 　各组大鼠干预前后体重变化 、肠重指数以及
大体形态评分　由表 1可见 ,乙酸灌肠所致的 UC
模型大鼠 ,无论是干预前后体重变化还是肠重指数
或者大体形态评分上 ,与正常组比较均有显著差异
(P<0.01);而 PRF450、PRF150组与模型组比较 ,
均能不同程度的加快大鼠体重增长 、降低肠重指数
和大体形态评分(P<0.05或 P<0.01);且统计显
示 PRF450组与 SASP组作用相似(P>0.05)。
3.4 　结肠组织的病理改变　光镜下可见正常组大
鼠结肠膜上皮完整 ,腺体排列规则 ,层次清晰 ,无炎
细胞浸润及溃疡形成;模型组大鼠结肠黏膜上皮细
胞严重缺失 ,腺体排列紊乱 ,部分消失 ,粘膜层及粘
膜下层有大量炎性细胞(大量中性粒细胞 、少量嗜
酸性细胞)浸润 ,充血水肿明显 ,有溃疡形成。与模
型组相比 , PRF450、PRF150组及 SASP组大鼠结肠
黏膜充血水肿明显减轻 ,上皮只有小部分缺失 ,大部
分腺体结构完整 , 排列整齐 ,炎证细胞浸润明显减
少 ,且多局限在黏膜层 ,同时也可见少量的纤维组织
增生 。其中以 PRF450组和 SASP组更为典型 ,大部
分组织结构基本恢复正常 ,接近正常组 。
　表 1　　　　干预前后体重变化 、肠重指数及大
体形态评分比较( X±S, n=10)
组别 干预前后体重差值(g) 肠重指数(%) 大体形态评分
正常 79.600±14.144＊＊ 0.481±0.039＊＊ -
模型 13.900±31.164## 1.012±0.166## 7.300±2.214##
PRF450 59.500±22.619＊＊ 0.660±0.132＊＊ 2.700±1.767＊＊
PRF150 47.200±25.888＊ 0.780±0.170＊＊ 4.700±2.359＊
PRF50 29.500±30.920 0.906±0.231 5.900±2.025
SASP 61.300±25.535＊＊ 0.657±0.163＊＊ 2.600±1.647＊＊
　　注:与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与正常组比较 , ##P
<0.01。下表皆同
　　表 2 　大鼠结肠组织中 MPO、SOD、NO、iNOS的活性( X±S, n=10)
组别 MPO(U/g) SOD(U/mg· prot) NO(μmol/g· prot) iNOS(U/mg· prot)
正常 0.263±0.083＊＊ 214.295±11.714＊＊ 1.355±0.428＊＊ 0.206±0.074＊＊
模型 0.662±0.203## 154.738±12.641## 3.347±0.552## 0.405±0.113##
PRF450 0.316±0.119＊＊ 198.432±12.171＊＊ 1.974±0.499＊＊ 0.254±0.058＊＊
PRF150 0.357±0.121＊＊ 180.242±20.517＊＊ 2.707±0.539＊ 0.297±0.061＊
PRF50 0.505±0.167 168.838±15.507 2.824±0.657 0.347±0.089
SASP 0.283±0.162＊＊ 199.127±24.927＊＊ 1.852±0.871＊＊ 0.236±0.078＊＊
3.5 　结肠组织中 MPO、SOD、NO、iNOS活性　结果
见表 2。乙酸诱导的 UC大鼠结肠组织中 MPO、NO、
iNOS的活性均较正常对照组显著升高(P<0.01),
SOD活性却显著降低(P<0.01)。而经 PRF干预
后 , PRF450组大鼠结肠组织中 MPO、NO、iNOS的活
性明显降低 (P<0.01), SOD活性显著升高(P<
0.01),且与 SASP组相似(P<0.05);而 PRF150组
则是不同程度的降低 MPO、NO、iNOS的活性(P<
0.01, P<0.05), 但能显著升高 SOD活性 (P<
0.01)。
4 　讨论
UC是一种主要累及直肠 、结肠黏膜的慢性非特
异性炎症 ,临床以腹痛 、腹泻 、黏液血便 、里急后重为
主要表现 ,病程迁延不愈 。目前治疗常用的三类药
物(水杨酸类 、类固醇激素和免疫抑制剂)也只是缓
解症状 ,且存在停药后易复发和长期使用不良反应
多等缺点 ,因此研究开发治疗 UC的天然药物具有
重大意义 。
乙酸灌肠法制备 UC模型始于上世纪 70年代 ,
具有稳定可靠 、简便经济 、重现性好 、适应性强 、造模
周期短等优点 ,故至今仍为科研中常用的造模方法
之一 。本实验采用 6%乙酸溶液灌肠制备 UC大鼠
模型 ,结果无论是在临床症状还是病理改变方面均
与人类 UC相似 。
迄今 UC的发病机制尚不十分清楚 ,但大量研
究结果表明 ,中性粒细胞的浸润和自由基损伤与其
密切相关 。UC活动期结肠黏膜有大量中性粒细胞
浸润 ,而 MPO是存在于中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒中
的酶 ,其活性大小反映中性粒细胞浸润程度。中性
粒细胞呼吸爆发 ,产生大量氧自由基 ,诱发脂质过氧
化 ,引起蛋白质变性和交联 ,导致细胞膜结构受损。
SOD是体内最重要的超氧阴离子自由基的天然清
除剂 ,能有效地清除氧自由基 ,抑制脂质过氧化反
应 ,从而保护细胞免受损伤 ,通过其活力的检测可以
·426· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 3期 2008年 3月
间接了解机体清除氧自由基的能力。同时在结肠炎
症时 ,由被激活的 iNOS催化 L-精氨酸大量生成 NO
也对肠黏膜具有杀伤毒性和促炎作用 ,且有研究表
明 UC病变黏膜中 iNOS活性增高及 NO浓度的增
加与炎症程度呈平行关系〔10〕。本课题同时检测了
大鼠结肠组织中 MPO、SOD、NO、iNOS的活性 ,结果
显示 PRF能显著降低乙酸诱导的 UC大鼠结肠组织
的 MPO、NO、iNOS活性 ,明显阻遏 SOD活性的下
降 ,提示 PRF抗 UC作用可能是通过抑制中性粒细
胞浸润和抗自由基损伤实现的 。
结合给予 PRF后 UC模型大鼠临床症状的显著
改善和结肠黏膜损伤明显减轻的情况 ,说明 PRF对
UC有显著的干预作用 ,其机制可能与抑制中性粒细
胞浸润 、抗氧自由基损伤以及抑制 NO生成有关。
参 考 文 献
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(2007-07-30收稿)
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·427·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 3期 2008年 3月