全 文 :黄荆子乙酸乙酯提取物抑制人乳腺癌
MCF-7裸鼠移植瘤生长*
彭娟1 ,周应军 2 ,封萍1 ,刘丽华 1 ,童平珍1 ,曹建国 1, 3*
(1.南华大学医学院肿瘤研究所 ,湖南 衡阳 421001;
2.中南大学药学院天然药物化学研究室 , 湖南 长沙 410006;
3.南华大学药物药理研究所 , 湖南 衡阳 421001)
[摘要 ] 目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)对人乳腺癌(MCF-7)裸鼠移植瘤生长的影响。方法:MTT法检
测 6种黄荆子提取物对人乳腺癌 MCF-7细胞增殖的影响;获得目标抗肿瘤有效组分即 EVn-50, 人乳腺癌(MCF-7)裸鼠移
植瘤模型治疗实验 , 评价 EVn-50治疗人乳腺癌的有效性。结果:不同提取方式获得的 6种黄荆子提取物对人乳腺癌(MCF
-7)细胞的增殖活性具有不同程度的抑制作用 ,以 EVn-50作用最强 ,其 IC50值为 0.89μg/mL。 EVn-50对人乳腺癌(MCF
-7)裸鼠移植瘤生长具有抑制作用 , 呈剂量依赖性。结论:EVn-50具有抑制人乳腺癌 MCF-7细胞增殖和人乳腺癌(MCF-
7)裸鼠移植瘤生长作用。
[关键词 ] 乳腺肿瘤;黄荆子;黄荆子乙酸乙酯提取物;治疗作用
[中图分类号 ] R737.9, S553+.2 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1673-016x(2007)03-0016-04
Effectoftheextractfromsemenviticisnegundowithacetoacetateonthe
growthofhumanbreastcancerMCF-7 xenogeaftsinnudemice
PENGJuan1 , ZHOUYing-jun2 , FENGPing1 , LIULi-hua1 , TONGPing-zhen1 , CAOJian-guo1, 3
(1.InstituteofOncology, NanHuaUniversity, Hengyang421001, China;
2.ColegeofPharmacy, CentralSouthUniversity, Changsha, 410006, China;
3.InstituteofPharmacyandPharmacology, NanhuaUniversity, Hengyang, 421001, China)
[ Abstract] Objective Toexploretheefectoftheextractfromsemenviticisnegundowithacetoacetate
(Evn-50)onthegrowthofhumanbreastcancerxenograftsinnudemice.Methods Theproliferationofhuman
breastcancerMCF-7celswasdetectedbyMTTassay.Trailofhumanbreastcancerxenograftsinnudemousemedol
wasevaluatedtheeficacyofEvn-50onhumanbreastcancer.Results Sixnegundochastetreefruitsextractedby
diferentwayshaddiferentdegreesofinhibitingefectsonproliferationofhumanbreastcancerMCF-7 cels, and
EVn-50wasthestrongestinhibitoramongthese, anditsIC50 is0.89μg/m.EVn-50 inhibitedthegrowthofhuman
breastcancerxenograftsinnudemice, inadose-dependentmanner.Conclusion EVn-50 inhibitstheproliferation
ofhumanbreastcancerMCF-7 celsandthegrowthofhumanbreastcancerxenograftsinnudemice.
[ Keywords] humanbreastcancer;semenviticisnegundo;theextractfromsemenviticisnegundowithace-
toacetate;therapeuticaction
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湖南师范大学学报(医学版)
JHunanNormalUniv(MedSci) 2007, 4(3)
* 收稿日期:2007-08-28
作者简介:彭娟(1980—),女 ,湖南张家界人 ,在职硕士研究生 ,助理实验师 ,主要从事肿瘤药理研究。Tel:86-734-8281542
*通讯作者:曹建国(1956-),男 ,湖南益阳人,教授 ,博士 ,硕士研究生导师 ,主要从事抗肿瘤药物筛选及分子机制研究。 E-mail:cao-
jianguo2005@yahoo.com.cn
黄荆(VitexnegundoL.)为被子植物马鞭草科
的牡荆属植物 ,黄荆子(SemenViticisnegundo)为黄
荆的果实。黄荆子的化学成分研究主要集中在黄酮
类化合物 、二萜类化合物和木脂素类化合物 。Diaz
等报道从黄荆子中得到的黄酮类化合物如紫花牡荆
素对多种肿瘤细胞有细胞毒作用[ 1] 。这些研究成果
提示:黄荆子中存在抗肿瘤有效部位或活性成分 。
本文测定 6种黄荆子提取物对人乳腺癌 MCF-7细
胞增殖的影响 ,筛选获得其目标组分即黄荆子乙酸
乙酯提取物 (EVn-50),观察 EVn-50对人乳腺癌
(MCF-7)裸鼠移植瘤生长的影响 ,试图为黄荆子的
抗肿瘤有效部位或活性药物分子作为人乳腺癌治疗
创新药物的开发研究提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞与细胞培养 人乳腺癌(MCF-7)细胞
系细胞购于中国典型培养物保藏中心(中国武汉
市),用含 10%小牛血清(FCS)的 RPMI1640培养
基培养 , 2 ~ 3天传代 1次 ,取对数生长期细胞用于
实验。
1.1.2 受试物与药品
表 1 6种黄荆子提取物的理化特性*
代号 部位名称 性状 数量
EVn-10 水提部位 淡黄色粉末 200mg
EVn-20 40%乙醇部位 棕黄色粉末 200mg
EVn-30 60%乙醇部位 棕黄色粉末 200mg
EVn-40 95%乙醇部位 棕褐色粉末 200mg
EVn-50 乙酸乙酯部位 黄色粉末 200mg
EVn-60 甲醇部位 褐色粉末 200mg
*:由中南大学药学院提供 , 10mL棕色试剂瓶密封 , 置
于 4℃冰箱中保存。
他莫昔芬片(TAM):为扬子江药业集团有限公
司生产 ,批号 05110301, 规格为 10mg/片。紫杉醇
注射液(Tax):由北京四环医药科技股份有限公司
生产 ,批号为 0604131 ,规格 30mg/5mL/支。
1.1.3 动物 突变系 SPF级 Balb/c-nu雌性小鼠
24只 , 6 ~ 7周龄 ,体重 18 ~ 21g。提供单位:中国药
品生物制品检定所;合格证号码:京质字 0052997;
许可证编号:SCXK(京)2005-0004。
1.2 方法
1.2.1 MTT比色法 MCF-7细胞 6.0×104个 /mL
接种于 96孔细胞培养板 ,每孔 100μL, 分别加入各
黄荆子提取物和 Tax10μL/孔(终浓度分别为 0.1,
0.3, 1.0, 3.0, 10.0μg/mL)。培养 48小时后 ,加入
MTT液(5mg/mL)10μl/孔 ,继续培养 4小时 ,加入
100μl/孔 DMSO,用 570nm波长测定吸光度(A值)。
按 IR(%)=(1-药物处理组 A均值 /溶媒对照组 A
均值)×100%计算细胞增殖抑制率 。 IC50用 Cal-
cusyn程序计算 。以上实验重复 2次 。
1.2.2 人乳腺癌(MCF-7)裸鼠移植瘤模型治疗实
验 突变系 Balb/c-nu雌性小鼠 24只 ,背部皮下接
种 MCF-7细胞 2 ×106cels/只 , 待移植瘤体积达
100mm3以上时 ,按瘤体积和体重均衡原则 ,分为 6
组 ,每组 4只。 A组 , 生理盐水 (NS, 0.1mL/10g,
i.p)模型对照组;B组 ,他莫昔芬 (TAM, 10mg/kg,
i.g)对照组;C组 ,紫杉醇(TAX10mg/kg, i.p)对照
组;D组 ,低剂量(EVn-50, 5mg/kg, i.p)实验组;E
组 ,中剂量(EVn-50, 10mg/kg, i.p)实验组;F组 ,高
剂量(EVn-50, 20mg/kg, i.p)实验组;以上各组隔日
给药 1次 ,共计 7次 ,给药期间每 4日用游标卡尺测
量移植瘤最长径和最短径 ,按标准公式计算瘤体积:
V=L×W2 ×0.52。末次给药 48小时后测定移植瘤
体积 ,脱颈臼处死裸小鼠 ,切除移植瘤 ,用皿式电子
分析天平称量瘤重。肿瘤生长抑制率(%)=(1-
实验组瘤体积均值 /对照组瘤体积均值)×100%;
瘤重抑制率(%)=(1-实验组瘤重均值 /对照组瘤
重均值)×100%。
1.3 统计学处理
各组瘤体积和瘤重均用 x±s表示 ,采用 SPSS
11.0软件 OneWayANOVA方式行方差分析 ,两两
比较采用 Studentst检验 , P<0.05为统计学意义显
著标准。
2 结果
2.1 6种黄荆子提取物对人乳腺癌 MCF-7细胞增
殖的影响
MTT法检测结果表明:6种黄荆子提取物对人
乳腺癌 MCF-7细胞增殖具有抑制作用 ,呈浓度依赖
性(表 2)。
17黄荆子乙酸乙酯提取物抑制人乳腺癌 MCF-7裸鼠移植瘤生长 彭娟等
表 2 6种黄荆子提取物对 MCF-7细胞增殖的影响(n=4)
药物 浓度(μg/mL) A570 IR(%) IC50(μg/mL)
Medium 0 1.974±0.016 0
DMSO 0.02% 1.948±0.014 1.32
Tax 0.1 0.586±0.067 70.31
0.3 0.337±0.022 82.93
1.0 0.280±0.022 85.82
3.0 0.207±0.010 89.51
10.0 0.137±0.014 93.06 0.81
EVn-10 0.1 1.875±0.013 5.02
0.3 1.756±0.024 11.04
1.0 1.696±0.007 14.08
3.0 1.630±0.005 17.43
10.0 1.508±0.014 23.61 224.06
EVn-20 0.1 1.910±0.012 3.24
0.3 1.831±0.003 7.24
1.0 1.652±0.017 16.31
3.0 1.549±0.020 21.53
10.0 1.377±0.017 30.24 32.67
EVn-30 0.1 1.923±0.014 2.58
0.3 1.859±0.007 5.83
1.0 1.749±0.008 11.40
3.0 1.560±0.025 20.97
10.0 1.440±0.019 27.05 39.34
EVn-40 0.1 1.882±0.016 4.66
0.3 1.775±0.019 10.08
1.0 1.667±0.016 15.55
3.0 1.545±0.017 21.73
10.0 1.356±0.008 31.31 45.90
EVn-50 0.1 1.664±0.020 15.70
0.3 1.306±0.065 33.84
1.0 0.832±0.054 57.85
3.0 0.580±0.069 70.62
10.0 0.359±0.011 81.81 0.89
EVn-60 0.1 1.850±0.025 6.28
0.3 1.738±0.035 11.96
1.0 1.616±0.035 18.14
3.0 1.450±0.057 26.55
10.0 1.311±0.081 33.59 36.96
18 湖南师范大学学报(医学版), 2007, 4(3)
2.2 EVn-50对人乳腺癌裸鼠移植瘤体积的影响
EVn-50(5mg/kg, 10mg/kg, 20mg/kg, )对人乳
腺癌 MCF-7裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用(与对
照组比较 P<0.01),呈浓度和时间依赖性(图 1)。
图 1 EVn-50对人乳腺癌裸鼠移植瘤生长曲线的影响
*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001, vscontrol
(NS), n=4
2.3 EVn-50对人乳腺癌裸鼠移植瘤瘤重的影响
表 3示:EVn-50处理 16天 ,低 、中 、高剂量实验
组的皮下移植瘤重量显著低于生理盐水模型对照
组 ,其瘤重抑制率分别为 54%, 55%和 63%(P<
0.001);化疗药 TAX对照组瘤重生长抑制率是
66%(P<0.001), TAM对照组为 57%(P<0.01)。
表 3 EVn-50对人乳腺癌 MCF-7裸鼠
移植瘤瘤重的影响( x±s, n=4)
组号 药物 剂量(mg/kg)
瘤重
(mg)
瘤重抑制率
(%)
A NS 0 145±20 0
B TAM 10 62±9** 57
C TAX 10 50±2*** 66
D EVn-50 5 66±5*** 54
E EVn-50 10 65±29*** 55
F EVn-50 20 54±28*** 63
F=9.487, P=0.000, **P<0.01, ***P<0.001
vsControl(NS)
3 讨论
黄荆(VitexnegundoL.)为被子植物马鞭草科
的牡荆属植物 ,分布于我国 20余省市 ,黄荆果实 、
叶 、枝及根入药 ,其味苦 ,辛 ,温。具有清热解表 、利
湿解毒 、止咳平喘及缓解支气管痉挛的作用 [ 1] 。黄
荆子(SemenViticisnegundo)是黄荆的果实。黄荆
子的化学成分研究主要集中在黄酮类化合物 、二萜
类化合物和木脂素类化合物。 Diaz等报道从黄荆子
中得到的黄酮类化合物如紫花牡荆素对多种肿瘤细
胞有细胞毒作用 [ 2] 。 Kobayakawa等报道紫花牡荆
素对人口腔鳞状细胞癌 KB细胞的生长具有显著的
抑制作用 ,其 IC50值为 0.23 μM,紫花牡荆素阻滞
KB细胞周期于 G2-M期 [ 3] 。
乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一 ,
化学药物治疗在以手术为主的综合治疗中占有重要
地位 。本文旨在系统筛选黄荆子抗人乳腺癌有效部
位和评价其人乳腺癌治疗的有效性 。
本文实验结果表明 ,不同提取方式获得的 6种
黄荆子提取物对人乳腺癌(MCF-7)细胞的增殖活性
具有不同程度的抑制作用 ,以黄荆子乙酸乙酯提取
物(EVn-50)作用最强 ,其 IC50值为 0.89μg/mL,其
作用效价强度接近常规化疗药紫杉醇 (IC50值为
0.81μg/mL)。
为进一步评价 EVn-50治疗人乳腺癌的有效
性 ,本文采用人乳腺癌 MCF-7裸鼠移植瘤模型治疗
实验证实 EVn-50具有显著抑制人乳腺癌裸鼠移植
瘤生长作用。 EVn-50(20mg/kg)实验组的瘤重抑瘤
率达 63%。
总之 ,本文综合现代天然植物化学分离技术和
生物活性导向技术 ,筛选获得 1种黄荆子抗人乳腺
癌的有效部位即黄荆子乙酸乙酯提取物;本文的实
验研究证实黄荆子乙酸乙酯提取物是一种极具潜力
的人乳腺癌治疗候选药物。
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19黄荆子乙酸乙酯提取物抑制人乳腺癌 MCF-7裸鼠移植瘤生长 彭娟等