全 文 ：中国药业 China Pharmaceuticals·54·
2010年第 19卷第 22期
岗梅根中总皂苷的提取工艺研究
鲁湘鄂
(广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006)
摘要:目的 优选岗梅根中总皂苷的最佳提取工艺条件。方法 采用正交设计 L9 (34 )方法 ，以齐墩果酸为对照品，通过比色法测定总皂苷的
含量，考察乙醇用量、乙醇体积分数和提取时间等因素对提取率的影响。结果 水浴提取法的最佳工艺为 16倍量 40%的乙醇提取 1 h，在此
条件下，总皂苷的质量分数达到 1． 355%;超声提取法的最佳工艺为16 倍量 40%的乙醇提取 40 min，在此条件下，总皂苷的质量分数达到
1． 706%。超声法优于水浴法。结论 优选的最佳提取工艺条件，为开发岗梅根的有效部位提供一个科学、合理的理论依据。
关键词:岗梅根;齐墩果酸;提取工艺
中图分类号:R284． 2;TQ461 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2010 )22 － 0054 － 02
Study on Extraction Condition of Total Saponins in Roughhaired Holly Root
Lu Xiang’e
( College of Traditional Chinese Materia Medica， Guangzhou University of TCM， Guangzhou， Guangdong， China 510006 )
Abstract:Objective To optimize the extraction condition for total saponins from Roughhaired Holly Root．Methods The orthogonal test L9 (34 )
was adopted with oleanolic acid as control and the content of total saponins detected by colorimetric method as index for investigating the
effects of ethanol amount，ethanol concentration and extraction time on the extraction rate． Results The optimal technology of water bath
extraction was extracting with 16 times amount of 40% ethanol for 1 h． Under this condition，the mass fraction of total saponins reached to
1． 355% ． The optimal technology of ultrasonic wave extraction was extracting with 16 times amount of 40% ethanol for 40 min． Under this
condition，the mass fraction of total saponins reached to 1． 706% ． The ultrasonic extraction method was superior to the water － bath extrac-
tion． Conclusion Optimizing the extraction technology may provide the scientific and reasonable basis for developing the active parts from
Roughhaired Holly Root．
Key words:Roughhaired Holly Root; total saponins; extraction technology
岗梅根系冬青科植物梅叶冬青 Ilex asprella(Hook． et Arn．)
Champ． ex Benth． 的根，性苦寒，具有清热解毒、生津活血的功效，
能治疗感冒、喉痛和跌打损伤 [ 1 ]。岗梅根常作为药茶的原料，也常制
成多种单方或复方制剂，主要成分是皂苷、甾体和生物碱 [ 2 ]。关于岗
梅根中总皂苷的提取工艺研究，尚未见文献报道。为了充分开发和
利用岗梅根植物资源，笔者采用正交试验法对影响岗梅根总皂苷
提取效果的诸因素进行考察， 选择最佳提取条件， 并且采用比色
法以齐墩果酸为对照品对岗梅根中总皂苷的含量进行了测定，现
报道如下。
1 仪器与材料
UV /VIS 916 型紫外 －可见分光光度计 (澳大利亚，GBC 制
造 ); 电子天平(上海天平仪器厂 );FZ102 型微型植物试样粉碎机
(河北省黄骅市振兴机电仪器厂);HH － SZ 型系列恒温水浴槽(江
苏省金坛市环宇科学仪器厂);SB25 － 12D 型台式超声波清洗器
(宁波新芝生物科技股份有限公司 );AT201 型电子分析天平 (梅特
勒 －托利多仪器〈上海〉有限公司 )。齐墩果酸对照品(中国药品生
物制定检定所，批号为 110709 － 200505);95%乙醇(天津市广成化
学试剂有限公司);甲醇、香兰素、浓硫酸等均为分析纯。岗梅根(购
自肇庆市邦健药店)。
2 方法与结果
2．1 含量测定
2． 1． 1 溶液制备
精密称取齐墩果酸对照品 1． 6 mg，置 10 mL量瓶中，用甲醇溶
解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
2． 1． 2 测定波长选择 [ 3 ]
取一定量已知质量浓度的对照品溶液，置具塞试管中，水浴挥干
溶剂，依次加入新配制的 80 g / L香兰素乙醇溶液 0． 5 mL，体积分数
为 72 %的硫酸溶液 5 mL ，摇匀，于 90 ℃恒温水浴上加热 10 min，
立即取出并于冰水浴中冷却 15 min ，取出，冷却至室温。于 400 ～
700 nm 波长内扫描。结果在 530 nm 波长处有最大吸收，故选取
530 nm波长为测定波长。
2． 1． 3 方法学考察
标准曲线绘制:分别精密吸取0． 1，0． 3，0． 5，0． 7，0． 9 mL齐墩
果酸对照品溶液，按 2． 1． 2 项下方法操作，反应混合物供测试用，
以随行溶剂作空白对照，于 530 nm 波长处测定吸光度。结果在
2． 89 ～ 26． 01 μg /mL 范围内，齐墩果酸样品显色后的吸光度值
( D )与质量浓度 (ρ ) 线性关系良好，回归方程为 D = 0． 011 5 ρ －
0． 019 9，r = 0． 995 1 ( n = 5 )。
精密度试验:称取岗梅根粉末约0． 5 g，精密称定，按供试品溶液
制备方法制备，按 2． 1． 2项下相同方法进行显色，于 530 nm波长处
测定吸光度。结果的 RSD = 0． 45% ( n = 6)，表明仪器精密度较好。
重复性试验:称取岗梅根粉末约0． 5 g，精密称定，依法平行制
备 5份供试品溶液并测定。结果的 RSD = 0． 25% ( n = 5 )，表明方法
的重现性较好。
稳定性试验:取同一供试品溶液，在0，3，6，9，12 h时分别测定吸
光度。结果的 RSD = 1． 06% ( n = 5)，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
加样回收试验: 向已知含量的样品中加入不同量的齐墩果酸
对照品，进行含量测定。结果平均回收率为 97． 81%，RSD = 1． 39%
(n = 5)，表明方法准确可靠。
2．2 正交试验
2． 2． 1 因素水平表
通过预试验，选定水浴提取法、超声提取法各条件。以乙醇用
量 (因素 A)、乙醇体积分数 (因素 B )、提取时间 (因素 C)为考察因
素，按照 L9 (34 )安排 3因素 3水平正交试验。因素水平表见表 1。
2． 2． 2 供试品溶液制备
称取岗梅根药材粗粉约 0． 5 g，精密称定，共 18 份，按表 1设计
进行提取、过滤，水浴挥干溶剂，残渣用甲醇溶解，并定容至 50 mL量
瓶中，待测。
制剂技术
中国药业 China Pharmaceuticals ·55·
2010年第 19卷第 22期
硫酸软骨素双酶法生产新工艺
刘宪锋，王 贞，李稳强
(华懋双汇实业〈集团〉有限公司生物化学制药厂，河南 漯河 462000)
摘要:目的 介绍硫酸软骨素双酶法生产新工艺。方法 引入新型复合蛋白酶，采用双酶法新工艺生产硫酸软骨素。结果 与现行硫酸软骨素
生产工艺相比，能有效缩短生产周期、降低生产成本、提高产品质量。结论 双酶法生产新工艺值得生产企业重视和推广。
关键词:硫酸软骨素;双酶法;新工艺
中图分类号:T460． 6;R977． 6 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2010 )22 － 0055 － 02
列号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Ⅰi
Ⅱi
Ⅲ i
R
Ⅰi
Ⅱi
Ⅲ i
R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
2． 716
3． 444
3． 842
1． 126
3． 346
3． 519
4． 519
1． 173
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
3． 863
3． 327
2． 812
1． 051
4． 074
3． 714
3． 596
0． 478
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
3． 210
3． 135
3． 657
0． 522
3． 163
4． 175
4． 046
1． 012
空白
1
2
3
3
1
2
2
3
1
3． 192
3． 431
3． 379
0． 239
3． 906
3． 746
3． 732
0． 174
水浴提取法
0． 993
0． 869
0． 854
1． 273
1． 206
0． 965
1． 597
1． 252
0． 993
超声提取法
1． 035
1． 199
1． 112
1． 372
1． 267
0． 880
1． 667
1． 248
1． 604
因素 总皂苷含量 (% )
表 2 正交试验结果表
1
2
3
因素 A (倍)
8
12
16
因素 B(%)
40
60
80
因素 C(h)
1
2
3
因素 A(倍)
8
12
16
因素 B (%)
40
60
80
因素 C(min)
30
40
50
水浴提取法 超声提取法
水平
表 1 因素水平表
平方和(S) 均方和(S / f) F自由度
(f)
方差
来源
A
B
C
D
水浴
0． 217 4
0． 184 1
0． 053 1
0． 010 5
超声
0． 267 3
0． 041 3
0． 202 3
0． 006 2
2
2
2
2
水浴
0． 108 7
0． 092 1
0． 026 6
0． 005 3
超声
0． 133 7
0． 020 7
0． 101 1
0． 003 1
水浴
20． 64
17． 48
5． 04
1
超声
42． 91
6． 63
32． 47
1
表 3 方差分析结果表
注:F ( 2，2 ) 0． 01 = 99，F ( 2，2 ) 0． 05 = 19，F (2，2 ) 0． 1 = 9。
硫酸软骨素 (chondroitin sulfate，CHS)是一类动物性黏多糖，由动
物喉骨、鼻软骨、气管或骨腱、韧带等含硫酸软骨素的软骨组织制取
而成。在软骨中，硫酸软骨素与蛋白质(如胶原蛋白)结合在一起，以
蛋白多糖的形式存在 [1 ]。现行硫酸软骨素生产工艺大部分是先碱解，
然后用胰脏(胰酶)和碱性蛋白酶进行酶解，最终使硫酸软骨素从蛋
白多糖中释放出来。但碱提过程中会使提取液颜色加深，后期除蛋白
困难，严重影响产品色泽和质量，需要在后道工序进行氧化脱色处
理。笔者采用双酶法新工艺，通过引入新型复合蛋白酶，去掉碱提、氧
化步骤，显著缩短了生产周期，在保证产品质量基础上降低了物料消
耗，简化了操作，使得新工艺更稳定。现报道如下。
1 仪器与试药
702 光度滴定仪(瑞士万通公司);TU － 1901 型紫外分光光度
2． 2． 3 正交试验及结果
精密吸取供试品溶液 0． 5 mL，置具塞试管中，按 2． 1． 2 项下方
法进行显色，于 530 nm波长处测定吸光度 A，计算总皂苷的含量。
结果见表 2。
2． 2． 4 方差分析结果
将正交试验结果进行方差分析，结果见表 3。在水浴提取法中，
由表 2 中极差 R 值大小显示，各因素作用次序为 A ＞ B ＞ C，方差
分析结果表明因素 A 有显著性差异(P ＜ 0． 05)，因素 B 有较显著
性差异(P ＜ 0． 1)，因素 C无显著性差异(P ＞ 0． 1)，故最佳提取工艺
以 A3B1C1组合为佳，即 16倍量 40%的乙醇水浴法提取 1 h。在超声提
取法中，由表 2中极差 R值大小显示，各因素作用次序为 A ＞C ＞ B，
方差分析结果表明，因素 A和因素 C有显著性差异(P ＜0． 05)，因素
B无显著性差异(P ＞ 0． 1)，故最佳提取工艺以 A3B1C2 组合为佳，即
16倍量 40%的乙醇提取 40 min。
2．3 结果对比
将水浴提取法和超声提取法两种方法按优化条件进行比较试
验，分别对岗梅根总皂苷进行了提取和含量测定。结果水浴提取法总
皂苷含量为 1． 355%，超声提取法为 1． 706%。可见，超声提取所得的
总皂苷含量较高，而且操作简单，所用提取时间短，从节能、技术经济
和资源综合利用的角度来看，应用超声提取具有一定的优势。
3 讨论
超声提取法是在提取过程中进行超声波强化处理，最大的优
点是提取时间短、温度低、提取率高。正交试验优选确定的超声提
取最佳工艺水平是科学、可行的，有利于实际生产降低能源、节约
时间，故确定岗梅根中总皂苷的最佳提取方法为超声提取，其工艺
以 A3B1C2 组合为佳，即 16 倍量 40%的乙醇提取 40 min。
本研究结果表明，岗梅根中总皂苷的含量高，预示尚有大量的
研究工作有待进行，可为寻找高效、低毒化合物进而研究新药奠定
基础，同时也可为有机合成化学家开展分子多样性的苷类天然产
物的合成和创新药物研究提供借鉴。
作者简介:鲁湘鄂(1979 －)，女，湖北枝江人，在读博士研究
生，主要从事中药及其制剂的工艺和质量标准的研究，(电子信箱)
lxe0710@ sina． com。
参考文献:
[ 1 ] 广东省中药志编写委员会 ． 广东中药志 (第一卷 ) [M ] ． 广州:广东科学
技术出版社，1994:215．
[ 2 ] 李敏华，俞世杰，杜上监，等 ． 岗梅根化学成分的研究 [ J ] ． 中草药，
1997，28 (8 ):454．
[ 3 ] 杨燕军，邓永燕， 赵 南，等 ． 枫香槲寄生齐墩果酸提取工艺研究及含
量测定 [ J ] ． 广州中医药大学学报，2007，24 (1 ):62 － 65．
(收稿日期:2009 － 12 － 03;修回日期:2010 － 05 － 11 )
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制剂技术