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苹果皮果胶多糖的理化性质以及抑制人结肠癌细胞HT-29增殖活性的初步研究



全 文 :食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
26 2013 Vol. 39 No. 8 (Total 308)
苹果皮果胶多糖的理化性质以及抑制人结肠癌细胞
HT-29 增殖活性的初步研究*
张英,段双艳,刘洋,程洋,潘丽英,王仲孚
(西北大学生命科学学院 西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,
陕西省生物技术重点实验室,陕西 西安,710069)
摘 要 用水、质量分数 0. 5%草酸铵溶液、0. 05 mol /L HCl 溶液、1 mol /L KOH 溶液从苹果皮中提取得到 4 种
果胶多糖,分别是水溶性果胶多糖(WSP)、盐溶性果胶多糖(CSP)、酸溶性果胶多糖(ASP)和碱溶性果胶多糖
(BSP)。测定了它们的总糖、糖醛酸和蛋白含量以及相对分子质量、单糖组成及摩尔比和红外光谱;并初步研究
了 4 种苹果皮果胶多糖对人结肠腺癌细胞系 HT-29 细胞生长的抑制作用。结果显示:WSP、CSP、ASP 和 BSP 的
相对分子质量均大于 4. 0 × 105 Da;气相色谱测定 WSP、CSP、ASP 和 BSP 的单糖组成及摩尔比,4 种果胶多糖均
含有半乳糖,而 CSP所含的半乳糖醛酸含量最多,BSP不含半乳糖醛酸。WSP、CSP、ASP和 BSP都能抑制人结肠
腺癌细胞系 HT-29 细胞的增值,CSP的抑制活性最高(35. 65%),BSP的抑制活性最低(10. 30%),初步分析可能
与苹果皮果胶多糖中半乳糖及半乳糖醛酸残基的含量相关。
关键词 苹果皮果胶多糖,系列提取,理化性质,HT-29 细胞,抗肿瘤
第一作者:博士,讲师 (王仲孚教授为通讯作者,E-mail:wangzhf
@ nwu. edu. cn)。
* 国家自然科学基金项目(31071506)
收稿日期:2013 - 05 - 09,改回日期:2013 - 07 - 12
果胶多糖是种酸性杂多糖,是植物细胞壁的主要
组成成分,在生物体内对细胞和组织起着支撑、固定
细胞形态、软化和细胞黏合等作用;在食品工业中可
用作增稠剂、胶凝剂、乳化剂和稳定剂等[1 - 2];还具有
抗炎、抗肿瘤(可有效抑制结肠腺瘤及腺癌)等活
性[3]。
果胶多糖的结构主要可分为半乳糖醛酸聚糖
(homogalacturonans,HG)、鼠李半乳糖醛酸聚糖-Ⅰ
(rhamnogalacturonans,RG-Ⅰ)和鼠李半乳糖醛酸聚
糖-Ⅱ(Rhamnogalacturonans,RG-Ⅱ)三大类。这三大
类多糖又可以相互共价或非共价结合,形成更为复杂
的果胶多糖分子结构[4]。果胶多糖在不同的植物、
组织分布和发育阶段,其侧链中残基的种类、含量和
连接方式以及其取代基的修饰情况都有一定变化,体
现出果胶多糖在结构上的多样性。果胶多糖的结构
变化,包括糖残基的种类和含量、酯化程度等决定了
果胶多糖的生理活性和应用。因此,研究不同来源的
果胶多糖的化学结构及其生物化学性质很重要[5]。
目前,国内外提取果胶多糖的方法很多,常用的
几种是:水提取法[6]、酸提取法[7]、碱提取法[6]、草酸
铵提取法[8]、微波辅助提取法[9]、离子交换树脂法[10]
及酶法[11 - 12]等。但是利用传统的方法提取果胶多
糖,得到的果胶种类比较单一,很难全面评价其理化
性质和生物活性,限制了果胶多糖的应用。
已有文献报道利用系列提取的方法从同一原料
中提取性质和功能具有差异的果胶多糖。Prabasari
等[13]利用 NaOAc、CDTA、Na2CO3、1 mol /L KOH 和 4
mol /L KOH系列提取的方法分别从柑橘残渣中提取
出几种不同的果胶多糖;Rombouts[14]等利用水、草酸
盐、酸和碱系列提取的方法从甜菜浆中分离得到 4 种
不同的果胶多糖;Emaga 等[15]利用水、草酸铵和 HCl
分别从香蕉和车前草皮中系列提取得到 3 种果胶多
糖;Zhang[6]等利用同种方法从美人蕉残渣中提取出
3 种性质有所差异的果胶多糖。但是,这种系列提取
的方法至今还未应用于苹果皮果胶多糖的分离制备。
为了提高苹果皮中果胶多糖的利用率及探明苹果果
胶多糖结构与抗肿瘤功能之间的关系,本研究利用
水、质量分数 0. 5%草酸铵溶液、0. 05 mol /L HCl 溶
液、1 mol /L KOH溶液,从苹果皮中系列提取出 4 种
性质和功能具有差异的苹果皮果胶多糖,分别对其部
分物理化学性质和结构进行了较为系统地研究,并初
步研究了这些苹果皮果胶多糖对人结肠腺癌细胞
HT-29 增殖的抑制作用。
1 实验部分
1. 1 材料与试剂
DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2013.08.023
研究报告
2013年第 39卷第 8期(总第 308期) 27
陕西礼泉产红富士苹果;人结肠癌细胞株(HT-
29,购自中国科学院上海细胞所)。
鼠李糖(D-Rha)、岩藻糖(D-Fuc)、阿拉伯糖(D-
Ara)、木糖(D-Xyl)、甘露糖(D-Man)、葡萄糖(D-
Glc)和半乳糖(D-Gal)为上海国药集团产品;葡萄糖
醛酸(GlcA)、半乳糖醛酸(GalA)、鸡蛋白蛋白(albu-
min)、考马斯亮蓝、胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)为 Sigma
产品;葡聚糖分子量标准品为 Fluka产品;培养液 RP-
MI-1640 和胎牛血清(FBS)购自 Gibco BRL 公司;青
霉素钠、硫酸链霉素为华北制药厂产品;三氟乙酸
(TFA)、二甲基亚砜(DMSO)为天津百事化工有限公
司产品;PBS缓冲液为博士德生物工程公司产品;其
他试剂均为国产分析纯。
1. 2 仪器与设备
Shimadzu GC 2010 型气相色谱仪(GC) ,配置
FID检测器,色谱柱为 rtx-50(30 m × 0. 32 mm × 0. 25
μm) ;Water 2996-高效液相色谱仪(HPLC) ,配置
2414 示差折光检测器;Eppendorf centrifuge 5418 离心
机;Lambda 25 UV /VIS型(Perkin Elmer)紫外分光光
度计;HF 151UV型 CO2 培养箱;LL 3000 型(Heto)真
空冷冻干燥;SW-CJ 净化工作台;Mode 1680 型酶标
分析仪;Bruker EQUINOX 55 型傅立叶红外光谱仪;
T-214 型精密电子天平;CMD-20X型智能型电热恒温
鼓风干燥箱;RE 52-A型旋转蒸发仪。
1. 3 苹果皮果胶多糖的提取[5,14 -15]
新鲜的苹果皮用去离子水清洗 3 次,90 ℃水浴
处理 10 ~ 15 min,使果皮中的酶失去活性;过滤处理
过的苹果皮,用温水漂洗几次(3 次) ,以除去溶出的
糖类、色素及其他杂质[16],真空干燥箱中 70 ℃恒温
干燥,粉碎后制成苹果皮粉备用。
苹果皮粉 20 g,加入 600 mL 水,在 80 ℃下提取
2 次,各 1 h,提取过程中不时加入 1 mol /L NaOH 调
pH值至 5。将上述提取液离心,分离上清和残渣,残
渣备用;将离心所得上清液合并,后旋转蒸发仪低压
浓缩;Savage法除蛋白;后在 1 L 去离子水中透析 48
h,冷冻干燥得到水溶性果胶多糖(water-soluble pec-
tin,WSP)。在上述残渣中加入 600 mL 0. 5%的草酸
铵溶液(pH 5. 0) ,80 ℃提取 2 次,每次 1 h;离心,合
并上清液,低压浓缩,Savage法除蛋白,冷冻干燥得盐
溶性果胶多糖(chelate-soluble pectin,CSP) ;将草酸
铵处理后的残渣平均分为 2 份,分别加入 300 mL 0. 5
mol /L的 HCl和 300 mL 1 mol /L 的 KOH 溶液,各自
80 ℃提取 2 次(每次 1 h) ,离心,合并上清液,浓缩,
Savage法除蛋白,冷冻干燥得酸溶性果胶多糖(acid-
soluble pectin,ASP)和碱溶性果胶多糖(base-soluble
pectin,BSP)。分别计算得率。
1. 4 苹果皮果胶多糖总糖、糖醛酸及蛋白质含量的
测定
苹果皮果胶多糖的总糖、糖醛酸及蛋白质含量分
别采用苯酚-硫酸法[17]、咔唑硫酸法[18 - 19]及 Bradford
法[20]进行测定。分别以 Glc,GalA 及 Albumin 作为
标准。
1. 5 苹果皮果胶多糖的糖组成分析
糖组成分析采用 GC进行,衍生和检测条件参照
文献[16 - 17],略作改动。
具体衍生化实验操作为:称取干燥多糖样品 2
mg,置于反应瓶中,加入 2 mL 浓度为 2 mol /L 的
TFA,封口密闭,于 120℃条件下水解 2 h,旋转蒸发仪
减压抽干。再加入 2 mL甲醇,充分振荡,旋转蒸发仪
减压抽干,重复 3 次。后按照 Lehrfeld[21]的方法进行
衍生化反应,采用 GC 检测样品中的单糖组成。GC
色谱分析条件:毛细管色谱柱,型号为 rtx-50(30. 0 m
×0. 25 mm × 0. 25 μm) ;程序升温过程为:180 ℃保
留 2 min,以 6 ℃ /min 的速度提温至 210 ℃,然后以
0. 3 ℃ /min的速度提升至 215 ℃,最后再以 6 ℃ /min
提升至 240 ℃,保留 30 min;进样口温度为 270 ℃,检
测器温度是 280 ℃;分流比是 19 ∶ 1;载气为氮气 /空
气;柱流速为 0. 88 mL /min;压力为 110 kPa;进样量
为 2. 0 μL。
1. 6 苹果皮果胶多糖的相对分子质量测定
苹果皮果胶多糖的相对分子质量测定采用高效
凝胶渗透色谱法(HPGPC)进行。
HPLC(Waters 2695)配有 TSK-Gel G4000SW 色
谱柱(7. 5 mm × 300 mm)和 2414 示差折光检测器。
其原理是利用高效分子排阻色谱法测定果胶的分子
质量。HPGPC 分析条件:标准品及样品浓度均为 2
g /L,磷酸盐缓冲液(0. 02 mol /L,pH 6. 0)作为洗脱
液;进样量为 20 μL;流速为 0. 5 mL /min;柱箱温度和
检测器温度均设为 30 ℃。先将 Dextran 标准品按分
子质量由小到大(1 000、5 000、12 000、25 000、80 000
和 150 000 Da)的顺序,依次进样,测定保留时间;后
对 4 种苹果皮果胶多糖样品依次进样,测定保留时
间。以 Dextran标准品的分子量对数 Ig Mw对色谱柱
上的保留时间 tR 做标准曲线,根据样品的保留时间
和回归方程,计算样品的相对分子质量范围。
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
28 2013 Vol. 39 No. 8 (Total 308)
1. 7 苹果皮果胶多糖的红外光谱(IR)分析
苹果皮果胶多糖红外光谱(IR)分析采用傅立叶
红外光谱仪进行。称取干燥苹果皮果胶多糖 2 mg,
与 300 mg 干燥的溴化钾(KBr)粉末压成薄片,上机
测定,于 4 000 ~ 400 cm -1内进行扫描。
1. 8 苹果皮果胶多糖对HT-29细胞增殖的抑制作用
运用 MTT法测定苹果皮果胶多糖对肿瘤细胞的
增殖抑制率[23]。HT-29 细胞以 RPMI 1640 完全培养
液培养,内含 10%胎牛血清、100 U /mL 青霉素以及
100 μg /mL链霉素,置 37 ℃,5% CO2 恒温培养箱中
培养。收集处于对数生长期的 HT-29 细胞,以完全
培养液调整细胞悬液浓度为 1 × 104 个 /mL,每孔加
入 200 μL细胞悬液接种于 96 孔板,孵育 24 h。实验
设苹果皮果胶多糖处理组(5 个浓度梯度) ,空白对照
组和调零组。4 种苹果皮果胶多糖的浓度分别为:
5000、500、50、5 和 0. 5 μg /mL(溶解于完全培养液
中)。对照组只加完全培养液 200 μL,调零组不加细
胞只加入完全培养液 200 μL。将苹果皮果胶多糖以
不同的浓度加入 96 孔板中与细胞孵育,每孔加入
200 μL;每组设置 5 个复孔。加入多糖后,继续孵育
48 h;后每孔加入 10 μL MTT 溶液(5 mg /mL) ,继续
培养 4 h。吸除培养液,终止培养,每孔加入 150 μL
DMSO,置摇床上低速振荡 10 min,使结晶物充分溶
解。用酶联免疫检测仪测量各孔的 OD值,检测波长
为 490 nm,重复测定 3 次,计算平均值。按以下公式
计算细胞存活率和细胞增殖抑制率。
细胞存活率 /% =[( 实验组 OD 值 -调零组 OD
值) / ( 对照组 OD值 -调零组 OD值) ]× 100
细胞增值抑制率 = 1 -细胞存活率
2 结果与分析
2. 1 苹果皮果胶多糖的提取
粉碎干燥的苹果皮经过水、0. 5%草酸铵溶液、
0. 05 mol /L HCI 溶液、1. 00 mol /L KOH 溶液系列提
取,得到 4 种不同的苹果皮果胶多糖:分别为水溶性
果胶多糖 WSP、盐溶性果胶多糖 CSP、酸溶性果胶多
糖 ASP和碱溶性果胶多糖 BSP。制备流程如图 1 所
示。果胶多糖组分的得率分别为 3. 49% (WSP)、
5. 23%(CSP)、2. 77%(ASP)、2. 35%(BSP)。
2. 2 总糖、糖醛酸及蛋白含量的测定
对 WSP、CSP、ASP和 BSP 4 种果胶多糖的总糖、
糖醛酸及蛋白含量进行了测定,其结果如表 1 所示。
图 1 苹果皮果胶多糖系列提取流程图
Fig. 1 Scheme for serial extraction of pectic
polysaccharides from apple peel
表 1 WSP、CSP、ASP和 BSP的总糖、糖醛酸及蛋白含量分析
Table 1 Analysis of total sugar,uronic acid and protein
contents in WSP,CSP,ASP and BSP
果胶多糖 WSP CSP ASP BSP
总糖含量 /% 85. 00 96. 20 83. 48 80. 15
糖醛酸含量 /% 7. 30 24. 51 15. 72 0
蛋白含量 /% 2. 58 0. 41 1. 48 6. 45
如表 1 所示,0. 5%草酸铵提取的 CSP 总糖和糖
醛酸含量都高于 WSP、ASP 和 BSP,主要是由于其蛋
白含量最低;而由 KOH 提取得到的 BSP 不含糖醛
酸,但蛋白质含量高于 WSP、CSP 和 ASP,达到了
6. 45%,因而其糖含量要低于其他 3 种多糖。结果显
示,这 4 种多糖化学组成有一定差别,CSP 含有高含
量的糖醛酸,因而推测其主要是一种果胶类物质,
ASP结构类型与其类似,但糖醛酸含量偏低;而 WSP
则主要由中性糖组成,含有少量糖醛酸;BSP 则全部
由中性糖组成[24]。
2. 3 WSP、CSP、ASP 和 BSP 苹果皮果胶多糖的单
糖组成分析
采用 GC 同时检测中性糖和糖醛酸的方法[21],
对WSP、CSP、ASP和 BSP的单糖组成进行了测定,结
果如图 2 所示。
GC 结果表明,WSP 和 ASP 由 Rha、Ara、Xyl、
Glc、Gal和 GalA 6 种单糖所组成,糖组成摩尔比分别
为:1. 51 ∶ 58. 5 ∶ 2. 13 ∶ 19. 51 ∶ 11. 88 ∶ 6. 44 和 1. 11 ∶
23. 28∶ 1. 4∶ 16. 51∶ 14. 14∶ 13. 56;CSP 由 Ara、Glc、Gal
和 GalA 4 种单糖组成,糖组成摩尔比为:54. 61∶ 9. 81
研究报告
2013年第 39卷第 8期(总第 308期) 29
1 -鼠李糖(Rha) ;2 -岩藻糖(Fuc) ;3 -阿拉伯糖
(Ara) ;4 - 木糖(Xyl) ;5 - 甘露糖(Man) ;6 - 葡萄糖
(Glc) ;7 -半乳糖(Gal) ;8 -葡萄糖醛酸(GlcA) ;9 -半
乳糖醛酸(GalA)
图 2 GC法分析 4 种苹果皮果胶多糖 WSP、CSP、
ASP和 BSP的单糖组成
注:(A)9 种单糖标准的 GC图谱;(B)WSP的单糖
组成 GC图谱;(C)CSP 的单糖组成 GC 图谱; (D)ASP
的单糖组成 GC图谱;(E)BSP的单糖组成 GC图谱
Fig. 2 Monosaccharide composition analysis of four apple
pectins WSP,CSP,ASP and BSP by GC
∶ 13. 43∶ 22. 16,所含的 GalA 在 4 种苹果皮果胶多糖
中最多;BSP 的糖组成为 Rha、Ara、Xyl、Glc、Gal,
Rha、Ara、Xyl、Glc、Gal,摩尔比为 3. 15∶ 28. 33∶ 4. 51
∶ 49. 70∶ 14. 32,不含 GalA,详见表 2。
表 2 WSP,CSP,ASP和 BSP的单糖组成分析 %
Table 2 Monosaccharide compositions of WSP,
CSP,ASP and BSP %
WSP CSP ASP BSP
鼠李糖(Rha) 1. 51 0 1. 11 3. 15
阿拉伯糖(Ara) 58. 50 54. 61 23. 28 28. 33
木糖(Xyl) 2. 13 0 1. 40 4. 51
葡萄糖(Glc) 19. 51 9. 81 16. 51 49. 70
半乳糖(Gal) 11. 88 13. 43 14. 14 14. 32
半乳糖醛酸(GalA) 6. 44 22. 16 13. 56 0
2. 4 WSP、CSP、ASP和 BSP的分子量测定
线性回归方程为:lg Mw = 7. 356 91 - 0. 100
46tR,R
2 = 0. 999 5(n = 4)。4 种果胶多糖在 TSK-Gel
G4000SW 柱上的保留时间分别为:WSP(16. 362
min)、CSP(16. 556 min)、ASP(16. 278 min)、BSP
(16. 241 min) ,都超过了线性范围,被凝胶柱排阻,所
以 4 种果胶多糖的相对分子质量都大于 4. 0 × 105 u。
2. 5 WSP、CSP、ASP和 BSP的红外光谱分析
4 种苹果皮果胶多糖 WSP、CSP、ASP 和 BSP 的
红外光谱图如图 3 所示。
结果表明,4 种苹果皮果胶多糖都具有多糖的特
征吸收峰,所有样品都在 3 620 ~ 3 020 cm -1和 3 000
~ 2 800 cm -1处有吸收峰,分别为—OH 的伸缩振动
和糖类的—CH2 或—CH3 的 C—H 伸缩振动
[25],
1 620 ~ 1 550 cm -1、1 440 ~ 1 395 cm -1、1 400 ~ 1 300
cm -1处的吸收峰分别为 C  O 的非对称伸缩振动、
C—O伸缩振动、C O 对称伸缩振动,1 320 ~ 1 210
cm -1处的吸收峰为—OH 变角振动。几种苹果皮果
胶多糖在 1 151. 64 cm -1、1 025. 04 cm -1左右处都有
吸收峰,为吡喃型糖的特征吸收峰,是其糖苷键的
C—O—C的非对称振动峰[26 - 27]。ASP、CSP 和 WSP
3 种苹果皮果胶多糖在 1 750 ~ 1 700 cm -1处有特征
吸收峰,为糖醛酸的特征吸收峰,而 BSP 在此范围内
没有特征吸收峰[28],不含糖醛酸,该结果与单糖组成
的测定结果一致。
图 3 四种果胶果糖 WSP、CSP、ASP和 BSP的红外图谱
Fig. 3 FTIR spectra of four apple pectins WSP,
CSP,ASP and BSP
2. 6 WSP、CSP、ASP 和 BSP 对 HT-29 细胞增值的
抑制作用
MTT法检测苹果皮果胶多糖对 HT-29 细胞的增
值抑制作用,结果如表 3 所示。
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
30 2013 Vol. 39 No. 8 (Total 308)
表 3 WSP、CSP、ASP和 BSP对 HT-29 细胞
增殖的抑制作用
Table 3 Effects of apple pectin polysaccharidesWSP,
CSP,ASP and BSP on the growth of HT-29 cells
组别 剂量 /(μg·mL -1) 抑制率 /% 存活率 /%
空白 0 0 100
WSP 5 000 19. 93** 80. 07
500 15. 61** 84. 39
50 11. 96** 88. 04
5 9. 63* 90. 07
0. 5 2. 82 97. 18
CSP 5 000 35. 65** 64. 35
500 19. 63** 80. 37
50 9. 09* 90. 91
5 8. 55* 91. 45
0. 5 5. 32* 94. 68
ASP 5 000 27. 11** 72. 89
500 19. 20** 80. 80
50 15. 49** 84. 51
5 6. 60* 93. 40
0. 5 5. 79* 94. 21
BSP 5 000 10. 30** 89. 70
500 7. 61* 92. 39
50 6. 60* 83. 40
5 9. 72* 92. 28
0. 5 5. 48* 94. 52
注:* 表示与空白组比较 P < 0. 05,**表示与空白组相比较 P <
0. 01,组间比较采用 t检验,P < 0. 05 表示 2 组间具有显著性差异,P <
0. 01 表示 2 组间具有极显著性差异。
结果表明,WSP、CSP 和 ASP 在不同浓度下对
HT-29 细胞都有一定的抑制作用,并且抑瘤活性都呈
现出剂量依懒性。当浓度为 5 000 μg /mL时,CSP的
抑 制 率 为 35. 65%,ASP 为 27. 11%,WSP 为
19. 93%,而 BSP 的抑制率只有 10. 3%,与对照组相
比都具有显著差异(P < 0. 01)。已有文献报道柑橘
来源的果胶多糖(含有半乳糖苷) ,能够特异性的与
gal-3 相结合,通过调节 gal-3 的表达发挥抑瘤的作
用。WSP、CSP、ASP 和 BSP 对结肠癌细胞的增殖抑
制作用的不同,可能与其含有的半乳糖和半乳糖醛酸
的含量有关,CSP中包含的 Gal及 GalA残基最多,其
次分别是 ASP、WSP 和 BSP,该结果符合文献报道的
果胶多糖抑制肿瘤细胞生长的机制。
3 结论
通过水提、盐提、酸提、碱提等一系列提取方法从
苹果皮中连续提取得到 4 种不同的苹果皮果胶多糖
WSP、CSP、ASP和 BSP,对它们的部分物理化学性质
和抗肿瘤活性进行了较为系统的研究。结果发现,
CSP的总糖含量和糖醛酸含量都高于其他 3 种苹果
皮果胶多糖;WSP 和 ASP 由 Rha、Ara、Xyl、Glc、Gal
和 GalA 6 种单糖所组成;CSP 由 Ara、Glc、Gal 和 Ga-
lA 4 种单糖组成;CSP 中所含的 GalA 在几种苹果果
胶多糖中最多,占到了 22. 16%;BSP 只由 Rha、Ara、
Xyl、Glc 和 Gal 所组成,不含 GalA。WSP、CSP、ASP
和 BSP均具有抑制 HT-29 肿瘤细胞增值的活性,并
且呈浓度依赖性;在高浓度作用时(5 000 μg /mL) ,
CSP的抑制活性最高(35. 65%) ,而 BSP 的抑制活性
最低(10. 3%)。CSP 中包含的 Gal 及 GalA 残基最
多,依次分别是 ASP、WSP和 BSP,这符合文献报道的
果胶多糖抑制肿瘤细胞生长的机制,富含半乳糖苷的
果胶多糖可能直接影响 gal-3的表达,从而抑制肿瘤细
胞的生长。4种苹果皮果胶多糖对结肠癌细胞的增殖
抑制作用的不同,可能与其含有的半乳糖和半乳糖醛
酸的含量有关。本研究补充和丰富了苹果皮果胶多糖
的提取方法,提高了苹果皮的利用率,也为其他果皮或
果渣中果胶多糖的提取及再利用提供了一种可靠方
法。苹果皮果胶多糖的结构与其抑制结肠癌细胞 HT-
29增殖的相关性机制,还有待进一步研究。
参 考 文 献
[1] Shen H,He L,Price R L,et al. Dietary soluble fiber low-
ers plasma LDL cholesterol concentrations by altering lipo-
protein metabolism in female guinea pigs[J]. Journal of
Nutrition. 1998,128:1 434 - 1 441.
[2] Adiarov D,Pentieva K,Ivanova L,et al. Influence of di-
etary pectin on the hepatic levels of reduced glutathione
and on lipid peroxide formation in mice [J]. Journal of
Clinical Biochemistry and Nutrition,1995,18:127 - 132.
[3] Hayashi A,Gillen A C,Lott J R. Effects of daily oral ad-
ministration of quercetin chalcone and modified citrus pec-
tin on implanted colon - 25 tumor growth in Balb-c mice
[J]. Alternative Therapies in Health and Medicine,2000,
5:546 - 552.
[4] O’neill M,Albersheim P,Darvilli A. The pectic polysac-
charides of primary cell walls [M]. London:Academic
Press,1990:415 - 441.
[5] Zhang J,Wang Z W,Yu W J. Pectins from canna edulis
ker residue and their physicochemical characterization
[J]. Carbohydrate Polymers,2011,83:210 - 216.
[6] Oosterveld A,Beldman G,Schols H A,et al. Arabinose
and ferulic acid rich pectic polysaccharides extracted from
sugar beet pulp [J]. Carbohydrate Research, 1996
(288) :143 - 153.
[7] Gunter E A,Popeiko O V,Ovodov Y S. Isolation of poly-
saccharides from the callus culture of Lemna minor L[J].
Applied Biochemistry and Microbiology,2004 (40) :80 -
83.
[8] Sirisomboon P,Tanaka M,Fujita S,et al. A simplified
研究报告
2013年第 39卷第 8期(总第 308期) 31
method for the determination of total oxalate-soluble pectin
content in japanese pear[J]. Journal of Food Composition
and Analysis,2001,14:83 - 91.
[9] Bagherian H,Ashtiani F Z,Fouladitajar A,et al. Com-
parisons between conventional,microwave-and ultrasound-
assisted methods for extraction of pectin from grapefruit
[J]. Chemical Engineering and Processing,2011,50:
1237 - 1243.
[10] 张燕,毛桂枝,刘蕴哲 . 离子交换树脂法提取橘皮中
的果胶多糖[J]. 食品研究与开发,2003,8(24) :52
- 54.
[11] Ptichkina N M,Markian O A,Rumyantseva G N. Pectin
extraction from pumpkin with the aid of microbial enzymes
[J]. Food Hydrocolloids,2008,22:192 - 195.
[12] Rumyntseva G N. Microbial enzymes in pectin production
[J]. Vestnic Russian Academy of Agricultural Science,
1993,3:68 - 80.
[13] Prabasari I,Pettolino F,Liao M L. Pectic polysaccharides
from mature orange (Citrus sinensis) fruit albedo cell
walls:Sequential extraction and chemical characterization
[J]. Carbohydrate Polymers,2011,84:484 -494.
[14] Rombputs F M,Thibault J F. Chemistry and functions of
pectins[M]. Washington:American Chemical Society,
1986:49 - 60.
[15] Emaga T H,Robert C,Sebastien N R,et al. Dietary fi-
bre components and pectin chemical features of peels dur-
ing ripening in banana and plantain varieties[J]. Biore-
source Technology,2008,99:4346 - 4354.
[16] 徐溪,黄琳娟,王仲孚,等 . 苹果果胶多糖活性寡聚
半乳糖醛酸的分离制备及其 ESI-MS 分析研究[J].
化学学报,2010,15(68) :1 525 - 1 531.
[17] 张惟杰,糖复合物生化研究技术[M]. 杭州:浙江大
学出版社,1994:324 - 326.
[18] Yeoh S,Shi J,Langrish T A G. Comparisons between
different techniques for water-based extracted of pectin
from orange peels[J]. Desalination,2008,218:229 -
237.
[19] 梅新,木泰华,郭庆 . 甘薯果胶多糖的乳化特性研究
[J]. 中国农业科学,2010,43(13) :2 759 - 2 766.
[20] Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quan-
tification of protein using the principle of protein-dye bind-
ing[J]. Analytical Biochemistry,1976,72:48 -54.
[21] Lehrfeld J. Simultaneous gas-liquid chromatographic de-
termination of aldonic acids and Aldoses[J]. Analytical
Chemistry,1985,57:346 - 347.
[22] Cerna M,Barros A S,Nunes A,et al. Use of FT-IR
spectroscopy as a tool for the analysis of polysaccharide
food additives [J]. Carbohydrate Polymers,2003,51
(4) :383 - 389.
[23] Tomatsu M,Ohnishi-kameyama M,Shibamoto N. Ara-
lin,a new cytotoxic protein from Aralia elata,inducing
apoptosis in human cancer cells [J]. Cancer Letter,
2003,199:19 - 25.
[24] 孙元琳 . 当归多糖的制备、结构分析和抗辐射效应研
究[D]. 无锡:江南大学,2006.
[25] 杨翠娴,李清彪,凌雪萍,等 . 应用微波前处理 -热
水浸提技术提取龙眼多糖[J]. 化工学报,2007,58
(8) :2004 - 2009.
[26] Kumar A,Chauhan G S. Extraction and characterization
of pectin from apple pomace and its evaluation as lipase
(steapsin)inhibitor[J]. Carbohydrate Polymers,2010,
82:454 - 459.
[27] Zhao G H,Kan J Q,Li Z X et al. Structural features and
immunological activity of apolysaccharide from dioscorea
opposita thunb roots[J]. Carbohydrate Polymers,2005,
61:125 - 131.
[28] 宫雪,丁黎,司敏达,等 . 植物多糖组分中糖醛酸的
分析技术及其应用[J]. 2007,11(31) :496 - 501.
Study on physicochemical properties of apple peel polysaccharides
and its inhibitory activities against HT-29 cells in vitro
ZHANG Ying,DUAN Shuang-yan,LIU Yang,CHENG Yang,
PAN Li-ying,WANG Zhong-fu
(Key Laboratory of Resource Biology and Biotechnology in Western China,Ministry of Education,Shaanxi Provincial
Key Laboratory of Biotechnology,College of Life Science,Northwest University,Xi’an 710069,China)
ABSTRACT In the present study,four components of apple pectins:water-soluble pectin (WSP) ,chelate-soluble
pectin (CSP) ,acid-soluble pectin (ASP)and base-soluble pectin (BSP) ,were extracted from apple peel by water,
0. 5% ammonium oxalate,0. 05 mol /L HCl and 1 mol /L KOH,respectively. Their physicochemical properties,in-
cluding monosaccharide composition with corresponding molar ratio,sugar content,uronic acid content,protein con-
tent,relative molecular weight and FTIR spectra were investigated. Their in vitro inhibitory effects on the growth of
HT-29 cells were preliminarily investigated. As a result,it was found that all the four pectin polysaccharides,WSP,
CSP,ASP and BSP pssessed a relative molecular weight over 4. 0 × 105 Da. CSP contains the most amount of galactu-
ronic acids,while BSP had the most glucose without galacturonic acids. Meanwhile,all four pectin polysaccharides
showed inhibitory activities against the proliferation of HT-29 cells,of which CSP had the highest activity and BSP had
the lowest. The difference among four pectin polysaccharides in the inhibitory activity against HT-29 cells may due to
their different contents of galactose and galacturonic acid.
Key words pectin,serial extraction,physicochemical properties,HT-29 cell,antitumor