全 文 ：贾思振，王媛花，颜志明，等． 火焰南天竹叶片不定芽再生研究［J］． 江苏农业科学，2016，44(2):73 － 75．
doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2016． 02． 020
火焰南天竹叶片不定芽再生研究
贾思振1，2，王媛花1，2，颜志明1，2，刘 丹1
(1．江苏农林职业技术学院，江苏句容 212400;2．江苏现代园艺工程技术中心，江苏句容 212400)
摘要:以火焰南天竹组培苗叶片为外植体，研究不同植物生长调节剂、不同营养物质、暗培养时间、接种方式对其
不定芽再生的影响。结果表明:继代 30 ～ 35 d 的火焰南天竹组培苗叶片适用于叶片不定芽再生;外植体在添加
1． 5 mg /L TDZ、0． 2 mg /L 2，4 － D的 MS培养基上暗培养 14 d，再生率可达 80． 6%，平均每张叶片的再生芽数达到 3． 1
个，且玻璃化现象较少，为最佳组合;生根试验表明，再生芽在 1 /2MS + 0． 4 mg /L NAA的生根培养基上生根效果最好，
生根率可达 76． 3%。
关键词:火焰南天竹;叶片再生;不定芽;生根
中图分类号:S687． 904 + ． 3 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2016)02 － 0073 － 03
收稿日期:2015 － 07 － 24
基金项目:江苏农林职业技术学院科研项目(编号:110751038)。
作者简介:贾思振(1982—)，男，山东济南人，硕士，讲师，从事花卉栽
培生理方面的研究。E － mail:93327862@ qq． com。
火焰南天竹(Nandina domestica‘Fire power’)是一种新
兴的园艺品种，从国外引入我国栽培，现在大量用于园林景观
中。火焰南天竹耐寒常绿，叶片椭圆或卵圆形，与原种披针形
叶有明显区别，这是优于原种的重要性状［1］。火焰南天竹到
每年秋天遇到冷空气，叶色便由绿色转为鲜红色，叶片颜色能
够持续到第二年初春，因此在南方地区具有极佳的观赏效果。
在园林绿化中，火焰南天竹可与山茶同时培植于树坛中，也适
宜种植在植物群落下层，丰富景观层次。同时，火焰南天竹又
是一种具有良好发展前途的盆栽植物，并有较高的药用
价值［2］。
目前关于火焰南天竹组织培养快繁的研究比较多，但是
关于再生植株方面的报道很少。黄一青等虽通过诱导不定芽
获得再生植株，但继代培养时间需 45 d，芽的增殖系数仅 2． 5
倍［3］，同时也未见有关生根率的报道，这样在一定程度上限
制了火焰南天竹试管苗的大面积推广［1］。为了使火焰南天
竹进行大面积推广，增加繁殖速度，就需要对火焰南天竹进一
步研究。随着目前分子生物学的发展，基因改良是一个重要
方向，因此研究火焰南天竹的基因改良也是今后的重要研究
方向［4］。火焰南天竹抗寒性弱，是抑制其在北方推广的重要
因素，亟待利用转基因技术对其进行遗传改良，而稳定的基因
转化有赖于良好的再生体系［5］。目前有关火焰南天竹叶盘
再生不定芽的研究很少，可借鉴的方法也非常少，本研究建立
了火焰南天竹稳定高效的再生体系，再生率高达97． 6%，为火
焰南天竹的遗传改良奠定了基础。
1 材料与方法
1． 1 植物材料准备
以火焰南天竹生长健壮的枝条上饱满的顶芽为外植体，
用流水冲洗 3 h，氯化汞杀菌 8 min后用无菌水冲洗 6 ～ 8 次，
接取种到 MS +1． 5 mg /L 6 － BA + 0． 4 mg /L IBA 的分化培养
基上，暗培养 5 d以后光下培养。接种 15 d左右芽开始萌发，
40 d后分化成为 2 ～ 3 cm 高的植株。将分化的小苗接种于
MS +0． 5 mg /L 6 － BA + 0． 1 mg /L NAA 的继代培养基中，每
35 d继代 1 次。
培养基中附加 30 g /L蔗糖、6． 0 g /L琼脂，pH 值为 5． 8。
培养基在 121 ℃ 条件下灭菌 20 min。培养温度为(25 ±
2)℃，光照度为 25 μmol /(m2·s)，光周期为 16 h光照 + 8 h
暗培养。MS1 培养基用 6． 5 g /L 硫酸铵代替 MS 培养基中的
硝酸铵配成。
1． 2 火焰南天竹叶片不定芽分化
取 30 ～ 35 d 叶龄的组培苗上嫩绿、平展的叶片，剪去叶
尖、叶缘，剪成大小为 3 mm2 均匀的叶块，分别作以下处理:
(1)将剪好的叶块接种于附加不同浓度 TDZ、6 － BA、NAA、
2，4 － D、IAA的培养基上，培养 35 d以后，观察叶片的生长状
态，分析不同的植物生长调节剂，以及植物生长调节剂的浓度
比例对火焰南天竹叶片不定芽再生的影响;(2)将剪好的叶
块分别接种于附加 2． 5 mg /L TDZ、0． 2 mg /L 2，4 － D 的 MS
培养基和硫酸铵代替硝酸铵的 MS1 培养基上暗培养 14 d，研
究不同营养源对不定芽再生的影响;(3)将外植体分别接种
于附加 2． 5 mg /L TDZ、0． 2 mg /L 2，4 － D 的 MS培养基上，分
别进行不暗培养、暗培养 7 d、暗培养 14 d、暗培养 21 d 的处
理，分析暗培养时间长短对火焰南天竹叶片不定芽再生造成
的影响;(4)将叶片以近轴面贴近培养基(正放)、远轴面贴近
培养基(反放)2 种放置方式接种于附加 2． 5 mg /L TDZ、
0． 2 mg /L 2，4 － D的 MS再生培养基上，分析研究不同的叶片
放置方式对火焰南天竹不定芽再生的影响。
将外植体均接种于 250 mL 广口玻璃瓶中，每个处理 5
瓶，重复 3 次。
1． 3 火焰南天竹再生不定芽的新梢伸长
再生 45 d 以后，火焰南天竹的不定芽一般长至 1 cm 左
右，将这种不定芽接种到 MS + 0． 5 mg /L 6 － BA + 0． 1 mg /L
NAA的芽伸长培养基中，不定芽进行大约 30 d 的伸长生长，
长成株高约 3 cm的植株。
—37—江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 2 期
1． 4 火焰南天竹再生不定芽生根培养
经过伸长生长的植株，把新梢剪成 1． 0 ～ 1． 5 cm 长的茎
段进行生根培养，基本培养基选用 MS、1 /2MS，培养基中分别
添加不同浓度比例的 IBA、NAA，每个处理 5 瓶，每瓶 5 个植
株，培养 45 d后统计生根率。
1． 5 评价指标与数据调查
调查获得的数据用 SPSS软件进行统计分析，平均值进行
Duncan’s测验，得出显著性差异。基本数据按照以下公式
计算:
火焰南天竹不定芽再生率 =(再生不定芽叶片总数 /接
种叶片总数)× 100%;
火焰南天竹平均每外植体再生芽数 =叶片再生不定芽总
数 /再生不定芽叶片数;
火焰南天竹再生不定芽生根率 =(所有生根再生不定芽
数 /所有接种的再生不定芽数)× 100%。
2 结果与分析
2． 1 不同植物生长调节剂以及浓度配比对火焰南天竹不定
芽再生的影响
由表 1、图 1 可见，不同植物生长调节剂种类以及浓度配
比对火焰南天竹叶片不定芽分化有重要影响。结果表明，
TDZ比 6 － BA更适于不定芽再生;TDZ 与 2，4 － D 组合对火
焰南天竹不定芽的诱导效果要好于 TDZ 与 NAA、IAA 的组
合。用 2． 5 mg /L TDZ、0． 2 mg /L 2，4 － D的组合最适于火焰
南天竹叶片不定芽分化，再生率可达 97． 6%，平均每块叶片
外植体再生芽数也较多(图 1 － a、图 1 － c)。但是试验中发
现，这个激素的浓度会造成部分芽玻璃化，玻璃化芽不能够生
根，因此不能够用于后续试验。
表 1 植物生长调节剂对火焰南天竹叶片不定芽再生的影响
植物生长调节剂浓度(mg /L)
6 － BA TDZ 2，4 － D NAA IAA
不定芽再
生率(%)
叶片再生
芽数(个 /块)
2． 0 0． 2 68． 6 2． 2
2． 0 0． 2 22． 1 1． 6
2． 0 0． 2 30． 9 1． 4
4． 0 0． 2 23． 6 1． 2
4． 0 0． 2 11． 6 1． 0
4． 0 0． 2 5． 7 1． 0
6． 0 0． 2 9． 3 1． 0
6． 0 0． 2 7． 3 1． 0
6． 0 0． 2 5． 0 1． 0
1． 5 0． 2 80． 6 3． 1
1． 5 0． 2 42． 1 1． 9
1． 5 0． 2 56． 5 2． 2
2． 5 0． 2 97． 6 3． 4
2． 5 0． 2 71． 2 2． 5
2． 5 0． 2 52． 1 1． 4
4． 0 0． 2 17． 9 2． 5
4． 0 0． 2 11． 6 1． 8
4． 0 0． 2 64． 7 2． 0
当 TDZ浓度达到 1． 5 mg /L时，与 0． 2 mg /L 2，4 － D配合
使用不定芽再生率可以达到 80． 6%，而且在这个激素浓度的
培养基中玻璃化芽明显减少。因此在试验过程中，实际选择
这个培养基浓度来进行火焰南天竹的不定芽再生，虽然再生
率有一定程度的降低，但是再生芽不发生玻璃化现象，而且平
均每块叶片再生芽数也能达到 3． 1 个(图 1 － b、图 1 － d)。
TDZ浓度达到 4． 0 mg /L时，不定芽再生率显著降低，而且玻
璃化芽明显增多。试验结果表明，6 － BA 不适于火焰南天竹
再生，添加 6 － BA 的培养基中火焰南天竹叶片不定芽再生
率、平均每块叶片再生芽数都显著低于添加 TDZ的培养基。
2． 2 不同营养源对火焰南天竹不定芽再生的影响
用 6． 5 g /L的硫酸铵代替 MS培养基中的硝酸铵，不定芽
再生率显著降低，说明培养基中的营养物质对不定芽再生影
响极大(表 2)。有研究报道用硫酸铵代替硝酸铵继代火焰南
天竹，继代苗生长正常，而本研究的再生试验表明，此培养基
不适于火焰南天竹再生。硝酸铵是培养基中氮元素的主要来
源，用硫酸铵代替硝酸铵后，氮元素含量减少，再生率显著降
低，因此可见，氮元素在火焰南天竹不定芽再生中起重要
作用。
表 2 不同营养元素对火焰南天竹叶片不定芽再生的影响
培养基
不定芽再生率
(%)
平均每外植体再生芽数
(个)
MS 91． 5 3． 2
MS1 19． 6 1． 0
2． 3 暗培养时间对火焰南天竹不定芽再生的影响
暗培养时间的长短对火焰南天竹不定芽的再生有显著影
响。不暗培养时不定芽再生率为 0，暗培养时间短，不定芽再
生率低，暗培养时间过长，不定芽再生率也会降低，最适的不
定芽再生的暗培养时间为 14 d，不定芽再生率可达 82． 1%
(表 3)。
2． 4 叶片放置方式对火焰南天竹不定芽再生的影响
叶片以正放、反放2种不同接种方式下的不定芽再生率
—47— 江苏农业科学 2016 年第 44 卷第 2 期
表 3 暗培养时间对火焰南天竹叶片不定芽再生的影响
暗培养时间
(d)
不定芽再生率
(%)
平均每外植体再生芽数
(个)
0 0． 0d 0． 0c
7 16． 5c 1． 0b
14 82． 1a 3． 3a
21 76． 0b 3． 2a
注:同列数据后的不同小写字母表示差异显著(P ＜ 0． 05)。表
4、表 5 同。
没有显著差异，说明叶片不同的放置方式对火焰南天竹不定
芽的再生没有影响(表 4)。
2． 5 不同生长调节剂对火焰南天竹离体新梢生根的影响
离体新梢生根试验表明，生长调节剂能明显促进茎段不
表 4 叶片不同放置方式对火焰南天竹不定芽再生的影响
叶片放置方式
不定芽再生率
(%)
平均每外植体再生芽数
(个)
正放 85． 4a 3． 2a
反放 86． 8a 3． 3a
定根的形成。火焰南天竹在添加 0． 4 mg /L NAA的培养基中
生根最早，接种后 20 d基部开始形成不定根;在添加 IBA 的
培养基中根部形成大量愈伤，不易生根，说明 NAA 比 IBA 更
适合火焰南天竹诱导不定根;基本培养基对生根也有明显的
影响，表 5 结果表明，1 /2MS 培养基有利于火焰南天竹生根。
因此，适合火焰南天竹离体新梢生根的培养基为 1 /2MS +
0． 4 mg /L NAA。
表 5 不同生长调剂对火焰南天竹离体新梢生根的影响
植物生长调节剂组合
生根率(%) 平均根数(条)
MS培养基 1 /2MS培养基 MS培养基 1 /2MS培养基
0． 4 mg /L IBA 16． 7 ± 0． 4f 33． 7 ± 1． 2f 5． 0 ± 0． 3g 6． 0 ± 0． 1f
0． 6 mg /L IBA 11． 4 ± 0． 5g 13． 3 ± 1． 1g 3． 2 ± 0． 1h 5． 5 ± 0． 2f
0． 4 mg /L NAA 50． 0 ± 0． 6b 100． 0 ± 0． 0a 20． 5 ± 0． 4a 41． 3 ± 0． 1a
0． 6 mg /L NAA 33． 3 ± 0． 7d 86． 4 ± 0． 8b 12． 3 ± 0． 2d 26． 3 ± 0． 2b
0． 2 mg /L IBA + 0． 2 mg /L NAA 27． 3 ± 1． 3e 68． 7 ± 0． 5d 8． 0 ± 0． 2f 17． 4 ± 0． 2de
0． 2 mg /L IBA + 0． 4 mg /L NAA 66． 7 ± 0． 8a 56． 5 ± 0． 5e 13． 5 ± 0． 2c 16． 5 ± 0． 2e
0． 4 mg /L IBA + 0． 2 mg /L NAA 18． 2 ± 0． 7f 76． 3 ± 0． 8c 17． 2 ± 0． 3b 18． 3 ± 0． 6d
0． 4 mg /L INA + 0． 4 mg /L NAA 45． 5 ± 0． 6c 85． 6 ± 1． 4b 10． 5 ± 0． 6e 19． 5 ± 0． 9c
3 结论与讨论
目前关于火焰南天竹离体叶片再生的研究很少，由于火焰
南天竹的再生受基因型、环境条件的限制，因此其再生率很难
达到很高的水平［6］。在现有的报道中，大多数仍然集中于研究
火焰南天竹的快繁，很少有再生研究的相关内容。本研究表
明，影响火焰南天竹叶片再生的因素很多，包括植物生长调节
剂、暗培养时间、培养基的营养物质等，这些条件对火焰南天竹
离体器官的再生都起着决定性的作用，任何一个条件发生变
化，都可能造成火焰南天竹再生率的下降或者完全不再生。
在添加 1． 5 mg /L TDZ、0． 2 mg /L 2，4 － D 的 MS 培养基
上，火焰南天竹再生率可达到 80． 6%，每块叶片外植体再生
芽数达到 3． 1 个，而且玻璃化现象较少。植物再生过程中，不
但要选择合适的植物生长调节剂，而且浓度比例也非常重要，
一般植物再生中的细胞分裂素、生长素的浓度比例需要控制
在一个合理范围［7］。本研究也选取了多种细胞分裂素、生长
素，对其浓度比例进行了多次尝试，最终确定 TDZ 与 2，4 － D
的浓度比例为 12． 5 ∶ 1 时再生率最高。
暗培养是影响不定芽分化的一个重要因素。一些研究表
明暗培养可能促进不定芽的再生［7］。本试验结果表明，火焰
南天竹必须暗培养 14 d才能获得较高的再生率。
营养元素对火焰南天竹不定芽再生有显著影响，以硫酸
铵代替硝酸铵的培养基可以用来继代草莓、葡萄，在这个条件
下的组培苗均能正常生长［8］。而在本试验中，硫酸铵代替硝
酸铵对火焰南天竹的再生有极大影响，原因有待于进一步研
究。叶片接种方式对再生不定芽的影响因植物种类和品种的
不同而异，有些植物的再生不受叶片放置方式的影响，而有些
则影响较大［9］。本试验发现火焰南天竹叶片接种方式对叶
片再生无显著影响。
本试验获得的火焰南天竹再生率高达 97． 6%，在目前能
够查到的火焰南天竹再生的报道中最高。这说明，尽管火焰
南天竹叶片不定芽分化再生困难，但只要有合适的培养条件，
可以进一步提高叶片不定芽的再生率，克服火焰南天竹离体
再生困难的问题。
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