全 文 ：第４０卷／第１期／
２０１６年１月
河北师范大学学报／自然科学版／
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＨＥＢＥＩ　ＮＯＲＭＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ／Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ／
Ｖｏｌ．４０　Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１６
文章编号：１０００－５８５４（２０１６）０１－００６６－０７
收稿日期：２０１５－０９－０７；修回日期：２０１５－１０－０９
基金项目：国家自然科学基金（３１１６００７１）
作者简介：蔡　鹏（１９９１－），男，江西南昌人，学士，研究方向为植物细胞生物学．
通信作者：刘华英（１９７１－），女，副教授，研究方向为植物细胞生物学．Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｙｌｉｕｃｈｓｈ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
南天竹的离体培养研究
蔡　鹏１，　苏华桃２，　李丽炎２，　刘华英２，　姚惠文２
（１．广西师范大学 漓江学院，广西 桂林　５４１００４；２．广西师范大学 生命科学学院，广西 桂林　５４１００４）
摘 要：以南天竹茎段为材料，对不同消毒剂、消毒时间和内生菌抑制剂的消毒效果及诱导、增殖和生根培养
基进行研究．结果表明：不同消毒剂消毒效果最佳时间为１０ｍｉｎ；消毒效果排序１ｇ／Ｌ　ＨｇＣｌ２＞５０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２＞
２０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２ ＞８０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２；适宜的诱导培养基为 ＭＳ（ｍｕｒａｓｈｉｇｅ　ｓｋｏｏｇ培养基）＋１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１
ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ＋９０ｍｇ／Ｌ青霉素＋１　６００ｍｇ／Ｌ　Ｖｃ，诱导率达６６．６７％；ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．０５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ是最
适增殖配方，株高１．６７ｃｍ，增殖系数２．６３；最佳壮苗培养基为 ＭＳ＋０．０１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ，株高２．１７
ｃｍ，增殖系数６．２７；在微量元素减半的１／２ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ＋４ｇ／Ｌ活性碳＋３０ｇ／Ｌ蔗糖的
液体培养基上生根率可达７６．６７％．
关键词：南天竹；离体培养；无菌体系
中图分类号：Ｑ　８１３　　　文献标志码：Ａ　　　ｄｏｉ：１０．１３７６３／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｈｅｂｎｕ．ｎｓｅ．２０１６．０１．０１２
Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｎａｎｄｉｎａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｔｈｕｎｂ
ＣＡＩ　Ｐｅｎｇ１，　ＳＵ　Ｈｕａｔａｏ２，　ＬＩ　Ｌｉｙａｎ２，　ＬＩＵ　Ｈｕａｙｉｎｇ２，　ＹＡＯ　Ｈｕｉｗｅｎ２
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｊｉａｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｇｕｉｌｉｎ　５４１００４，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｇｕｉｌｉｎ　５４１００４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ，ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ａｓ　ｗｅｌ　ａｓ　ｖａｒｉｏｕｓ
ｍｅｄｉａ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｓｔｅｍ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｎａｎｄｉｎａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　ａｓ
ｍａｔｅｒｉａｌ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　１０ｍｉｎ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｆｏｒ　ａｌ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ，ｗｉｔｈ　ｄｅｃｌｉｎｉｎｇ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｅｆｆｅｃｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｒｄｅｒ　ｏｆ　１ｇ／Ｌ　ＨｇＣｌ２，５０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２，２０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２ａｎｄ　８０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ
ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ＋９０ｍｇ／Ｌ　ｐｅｎｉｃｉｌｉｎ＋１　６００ｍｇ／Ｌ　Ｖｃ，ｗｉｔｈ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｒｅａｃｈｉｎｇ　６６．６７％．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒｍｕｌａ　ｗａｓ　ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．０５
ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ，ｏｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔ　ｈｅｉｇｈｔ　ａｖｅｒａｇｅｄ　ａｔ　１．６７ｃｍ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｗａｓ　ａｓ　ｈｉｇｈ　ａｓ
２．６３．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｓｈｏｏｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ＭＳ＋０．０１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ，ｗｉｔｈ
ｍｅａｎ　ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　２．１７ｃｍ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ　６．２７．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ
７６．６７％ ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　１／２ＭＳ（ｍａｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔｓ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｂｙ
ｈａｌｆ）＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ＋４ｇ／Ｌ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃｈａｒｃｏａｌ＋３０ｇ／Ｌ　ｓｕｃｒｏｓｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｎａｎｄｉｎａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｔｈｕｎｂ；ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ａｓｅｐｓｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ
南天竹（Ｎａｎｄｉｎａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｔｈｕｎｂ．）为小檗科南天竹属丛生灌木，是观叶、观果的优良地被和色块植
物．南天竹不仅可以净化空气、涵养水源、防风固沙、保持水土，而且根、茎、叶、果都可以入药；种子含油率约
为１２０ｍｇ／ｇ，可以榨油；叶含鞣质，可以作为鞣料植物；也可作为贫困地区的材用树种［１－３］．因此，南天竹是集
观赏、生态、药用多种经济和社会价值于一体的植物资源．目前，南天竹主要通过播种、扦插和分株繁殖，但繁
殖周期长，繁殖率低，其组培繁殖的研究较少［４－５］．本文中，笔者对南天竹不定芽的诱导、增殖和生根条件进行
筛选，以建立其高效的离体再生体系，为南天竹大规模种苗生产和推广利用提供技术支持和参考依据．
１　材料与方法
１．１　材　料
选取生长健壮、无病虫害的红果南天竹当年生嫩枝．
１．２　方　法
１．２．１　外植体消毒
将材料用自来水洗净后在超净工作台上浸入７００ｍＬ／Ｌ酒精３０ｓ，然后分别置于ＨｇＣｌ２ 和ＮａＣｌＯ２ 溶液
中消毒５，１０，１５ｍｉｎ，无菌水冲洗５次，用无菌吸水纸吸干水分，将材料切成０．５～１．０ｃｍ带芽茎段，接入１．５
ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ的培养基中，培养３０ｄ后统计污染率、存活率、死亡率．污染率＝污染外植体
数／接种外植体数×１００％，存活率＝存活外植体数／接种外植体数×１００％，死亡率＝死亡外植体数／接种外
植体数×１００％．
１．２．２　南天竹不定芽的诱导
１）ＩＢＡ和６－ＢＡ不同配比对南天竹不定芽诱导的影响．将外植体接种到ＩＢＡ和６－ＢＡ不同配比的培养
基上诱导不定芽，培养３０ｄ后统计诱导率．诱导率＝长不定芽外植体数／接种外植体数×１００％．
２）内生菌抑制剂对南天竹不定芽诱导的影响．在含１．０ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ和０．１ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ的诱导培养基中
添加不同质量浓度的青霉素和Ｖｃ，培养３０ｄ后统计诱导率．
１．２．３　南天竹不定芽的增殖
将试管苗切成约０．５ｃｍ的带节茎段接种于不同质量浓度ＫＴ，ＮＡＡ与０．５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ组合的培养基、
添加青霉素和Ｖｃ或ＧＡ３的含０．５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．０５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ培养基中，培养３０ｄ后统计增殖系数和
株高．增殖系数＝增殖后的芽数／接种外植体数．
１．２．４　南天竹壮苗培养基的筛选
将试管苗切成约０．５ｃｍ的带节茎段接种于不同质量浓度６－ＢＡ和ＮＡＡ组合的培养基中，培养３０ｄ后
统计增殖系数和株高、长势．
１．２．５　南天竹的生根培养
将高约２ｃｍ的试管苗接种于含不同质量浓度ＮＡＡ和ＩＢＡ的１／２ＭＳ（（１）ＭＳ培养基的大量元素减半）
＋１５ｇ／Ｌ蔗糖的培养基中诱导生根，６０ｄ天后统计生根率、生根系数、根长．生根率＝生根株数／接种株数×
１００％，生根系数＝生根总数／接种株数．
采用１／２ＭＳ（（２）ＭＳ培养基的大量元素和微量元素减半）培养基和不同蔗糖含量、青霉素和Ｖｃ、液体培
养对试管苗进行生根培养，６０ｄ后统计生根率、生根系数、根长．
上述培养除特别说明外基本培养基都为 ＭＳ附加７ｇ／Ｌ琼脂，诱导培养添加６０ｇ／Ｌ蔗糖，增殖壮苗培
养添加３０ｇ／Ｌ蔗糖，生根培养添加４ｇ／Ｌ活性炭，ｐＨ　６．０～６．２．培养条件：光强１　５００～２　０００ｌｘ，光照时间
１２ｈ／ｄ，温度（２５±２）℃．每处理接种１０瓶，每瓶接种１个材料，设３次重复．
２　结果与分析
２．１　消毒剂与消毒时间对外植体消毒的影响
由表１，２可知，１ｇ／Ｌ　ＨｇＣｌ２ 和不同体积分数ＮａＣｌＯ２ 消毒时存活率都是消毒１０ｍｉｎ时最高，其次是消
毒５ｍｉｎ，最低是消毒１５ｍｉｎ，３个处理时间的存活率有明显差异．结果表明，消毒１５ｍｉｎ时，污染率都为０，
但死亡率也为各处理的最大值，尤其是８０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２ 处理的１００％死亡，显示消毒时间超过１０ｍｉｎ对外
植体伤害严重，死亡增加．由表２可知，消毒５～１０ｍｉｎ时，其存活率５０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２ 高于２０，８０ｍＬ／Ｌ
ＮａＣｌＯ２处理．８０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２ 消毒不同时间后，污染率都为０，但茎段存活率低，生长速度慢，芽黄绿色，说
明８０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２ 不适用于南天竹茎段消毒．综合存活率和生长状况，１ｇ／Ｌ　ＨｇＣｌ２ 和５０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２
消毒１０ｍｉｎ时污染率都为０，存活率都为１００％，但前者处理的生长好于后者．因此，南天竹茎段消毒宜选用
·７６·
１ｇ／Ｌ　ＨｇＣｌ２ 消毒１０ｍｉｎ．
表１　１ｇ／Ｌ　ＨｇＣｌ２ 消毒时间对外植体消毒的影响
消毒时间／ｍｉｎ 污染率／％ 存活率／％ 死亡率／％ 生长状况
０　 １００．００±０．００　 ３．３３±３．３３　 ９６．６７±３．３３ 芽较粗壮，为黄绿色
５　 ２３．３３±３．３３　 ７６．６７±３．３３　 ２２．３３±３．３３ 芽较粗壮，多为绿色
１０　 ０．００±０．００　 １００．００±０．００　 ０．００±０．００ 芽较粗壮，多为绿色
１５　 ０．００±０．００　 ２３．３３±３．３３　 ７６．６７±３．３３ 芽较粗壮，多为黄白色
表２　不同体积分数ＮａＣｌＯ２ 对外植体消毒的影响
φ（ＮａＣｌＯ２）／（ｍＬ·Ｌ
－１） 消毒时间／ｍｉｎ 污染率／％ 存活率／％ 死亡率／％ 生长状况
５　 ４３．３３±３．３３　 ５６．６７±３．３３　 ４３．３３±３．３３ 芽较粗壮，多为绿色
２０　 １０　 ２０．００±０．００　 ８０．００±０．００　 ２０．００±０．００ 芽较粗壮，多为绿色
１５　 ０．００±０．００　 ３６．６７±３．３３　 ６３．３３±３．３３ 芽较粗壮，多为黄绿色
５　 ２０．００±５．７７　 ７６．６７±３．３３　 １６．６７±３．３３ 芽较粗壮，多为绿色
５０　 １０　 ３．３３±３．３３　 ９６．６７±３．３３　 ３．３３±３．３３ 芽较粗壮，多为黄绿色
１５　 ０．００±０．００　 ２３．３３±３．３３　 ７６．６７±３．３３ 芽较粗壮，多为黄绿色
５　 ０．００±０．００　 ５６．６７±３．３３　 ４３．３３±３．３３ 芽较粗壮，多为黄绿色
８０　 １０　 ０．００±０．００　 ４３．３３±３．３３　 ５６．６７±３．３３ 芽较粗壮，多为黄绿色
１５　 ０．００±０．００　 ０．００±０．００　１００．００±０．００ —
２．２　南天竹不定芽的诱导
２．２．１　ＩＢＡ和６－ＢＡ对南天竹不定芽诱导的影响
采用不同质量浓度的ＩＢＡ和６－ＢＡ进行南天竹不定芽诱导实验，发现接种７ｄ左右茎段的腋芽开始萌
动并生长，３０ｄ后不定芽诱导的结果见表３．当６－ＢＡ质量浓度相同时，随ＩＢＡ质量浓度的升高，诱导率降
低，处理１的南天竹不定芽的诱导率最高，不定芽较粗壮，生长较快（见图１）；处理２的诱导率次之．
表３　激素对南天竹不定芽诱导的影响
处理 ρ（６－ＢＡ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） ρ（ＩＢＡ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 诱导率／％ 生长状况
１　 １．０　 ０．１　 ４３．３３±３．３３ 芽多为绿色，较粗壮
２　 １．０　 ０．２　 ２３．３３±３．３３ 芽多为绿色，较纤细
３　 １．０　 １．０　 １３．３３±３．３３ 芽多为绿色，较粗壮
４　 １．５　 ０．１　 １６．６７±３．３３ 芽粉红色，较粗壮
５　 １．５　 ０．２　 １６．６７±３．３３ 芽绿色，较纤细
６　 １．５　 １．０　 ６．６７±３．３３ 有愈伤组织，芽黄绿色
７　 ２．０　 ０．２　 １６．６７±３．３３ 芽多为绿色，较粗壮
８　 ２．０　 １．０　 １３．３３±３．３３ 芽绿色，较纤细
·８６·
２．２．２　内生菌抑制剂对南天竹不定芽诱导的影响
在诱导培养基上加入不同质量浓度的青霉素和Ｖｃ，诱导过程无污染，不定芽的诱导率都有不同程度的
增加，芽生长健壮（见表４），显示一定质量浓度的青霉素和 Ｖｃ促进不定芽的诱导．处理９～１１的诱导率相
近，处理１２的诱导率明显高于其他处理．
表４　不同质量浓度青霉素和Ｖｃ配比对南天竹不定芽诱导的影响
处理 ρ（青霉素）／（ｍｇ·Ｌ
－１） ρ（Ｖｃ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 诱导率／％
９　 ３０　 ７００　 ５３．３３±３．３３
１０　 ５０　 １　０００　 ５３．３３±３．３３
１１　 ７０　 １　３００　 ５０．００±０．００
１２　 ９０　 １　６００　 ６６．６７±３．３３
２．３　南天竹不定芽的增殖
２．３．１　不同质量浓度ＫＴ，ＮＡＡ与６－ＢＡ配比对南天竹不定芽增殖的影响
在含０．５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ的培养基上，添加不同质量浓度ＫＴ，ＮＡＡ增殖的不定芽较粗壮，叶片多为绿色，
较小，但株高和增殖系数表现不同（见表５）．当ＮＡＡ为０．０５ｍｇ／Ｌ时，不定芽平均增殖２．６３个，３０ｄ时株高
１．６７ｃｍ（见图１），为各处理中最高，同时添加０．５ｍｇ／Ｌ的ＫＴ，增殖系数明显增加，为各处理中最大值，而株
高降低．当 ＮＡＡ 为０．５ｍｇ／Ｌ时，添加０．５ｍｇ／Ｌ　ＫＴ，增殖系数大幅减少，为各处理中最小值，添加
２．０ｍｇ／Ｌ　ＫＴ，增殖系数也明显降低，植株生长最慢．可见，较高质量浓度（０．５ｍｇ／Ｌ）ＮＡＡ不利于不定芽的
增殖．仅添加２．０ｍｇ／Ｌ　ＫＴ时，增殖系数和株高比仅添加０．０５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ时略低．综合生长和增殖情况，
０．５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ与０．０５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ的激素配比适合不定芽的增殖．
表５　不同激素配比对南天竹不定芽增殖的影响
处理 ρ（ＫＴ＋ＮＡＡ＋６－ＢＡ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 株高／ｃｍ 增殖系数
１３　 ０．０＋０．０５＋０．５　 １．６７±０．０１　 ２．６３±０．０９
１４　 ０．５＋０．０５＋０．５　 １．１５±０．０７　 ３．８３±０．１２
１５　 ０．５＋０．５＋０．５　 １．１３±０．０６　 １．６７±０．１２
１６　 ２．０＋０．５＋０．５　 ０．８５±０．０４　 １．７７±０．０９
１７　 ２．０＋０．０＋０．５　 １．４８±０．０２　 ２．０３±０．１５
２．３．２　内生菌抑制剂与ＧＡ３ 对南天竹不定芽增殖的影响
如表６所示，在含０．５ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．０５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ的增殖培养基上，添加９０ｍｇ／Ｌ青霉素＋１　６００
ｍｇ／Ｌ　Ｖｃ，株高０．９５ｃｍ，明显降低，增殖系数为２．１３，表明其芽的伸长和增殖均受到抑制；添加０．２ｍｇ／Ｌ
ＧＡ３ 时，株高明显受到抑制，但增殖系数却大幅增加，是其１．４８倍．
表６　内生菌抑制剂与ＧＡ３ 对南天竹不定芽增殖的影响
处理 ρ（青霉素＋Ｖｃ＋ＧＡ３）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 株高／ｃｍ 增殖系数
１８　 ９０＋１　６００＋０．０　 ０．９５±０．０２　 ２．１３±０．２０
１９　 ０．０＋０．０＋０．２　 ０．６６±０．０７　 ３．９０±１．０４
·９６·
１．芽的诱导；２．芽的增殖；３．壮苗；４．生根．
图１　南天竹的离体培养
２．４　壮苗培养基的筛选
由表７可知，随激素质量浓度的降低，株高和增殖系数增加，芽由黄绿色到绿色．处理２２较处理２０，２１
和增殖培养基的株高和增殖系数都有明显增加，尤其是增殖系数，其不定芽粗壮，叶绿色，展开，叶大（见图
１），表明较低质量浓度的６－ＢＡ＋ＮＡＡ有利于不定芽的生长和增殖，可用于南天竹的壮苗培养．
表７　壮苗培养基对南天竹生长的影响
处理 ρ（ＮＡＡ＋６－ＢＡ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 株高／ｃｍ 增殖系数
２０　 ０．１０＋１．０　 １．１５±０．０３　 ３．１３±０．１５
２１　 ０．０５＋１．０　 １．３３±０．０２　 ４．１０±０．１７
２２　 ０．０１＋０．３　 ２．１７±０．１５　 ６．２７±０．０９
２．５　试管苗的生根
由表８可知，当ＩＢＡ质量浓度相同而ＮＡＡ质量浓度不同时对株高的影响较小，０．１ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ处理的
株高都略高于０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ处理．处理２５的生根率最高，但生根系数最小，根纤细；而处理２６有最高生根
系数和根长且根较粗壮．总体上，生根率较低．
表８　不同激素配比对南天竹生根的影响
处理 ρ（ＮＡＡ＋ＩＢＡ）／（ｍｇ·Ｌ
－１） 株高／ｃｍ 生根率／％ 生根系数 根长／ｍｍ
２３　 ０．１＋０．１　 ３．１４±０．０５　 １３．３３±３．３３　 ０．５０±０．０６　 ５．３３±０．８８
２４　 ０．２＋０．１　 ３．２０±０．０３　 ０．００±０．００ － －
２５　 ０．１＋０．２　 ２．９５±０．０３　 １６．６７±３．３３　 ０．３０±０．０６　 ６．００±０．５８
２６　 ０．２＋０．２　 ２．９０±０．０６　 １３．３３±３．３３　 １．８３±０．０９　 ９．６７±０．８８
在含０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ的１／２ＭＳ（１）培养基上，蔗糖质量浓度、微量元素减半、青霉素和
Ｖｃ、液体培养对试管苗生根的影响见表９．结果表明，处理２７的生根率、生根系数大幅升高，分别增加了
１．５０，１．９５倍；在此基础上，添加青霉素和Ｖｃ或微量元素减半的生根率为０，株高略有降低，显示青霉素和
Ｖｃ对南天竹生根有抑制作用．当微量元素减半时，生根率明显增加，生根系数和根长有不同程度减少；蔗糖
质量浓度由１５ｇ／Ｌ升至３０ｇ／Ｌ时生根率为０，株高也为各处理中最低；同样条件下，液体培养的株高、生根
·０７·
系数和根长都明显好于固体培养，尤其处理３１的株高、生根率和生根系数为各处理中最大值，生根率高达
７６．６７％，根较粗壮（见图１）．由上可知，在１／２ＭＳ（１）固体培养基和１／２ＭＳ（２）液体培养基上，添加３０ｇ／Ｌ
蔗糖比添加１５ｇ／Ｌ蔗糖的生根效果好，１／２ＭＳ（２）液体培养基＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋４ｇ／Ｌ活性炭＋０．２ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ是最适宜的生根培养基．
表９　南天竹生根培养基的筛选
处理 生根培养基 株高／ｃｍ 生根率／％ 生根系数 根长／ｍｍ
２７　 １／２ＭＳ（１）＋３０ｇ／Ｌ蔗糖 ３．３３±０．１５　 ３３．３３±３．３３　 ５．４０±０．２６　 ５．５０±０．３３
２８
１／２ＭＳ（１）＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋９０ｍｇ／Ｌ
青霉素＋１　６００ｍｇ／Ｌ　Ｖｃ
３．０９±０．１０　 ０．００±０．００ － －
２９　 １／２ＭＳ（２）＋３０ｇ／Ｌ蔗糖 ２．３７±０．１５　 ０．００±０．００ － －
３０　 １／２ＭＳ（２）＋１５ｇ／Ｌ蔗糖 ３．２３±０．１５　 ３３．３３±３．３３　 １．６７±０．１２　 ７．４５±０．２４
３１　 １／２ＭＳ（２）（液体培养基）＋３０ｇ／Ｌ蔗糖 ４．３３±０．１８　 ７６．６７±３．３３　 ６．７３±０．２３　 ６．１７±０．２０
３２　 １／２ＭＳ（２）（液体培养基）＋１５ｇ／Ｌ蔗糖 ４．０９±０．１０　 ２３．３３±３．３３　 ２．２３±０．２０　 １０．８７±０．８２
３　讨　论
在植物组织培养中表面消毒最为重要，这决定着实验的失败与否，消毒剂的杀菌能力、使用质量、消毒时
间等因素对植株的消毒效果均不同［６］．实验中，不同消毒剂都以消毒１０ｍｉｎ效果最好；５０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２ 的
消毒效果好于２０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２，最差的是８０ｍＬ／Ｌ　ＮａＣｌＯ２．１ｇ／Ｌ　ＨｇＣｌ２ 的消毒效果好于５０ｍＬ／Ｌ　Ｎａ－
ＣｌＯ２，是适宜的南天竹表面消毒方式，这与多数植物的表现相似［７］．
植物体内的内生细菌潜伏较深，仅用表面消毒无法将其杀除干净．这种污染在外植体初期培养中不易被
肉眼察觉，随着继代次数的增加，植株体内细菌逐渐积累，在培养基上呈现出来［８］．由于南天竹茎节非常短、
叶鞘抱茎等原因，消毒难以彻底，易将内生菌带入．笔者实验观察到南天竹组培过程中诱导培养时无污染，继
代增殖时大体出现２种形式的内生菌：继代２５ｄ左右出现红白色菌斑，然后逐渐干缩，与常见的细菌污染和
真菌污染表现状况不同，并且不影响植株生长，仍能分割继代培养；另一种在接种茎段基部呈白色丝状或片
状，随时间延长蔓延至培养基表面，基本不影响植株生长，但不能用于分割继代培养，这一结果与王春等［９］的
研究结果相一致．在诱导培养基上加入不同质量浓度的青霉素和Ｖｃ后不仅诱导时无污染出现，其后的继代
培养过程中污染也减少，且芽的诱导率和增殖系数都有不同程度的增加，芽生长健壮，这与文献［１０－１１］的研
究结果相符．但在增殖培养基和生根培养基上加入青霉素和Ｖｃ则降低了增殖系数，强烈抑制生根，这可能
是增殖、生根培养时试管苗带菌量极大减少甚至完全无菌，内生菌抑制剂浓度过高、积累过多对植株造成一
定伤害［１２］．
本文中，笔者实验筛选出的南天竹最佳诱导激素组合为１ｍｇ／Ｌ　６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ，这与文献［９］研
究结果相一致，但是在诱导时间上比其所用时间少，可能与本实验使用６０ｇ／Ｌ蔗糖（文献［９］用３０ｇ／Ｌ蔗
糖）有关，李慧［５］对火焰南天竹的研究也发现６０ｇ／Ｌ蔗糖更适合芽的诱导．
ＧＡ３ 通常用于促进茎的伸长，张小红等［１３］研究发现添加ＧＡ３ 对香椿芽的伸长效果明显．南天竹茎节非
常短，产生的不定芽也矮小，但在增殖培养基中添加ＧＡ３ 后株高未增反降，增殖系数则明显增加，何瑞岳
等［１４］也出现类似结果（使用不宜质量浓度ＧＡ３ 使情人草伸长）．可能由于植物间差异性较大，所使用的ＧＡ３
质量浓度不同有关．
在１５ｇ／Ｌ蔗糖与微量元素减半的生根固体培养基中，南天竹的生根率仅为３３．３３％，与杜永芹等［１５］研
究结果相差较大，可能是火焰南天竹与南天竹基因型差异较大．使用液体培养基生根效果好于固体培养基，
最高生根率达７６．６７％，这与袁小环等［１６］在甜樱桃组培苗的生根研究结果一致．
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（责任编辑　柴　键）
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