全 文 ：北方园艺２０１５（０５）：９３～９６ ·生物技术·
第一作者简介：刘中兵（１９７８－），男，湖北枝江人，硕士，副教授，现
主要从事植物资源利用与繁殖等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｚｂ＿ｗｈｓｗ＠ｓｏ－
ｈｕ．ｃｏｍ．
基金项目：湖北省自然科学基金资助项目（２００９ＣＤＺ０３４）；湖北省
高等学校青年教师深入企业行动计划资助项目（ＸＤ２０１２５０７）。
收稿日期：２０１４－１２－１６
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５０５０２９
南天竹离体初代培养条件优化
刘 中 兵，孟 媛
（武汉生物工程学院 园林系，湖北 武汉４３０４１５）
摘 要：以南天竹茎段为试材，采用正交设计对初代培养中基本培养基类型、ＢＡ浓度、ＮＡＡ
浓度、蔗糖浓度４个因素进行优化，旨在筛选最佳组合，以提高初代培养的诱导率。结果表明：
４个因子对南天竹愈伤组织或芽的诱导影响程度依次为基本培养基类型、蔗糖浓度、ＢＡ浓度、
ＮＡＡ浓度；初代培养外植体的诱导最佳组合为ＭＳ＋ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋２０ｇ／Ｌ蔗
糖，诱导率达７４．４％。
关键词：南天竹；离体；初代培养；正交设计；诱导率
中图分类号：Ｓ ７９５．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）０５－００９３－０４
南天竹（Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｔｈｕｎｂ）属小檗科南天
竹属常绿小灌木，是观花观果的佳品，适于窗前、阶下、
花台丛植或入口对植，也可盆栽观赏，亦可种植在植物
群落下层，丰富景观层次。同时，其根、茎、叶均可入药，
因此，集生态、观赏、药用等多种价值于一身的南天竹开发
利用前景较大［１－３］。开发利用需要大量的种苗，利用组织
培养技术可以高效快速的繁殖南天竹，黄一青等［４］、杜永
芹等［５］、蒋泽平等［６］、王春等［７］先后建立了南天竹的离体
培养体系，并获得了试管苗。从报道来看，南天竹在离
体初代培养时，其愈伤组织或芽的诱导率不高，对其深
入试验具有一定的限制。因此，该试验拟采用正交设计，
对初代培养的几个重要的影响因子，基本培养基类型、ＢＡ
浓度、ＮＡＡ浓度以及蔗糖浓度进行优化，旨在筛选出最佳
组合，提高初代培养的诱导率，为后续试验奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
２０１１年９月底采集位于武汉生物工程学院的南天
竹无病毒、生长健壮的当年生枝条，截取上部幼嫩茎段
作为外植体。
１．２ 试验方法
１．２．１ 材料灭菌 用自来水冲洗茎段２０ｍｉｎ，在无菌
室内先浸入７５％酒精中２０ｓ，用无菌水冲洗３次后置于
１ｇ／Ｌ ＨｇＣｌ２中消毒７ｍｉｎ［８］，为了克服内生菌污染，在
培养的过程中，培养基中添加了１．５ｇ／Ｌ的５０％多菌灵
可湿性粉剂［９］。
１．２．２ 初代培养设计 为了探讨基本培养基类型，不同
浓度的ＢＡ、ＮＡＡ和蔗糖对南天竹初代培养的影响，采
用Ｌ９（３４）正交设计（表１），以筛选出最佳组合。将灭菌
处理的材料在超净工作台内无菌条件下，切成０．５ｃｍ长
的小段保持极性接入所制备的培养基，每种处理接种３０
个，重复３次，培养３０ｄ后统计诱导率。培养基中添加
０．７％琼脂，ｐＨ ５．８。
表１ 南天竹茎段诱导试验
Ｌ９（３４）正交设计的因素和水平
Ｔａｂｌｅ １ Ｌ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ
Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｔｈｕｎｂ ｓｔｅｍ ｓｅｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｔｅｓｔ
水平
Ｌｅｖｅｌ
因素Ｆａｃｔｏｒ
基本培养基类型
Ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｃｕｌｔｕｒｅ
ｍｅｄｉｕｍ ｔｙｐｅ
（Ａ）
ＢＡ浓度
ＢＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
（Ｂ）
ＮＡＡ浓度
ＮＡＡ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
（Ｃ）
蔗糖浓度
Ｓｕｃｒｏｓｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／（ｇ·Ｌ－１）
（Ｄ）
１ １／２ＭＳ ０．５ ０．３ ２０．０
２ ＭＳ １．０ ０．２ ４０．０
３ Ｂ５ １．５ ０．１ ６０．０
１．２．３ 培养条件 培养室温度（２５±２）℃、每天光照１０～
１２ｈ，光照强度２ ０００～３ ０００ｌｘ。
１．２．４ 不同处理对外植体初代培养诱导情况 将外植
体接入处理编号为１～９号的培养基中（表２），培养３０ｄ
时，记录外植体的诱导数（包括愈伤化、萌发数）、计算其
诱导率。
１．２．５ 不同因素对外植体诱导情况的影响 对基本
培养基类型、ＢＡ浓度、ＮＡＡ浓度和蔗糖浓度不同水
平进行ＳＳＲ检验，比较４个因素对外植体诱导情况
的影响。
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·生物技术· 北方园艺２０１５（０５）：９３～９６
表２ 外植体诱导结果
Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
因素Ｆａｃｔｏｒ 诱导率Ｉｎｄｕｃｔｅｄ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ／％
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
重复１
Ｒｅｐｅａｔ １
重复２
Ｒｅｐｅａｔ ２
重复３
Ｒｅｐｅａｔ ３
均值
Ａｖｅｒａｇｅ
１ １ １ １ １ １３．３ １３．３ １６．７ １４．４
２ １ ２ ２ ２ ３３．３ ３０．０ ３６．７ ３３．３
３ １ ３ ３ ３ １３．３ １０．０ ６．７ １０．０
４ ２ １ ２ ３ ３３．３ ３３．３ ３６．７ ３４．４
５ ２ ２ ３ １ ７３．３ ８０．０ ７０．０ ７４．４
６ ２ ３ １ ２ ２０．０ ２３．３ ２３．３ ２２．２
７ ３ １ ３ ２ ３．３ ６．７ ３．３ ４．４
８ ３ ２ １ ３ １０．０ ６．７ ６．７ ７．８
９ ３ ３ ２ １ ２６．６ ３０．０ ３０．０ ２８．９
２ 结果与分析
２．１ 不同处理对外植体初代培养诱导情况
所有处理均使外植体出现了启动现象，接种在５号
培养基的诱导率最高，平均值达到７４．４％，且大部分诱
导的愈伤组织出现在茎节部分（图１）；部分茎段萌发出
芽，生长旺盛（图２）；随着培养的深入，培养物不断地增
殖（图３、图４）。由表３方差分析可知，不同的基本培养
图１ 处理５培养３０ｄ时愈伤组织状态
Ｆｉｇ．１ Ｃａｌｕｓ ｓｔａｔｕｓ ａｆｔｅｒ ３０ｄａｙｓ（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ５）
图２ 处理５培养３０ｄ时芽萌发状态
Ｆｉｇ．２ Ｂｕｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ａｆｔｅｒ ３０ｄａｙｓ（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ５）
图３ 处理５培养６０ｄ时愈伤组织增殖
Ｆｉｇ．３ Ｃａｌｕｓ ｇｒｏｗｔｈ ａｆｔｅｒ ６０ｄａｙｓ（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ５）
图４ 处理５培养６０ｄ时芽增殖
Ｆｉｇ．４ Ｂｕｄ ｇｒｏｗｔｈ ａｆｔｅｒ ６０ｄａｙｓ（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ５）
表３ 外植体诱导试验的方差分析
Ｔａｂｌｅ ３ Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
ｄｆ ｓｓ Ｓ２ Ｆ Ｆ０．０５ Ｆ０．０１
Ａ ２ ４ ５８１．６ ２ ２９０．８ ２９０．０＊＊ ３．５５ ６．０１
Ｂ ２ ２ ３０２．６ １ １５１．３ １４５．７＊＊ ３．５５ ６．０１
Ｃ ２ １ ５８６．４ ７９３．２ １００．４＊＊ ３．５５ ６．０１
Ｄ ２ ２ ５６２．４ １ ２８１．２ １６２．２＊＊ ３．５５ ６．０１
误差Ｅｒｒｏｒ １８ １４１．５ ７．９
总变异Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ２６ １１ １７４．５
注：＊＊表示在０．０１水平上差异极显著。
Ｎｏｔｅ：＊＊ｓｈｏｗｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ０．０１ｌｅｖｅｌ．
基类型、ＢＡ浓度、ＮＡＡ浓度和蔗糖浓度对外植体的诱
导有极显著的影响。
２．２ 不同因素对外植体诱导情况的影响
由表４可知，基本培养基类型、ＢＡ浓度、ＮＡＡ浓度
和蔗糖对南天竹外植体诱导都有影响。通过极差法分
析得出ＲＡ＝３０．０、ＲＢ＝２０．７、ＲＣ＝１７．４、ＲＤ＝２１．８，故影
响外植体诱导率最大的因素为基本培养基类型，其次是
蔗糖浓度，然后是ＢＡ浓度、ＮＡＡ浓度。
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北方园艺２０１５（０５）：９３～９６ ·生物技术·
表４ 基本培养基３个水平对诱导影响的ＳＳＲ检验
Ｔａｂｌｅ ４ ＳＳＲｔｅｓｔ ｏｆ ３ｂａｓｉｃ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｅｆｅｃｔ ｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄｌ
水平
Ｌｅｖｅｌ
基本培养基诱导率均值
Ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｉｎｄｕｃｔｅｄ
ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ／％
ＢＡ诱导率均值
Ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ＢＡ ｉｎｄｕｃｔｅｄ
ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ／％
ＮＡＡ诱导率均值
Ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ＮＡＡ ｉｎｄｕｃｔｅｄ
ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ／％
蔗糖诱导率均值
Ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ｓｕｃｒｏｓｅ ｉｎｄｕｃｔｅｄ
ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ／％
１ １９．３ａＡ １７．８ａＡ １４．８ａＡ ３９．２ａＡ
２ ４３．７ｂＢ ３８．５ｂＢ ３２．２ｂＢ ２０．０ｂＢ
３ １３．７ｃＣ ２０．４ａＡ ２９．６ｂＢ １７．４ｂＢ
２．２．１ 基本培养基类型对外植体诱导的影响 基本培
养基是植物组织培养的物质基础，也是植物组织培养能
否获得成功的重要因素之一［１０］。由表４可知，１／２ＭＳ、
ＭＳ、Ｂ５对外植体诱导的影响差异极显著。根据各水平
的平均值大小进行比较，ＭＳ诱导率最高，达４３．７％，所
以，外植体诱导基本培养基首选ＭＳ。
２．２．２ ＢＡ浓度对外植体诱导的影响 细胞分裂素在
组织培养中的主要作用是促进细胞的分裂和分化，诱导
胚状体和不定芽的形成［１０］。由表４可知，水平１、３对外
植体的诱导影响差异不明显；水平２对外植体的诱导有
极显著的影响。根据各水平的平均值大小进行比较，
１．０ｍｇ／Ｌ ＢＡ诱导率最高，达３８．５％，所以，ＢＡ浓度首
选水平２。
２．２．３ ＮＡＡ浓度对外植体诱导的影响 在组织培养
中，生长素主要是用于诱导愈伤组织的形成，根的分化
以及细胞的分裂和伸长［１０］。由表４可知，水平２、３对外
植体的诱导影响差异不显著，其平均诱导率均比水平１
高，且差异达极显著水平。所以，ＮＡＡ浓度水平可选２
或３。
２．２．４ 蔗糖浓度对外植体诱导的影响 糖类物质是培
养物重要的碳源，在培养基中提供培养物所需的碳骨架
和能源外，还可在一定程度调节培养基的渗透压，影响
细胞的增殖和分化，一般来说，蔗糖是最好的糖源［１０］。
由表４可知，水平２、３对外植体的诱导影响差异不显著；
水平１对外植体诱导的影响比水平２、３有极显著的差
异，且平均诱导率是最高，因此，蔗糖浓度首选水平１。
综上所述，在植物组织培养中，基本培养基和蔗糖
是组织培养的物质基础，对外植体的启动有重要影响；
植物生长调节物质则影响植物细胞的分裂、分化、发育，
细胞分裂素和生长素配合使用，对外植体的诱导具有重要
作用。选取各因素的最优水平，即ＭＳ＋ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋２０．０ｇ／Ｌ或 ＭＳ＋ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋
ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋２０．０ｇ／Ｌ蔗糖为最佳组合。结合表１
正交实验方案和表２的外植体诱导率结果可以看出，５
号处理的诱导率均值为７４．４％，为９个处理中的最高
值，因此该试验中５号处理为外植体诱导的最佳配方。
３ 结论
该试验以南天竹幼嫩茎段作为外植体，基本培养基
类型、ＢＡ浓度、ＮＡＡ浓度以及蔗糖浓度对外植体的启
动具有不同程度的影响，效应最大的是基本培养基类型，
其次是蔗糖浓度、ＢＡ浓度、ＮＡＡ浓度；诱导效果最佳的组
合是ＭＳ＋ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ＋２０．０ｇ／Ｌ蔗
糖，诱导率达７４．４％。
通过该试验优化了南天竹初代培养的条件，建立了
南天竹的离体培养体系，为其快繁和遗传改良奠定了基
础。但其增殖、生根培养、练苗、移栽等相关技术，都有
待进一步的研究。
参考文献
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ＬＩＵ Ｚｈｏｎｇ－ｂｉｎｇ，ＭＥＮＧ Ｙｕａｎ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｗｕｈａｎ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｗｕｈａｎ，Ｈｕｂｅｉ ４３０４１５）
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·生物技术· 北方园艺２０１５（０５）：９６～９９
第一作者简介：刘青（１９８９－），女，河北石家庄人，硕士研究生，研究
方向为生物工程。Ｅ－ｍａｉｌ：９０６４５９４０１＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：魏景芳（１９５７－），男，河北沧州人，博士，教授，现主要从事
植物细胞工程等教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｊｆａｎｇ＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：河北省科技厅资助项目（１４２３０９１０Ｄ）。
收稿日期：２０１４－１１－１０
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５０５０３０
黑果腺肋花楸组织培养和快繁体系的优化研究
刘 青，刘 颖，李 冬 杰，闫 素 红，张 冠 华，魏 景 芳
（河北科技大学 生物科学与工程学院，河北 石家庄０５００００）
摘 要：以黑果腺肋花楸带芽茎段为试验材料，采用组织培养的方法，研究不同激素含量和
配比对其组织培养和快速繁殖的影响。结果表明：茎段在ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ
培养基上诱导芽最快最好，ＫＴ能诱导愈伤组织，但对试管苗的芽诱导无明显影响；在 ＭＳ＋６－ＢＡ
０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ培养基上继代１次，增殖系数就能达６倍以上；生根培养基１／２ＭＳ＋
ＩＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ效果最好，生根率近１００％；移栽基质以草炭土∶营养土∶蛭石＝１∶２∶１的基质
中最好，成活率达１００％。
关键词：黑果腺肋花楸；组织培养；优化；快速繁殖
中图分类号：Ｓ ６８７．６０３．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）０５－００９６－０４
黑果腺肋花楸（Ａｒｏｎｉａ ｍｅｌａｎｏｃａｒｐａ）属蔷薇科腺肋
花楸属落叶灌木。树高１．５～３．０ｍ。羽状单叶，复伞状
花序，入秋叶色变红，抗旱抗病耐寒。浆果，果实为紫黑
色球形，直径１．５ｃｍ左右。根系属浅根性，水平根发
达［１］。该树种在欧美和东亚地区园林绿化方面应用广
泛。黑果腺肋花楸果实中的花青素和黄酮能够维持人
的心脏和机体的健康，多酚类物质能够抑制人体内低密
度蛋白和脂质体的氧化，对于预防心脏疾病和癌症、保
持人体健康具有显著效果［２－３］。由其果实加工的药品、
保健饮料和食品在市场上非常普及和流行［４］。因此，为
满足庞大的市场需求，需要对其进行大规模的栽培。目
前，有关其组织培养的研究已有报道，但仍有不少问题
需深入研究［５－８］。该试验主要对黑果腺肋花楸组织培养
和快速繁殖体系的进行了一系列的优化研究，以期整体
提高组培的效率，实现其长期工厂化快速繁育的目的。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试材料采集于河北科技大学生物科学与工程学
院植物组织培养实验室苗圃基地，以含有１～２个芽眼
的黑果腺肋花楸２ｃｍ幼嫩茎段为外植体。
１．２ 试验方法
１．２．１ 外植体处理 取２ｃｍ带顶芽或腋芽的幼嫩茎段
用流水冲洗６０ｍｉｎ，７５％酒精浸泡消毒４０ｓ，０．１％升汞
溶液消毒４ｍｉｎ，无菌水冲洗４～５次，用滤纸吸去水分，
将消毒后的外植体接种于不同的培养基上。每瓶接种４
个茎段，每个编号接种２０瓶，培养基中蔗糖浓度为３％，
琼脂浓度为０．８％，ｐＨ ５．８。培养温度（２５±２）℃，光照
时间１０ｈ／ｄ，光照强度１ ７００ｌｘ左右。
１．２．２ 培养基配方 试验所用培养基的具体配方见表１。
１．２．３ 练苗 当生根苗长至５ｃｍ时，置于温室中逐渐
揭去瓶盖练苗４ｄ。然后用镊子将苗取出用流水洗去根
部培养基。再用稀释８００倍的多菌灵溶液浸过后，然后
栽入苗床上，苗床基质分４个处理：营养土、草炭土、草炭
土＋营养土＋蛭石（１∶２∶１）以及营养土＋蛭石（２∶１），
定期浇以营养液，观察黑果腺肋花楸的生长状况，统计
其成活率，并进行比较
。
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｔｅｍ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｂｙ ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ．Ｓｔｅｍ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｏｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ
ｂｅｎｚｙｌａｄｅｎｉｎｅ（ＢＡ）ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆα?ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ （ＮＡＡ）ａｎｄ ｓｕｇａｒ，ｔｈｅ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｍｂｉｒａｔｉｏｎ，ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｃａｌｕｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ
ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍ，ｓｕｇａｒ，ＢＡ ａｎｄ ＮＡＡ．Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ
ｃａｌｕｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ（７４．４％）ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｏｎ ＭＳ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ １．０ｍｇ／Ｌ ＢＡ，０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ ａｎｄ ２０ｇ／Ｌ ｓｕｇａｒ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｔｈｕｎｂ；ｉｎ ｖｉｔｒｏ；ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ；ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｉｎ－
ｄｕｃｔｉｏｎ
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