全 文 ：果 树 学 报 2 0 01, 18 ( 5 ) : 2 8 8一 2 9 0
J o u nr
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f F ur i t S
e i e n e e
与枣核性状相关联的 R A P D 标记的筛选
彭建营 ` 束怀瑞 2 彭士琪 ` 孙仲序 2
河北农业大学中国枣研究中心 , 保定 0 7 1 001 ; 2 山东农业大学园艺系 ,泰安 27 10 18)
摘 要 用 340 个随机引物 , 对枣有核池和无核池进行了扩增 ,共扩增出 3 34 8 条 D N A 带 , 选出 1 个多态性引物 ,
进一步用这 1 个引物 进行个体验证 , 发现只有引物 51 5 4 在金丝小枣的 16 个类型 中 ( 占供试有核类 型 8 . 21 % )扩
增出一条 82 0 bp 的特异带 , 而无核小枣的 6 个类型中 (占供试无核类型 85 .71 % )无此特异带 。 综合分析初步认为 ,
51 54。 是与枣有核性状相关的分子标记 ,该标记需进一步验证 。
关键词 枣 ;有核性状 ; R AP D
中图分类号 : 56 65 . 1 文献标识码 : A 文章编号 : 100 9一 99 80一 ( 2 0 0 1 ) 一 05一 2 88一0 3
Id e n t in c a t i o n o f R A P D M a r k e r s L i n k e d t o t h e s 母e d C h a r a c t e r o f C h i n e s e
Juj u b e
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a n y i n g l
,
S h u H u a i r u i Z
,
p e n g S h i q i l
, a n d S u n Z h o n群 u Z
(’R e s e acr h eC n t e r of hC 云en s e ulj u 占e , A娜 e u l t u耐 nU 动 e rs i ty of eH 乙e心B ao d i咭 0 71 0 0 1 ,. ZD已 z〕川 me n t of oH rt ic u lt u er , hS an do 昭 A脚 e u l t u耐
nU 动 e rs ity ,叛 an 2 7 1 0 1 8)
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o o l a n d s e e d le s s P o o l w e er a n a ly s e d b y u s i n g ar n d o m am P li if e d P o ly m o pr h i e D N A (RA P D )
.
34 0 Pir m e r s
w e er s e er e n e d
, a n d a t o t a l o f 3 34 8 D N A b a n d s w e r e a m P liif e d
.
11 P
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, a n d e a e h fo mr
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.
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e e d e h ar a e t e r : RA p D
枣 (izZ 勿h us j uj 动 a M il . )果是拟核果 l] , 大部分
枣品种的果实有核 (内果皮硬化 ) , 且不同品种含仁
率不一 ,个别品种无核 。 无核品种无论鲜食还是加
工均很方便 , 无核是一个优良性状 ,如能寻找到与
无核性状连锁的分子标记 , 一方面可用于早期 鉴
定 ,另一方面可克隆目的基因 。
金丝小枣是 我 国最优 良的制 干品种之一 , 在
20 0 多年的栽培历史 中 , 金丝小枣已经发生了大量
的遗传变异 , 产生了许多类型 2[] 。 其 中 ,无核小枣就
是 由金丝小枣变异而来队 4] 。 金丝小枣平均坐果率仅
1% 一 2% ,核内很少含有种子 ,空粒种子 占 95 % 以上 ,
人工杂交育种很难开展 。 因此 ,金丝小枣与无核小
枣的杂交群体不易获得 。 但考虑到不同类型的无核
小枣是 由不同类型的金丝小枣变异而来 , 除果实无
核外 ,其植物学特征和生物学特性均与金丝小枣相
同 。 若寻找与无核性状相关的分子标记 , 可参 照
D N A 分池法 ( D N A p o l ) 15 , 根据表现型 , 随机选取
若干金丝小枣和无核小枣类型 , 提取基 因组 D N A ,
并等量混合 ,形成有核池和无核池 ,两池间除核的有
无差 异外 , 其它的性状均是 随机选取 的 。 RADP
(R
a n d o m Am Pli if e d P o l y m o rp h ie DN A
, 随机扩增多
态性 DN A )技术是利用一个随机序列的寡聚核昔酸
作引物 ,对所研究的基因组 D N A 进行 PC R 扩增 , 电
泳分离后直接检测多态性 16 。 本研究尝试利用表现
型 D N A 分池法和 R A P D 技术 , 筛选与枣核性状相
关联的分子标记 。
1 材料和方法
L l 材料
无核小枣 的 7 个类型和金丝小枣的 19 个类型
来 自山东省陵县小王庄林场 。 叶片采后放于冰壶中
带 回 ,不能立即做的 ,液氮冷冻后一75 ℃冰箱保存 。
L Z 方法
DN A 提取参照 Oar d 等的方法 17 。 引物为美国
收稿日期 : 2 0 0 0一 1 1一 2 0 接受 日期 : 2 0 0 1一 0 5一 2 0
彭建营 ,男 ,副研究员 ,博士 。
DOI : 10. 13925 /j . cnki . gsxb. 2001. 05. 010

2 9 0 树 1 8卷
关的 RA D P标记 ,该标记还需进一步验证 。
3 讨 论
本研究利用 表现 型 DN A 分 池法 和 R A P D 技
术 , 从 3 4 0 个随机引物 中筛选 出多态性引物 n 个 ,
进一步分别对这 1 个引物进行个体验证 , 发现只
有引物 51 5 4 在金丝小枣 的 16 个类型中 (占供试有
核类型 8 . 21 % )扩增 出一条 8 2 0 b p 的特异带 , 而无
核小枣的 6 个类型中(占供试无核类型 85 71 % )无此
特异带 。 因为无核小枣不同类型中 ,其无核程度是
有差异的 ,且与树势 、枝系生长强弱及树龄有关 。 因
此 , 出现特例的 1个无核小枣类型和 3 个金丝小枣
类型 ,可能为中间类型 。 核的性状 (内果皮硬化)可能
受多基因控制 。 无核的出现可能是与核有关基因的
缺失造成 ,缺失的多少直接关系无核程度 。 本研究
虽然非 F: 代个体 目标基 因分离构建的 D N A 库 , 两
池间所得的多态性片段 ,还有待进一步分析 、 验证 。
但考虑到金丝小枣和无核小枣 的特殊关系及在 自
然界中的分布情况 。 金丝小枣均采用无性繁殖 ,若
无核小枣由金丝小枣实生变异而来 ,众多的无核小
枣可认为由一株金丝小枣实生而来 , 随机选取的有
核 D N A 池和无核 DN A 池相当于 B SA 的 D N A 分池
法 。 本方法还未见报道 ,但对于无性繁殖且难获得杂
交群体的多年生果树具有现实意义 。 若无核小枣由
金丝小枣芽变而来 , 随机选取的有核 D N A 池和无
核 D N A 池的多态性条带 与核的性状相关的可能性
较大 。 金勇丰等 8[] 对桃布 目早生及其早熟芽变品种
`大观一号 ’ 基 因组 D N A 的多态性进行 R A PD 分
析 , 找到了一条特异性片段 ,并对该 片段做了分析 。
因此 ,本研究初步认为获得 的 5 154 820 标记可能与金
丝小枣核的性状相关 ,进一步可对这一片段克隆 、测
序 , 标记成特异探针或转化为 S C A R 标记 , 加以验
证 。
参 考 文 献
【l] 王勋陵.枣果实发育解剖学的初步观察 [J] .植物学 报 , 19 74 , 16 (2) :
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t o d i s e a s e 一re s i s t a n e e g e n e s b y b u lk e d s e g r e gan t a n al y s i s : a arn id
m e t h o d t o d e t e e t m a r k e rs i n sp e e i if e ge n o m i e re g i o n s b y u s i n g
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c le i e A e i d s R e s e a r e h
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10 6
.
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